Untitled - Deutsche Digitale Bibliothek

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Nationalbibliografie;
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1. Auflage 2012
© 2012 by Verlag: Deutsche Veterinärmedizinische Gesellschaft Service GmbH,
Gießen
Printed in Germany
ISBN 978-3-86345-083-0
Verlag: DVG Service GmbH
Friedrichstraße 17
35392 Gießen
0641/24466
[email protected]
www.dvg.net
Tierärztliche Hochschule Hannover
Immunhistologische Untersuchung ausgewählter
Matrixmetalloproteinasen (MMPs) und deren Inhibitoren in der
neoplastisch veränderten Mamma und den assoziierten Lymphknoten
von Hunden
INAUGURAL-DISSERTATION
zur Erlangung des Grades einer
Doktorin der Veterinärmedizin
-Doctor medicinae veterinariae(Dr. med. vet.)
Vorgelegt von
Julia Bornbaum
aus Böblingen
Hannover 2012
Wissenschaftliche Betreuung:
Priv. Doz. Dr. Susanne Alldinger
Institut für Pathologie
Stiftung Tierärztliche Hochschule Hannover
1.
2.
Gutachterin:
Gutachter/in:
Priv. Doz. Dr. Susanne Alldinger
Prof. Dr. R. Mischke
Tag der mündlichen Prüfung: 25.5.2012
Inhaltsverzeichnis
1
Einleitung ........................................................................................3
2
Literaturübersicht...........................................................................5
2.1
Kanine Mammatumoren ...................................................................5
2.1.1 Morphologischer Aufbau der physiologischen kaninen Mamma................ 5
2.1.2 Hämatogene und lymphogene Versorgung der physiologischen kaninen
Mamma.................................................................................................... 5
2.1.3 Epidemiologie kaniner Mammatumoren.................................................... 6
2.1.4 Ätiologie und Pathogenese kaniner und humaner Mammatumoren.......... 7
2.1.5 Pathologie kaniner Mammatumoren ......................................................... 9
2.2
Die extrazelluläre Matrix (EZM) ......................................................14
2.3
Matrixmetalloproteinasen (MMPs) und ihre Inhibitoren (TIMPs).....15
2.3.1
2.3.2
2.3.3
2.3.4
2.3.5
Klassifikation, Funktion und Struktur........................................................15
Regulation der MMPs ..............................................................................17
Substrate der MMPs................................................................................20
MMPs und Tumoren ................................................................................20
Ausgewählte MMPs und TIMPs...............................................................24
3
Material und Methoden ................................................................38
3.1
Untersuchte Tiere ...........................................................................38
3.2
Untersuchungsmaterial für die histologische und immunhistologische
Auswertung ....................................................................................39
3.2.1 HE-Übersichtsfärbung .............................................................................39
3.3
Immunhistologie .............................................................................39
3.3.1 Antikörper und Seren...............................................................................39
3.3.2 Immunhistochemisches Färbeprotokoll (ABC-Methode) ..........................41
3.3.3 Kontrollen ................................................................................................43
3.4
Diagnose, Auswertung und statistische Aufarbeitung.....................44
4
Ergebnisse ....................................................................................49
4.1
Ergebnisse der histologischen Befunderhebung ............................49
4.2
Ergebnisse der immunhistologischen Befunderhebung .................51
4.2.1
4.2.2
4.2.3
4.2.4
MMP-7.....................................................................................................51
MMP-11...................................................................................................69
MMP-12...................................................................................................91
TIMP-3 ..................................................................................................111
5
Diskussion ..................................................................................127
5.1
Immunhistologischer Nachweis von MMP-7.................................127
5.2
Immunhistologischer Nachweis von MMP-11...............................134
5.3
Immunhistologischer Nachweis von MMP-12...............................142
Inhaltsverzeichnis
5.4
Immunhistologischer Nachweis von TIMP-3.................................149
6
Zusammenfassung.....................................................................155
7
Summary .....................................................................................159
8
Fotodokumentation ....................................................................162
8.1
MMP-7-Expression in den Untersuchungsgruppen ......................162
8.2
MMP-11-Expression in den Untersuchungsgruppen ....................164
8.3
MMP-12-Expression in den Untersuchungsgruppen ....................168
8.4
TIMP-3-Expression in den Untersuchungsgruppen ......................171
9
Literaturverzeichnis ...................................................................175
10
Anhang ........................................................................................198
10.1 Untersuchtes Tiermaterial ............................................................198
10.2 Immunhistologische „Scores“ aller untersuchten Antikörper.........205
10.2.1 MMP-7 „Scores“ in den Untersuchungsgruppen ....................................205
10.2.2 MMP-11 „Scores“ in den Untersuchungsgruppen ..................................211
10.2.3 MMP-12 „Scores“ in den Untersuchungsgruppen ..................................217
10.2.4 TIMP-3 „Scores“ in den Untersuchungsgruppen....................................223
10.3 Statistische Daten.........................................................................229
10.3.1 Median, Min., Max. für MMP-7...............................................................229
10.3.2 Median, Min., Max. für MMP-11.............................................................233
10.3.3 Median, Min., Max. für MMP-12.............................................................237
10.3.4 Median, Min., Max. für TIMP-3 ..............................................................240
10.4 p-Werttabellen ..............................................................................245
10.4.1 p-Werte für MMP-7 ................................................................................246
10.4.2 p-Werte für MMP-11 ..............................................................................251
10.4.3 p-Werte für MMP-12 ..............................................................................259
10.4.4 p-Werte für TIMP-3................................................................................267
10.5 Lösungen und Puffer ....................................................................275
10.6 Bezugsquellen für Chemikalien und Antikörper............................276
10.6.1 Antikörper und Seren.............................................................................276
10.6.2 Chemikalien...........................................................................................276
10.7 Bezugsquellen für Geräte und Einmalartikel ................................278
10.8 Abkürzungsverzeichnis.................................................................280
11
Danksagung................................................................................282
Einleitung 3
1
Einleitung
Die vorliegende Arbeit befasst sich mit einer der häufigsten Neoplasien der Hündin:
dem Tumor des Mammadrüsengewebes (BOMHARD et al., 2001; BOSTEDT, 1995;
BOSTOCK, 1986; BRODEY et al., 1983). Diese Mammatumoren zeigen eine große
Vielfalt in ihrer Morphologie und Differenzierung und dementsprechend auch
unterschiedliche Dignitäten. Eine histologische Untersuchung von exzidiertem
Tumorgewebe ist für die Diagnostik und die Dignitätsaussage notwendig. Während
über die Pathogenese der Tumorentstehung, deren Progression, Invasion und das
Metastasierungsverhalten beim Hund nur wenige Daten vorliegen, gibt es in der
Humanmedizin zahlreiche Publikationen über den Zusammenhang oben genannter
pathologischer Vorgänge mit Matrixmetalloproteinasen (MMPs) und ihren Inhibitoren,
den „ Tissue Inhibitors of Matrix Metalloproteinases“ (TIMPs). Diese Enzyme sind
beim Menschen eindeutig mit dem Auftreten von Brusttumoren, deren Wachstum und
Differenzierung, sowie der Prognose und der Gesamtüberlebenszeit korreliert
(BOURGUIGNON, 2001; GARCIA et al., 2010; STAMENKOVIC, 2003).
MMPs sind eine Familie zinkabhängiger Endopeptidasen, die neben Einflussnahme
auf zahlreiche physiologische Vorgänge, wie z. B. Zellproliferation und –migration
während der Organogenese, sowie Differenzierung und „Remodelling“ der
extrazellulären Matrix auch die Entstehung von Tumoren begünstigen können
(CHANG
und
WERB,
2001).
Besonders
beim
Invasions-
und
Metastasierungsverhalten wird MMPs und ihren Inhibitoren eine wichtige Bedeutung
zugesprochen.
Zahlreiche Untersuchungen in der Humanmedizin belegen die vielfältige Beteiligung
von MMP-7, MMP-11, MMP-12 und TIMP-3 an physiologischen und pathologischen
Prozessen
beim
Menschen.
Sie
und
andere
MMPs
werden
nun
als
Schlüsselregulatoren vielfältiger zellulärer Funktionen gesehen, wie der Reifung und
Aktivierung verschiedener Substrate, sowie deren Inaktivierung und Abbau (CAUWE
et al., 2007). Auch ihr Auftreten und Einfluss auf Brusttumoren wurde vielfältig
untersucht (CHENG et al., 2010; HUGHES et al., 2007; JIANG et al., 2005;
PETERSON et al., 2009; WANG und TETU, 2002). Untersuchungen bei
Mammatumoren der Hündin auf MMPs und ihre Inhibitoren sind nur vereinzelt zu
finden (PALTIAN, 2006) und es liegt keine Arbeit vor, die die Expression der vier
Einleitung 4
genannten
Enzyme
in
verschiedenen
mammären
Tumorarten
der
Hündin
gegenüberstellt. Dies soll in der vorliegenden Arbeit geschehen.
Diese Dissertation untersucht die Expression von MMP-7, MMP-11, MMP-12 und
eines Inhibitors, des TIMP-3, in benignen und malignen Mammatumoren und den
assoziierten Lymphknoten der Hündin. Zusätzlich werden auch hyperplastische
Drüsengewebe und Kontrollgewebe von gesunden Tieren auf die Expression dieser
Enzyme
untersucht.
