Kursstunde Serologie Lernziele im Mikrobiologie-Kurs - UK
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Praktikum der Mikrobiologie Lernziele im Mikrobiologie-Kurs Kursstunde Serologie • Erkennen Virus-spezifischer zytopathischer Effekte aus letzter Kursstunde Institut für Virologie • Serologische Methoden Jun.-Prof.Dr.rer.nat. Baki Akgül SS2013 Serologische Methoden in der Kursstunde Nachweis eines Erregers über : • • im Körper hervorgerufene Antikörperreaktion im Körper exprimierte virale Antigene • Direktnachweis über Einsatz der PCR (Nachweis der viralen DNA bzw. RNA) • Latex-Agglutinationstest (Adenovirus) • Enzyme-Linked-ImmunoSorbent Assay (ELISA) (HBV) • Immunoblot (HIV) 1 Immunfluoreszenztest zum Nachweis CMV-spezifischer IgM-Antikörper Norovirus-positive Stuhlsuspension • CMV-spezifische Einschlusskörper im Kern von Fibroblasten • Inkubation mit Patientenserum • Nachweis über fluoresziierende 2. AK Immunelektronenmikroskopie Latex-Agglutinationstest • Nachweis viraler Antigene • Bsp: Adenovirus-Antigen Virus-Antikörper Agglutinate - Abstände werden über Antikörper definiert neg pos 2 Enzyme-Linked-ImmunoSorbent Assay (ELISA) • Nachweis von menschlichen Antikörpern gegen virale Antigene • Nachweis viraler Antigene • Bsp. Hepatitis B Hepatitis B Virus • • behülltes, doppelsträngiges DNA Virus HBsAg frühester, diagnostischer Marker Abb 766-11A • 90% Ausheilung; 10% der Infektionen werden chronisch (Zirrhose, HCC); • HBV ist nicht zytopathogen; Zelle wird nicht durch Infektion und Replikation des Virus zerstört; • Immunpathogenese; Leberzellschädigung durch zytotoxische T-Lymphozyten und NK-Zellen; Hepatitis B Infektiös: Solange HBs-Antigen oder HBV-DNA nachweisbar ist HBsAg ist Tage bis Wochen vor Symptomen nachweisbar (ca. 6 - 8 Wochen p.i.) HBV-DNA wird 4 Wochen p.i. nachweisbar Achtung: Das HBe-Ag/Ak System liefert nur Hinweise zur Viruslast! Es gibt HBe-Ag positive Pat. mit niedriger Viruslast und HBe-Ak positive Pat. mit hoher Viruslast 3 Impfung Hepatitis B Serologie HBs-Ag AntiHBs + – – + + – Anti-HBc HBeAg Anti-HBe HBV-DNA + – ++ Frische HBV-Infektion + – + – Durchgemachte HBVInfektion – + – + + Späte Phase einer akuten/chronischen Infektion; geringere Infektiosität + – – – – Z.n. Impfung +/(–) Anti-HBc-IgM ++ Diagnose Durchgemachte Infektion Hepatitis B Serologie HBs-Ag AntiHBs + – – + + – Anti-HBc HBeAg Anti-HBe HBV-DNA + – ++ Frische HBV-Infektion + – + – Durchgemachte HBVInfektion – + – + + Späte Phase einer akuten/chronischen Infektion; geringere Infektiosität + – – – – Z.n. Impfung +/(–) Anti-HBc-IgM ++ Diagnose 4 Frische Infektion Hepatitis B Serologie HBs-Ag AntiHBs + – – + + – Anti-HBc HBeAg Anti-HBe HBV-DNA + – ++ Frische HBV-Infektion + – + – Durchgemachte HBVInfektion – + – + + Späte Phase einer akuten/chronischen Infektion; geringere Infektiosität + – – – – Z.n. Impfung +/(–) Anti-HBc-IgM ++ Diagnose Hepatitis B Serologie HBs-Ag AntiHBs + – – + Anti-HBc +/(–) Anti-HBc-IgM + ++ HBeAg Anti-HBe HBV-DNA + – ++ Frische HBV-Infektion – + – Durchgemachte HBVInfektion HBs-Ag + Anti-HBs - Anti-HBc + HBe-Ag - Anti-HBe + HBV-DNA + Diagnose + – + – + + Späte Phase einer akuten/chronischen Infektion; geringere Infektiosität – + – – – – Z.n. Impfung Späte Phase einer akuten oder Chronische HBV-Infektion (geringere Infektiosität) 5 Immunoblot (Western Blot) Immunoblot (Western Blot) • z.B. HIV Bestätigungstest Antikörper des Patienten gegen HIV HIV Proteine HIV-Immunoblot HIV-Immunoblot Bei reaktivem Befund: Bestätigungstest: Western Blot: positiv, wenn mindestens 1 Glykoprotein- und 1 Proteinbande gP P HIV-1" gP P HIV-2" 6
