Protokoll zum Kurstaeil Mutationen
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Fachmodul Genetik Mutationen __________________________________________________________________________________________ Protokoll zu dem Versuchsteil: „Ames-Test“ Name: Gruppennr.: Datum: Abgabe bis spätestens 11.05.09 Abgabe des korrigierten Protokolls bis: ___________________________________________________________________________ Einleitung: Fachmodul Genetik Mutationen __________________________________________________________________________________________ Die Auswertung beider Testplatten erfolgt halbquantitativ. Achten Sie auf die folgenden Punkte: 1. Wie hoch ist bei den Salmonella-Stämmen TA98 und TA100 ungefähr die Anzahl an spontan auftretenden Revertanten in Plattenbereichen, die entfernt von den aufgebrachten Substanzen liegen. Lässt sich die Zahl dieser spontanen Revertanten mit der Zahl der spontanen Mutationsereignisse vergleichen, die zur Streptomycinresistenz führen? Begründen Sie Ihre Antwort. 2. Beobachten Sie genau den zellfreien Bereich, der sich durch das „Wegschwemmen“ der Salmonella-Kulturen nach Aufbringen von Saline gebildet hat. Sie müssen in der Lage sein, diesen Bereich von einem sog. „Hemmhof“ zu unterscheiden. Wodurch entsteht ein derartiger „Hemmhof“? 3. Beobachten Sie nun für jede der aufgebrachten Substanzen, ob sich ein Hemmhof oder eine erhöhte Anzahl an Revertanten gebildet hat. Berücksichtigen Sie auch die unterschiedliche Größe der Hemmhöfe bzw. den unterschiedlich großen Abstand zur applizierten Testsubstanz, in dem die Kolonien wachsen. Was bedeutet dies jeweils für die Toxizität bzw. Mutagenität dieser Substanz? Falls Sie für eine Substanz eine mutagene Wirkung beobachten, diskutieren Sie bitte auch (unter Einbeziehung der Informationen, die Sie über den Salmonella-Stamm besitzen, bei dem Sie Kolonien beobachten, und im Vergleich mit Literaturdaten) über welchen molekularen Mechanismus die mutagene Wirkung dieser Substanz erfolgt. Fachmodul Genetik Mutationen __________________________________________________________________________________________ 4. Warum wird beim „richtigen“ Ames-Test die zu testende Substanz mit Leberhomogenisaten inkubiert? 5. Beschreiben Sie die genetischen Marker, welche die Salmonella-Teststämme tragen, und erklären Sie, warum diese Marker für den Erfolg des Ames-Tests wichtig sind. Fachmodul Genetik Mutationen __________________________________________________________________________________________ 6. Beschreiben Sie die Wirkungsweise der aufgeführten Mutagene, und geben Sie an, ob sich die mutagene Wirkung mit den Salmonella-Teststämmen TA98 bzw. TA100 nachweisen lässt. Nutzen Sie für die Beantwortung dieser Frage Ihnen zugängliche Quellen (Lehrbücher, Internet). Mutagen Molekularer Wirkmechanismus Hydroxylamin EMS HNO2 Acridinorange Daunomycin 2,7Dinitrofluoren MNNG 5-Bromuracil EMS: Ethylmethansulfonat HNO2: Salpetrige Säure MNNG: N-Methyl-N’-nitro-N-nitrosoguanidin Nachweis der mutagenen Wirkung mit TA98 TA100