Expressionsmustern
Dadurch
einzelner
werden
MMPs,
Aussagen
über
beziehungsweise
Korrelationen
TIMPs
und
von
dem
Krankheitsverlauf bei Gesäugetumoren der Hündin erwartet. Möglicherweise stellen
MMPs
und
TIMPs
prognostische
Marker
für
die
Dignität
und
Wachstumsverhalten verschiedener mammärer Tumorarten der Hündin dar.
das
Literaturübersicht 5
2
Literaturübersicht
2.1
Kanine Mammatumoren
2.1.1 Morphologischer Aufbau der physiologischen kaninen Mamma
Anatomie und Histologie der Mamma
Entlang der ventralen Bauchwand des Hundes liegt die Gesäugeleiste, bilateral
bestehend aus fünf, manchmal auch vier oder sechs Drüsenkomplexen. Die
Milchdrüse stellt eine zusammengesetzte, modifizierte, apokrine Hautanhangsdrüse
dar, eingebettet in Fettgewebe und fibrovaskuläres Stroma von tubulo-alveolärem
Aufbau. Sie setzt sich aus dem sogenannten Drüsenkörper (Corpus mammae) und
der Eversionszitze (Papilla mammae) zusammen. Es kann zwischen milchbildenden
und milchableitenden Teilen unterschieden werden. Die in die Alveolen sezernierte
Milch wird über die Ducti lactiferi und dann über größere Milchgänge zur
Milchzisterne (Sinus lactiferi) geleitet. Von dort gelangt sie über sechs bis 20
Strichkanäle (Ductuli lactiferi) zu den Öffnungen (Ostia papillaria) auf der Zitze.
Produziert wird die Milch in einem einschichtigen, je nach Füllungsgrad der Alveole
flachen, kubischen oder auch hochprismatischen Epithel, das peripher von einer
Schicht
Myoepithelien
umgeben
wird.
Diese
sind
in
der
Lage,
bei
Oxytozinausschüttung ihre Myofilamente zu kontrahieren und somit eine Verengung
der Alveole zu bewirken. Den myoepithelialen Zellen folgt eine außen anliegende
Basalmembran. Auch die Milchgänge sind peripher locker von Myoepithel
umschlossen, um den gerichteten Milchabfluss zu ermöglichen (CHRISTENSEN,
1979; HABERMEHL, 1996; MANN, 1984);
2.1.2 Hämatogene und lymphogene Versorgung der physiologischen kaninen
Mamma
Die kanine Gesäugeleiste wird über die A. thoracica interna, sowie die Aa.
intercostales, die A. epigastricacranialis superficialis, die A. epigastrica cranialis
superficialis, die A. epigastrica caudalis superficialis, die A. abdominalis cranialis und
den Ramus labialis ventralis der A. pudenda externa mit Blut versorgt. Der venöse
Rückfluß der drei kranialen Komplexe erfolgt über die Vv. perforantes oder die V.
Literaturübersicht 6
epigastrica cranialis superficialis in die V. thoracica interna zur V. cava cranialis. Das
Blut der kaudal gelegenen drei Komplexe wird über die V. epigastrica caudalis
superficialis in die V. pudenda externa geleitet. Von dort fließt es über die V.
pudendoepigastrica, die V. iliaca externa und die V. iliaca communis zur V. cava
caudalis (MICHEL, 1994; WAIBL et al., 1996).
Der Lymphabfluss der beiden kranialen Gesäugekomplexe erfolgt bilateral
symmetrisch über die Lymphknoten Nl. axillaris proprius und Nl. axillaris accessorius
des Lymphocentrum axillare zum Truncus jugularis und zum Ductus thoracicus oder
direkt in den Venenwinkel und in den kranialen Sternallymphknoten (Nl. sternalis
cranialis). Der dritte Gesäugekomplex kann entweder über diesen Weg seine
Lymphe abführen, oder an die beiden kaudalen Komplexe angeschlossen sein, die
ihre Lymphe über die Nll. Inguinales superficiales des Lymphocentrum inguinale
superficiale in die Nll. iliaci mediales und die Nll. lumbales aortici abführen. Von dort
gelangt die Lymphe in den Truncus lumbalis, dann in die Cysterna chyli und
schließlich
in
den
Ductus
thoracicus.
Zwischen
kranialem
und
kaudalem
Lymphabfluss bestehen Anastomosen (CHRISTENSEN, 1979; MICHEL, 1994;
VOLLMERHAUS, 1996).
2.1.3 Epidemiologie kaniner Mammatumoren
Neben Hauttumoren zählen Mammatumoren zu den häufigsten neoplastischen
Erkrankungen der Hündin (BOMHARD et al., 2001; BOSTEDT, 1995; BOSTOCK,
1986; BRODEY et al., 1983; GUTBERLET et al., 1998; RAVIKUMAR et al., 2000).
Aufgrund unterschiedlich zusammengesetzter Untersuchungsgruppen und der
morphologischen Untersuchung nur eines Teils der exzidierten Tumoren ist eine
tatsächliche Häufigkeit nur schwer einschätzbar (RUTTEMAN, 2005). Beim Rüden ist
die Mammatumorerkrankung jedoch äußerst selten und die Inzidenz wird auf 0,4 bis
2,7 % geschätzt (BOSTEDT, 1995; ESKENS, 1983; FRESE et al., 1989;
RUTTEMAN, 2005). Die Wahrscheinlichkeit an einem Mammatumor zu erkranken, ist
für die Hündin etwa zweiundsechzigmal wahrscheinlicher als für den Rüden. Beim
männlichen Hund sind die Mammatumoren selten und für gewöhnlich gutartig (SABA
et al., 2007). Hunde mit malignen Veränderungen sind signifikant älter als Hunde mit
benignen Tumoren (SORENMO et al., 2009). Auch sind bösartige Tumoren größer
und in 66 % der Fälle treten multiple neoplastische Veränderungen an der
Gesäugeleiste auf (SORENMO et al., 2009). Das Durchschnittsalter betroffener Tiere
Literaturübersicht 7
beträgt 9,5 Jahre (BOMHARD et al., 2001; BOSTEDT, 1995; DAHME und WEISS,
1958; GUTBERLET et al., 1998; SIMON et al., 2001; SORENMO et al., 2009).
Obwohl kleine Rassen wie Dackel, Terrier und Spaniels etwas häufiger erkranken,
wurden klare Rassendispositionen nicht eindeutig beschrieben (RUTTEMAN, 2005).
Große Rassen sind von Mammatumoren seltener betroffen; Literaturangaben über
Boxer, Deutsche Schäferhunde und Mischlinge sind heterogen (BOMHARD et al.,
2001; BOMHARD, 1977; DAHME und WEISS, 1958; GUTBERLET et al., 1998;
MCEWEN und WITHROW, 1996; SIMON et al., 2001).
2.1.4 Ätiologie und Pathogenese kaniner und humaner Mammatumoren
Die Ätiologie kaniner Mammatumoren ist noch nicht vollständig geklärt. Neben
anderen Einflussfaktoren spielen hormonelle Stimuli auf das Brustdrüsengewebe
eine entscheidende Rolle (MISDORP, 2002; RUTTEMAN, 2005). Die Expression von
Östrogen war in immunhistologisch bearbeiteten Gewebeschnitten von gesunden
Hündinnen und bei Tieren mit hyperplastischen gutartigen Tumoren höher als in
Karzinomen (MILLANTA et al., 2005). Auch in früheren Publikationen wurden
Zusammenhänge
zwischen
dem
Auftreten
maligner
Entartungen
und
der
Herabregulierung von Steroiden und deren Rezeptoren in der Mamma festgestellt.
(RUTTEMAN und MISDORP, 1993). Eine mögliche Ursache der Tumorentstehung
ab dem 5. Lebensjahr ist der hormonelle Einfluss auf das Milchdrüsengewebe. Lange
Östrogen-, Progesteron- und Prolaktinphasen in Abhängigkeit vom Rezeptorstatus
der kaninen Mamma nehmen Einfluss auf Proliferationsvorgänge und können die
Entstehung
von
Neoplasien
begünstigen
(BOSTEDT,
1995).
Eine
erhöhte
Expression von Östrogenrezeptoren, Östradiol und dessen metabolisierender
Enzyme, sowie Proteinen, die Zellproliferation, Apoptose, Evasion, Invasion und
Angiogenese verursachen, führten zum Wachstum von kaninen Mammatumoren
(VINOTHINI et al., 2009). Beim Menschen kann auch Prostaglandin E2, ein
katalytisches Produkt von Cox-2, zur Tumorentstehung und Angiogenese beitragen
(LAVALLE et al., 2009). Eine geringere Expression des Progesteronrezeptors und
höhere Expression von zellulären Proliferationsmarkern korrelierten mit größerem
Durchmesser von mammären Tumoren und meist mit Malignität (FERREIRA et al.,
2009; TONITI et al., 2009). Auch Wachstumsfaktoren scheinen in der Genese von
malignen Tumoren und deren Vaskularisierung eine Rolle zu spielen. So war bei
kaninen inflammatorischen Karzinomen immunhistologisch eine starke Expression
Literaturübersicht 8
des „vascular endothelial growth factor“ (VEGF) nachzuweisen (MILLANTA et al.,
2010). Auch Somatotropin und Prolaktin werden neben Progesteron eine
tumorinduzierende Wirkung zugeschrieben. Durch Prolaktinhemmer verkleinerten
sich bereits vorhandene Mammatumoren (GUTBERLET et al., 1998).
Schon während der ersten Geschlechtszyklen entstehen kleine Klone von
präneoplastischen, epithelialen Zellen, die in späterer Zeit unter Einfluss geeigneter
Stimuli tumorös entarten (BOSTOCK, 1986). Eine frühzeitig vor dem ersten Zyklus
durchgeführte Ovariektomie senkt daher das Mammatumorrisiko auf 0,5 %, nach
dem ersten Zyklus auf 8 %. Eine Kastration nach dem zweiten Zyklus vermindert das
Risiko der Tumorentstehung nur noch auf 26 %. Ab einem Lebensalter von 2,5
Jahren kann kein Unterschied in der Mammatumorinzidenz zwischen intakten und
kastrierten Hündinnen mehr ausgemacht werden (BOSTOCK, 1986; BRODEY et al.,
1983; GUTBERLET et al., 1998; MANN, 1984; RUTTEMAN, 2005).
