InhaltsverzeichnisNEU

Inhaltsverzeichnis
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Abkürzungen
1. Einleitung
1
1.1
DCoH – ein bifunktioneller Faktor
2
1.2
Seven in absentia – ein neuer putativer Interaktionspartner von DCoH/PCD
7
1.3
Zielsetzung der Arbeit
2. Material und Methoden
11
12
2.1
Chemikalien und Enzyme
12
2.2
Oligonukleotide
12
2.3
Isolierung der cDNA von Xenopus Siah-2
13
2.4
Hergestellte Plasmidkonstrukte
15
2.5
Gekoppelte in vitro Transkription / Translation von XSiah-2
16
2.6
Two Hybrid Analysen in Hefe
17
2.7
Reverse Transkription-PCR (RT-PCR) aus Gesamt-RNA
von Xenopus Embryonen
17
2.8
19
2.9
Transiente Transfektion und indirekte Immunfluoreszenz-Mikroskopie
Western-Blotting und Immundetektion von His-XSiah-2
und Myc-DCoH/PCD
2.10 Haltung von Xenopus laevis und in vitro Befruchtung und
Kultur der Embryonen
2.11 Whole mount in situ Hybridisierung
21
19
20
Inhaltsverzeichnis
2.12 In vitro Synthese von mRNA und RNA-Mikroinjektion in Xenopus
22
2.13 Histologische Analysen von Xenopus Larven
3. Ergebnisse
3.1
Die cDNA des Xenopus Seven in absentia (XSiah) enthält einen
offenen Leserahmen von 939 Nukleotiden
24
3.2
Das Xenopus Seven in absentia Homolog ist zu 85 %
identisch mit den Säuger Siah-2 Proteinen
28
3.3
30
3.4
Der C-Terminus von XSiah-2 ist ausreichend und
notwendig für die Interaktion mit DCoH/PCD
XSiah-2 ist wie das Xenopus DCoH/PCD maternal exprimiert
3.6
36
XSiah-2 wird im embryonalen Auge und im Rückenmark exprimiert
3.7
38
XSiah-2 ist nach Transfektion überwiegend im Zytoplasma lokalisiert
3.8
40
DCoH/PCD ist kein Zielprotein einer XSiah-2 vermittelten Degradation
3.9
41
Die Überexpression von XSiah-2 in Xenopus führt zu Augendefekten
3.11
24
XSiah-2 kodiert ein Protein mit einem Molekulargewicht von 34 kDa
3.5
35
3.10
22
31
Die endogene XPax-6-Expression ist bei XSiah-2Überexpression unverändert
45
Die Überexpression von DCoH/PCD beeinflußt den XSiah-2 induzierten
Phänotyp nicht und vice versa
47
4. Diskussion
50
Inhaltsverzeichnis
4.1
Seven in absentia und DCoH/PCD – zwei maternale
Interaktionspartner mit vielfältigen Funktionen
50
4.2
55
XSiah-2 hat eine Bedeutung in der Augenentwicklung von Vertebraten
5. Zusammenfassung
61
6. Literatur
62