Ein weiterer möglicher Weg der Tumorgenese beim Menschen ist die Beeinflussung
des Übergangs von epithelialen Zellen zu mesenchymalen Zellen, welcher in vitro
von MMPs induziert wird. Dies führt zu DNA-Schäden und Instabilität des Genoms
(STALLINGS-MANN und RADISKY, 2007). Hypoxie wiederum stimuliert die
Tumorzellinvasion in den Brusttumorzelllinien MDA-MB-231 und MDA-MB-435
(MUNOZ-NAJAR et al., 2006). Während TIMPs in der Lage waren, die durch
schlechte Sauerstoffspannung verursachte Invasion zu blockieren, führte die
Überexpression von „membrane type-1 matrix metalloproteinase“ (MT1-MMP) zur
Aktivierung von weiteren MMPs und zur Steigerung der Hypoxie-induzierten Invasion
(MUNOZ-NAJAR et al., 2006).
Als weitere Einflussfaktoren werden u. a. virale, umweltbedingte, immunologische
und diätetische diskutiert (GUTBERLET et al., 1998; MANN, 1984; MISDORP, 2002).
Pathogenetisch handelt es sich bei der Tumorgenese um eine Mutation eines ProtoOnkogens. Diese kann spontan oder durch zuvor genannte Stimuli induziert erfolgen.
Das Proto-Onkogen kodiert ein für die Zellteilung und –differenzierung essentielles
Signalprotein und wird in mutierten Zellen durch sogenannte Tumorsuppressorgene
gehemmt, die nach ihrer Aktivierung die Apoptose der mutierten Zelle einleiten. Falls
die
Tumorsuppressorgene
jedoch
ebenfalls
mutiert
sind,
kommt
es
zur
Transformation zur Tumorzelle und zu unkontrolliertem Wachstum (SUTER, 2001). In
der
veterinärmedizinischen
Tumordiagnostik
sind
keine
Marker
für
kanine
Literaturübersicht 9
Mammatumoren
etabliert.
Die
Gene
BRCA1
und
BRCA2,
humane
Tumorsuppressorgene, sorgen bei Mutation für gesteigerte Empfänglichkeit für
Brustkrebs. Ihre Genprodukte sind nukleäre Phosphoproteine, die an der Regulation
des Zellzyklus beteiligt sind (GILBERT et al., 2009). Bei malignen Mammatumoren
der Hündin wurde eine aberrante Verteilung oder auch das vollständige Fehlen
dieses Regulationsproteins festgestellt und mit dem bösartigen biologischen
Verhalten des Tumors in Zusammenhang gebracht (NIETO et al., 2003). Dieses
bösartige Verhalten, charakterisiert durch Invasion und Metastasierung beeinflusst
die Bindung von Tumorzellen zur Basalmembran und die Degradierung von lokalem
Bindegewebe. Darauf folgen Penetration und Migration durch das proteolysierte
Stroma (CHAMBERS und MATRISIAN, 1997; CURRAN und MURRAY, 1999;
KOBLINSKI et al., 2000).
2.1.5 Pathologie kaniner Mammatumoren
Die kaninen Mammatumoren treten in 75 % der Fälle solitär auf. Sie variieren in ihrer
Größe und Konsistenz. Diese reicht von weich, teils fluktuierend bei zystischen
Veränderungen bis hin zu derber Beschaffenheit mit glatter oder unregelmäßig
höckeriger Oberfläche (ARNOLD, 2001; GUTBERLET et al., 1998; MCEWEN und
WITHROW, 1996; RUTTEMAN, 2005; SIMON et al., 2001). Maligne Tumoren sind
signifikant größer als benigne Veränderungen. Hunde mit malignen Neoplasien
entwickeln auch häufiger neue Primärtumoren (SORENMO et al., 2009). Mehr als
80% der Entartungen treten in den kaudalen drei, 60 % in den letzten beiden
Komplexen auf. Dies ist vermutlich mit größeren morphologischen Umbauprozessen
während des Zyklus und dem relativ höheren Gewicht der hinteren Komplexe
erklärbar (GUTBERLET et al., 1998; KÄLIN et al., 1985; SIMON et al., 2001). Die in
den kranialen Komplexen auftretenden Tumoren sind häufig gutartig und nicht so
groß oder sie werden als hyperplastische Proliferationen diagnostiziert (ZANINOVIC
und SMICIC, 1994). Metastasierung wird vorwiegend bei einfachen Karzinomen und
Mischtumoren festgestellt (ARNOLD, 2001). Diese kann auf hämatogenem,
lymphogenem oder lympho-hämatogenem Weg erfolgen. Beim Vergleich von
inflammatorischen und nicht-inflammatorischen Karzinomen, die sowohl beim
Menschen, als auch bei der Hündin die aggressivsten Tumorarten darstellen, zeigt
sich
beim
Hund
eine
Metastasierungstendenz
in
die
Blase
und
die
Reproduktionsorgane, jedoch keine Metastasierungsneigung in Knochen und nur
Literaturübersicht 10
eine geringe Tendenz zur Metastasierung in Lunge, Leber und Nieren (CLEMENTE
et al., 2010). Genetisch lassen sich beim Menschen drei Subtypen bei malignen
Brusttumoren klassifizieren. In einer immunhistologischen Untersuchung wurden
Gesäugetumoren des Hundes untersucht, um diese molekular basierte Klassifikation
der humanen Brusttumoren einer Überprüfung zu unterziehen. Mit Hilfe von
Antikörpern wurden die Subtypen in „luminalähnlich A und B“ und „basalähnlich“
unterteilt (SASSI et al., 2010). Diese Subtypen zeigten allerdings keine Assoziationen
zum histologischen Befund oder dem Tumorgrad. Aufgrund der hohen molekularen
Heterogenität von kaninen Mammatumoren wäre eine Klassifikation auf genetischer
Ebene von wichtiger prognostischer Bedeutung, jedoch schwierig (SASSI et al.,
2010).
2.1.5.1 Maligne Tumoren der Mamma
Die histologische Klassifikation der kaninen Mammatumoren erfolgt anhand der
WHO (World Health Organisation)- Einteilung in der „histologischen Klassifikation
von Mammatumoren von Hund und Katze“ (MISDORP et al., 1999). Diese legt
morphologische Kriterien unter Berücksichtigung einer prognostischen Wertung
zugrunde und listet die Tumoren aufsteigend in ihrer Malignität. Es gibt insgesamt
sieben verschiedene Gruppen maligner kaniner Mammatumoren epithelialen,
mesenchymalen und gemischten Ursprungs (MISDORP et al., 1999).
Epitheliale Tumoren:
-nicht infiltrativ wachsendes Karzinom (Carcinoma in situ)
-komplexes Karzinom
-einfaches Karzinom:
Tubulo-papillärer Subtyp
Solider Subtyp
Anaplastischer Subtyp
-besondere Varianten:
Spindelzellkarzinom
Plattenepithelkarzinom
Muzinöses Karzinom
Lipidreiches Karzinom
Mesenchymale Tumoren: -Sarkome:
Fibrosarkom
Osteosarkom
Literaturübersicht 11
Andere Sarkome
Mischtumoren:
-Karzinosarkom
-Karzinom oder andere Sarkome in benignen Tumoren
Das nicht-infiltrativ wachsende Karzinom stellt eine epitheliale maligne Neoplasie dar,
welche nicht die Basalmembran überwindet, häufig multizentrisch auftritt und
kribriform, zum Teil begleitet von einer zentralen Nekrose, wächst.
Komplexe Karzinome treten beim Hund recht häufig auf. Ihre Malignität ist
gekennzeichnet durch das Fehlen einer Kapsel, infiltratives Wachstum, hohe
Zelldichte, Nekrosen und eine hohe Mitoserate. Die epithelialen Zellen können
tubulopapillär oder solide formiert sein. Sowohl die epithelialen Anteile, als auch die
myoepithelialen Anteile sind proliferiert, wobei die spindelförmigen Myoepithelien ein
retikuläres Netz in einer faserarmen extrazellulären Matrix bilden. Expansives,
lobuliertes Wachstum ist die Regel, Lymphgefäßeinbrüche jedoch selten.
Einfache Karzinome bestehen aus nur einem Zelltyp, der entweder epithelialen
Zellen
oder
myoepithelialen
Zellen
ähnelt.
Eine
peritumorale
Lymphozytenakkumulation wird häufig, mit oder ohne Nekrose beobachtet. Diese
Tumoren haben eine große Tendenz, in umgebendes Gewebe und Gefäße
vorzudringen und können in drei Subtypen von steigender Malignität eingeteilt
werden: tubulopapillär, solide und anaplastisch. Der tubulopapilläre Subtyp lässt sich
nochmals unterteilen in tubuläre und papilläre Karzinome, wobei die tubulären
Tumoren häufig von Proliferationen stromalen Bindegewebes begleitet sind. Im
soliden Karzinom finden sich die Tumorzellen in kompakten Strängen, Flächen oder
Nestern wieder. Das Stroma ist reduziert oder in moderaten Anteilen aufzufinden.
Das anaplastische Karzinom ist ein hochgradig infiltrativ wachsender Tumor, der
pleomorphe, nicht klassifizierbare epitheliale Zellen enthält. Die Nuklei dieser Zellen
sind häufig chromatinreich und weisen einen deutlichen Polymorphismus auf.
Mehrkernige Zellen, ein kollagenreiches Stroma und Nekrosetendenz sind ebenfalls
häufig vorhanden.
Besondere Varianten der Karzinome sind das Spindelzellkarzinom, das vermutlich
myoepithelialen Ursprungs ist, sowie das Plattenepithelkarzinom, das squamöse
Differenzierung aufweist, die häufig von zentraler Nekrose begleitet sind. Es ist stark
infiltrativ wachsend und häufig von lymphogener Metastasierung begleitet. Bei
Literaturübersicht 12
Hunden ist es in der Mamma unüblich. Auch muzinöse und lipidreiche Karzinome
sind bei Hunden selten.
Zu den bösartigen mesenchymalen Tumoren zählt das Fibrosarkom, dessen
Spindelzellen retikulin-und kollagenartige Fasern bilden. Diese können parallel
ausgerichtet, oder netzartig verwoben sein. Sie sind, gemeinsam mit den
Osteosarkomen, die häufigsten mammären Sarkome der Hündin. Osteosarkome sind
Neoplasien, die entweder rein ossäre oder zusätzlich auch chondrale Anteile
aufweisen. Außerdem können Bindegewebsbestandteile und Fettgewebe maligne
entartet sein. Hervorstechende Merkmale sind Pleomorphismus und mitotische
Aktivität. Chondrosarkome und Liposarkome sind selten. Die aus variablen
epithelialen und mesenchymalen Anteilen zusammengesetzten Tumoren werden als
Karzinosarkome bezeichnet. Sie variieren in ihrer Morphologie, sind jedoch häufig
gut umschrieben. Karzinome oder Sarkome in einem gutartigen Tumor sind
beispielsweise maligne Neoplasien in komplexen Adenomen oder in benignen
Mammamischtumoren. Es stellt jedoch eine Herausforderung dar, festzustellen, ob
der maligne tumoröse Teil aufgrund einer Entartung des benignen entstanden, oder
in diesen invadiert ist.
2.1.5.2 Benigne Tumoren des Mammadrüsengewebes
Benigne Mammatumoren können in vier Gruppen unterteilt werden (MISDORP et al.,
1999) und sind epithelialen oder gemischten Ursprungs.
Epitheliale Tumoren:
-Adenome:
Einfaches Adenom
Komplexes Adenom
Basaloides Adenom
-Duktpapillome
Mischtumoren:
-Fibroadenome:
Zellarmes Fibroadenom
Zellreiches Fibroadenom
-Benigne Mischtumoren
Die einfachen Adenome bestehen aus gut differenziertem luminalen Epithel tubulärer
Wuchsform. Beim Hund werden solide wachsende, gutartige Spindelzellen
enthaltende Adenome Myoepitheliome genannt. Bei komplexen Adenomen treten
neben epithelialen Bestandteilen auch myoepitheliale Zellen auf. Das Vorhandensein
Literaturübersicht 13
einer Kapsel in Abwesenheit von Nekrose und Zellatypien, sowie eine geringe
Mitoserate helfen bei der Unterscheidung von gut differenzierten komplexen
Karzinomen. Einfache Adenome stellen häufig eine Übergangsform zu benignen
Mischtumoren dar. Basaloide Adenome wurden erstmals und nur beim Beagle
diagnostiziert. Dieser benigne Tumor, bestehend aus basaloiden, monomorphen,
epithelialen Zellen orientiert sich peripher an der Basalmembran und kann zentral
squamös differenziert sein. Fibroadenome bestehen aus einer Mischung aus
luminalen Epithelzellen, Stromazellen und bisweilen myoepithelialen Zellen. Sie
werden in zellreich und zellarm unterteilt. Der benigne Mammamischtumor enthält
Komponenten, die morphologisch an epitheliale (luminale oder myoepitheliale) und
an mesenchymale Tumoren erinnern. Die mesenchymalen Bestandteile produzieren
Knorpel und / oder Knochen und / oder Fettgewebe in Kombination mit
Bindegewebe. Sie sind bei der Hündin häufig. Duktale Papillome finden sich in
dilatierten Milchgängen und bestehen aus einfachen oder komplexen, benignen
Tumoren.
2.1.5.3 Unklassifizierte Tumoren des Mammadrüsengewebes
Tumoren, die sich in keine der oben genannten Kategorien einfügen lassen, werden
„unklassifiziert“ genannt.
2.1.5.4 Mammäre Hyperplasien und Dysplasien
Im Folgenden werden die einzelnen Formen von Hyperplasien und Dysplasien laut
WHO-Klassifikation zusammengefasst.
-Duktale Hyperplasie
-Lobuläre Hyperplasie
-Zysten
-Gangektasien
-Fokale Fibrosen
-Gynäkomastie
Die duktale Hyperplasie kann diffus oder multifokal auftreten und besteht aus einer
intraduktalen epithelialen Zellproliferation. Die Zellen sind klein, uniform und
mitosearm; das Vorhandensein einer myoepithelialen Schicht favorisiert die
Diagnose einer benignen Entartung. Die duktale Hyperplasie ist auch als
Literaturübersicht 14
Papillomatose oder Epitheliose bekannt. Bei der lobulären Hyperplasie unterscheidet
man zwei Formen, die epitheliale Hyperplasie und die Adenosis. Die epitheliale
Hyperplasie stellt eine nicht neoplastische Proliferation epithelialer Zellen in
extralobulären Dukti dar, während die Adenosis durch eine nicht neoplastische
Proliferation
von
Duktuli
charakterisiert
wird.
Letztgenannte
besteht
aus
unterschiedlichen Anteilen Epithel, Myoepithel und Stroma. Zysten treten für
gewöhnlich multipel auf. Das Epithel kann atrophisch, hyperplastisch oder papillär
wuchernd vorliegen. Gangektasien repräsentieren eine progressive Dilatation des
mammären Duktsystems. Eine Ruptur des Epithels kann zu einer granulomatösen
Entzündung führen. Fokale Fibrosen können in lobulären Hyperplasien und in
duktalen Proliferationen in Erscheinung treten. Die Gynäkomastie ist ein Phänomen
beim Rüden, unter anderem ausgelöst durch einen endokrin aktiven Sertolizelltumor,
der zu ausgeprägten duktalen und stromalen Hyperplasien führt.
2.2
Die extrazelluläre Matrix (EZM)
Die extrazelluläre Matrix vermittelt Zell-zu-Zell-Kontakte und Interaktionen der Zellen
mit ihrer Umgebung. Sie dient der Aufrechterhaltung der Gewebsintegrität, -form und
-architektur
und
sorgt
durch
Proteinbindung
für
die
Sequestrierung
von
Gewebswasser. (KUMAR et al., 2005). Aber auch pathologische Vorgänge, wie die
Entstehung von Tumoren und genetische Erkrankungen werden von der EZM und
deren Proteinen mit beeinflusst. Diese Proteine beinhalten typischerweise multiple,
hochkonservierte Domänen, die an Adhäsionsrezeptoren, wie Integrine binden
können. Sie sind für die Zell-Matrix-Adhäsion und die Übermittlung von Signalen in
die Zelle zuständig. EZM-Proteine binden auch an lösliche Wachstumsfaktoren und
regulieren deren Verteilung, Aktivierung und Präsentation (HYNES, 2009). Die EZM
ist organabhängig unterschiedlich zusammengesetzt. Die Komponenten werden von
zahlreichen Zellen synthetisiert und sezerniert. Dazu zählen im Wesentlichen drei
Gruppen von Makromolekülen: 1. Bindegewebs-Strukturproteine, wie Kollagene und
Elastine, 2. Adhäsive Glykoproteine, und 3. Proteoglykane und Hyaluronsäure. Diese
Makromoleküle dienen zum Einen dem Aufbau der Basalmembran, zum Anderen der
Gestaltung
der
interstitiellen
Matrix.
Durch
Tumorerkrankungen
oder
Entzündungsprozesse kann die Homöostase, die durch dynamische Auf- und
Abbauprozesse aufrechterhalten wird, empfindlich gestört werden (STAMENKOVIC,
2003). Die durch Proteolyse entstandenen Spaltprodukte der EZM können z. B. die
Literaturübersicht 15
Migration von verschiedenen Zellarten ermöglichen (NAGASE et al., 2006; PAGEMCCAW et al., 2007; STAMENKOVIC, 2000).
2.3
Matrixmetalloproteinasen (MMPs) und ihre Inhibitoren (TIMPs)
2.3.1 Klassifikation, Funktion und Struktur
Matrixmetalloproteinasen, auch Matrixine genannt, wirken auf den extrazelullären
Raum und degradieren sowohl Matrix-, als auch nicht-Matrix Proteine. Sie sind
essentiell für Morphogenese, Wundheilung, Gewebs-“Remodelling“, Zellproliferation,
Differenzierung der EZM, Vaskularisierung und Zellmigration (PAGE-MCCAW et al.,
2007; STAMENKOVIC, 2003) und spielen im Verlauf von pathologischen Prozessen
wie Enzephalitis eine wichtige Rolle (ALLDINGER et al., 2006; ULRICH et al., 2006).
Die Degradierung der extrazellulären Matrix wird unter anderem mittels Proteolyse
von Wachstumsfaktoren erreicht. Dadurch wird die Migration von Zellen in
umliegendes Gewebe ermöglicht. Regulierte Rezeptorspaltung führt zur Beendigung
der Migrationssignale (CHANG und WERB, 2001). MMPs bestehen aus mehreren
Domänen und werden von den TIMPs reguliert. Grundsätzlich sind zahlreiche Typen
von Proteinasen in die Degradierung der extrazellulären Matrix eingebunden, wie z.
B. Serine, Zysteine und Aspartate (CHAMBERS und MATRISIAN, 1997; CURRAN
und MURRAY, 1999; KOBLINSKI et al., 2000; NAGASE und WOESSNER, Jr.,
1999), den Hauptbestandteil machen allerdings die MMPs aus (VISSE und NAGASE,
2003). Der Mensch besitzt 24 Gene, die für Matrixmetalloproteinasen kodieren, zwei
davon für MMP-23. Somit existieren 23 MMPs beim Menschen, deren Aktivität mittels
Wachstumsfaktoren, Zytokinen, Hormonen, Zell-zu-Zell-Kontakten und Interaktionen
zwischen Zellen und der EZM reguliert wird (NAGASE und WOESSNER, Jr., 1999).
Auch das Vorliegen als inaktive Vorstufen, die Zymogene, und die Hemmung durch
endogene
Inhibitoren,
die
TIMPs,
stellen
weitere
Abstufungen
der
Regulationsmechanismen dar.
MMPs sind als zinkabhängige Endopeptidasen Mitglieder der „zinc metalloprotease
family M10“ und wurden zunächst gemäß ihrer Substratspezifität in Kollagenasen,
Gelatinasen, Stromelysine und Matrilysine eingeteilt (YONG et al., 1998). Aufgrund
zahlreicher Substratüberschneidungen erfolgte eine numerische Listung (MMP-1,
MMP-2,Q), wobei MMP-4, MMP-5, MMP-6 und MMP-22 fehlen, da diese sich als mit
anderen MMPs identisch herausgestellt haben. Anhand ihrer Domänen und ihres
Literaturübersicht 16
molekularen Aufbaus wurden sie systematisiert (EGEBLAD und WERB, 2002;
MCCAWLEY und MATRISIAN, 2001; STAMENKOVIC, 2003).
MMPs gelten als extrazelluläre Proteine, jedoch zeigten inzwischen Studien, dass
MMP-1 (LIMB et al., 2005), MMP-2 (KWAN et al., 2004) und MMP-11 (LUO et al.,
2002) auch intrazellulär vorliegen und als intrazelluläre Proteine aktiv sind. Manche
MMPs werden sezerniert, andere liegen in membrangebundener Form vor. Alle
MMPs werden als Zymogene produziert, die eine sekretorische Signalsequenz und
eine Propeptidsequenz enthalten und durch Proteolyse in die aktive Form überführt
werden (STAMENKOVIC, 2003).
Die typische Struktur eines MMPs besteht aus einer Propeptid-Domäne, aus etwa
80 Aminosäuren, einer katalytischen Domäne, etwa 170 Aminosäuren beinhaltend,
einer sogenannten „hinge“-Region, eine prolinreiche Verbindungsstelle zwischen
der katalytischen Domäne und eines weiteren Bereichs, der Hämopexin-Domäne,
die aus ca. 200 Aminosäuren besteht. Sie ist für die kollagenolytische Aktivität der
Kollagenasen zuständig. CHUNG et al. (2004) zeigten, dass Kollagenasen zunächst
die tripelhelikalen Ketten ihrer Substrate aufwinden, um sie dann zu spalten.
Aufgrund dieser Aktivität und verschiedener Mechanismen, einschließlich der
Enzymproduktion durch Tumorzellen, der Induktion der Kollagenaseproduktion in
benachbarten Stromazellen und der Interaktion von Tumor- und Stromazellen, um
die Kollagenasenproduktion durch eine oder beide Zelltypen einzuleiten, können
Kollagenasen unter anderem als Indikatoren für schlechte Prognose und als Marker
für die Tumorprogression dienen (BRINCKERHOFF et al., 2000). Durch Interaktion
der Hämopexin-Domäne von proMMP-2 mit dem Inhibitor TIMP-2 wird beispielsweise
auch die Bindung an MT1-MMP vermittelt; dieses agiert sowohl als Rezeptor für den
proMMP-2-TIMP-2-Komplex, als auch als Aktivator von proMMP-2 (ITOH und SEIKI,
2006).
Ausnahmen vom klassischen Aufbau bilden MMP-7 (Matrilysin 1) und MMP-26
(Matrilysin 2), denen das Verbindungspeptid und die Hämopexin-Domäne fehlen,
und MMP-23, das zusätzlich eine zysteinreiche Domäne und eine Immunglobulinähnliche Domäne aufweist.
Durch Fibronektin II –ähnliche Einschübe sind die Gelatinasen (MMP-2 und MMP9) in der Lage, die Bindung von Gelatine an die katalytische Domäne zu vermitteln
(NAGASE und WOESSNER, Jr., 1999). Diese fibronektinähnliche Domäne ist
Literaturübersicht 17
essentiell, um Typ IV Kollagen, Elastin und Gelatine zu spalten, allerdings ist sie
nicht in der Lage, die Hydrolyse kleinerer Peptide zu vermitteln (MURPHY et al.,
1992).
Der zinkbindende Bereich der katalytischen Domäne und der „cysteine switch“Bereich der Propeptid-Domäne besitzen gemeinsame strukturelle Elemente, wobei
drei Histidinmoleküle das zinkbindende Strukturelement beeinflussen und das
Zystein (Cys) der Propeptidregion mit dem katalytischen Zinkion (Zn) interagiert
(STAMENKOVIC, 2003). Diese Zystein-Zink-Verbindung hält durch Wasserbindung
an das Zink-Atom die proMMPs in inaktiver Form (Zymogen). Die Bindung von
Substraten wird von der Struktur der Bindungsstelle diktiert. Diese liegt in der Nähe
des Zinkatoms und ist in ihrer Tiefe, je nach MMP, variabel (NAGASE et al., 2006).
Sie
ist
der
determinierende
Matrixmetalloproteinasen.
Durch
Faktor
das
der
Binden
Substratspezifität
eines
Substrates
von
wird
das
Wassermolekül vom Zinkmolekül getrennt. Zunächst muss jedoch das Zymogen
durch Proteolyse in die aktive Form überführt werden; dies wird durch Trennung der
Zystein-Zink-Verbindung und Ersetzen der Thiolgruppe des hochkonservierten,
ungepaarten
Zysteinrestes
durch
ein
Wassermolekül
erreicht.
Dieser
Aktivierungsmechanismus wird als „cysteine switch“ oder „velcro“-Mechanismus
bezeichnet (SOMERVILLE et al., 2003; VALLEE und AULD, 1990; VAN WART und
BIRKEDAL-HANSEN, 1990). Eine „Met-turn“-Region, ebenfalls in der katalytischen
Domäne, sorgt für den Strukturerhalt rund um das katalytische Zink (BODE et al.,
1993). Die Zinkbindungsstelle und das „Met-turn“ sind Strukturelemente, die allen
Familien der „metzincins“ (wie z. B die ADAM-, ADAMTS-oder die Astacin-Familie)
zueigen
sind
(BODE
et
al.,
1993).
Die
nahe
verwandten
Familien
der
Matrixmetalloproteinasen und die Metalloproteinasen Disintegrine (ADAMs) spielen
bei der Tumorausbreitung eine wichtige Rolle, wobei die ADAMs für Zelladhäsion
und Proteolyse zuständig, die MMPs hingegen für Invasion, Angiogenese,
Metastasierung, Tumorwachstum und –überleben verantwortlich sind (CHANG und
WERB, 2001).
2.3.2 Regulation der MMPs
Die MMP-Aktivität wird auf unterschiedlichen Wegen kontrolliert, nämlich a) die
Transkription,
wobei
die
mRNA,
die
posttranskriptional
vorliegt,
durch
Wachstumsfaktoren stabilisiert, bzw. destabilisiert wird und die Exkretion von
Literaturübersicht 18
intrazellulär gespeicherten MMPs variieren kann (STERNLICHT und WERB, 2001),
b) die proteolytische Aktivierung aus der inaktiven zymogenen Form und c) die
Inhibierung des aktiven Enzyms durch eine Vielzahl endogener Inhibitoren, zum
Beispiel der TIMPs (STAMENKOVIC, 2000; 2003). Auch die Induktion der
Genexpression durch „extracellular matrix metalloproteinase inducer“ (EMMPRIN,
CD 147, Basignin), die an der Tumorzelloberfläche vermehrt exprimiert werden, stellt
eine Möglichkeit zur Regulation dar (BISWAS et al., 1995; GUO et al., 2000).
Die Expression der meisten MMPs (darunter MMP-7 und MMP-12) wird auf der
transkriptionellen Ebene mittels Wachstumsfaktoren, Zytokinen, Hormonen und
Kontakt zur extrazellulären Matrix induziert (AMALINEI et al., 2007).
MMPs können durch Proteinasen oder „non-proteolytisch“ (chemisch oder thermisch)
durch Zerstörung der Zystein-Zink-Interaktion aktiviert werden (AMALINEI et al.,
2007; CHEN et al., 2001; VAN WART und BIRKEDAL-HANSEN, 1990). Plasmin
aktiviert zum Beispiel proMMP -1, -3, -7, -9, -10 und -13. Aktivierte MMPs können
beim Umbau anderer MMPs mitwirken (AMALINEI et al., 2007; VISSE und NAGASE,
2003).
Schließlich
stehen
den
MMPs
funktionelle
Antagonisten
gegenüber.
In
Gewebsflüssigkeiten erfüllt diese Aufgabe vor allem α2-Makroglobulin (SOTTRUPJENSEN und BIRKEDAL-HANSEN, 1989; YANG et al., 2001). Weitere Regulatoren
der MMP-Aktivität sind Thrombospondin und der Oberflächenrezeptor „reversion
inducing cysteine-rich protein with kazal motifs“ (RECK) (OH et al., 2001;
STAMENKOVIC, 2003). So bindet Thrombospondin-2 an MMP-2 und erleichtert die
Rezeptor-vermittelte Endozytose (YANG et al., 2001). Thrombospondin-1 hingegen
kann MMP-2 und MMP-9 sowohl aktivieren (TARABOLETTI et al., 2000) als auch in
inaktiver Form binden und blockieren (BEIN und SIMONS, 2000; RODRIGUEZMANZANEQUE et al., 2001). RECK, ein Glykosylphosphatidylinositol (GPI)verankertes Glykoprotein, das MMP-2 und -9 herabreguliert, die Angiogenese
unterdrückt und zum Tumorzelltod führt, inhibiert die proteolytische Aktivität von
MMP-2 und -9 , sowie MT1-MMP (OH et al., 2001; TAKAHASHI et al., 1998). Eine
Reihe von Proteinen enthalten Sequenzen, die der N-terminalen Sequenz der TIMPs
ähneln, so zum Beispiel Netrine, die unter anderem „type I collagen C-proteinase
enhancer protein“ (PCPE) sezernieren und auch als MMP-Inhibitor fungieren
(BAKER et al., 2002). Der „tissue factor pathway inhibitor“ (TFPI-2) weist ebenfalls
Literaturübersicht 19
Sequenzähnlichkeiten mit den TIMPs auf und inhibiert MMP-1, MMP-2, MMP-9 und
MMP-13. Auch Thrombospondin-2 wird zu den MMP-Inhibitoren gezählt (BAKER et
al., 2002), während α2-Makroglobulin als Hauptinhibitor der Matrixmetalloproteinasen
im Plasma gilt.
Weitere endogene Inhibitoren sind die TIMPS. Diese Moleküle haben ein
Molekulargewicht von 21-28 Kilodalton (kDa) und gehen eine 1:1 stochiometrische
Bindung mit MMPs ein, um diese reversibel zu blockieren (GOMEZ et al., 1997).
TIMP-1 und TIMP-2 sind in der Lage, eine Vielzahl von MMPs zu hemmen. TIMP-3
inhibiert vor allem die Aktivität von MMP-1, -3, -7 und -13 und die verwandten
Metalloproteinasen der ADAMs–Familie (ADAM-10, -12, -17) (AMOUR et al., 1998;
NAGASE et al., 2006), aber auch die ADAMTS -1, -4, -5 (NAGASE et al., 2006).
TIMP-4 weist eine schwächere, etwas eingeschränkte Inhibitoraktivität auf, die sich
auf MMP-2, und -7 und weniger ausgeprägt MMP-1, -3 und -9 bezieht (LIU et al.,
1997).
Die meisten MMPs werden von Zellen sezerniert und extrazellulär aktiviert. Pei und
Weiss wiesen 1995 für MMP-11 (Stromelysin-3) eine intrazelluläre Aktivierung mittels
Furin nach. Für viele MMPs ist für eine optimale Funktion die Lokalisierung an der
Zelloberfläche essentiell (WERB, 1997). Auch sezernierte MMPs sind häufig
transient an der Zelloberfläche zu finden, verbunden mit Adhäsionsrezeptoren oder
mit Proteoglykanen. So findet sich MMP-1 assoziiert mit Integrinen (DUMIN et al.,
2001) und EMMPRIN, einem Immunglobulin, das gebunden an MMP-1 an der
Zelloberfläche die Tumorzellinvasion begünstigt (GUO et al., 1997; 2000).
Zelloberflächenbindung scheint bei vielen MMPs dafür zu sorgen, dass die MMPAktivität an jene Stellen verlagert wird, an denen das „Remodelling“ der EZM
stattfindet und der Zelle eine Kontrollmöglichkeit über Degradierung und damit
verbundene Migration gibt (BOURGUIGNON et al., 1998). Die an der Zellmembran
verankerten MMPs -7 und -9 zeigen eine persistierende Aktivität. Dies könnte ein
Hinweis darauf sein, dass die Zelloberfläche diesen Enzymen quasi als protektive
Nische zum Schutz vor ihren natürlichen Inhibitoren dient (BOURGUIGNON et al.,
1998; YU und STAMENKOVIC, 1999; YU et al., 2002). Die Bindung von MMPs an
Zelloberflächenproteine kann Effekte auf intrazelluläre Signalwege haben, die
Proenzymaktivierung vereinfachen, die Zellmotilität modulieren, indem Zellkontakte
zur EZM unterbrochen werden, und die Internalisierung von Enzymen unterstützen
(BROOKS et al., 1996; STEFANIDAKIS und KOIVUNEN, 2006). Integrine dienen
Literaturübersicht 20
hierbei als Rezeptoren für Proteasen, einschließlich der MMPs. Der gebildete
Integrin-MMP-Komplex ist in die Angiogenese und das Tumorwachstum involviert. So
aktivieren MMPs Integrine mittels proteolytischer Spaltung; dies scheint wichtig für
die Invasion von Tumorzellen und Metastasierung zu sein (BROOKS et al., 1996;
STEFANIDAKIS und KOIVUNEN, 2006).
2.3.3 Substrate der MMPs
Generell spalten MMPs Peptidbindungen vor einem Rest mit hydrophoben
Seitenketten, wie z. B: Leukin, Isoleukin, Methionin, Phenylalanin oder Tyrosin
(AMALINEI et al., 2007; FOLGUERAS et al., 2004; VISSE und NAGASE, 2003). Die
Substrate der MMPs und die Wege ihrer proteolytischen Spaltung sind vielfältig:
So erfolgt eine Spaltung von Matrixproteinen in Verbindung mit Wachstumsfaktoren.
Der „fibroblast growth factor“ (FGF) und der „transforming growth factor- β ” (TGF-β)
haben eine hohe Affinität zu Matrixkomponenten, und die Proteolyse spezifischer
Matrixmoleküle macht die assoziierten Faktoren löslich. Die Spaltung von Decorin
durch MMP-2, -3, oder -7 ist beispielsweise in der Lage, TGF-β freizusetzen (IMAI et
al., 1997; MCCAWLEY und MATRISIAN, 2001). MMPs spalten Nicht-Matrixproteine,
die mit Wachstumsfaktoren assoziiert sind. Sie proteolysieren z. B. das „insulin-likegrowth-factor-binding protein“ (IGF-BP) und generieren einen aktiven IGF-Liganden
(FOWLKES et al., 1994). MMPs spalten und aktivieren Wachstumsfaktoren direkt
(MCCAWLEY und MATRISIAN, 2001; SCHONBECK et al., 1998; YU und
STAMENKOVIC,
2000).
Mitogene
Signalwege
können
durch
Proteolyse
herabreguliert werden (MCCAWLEY und MATRISIAN, 2001; SHEU et al., 2001).
MMPs führen durch Degradierung der Basalmembran und daraus resultierendem
Verlust von Zellsignalen zur Apoptose, z. B. bei der Mamma während der Involution
(ALEXANDER et al., 1996). Die Spaltung von β-Integrin, sowie E-Cadherin (durch
MMP-7) führt über Modulation der Zell-zu-Zell-oder Zell-Matrix-Bindungen indirekt zur
Zellmigration (LOCHTER et al., 1997; MCCAWLEY und MATRISIAN, 2001; NOE et
al., 2001; VON BREDOW et al., 1997).
2.3.4 MMPs und Tumoren
In der Humanmedizin sind zahlreiche Untersuchungen und Veröffentlichungen zum
Thema „Matrixmetalloproteinasen und ihre Inhibitoren“ bei Tumoren veröffentlicht
Literaturübersicht 21
worden. Nachfolgend soll eine Übersicht über die jüngsten Ergebnisse erstellt
werden.
Die recht enggefasste Ansicht, MMPs seien einfache Zerstörer von Komponenten
der extrazellulären Matrix lässt sich neueren Untersuchungen nach nicht mehr
halten. So sind die Proteine in weiten Bereichen an der Tumorentstehung und der
metastatischen Disseminierung beteiligt (CHABOTTAUX und NOEL, 2007). Bei
pathophysiologischen Prozessen werden MMPs vermehrt freigesetzt, so wird zum
Beispiel MMP-7 vor allem von Tumorzellen sezerniert, andere MMPs wiederum von
tumornahen Stromazellen. Diese Stromazellen werden zur Expression durch
Tumorzellinfiltration, durch direkte Zell-zu–Zell-Kontakte, parakrin durch von
Tumorzellen freigesetzte Wachstumsfaktoren oder indirekt (über Induktion von
Wachstumsfaktoren) über den Abbau der EZM stimuliert (STAMENKOVIC, 2003).
MMPs setzen Faktoren frei, die parakrin das Verhalten bestimmter Zelltypen
beeinflussen. Bergers et al. wiesen 2000 nach, dass die VEGF-Sekretion von MMP-9
zu Angiogenese im Mausmodell bei Inselzelltumoren führte.
Malignes Wachstum wird grundsätzlich von 6 essentiellen Veränderungen der
Zellphysiologie
diktiert:
(1)
Produktion
autokriner
Wachstumsfaktoren,
(2)
Insensitivität gegenüber Wachstums-inhibierenden Signalen, (3) Unterlaufen der
Apoptose, (4) unbegrenztes replikatives Potential, (5) Aufrechterhaltung der
Angiogenese und schließlich (6) Invasion in Gewebe und Metastasierung
(HANAHAN und WEINBERG, 2000). Entgegen der früheren Auffassung, MMPs
wären vor allem wichtig in späten Stadien der Tumorprogression, nämlich durch ihren
Einfluss auf Zellmigration, Invasion und Metastasierung, wird durch neuere
Untersuchungen wahrscheinlich, dass MMPs nicht auf die Proteolyse physiologischer
Matrixbarrieren beschränkt sind (CAUWE et al., 2007). MMPs werden nun als
Schlüsselregulatoren vielfältiger zellulärer Funktionen gesehen. Meist an der
Zelloberfläche lokalisiert, reichen die vielfältigen Aufgaben der MMPs von der
Reifung und Aktivierung verschiedener Substrate, bis hin zu Inaktivierung und zum
Abbau derselben (CHABOTTAUX und NOEL, 2007). Obwohl manche MMPs (wie z.
B. MMP-7) von Tumorzellen gebildet werden, findet die Produktion der meisten
MMPs in stromalen Zellen statt. Mammatumoren sind häufig durch eine stromale
Reaktion charakterisiert, die zum Einen zelluläre Elemente (Infiltration von
fibroblastoiden, endothelialen und inflammatorischen Zellen), zum Anderen die
extrazelluläre Matrix mit einschließt (KALLURI und ZEISBERG, 2006; NOEL und
Literaturübersicht 22
FOIDART, 1998). Eine vermehrte Menge von Tumorstroma und erhöhte Anteile an
EZM sind bei invasiven Mammatumoren häufig assoziiert (SHEKHAR et al., 2003).
Die im Tumorstroma lokalisierten Fibroblasten zeigten eine Modifikation ihres
Phänotyps, die auch bei Fibroblasten während der Wundheilung beobachtet wurde
(DVORAK,
1986).
Diese
„aktivierten“
Fibroblasten,
wie
beispielsweise
die
peritumoralen Fibroblasten, die reaktiven Stromafibroblasten, die Karzinomassoziierten Fibroblasten oder auch die Tumor-assoziierten Fibroblasten, sind in die
maligne Progression von Tumoren aktiv eingebunden, vor allem durch ihre Fähigkeit,
MMPs zu sezernieren (KALLURI und ZEISBERG, 2006; MUELLER und FUSENIG,
2004). Fibroblasten produzieren latenten VEGF, der von Tumorzellen aktiviert
werden kann. Humane primäre Fibroblasten (VA-13 Zellkulturen) formierten mit
VEGF unter MMP-7-Zugabe in den Zellkulturüberstand endotheliale Tuben (ITOH et
al., 2007). Zugabe von „connective tissue growth factor“ (CTGF) hob den
Angiogeneseffekt wieder auf. Dies lässt vermuten, dass Fibroblasten latentes VEGF
im extrazellulären Raum deponieren, um im Bedarfsfall mit Hilfe von MMP-7 die
Angiogenese einzuleiten.
In frühen Stadien der Tumorentstehung sorgt die proteolytische Prozessierung
bioaktiver Moleküle für ein permissives Umfeld, das maligne Entartung ermöglicht.
Gebundene Wachstumsfaktoren, wie z. B. der TGF-β, der IGF, der FGF, und der
„Heparin Binding Epidermal Growth Factor“ (HB-EGF), sind nicht in der Lage, mit
ihrem Rezeptor zu interagieren und Signale zu übermitteln (CHABOTTAUX und
NOEL, 2007). Verschiedene MMPs regulieren die Tumorzellproliferation, indem sie
Wachstumsfaktoren an spezifische Bindungsproteine oder auch Matrixkomponenten
gebunden lassen, oder diese aus ihren Vorläufern in die aktive Form überführen. Als
Beispiel hierfür dient IGF, das durch MMP-7 aus seinem Vorläufer aktiviert wird
(MIYAMOTO et al., 2007). Ebenso aktiviert MMP-7 HB-EGF durch Spaltung dessen
an der Zelloberfläche verankerten Vorläufers und führt durch Aktivierung des
spezifischen
Rezeptors
ERbB4
zum
Überleben
dieser
Zellen
(YU
und
STAMENKOVIC, 1999). Die Spaltung des membrangebundenen Fas-Liganden
(mFasL) in löslichen FasL (sFasL) durch MMP-7 erhöht die Apoptose-Rate im
physiologischen, den Tumor umgebenden Gewebe (POWELL et al., 1999). Durch
Abnormalitäten in der Transduktionskaskade (LI et al., 2006; MITSIADES et al.,
2001; O'CONNELL et al., 1999) sind Tumorzellen hingegen in der Lage, die
Literaturübersicht 23
Apoptose zu unterlaufen. Desgleichen ist MMP-11 in der Lage, den Tumorzelltod zu
inhibieren (BOULAY et al., 2001).
Zell-zu-Zell-Kontakte
werden
auch
durch
E-Cadherin
vermittelt.
Mittels
proteolytischer Prozessierung von E-Cadherin durch MMP-7 wird die Zellaggregation
unterbrochen und Tumorzellinvasion möglich (NOE et al., 2001). Proteolyse von ECadherin und Freisetzen von β-Catenin ist elementar für die „epithelial to
mesenchymal transition“ (EMT), einem phänotypischen Übergang von Zellen, der mit
aggressivem malignen Verhalten assoziiert ist (CHRISTOFORI, 2007; GILLES et al.,
2001). Eine neuere Untersuchung von WOLF et al. (2007) wies bei der kollektiven
Migration von Brusttumorzellen und der Bildung von multizellulären Strängen eine
regulative Beteiligung von MT1-MMP mittels EZM-„Remodelling“ nach. Die Spaltung
von EZM-Komponenten, wie z.B. Laminin oder Typ IV Kollagen durch MMPs kann
zuvor unzugängliche Stellen exponieren und dadurch die Zellmigration vereinfachen
(GIANNELLI et al., 1997; GILLES et al., 2001; XU und YU, 2001).
Auch die Angiogenese ist ein Vorgang, der durch verschiedene MMPs eingeleitet
wird (DAVIS und SAUNDERS, 2006; HANDSLEY und EDWARDS, 2005; NOEL et
al., 2007; SOUNNI und NOEL, 2005; VAN HINSBERGH et al., 2006). Dies schließt
fibrinolytische und kollagenolytische Aktivität (HOTARY et al., 2002; 2003) ebenso
mit ein, wie die Morphogenese von Endothelzellen (HOTARY et al., 2000; LAFLEUR
et al., 2002; PLAISIER et al., 2004), die transkriptionale Regulation von VEGF
(DERYUGINA et al., 2002; NOEL et al., 2004; SOUNNI et al., 2002), das Freisetzen
von sequestriertem VEGF entweder in der EZM (BERGERS et al., 2000), oder an
den CTGF gebunden (HASHIMOTO et al., 2002), sowie die posttranslationale
Prozessierung von VEGF (LEE et al., 2005). MMPs können bei der Angiogenese
stimulierend oder auch inhibierend wirksam werden, so kann beispielsweise die
Degradierung
von
EZM-Komponenten
oder
Plasminogen
auch
angiogene
Inhibitoren, wie Tumstatin, Endostatin und Angiostatin generieren (HAMANO und
KALLURI, 2005; HELJASVAARA et al., 2005).
In der unveränderten und tumorösen kaninen Mamma wurden im Rahmen einer
Dissertation von PALTIAN (2006) die verschiedenen Epithelien der Tumoren, die
Gefäßbestandteile und das Stroma auf die Expression von MMP-2, -9, -14, sowie
von TIMP-1 und -2 immunhistologisch untersucht. MMP-2 wurde in alveolären und
duktalen Epithelien von Mammatumoren, sowie in Gefäßen unveränderten und
Literaturübersicht 24
hyperplastischen Drüsengewebes festgestellt. Maligne Tumorarten wiesen eine
verringerte Expression von MMP-2 auf. Für MMP-9 konnte eine Aufregulierung in
benignen Mammamischtumoren gegenüber normalem Drüsengewebe und anderen
Tumorarten, besonders den komplexen Adenomen und Karzinomen festgestellt
werden.
MMP-14
zeigte
eine
Aufregulierung
in
Tumorepithelien
und
Gefäßbestandteilen verschiedener Tumoren. Die Überexpression von MMP-14 in
Karzinomen könnte mit deren Metastasierungs- und Invasionsverhalten assoziiert
sein. TIMP-1 war in Mammamischtumoren der Hündin deutlich überexprimiert. Dies
könnte durch eine Gegenregulierung der erhöhten MMP-Expression in diesen
Tumoren zu erklären sein. In einfachen Karzinomen war hingegen eine reduzierte
TIMP-1-Expression aufzufinden. Diese Untersuchungsergebnisse zeigen, dass
MMPs und TIMPs in der kaninen Mamma in verschiedenen Strukturen heterogen
exprimiert werden und waren Anlass, weitere Matrixmetalloproteinasen und
Inhibitoren immunhistologisch zu untersuchen.
2.3.5 Ausgewählte MMPs und TIMPs
Im Folgenden soll ein Überblick über die Publikationen über MMP-7, MMP-11, MMP12 und TIMP-3 im Allgemeinen, bei Brusttumoren des Menschen und bei
Untersuchungen zu Hunden gegeben werden.
2.3.5.1 MMP-7-Allgemeines
MMP-7, auch Matrilysin genannt, ist das kleinste MMP und besitzt nur eine
Propeptid- und eine katalytische Domäne. Es wurde erstmalig von SELLERS und
WOESSNER (1980) im Uterus der Ratte während der Involution post partum
identifiziert. Sequenziert und charakterisiert wurde es 1988 (MULLER et al., 1988;
WOESSNER, Jr. und TAPLIN, 1988). Weitere Bezeichnungen des humanen Enzyms
sind „putatives MMP“ oder „Pump-1“ und es erwies sich, dass die Eigenschaften
dieser Protease sehr ähnlich zum Rattenenzym sind (QUANTIN et al., 1989).
Die Aufgaben von MMP-7 sind vielfältig. So spaltet es beispielsweise Vorstufen von
an der Zelloberfläche gelegenen Wachstumsfaktoren der EGF-Familie, vor allem HBEGF. Dies führt zu Zellproliferationen (YU et al., 2002). E-Cadherin, ein
Proteoglykan, wird ebenfalls durch MMP-7 gespalten (NOE et al., 2001). Das nun
lösliche Molekül begünstigt die Invasion von Tumorzellen in umliegendes Gewebe.
Auch Integrine, wie z.B. β4-Integrin gehören zu den Substraten von MMP-7 (VON
Literaturübersicht 25
BREDOW et al., 1997). Matrilysin spaltet weiterhin das Proteoglykan Syndecan-1 (LI
et al., 2002). Die Spaltung von FasL an der membrangebundenen Ektodomäne von
Nicht-Tumor- und Tumorzellen führt zur Bildung von sFasL (lösliches Fas) und
dessen Aktivierung (POWELL et al., 1999; VARGO-GOGOLA et al., 2002). Der nun
löslich vorliegende Faktor scheint für die Apoptose der umliegenden Zellen, zum
Beispiel während der Involution der Prostata wichtig zu sein (MITSIADES et al.,
2001; POWELL et al., 1999). Auch die Apoptose von zytotoxischen T-Zellen ist Fasinduziert und wird durch Tumorzellen durch die Freisetzung von MMP-7 und damit
verbundene Spaltung von Fas vermittelt (MASANORI et al., 2005).
Die Produktion von MMP-7 durch Makrophagen führt zur Freisetzung von TNF-α
durch Unterbrechen der Adhäsion an der Zelloberfläche (MCCAWLEY und
MATRISIAN, 2001). Dies stimuliert die MMP-3 –Produktion, z. B. bei entzündlichen
Prozessen der Bandscheibe (HARO et al., 2000). Die Spaltung von TNF-α-Vorstufen
führt zur Freisetzung von löslichem TNF-α; dies erhöht die Apoptose-Rate
(GEARING et al., 1994; MOHAN et al., 2002).
MMP-7 ist ebenfalls in der Lage, das „C-type lectin domain family member A“
(CLEC3A), ein Protein, das im Knorpel, in der Zellmembran, in der EZM, im
Kulturmedium von CLEC 3A-exprimierenden Zellen, aber auch im normalen
Brustgewebe und bei Brusttumoren aufgefunden wurde, zu spalten und dadurch
vermutlich die Adhäsion von (Tumor-) Zellen abzuschwächen und die Migration in
umliegendes Gewebe zu erleichtern (TSUNEZUMI et al., 2009).
In einem in vitro-Modell untersuchten HARREL et al. (2005) die Matrilysin-Expression
am polarisierten Epithel von „Madin-Darby-canine-kidney“ (MDCK)- Zellkulturen, die
mit humanem MMP-7 transfiziert wurden. Latentes MMP-7 wurde im basolateralen
Kompartiment sezerniert, jedoch war im apikalen Bereich der Zelle eine wesentlich
höhere Matrilysin-Aktivität zu beobachten, was vermutlich auf die apikale CoFreisetzung von Matrilysin-Aktivatoren zurückzuführen ist. Apikale MMP-7-Aktivität
führte zu erhöhter Proliferation. MMP-7 seinerseits fungiert ebenfalls als Aktivator
anderer MMPs. So zeigte eine in vitro-Studie, dass MMP-8 ein Substrat von MMP-7
darstellt und die Bioverfügbarkeit von MMP-13 verringert. MMP-8-Vorstufen scheinen
auch in vivo durch Matrilysin in die aktive Form überführt zu werden (DOZIER et al.,
2006).
Literaturübersicht 26
Obwohl MMP-7 an einer Vielzahl von physiologischen Prozessen beteiligt ist, ist der
Körper in der Lage, es bei Überexpression als Antigen zu erkennen. Eine Unterart
zytotoxischer T-Zellen lysiert in diesem Fall die entsprechenden Zellen (YOKOYAMA
et al., 2008). Neben den TIMPs fungiert auch die „human leucozyte elastase“ aus
polynukleären Leukozyten als natürlicher Inaktivator (ALLA et al., 2008).
2.3.5.2 MMP-7 in physiologischem und tumorösem Mammagewebe des
Menschen
MMP-7 spielt bei der Regulation des physiologischen Gewebs- „Remodellings“ eine
wichtige Rolle. Durch Komplexbildung mit der Vorstufe des „heparin-binding
epidermal growth factor“ (pro-HB-EGF) unter Einfluss von CD44 sorgt Matrilysin für
höhere Überlebenszeit der Epithelzellen der Mamma (YU et al., 2002). MMP-7 und
CD44 wurden im luminalen Kompartiment des lobuloalveolären Epithels und in den
myoepithelialen
Zellen
aufgefunden.
physiologischen
„Remodellings“
der
Dies
könnte
reproduktiven
bei
der
Organe
Kontrolle
helfen
und
des
vor
ungerichteter EZM-Degradierung schützen (YU et al., 2002).
Während des Alterungsprozesses durchlaufen „human mammary epithelial cells“
(HMEC)-Zellkulturen sowohl morphologische, als auch funktionelle Veränderungen.
Dabei sinken die MMP-7-Expressionslevel mit steigendem Zellalter, wohingegen die
MMP-1-, MMP-2- und MMP-9-Expression unverändert bleibt. Dies weist auf eine
mögliche Rolle von MMP-7 beim Zellalterungsprozess hin (BERTRAM und HASS,
2008).
Grundsätzlich sind 4 Klassen von Proteinasen bekannt, die durch Degradierung der
extrazellulären
Matrix
Serinproteinasen,
die
ein
Tumorfortschreiten
Aspartatproteinasen,
die
ermöglichen,
nämlich
Zysteinproteinasen
und
die
die
Matrixmetalloproteinasen (NAGASE et al., 2006; PAGE-MCCAW et al., 2007).
Matrilysin-mRNA ist jedoch, im Gegensatz zu einer Vielzahl anderer MMPs bei
Brusttumoren
schwächer exprimiert
als
in
gesundem
Mammagewebe.
Die
Proteinlevels von MMP-7 sind allerdings erhöht. Dies kann mit einer Regulierung der
Translation zusammenhängen, welche den mRNA-Level von Matrilysin in den
Tumorzellen senkt und aufgrund höherer Translationsraten eine verstärkte
Proteinexpression im Tumorgewebe zur Folge hat (KOHRMANN et al., 2009).
Allerdings bleibt die Rolle
von MMP-7
weitgehend undurchsichtig. Einige
Untersuchungen befassten sich bis jetzt ausgiebig mit Matrilysin im Zusammenhang
Literaturübersicht 27
mit Mammatumoren. Das Enzym war bei Androgenrezeptor-positiven
humanen
Brusttumoren erhöht. Diese Rezeptoren scheinen in der Lage zu sein, MMP-7
aufzuregulieren. Dies führte zu gesteigertem Invasionspotential der Tumorzellen
(GONZALEZ et al., 2008). Erhöhte Expression korrelierte mit verringerter
rückfallfreier Zeitspanne bei Brusttumorpatienten. Ebenso konnte eine Assoziation
der Expression von MMP-7 in Fibroblasten und in mononukleären Entzündungszellen
mit einer höheren Metastasierungsrate nachgewiesen werden (VIZOSO et al., 2007).
Einer neuen Studie zufolge wiesen intratumorale Fibroblasten unter anderem eine
höhere Expression von MMP-7 auf als die invasive Front des Tumors (DEL CASAR
et al., 2009). Eine stark vermehrte MMP-7-Produktion durch Fibroblasten korrelierte
mit dem Auftreten von entfernten Metastasen, geringe Fibroblastenexpression
dagegen war mit geringem Risiko für Metastasen korreliert (DEL CASAR et al.,
2009). Eine andere Untersuchung von GONZALEZ et al (2010a) zeigte eine höhere
MMP-7-Expression (neben anderen MMPs) in stromalen Fibroblasten der invasiven
Front im Vergleich zu den neoplastisch veränderten Dukti von gemischt invasiven
Karzinomen und dem Carcinoma in situ. MYLONA et al. wiesen 2005 einen Anteil
von 54,2% der MMP-7 exprimierenden Zellen im Zytoplasma von Brusttumorzellen
und 47,5% in tumoralen Stromazellen nach. Matrilysin schien mit gesteigerter
Invasivität der neoplastischen Zellen assoziiert zu sein. Es scheint möglich, dass ein
Proto-Onkogen, das ACTR/AIB1, MMP-7 aufreguliert und über Reduzierung der
Zelladhäsion von Tumorzellen an spezifischen extrazellulären Matrixproteinen die
Invasivität dieser Zellen begünstigt (LI et al., 2008). Demgegenüber wirkt ein
Rezeptor, EphB6, der bei invasiven humanen Brusttumoren nicht mehr nachweisbar
ist, reduzierend auf die Transkriptionslevel von MMP-7 und verringert so die
Invasivität der Neoplasie (FOX und KANDPAL, 2009).
Eine Elimination von MMP-7 in humanen Brusttumorzelllinien (MDA-MB-231) war mit
geringerer Invasivität und langsamerem Tumorwachstum assoziiert (JIANG et al.,
2005). Die Überexpression von Matrilysin in “Michigan-Cancer-Foundation-7“ (MCF7)-Zelllinien, einer Brusttumorzellkultur des Menschen, erhöhte die zelluläre
Invasivität und aktivierte proMMP-2 und MMP-9 (WANG et al., 2006). Chronische
Expression von Matrilysin in Vorläuferzellen mammärer Neoplasien führt zur
Selektion einer Zellpopulation mit reduzierter apoptotischer Sensitivität (FINGLETON
et al., 2001). Diese Zellen sind in der Lage, die Lymphozyten-vermittelte
Immunabwehr zu unterlaufen. Genetische Polymorphismen, sogenannte „single
Literaturübersicht 28
nucleotid polymorphisms“ (SNPs) von MMP-7 sind signifikant für die Überlebensrate
und somit für die Prognose (BEEGHLY-FADIEL et al., 2009). Frauen mit dem
homozygoten G-Allel hatten eine signifikant schlechtere Prognose, als Frauen mit
dem homozygoten A-Allel. Eine längere Überlebenszeit zeigten Patientinnen mit dem
AA-SNP.
2.3.5.3 MMP-7-Untersuchungen bei Hunden
Eine Untersuchung bei Hunden mit dem renalen Alport-Syndrom (AS), einer
genetisch bedingten Erkrankung, bei der das Typ IV Kollagen mutiert ist und keine
ursächlichen Behandlungsmethoden möglich sind, zeigt sowohl eine Erhöhung der
m-RNA, als auch der Aktivität des vorhandenen MMP-7, was eine Beteiligung von
Matrilysin bei der Pathogenese dieser renalen Erkrankung nahelegt (RAO et al.,
2005). Die Behandlung von vorgefallenem Bandscheibengewebe mit rekombinanten
humanen MMP-7 (rhMMP-7) führte zu signifikant geringerem Gewicht und einem
Proteoglykanabbau im behandelten Gewebe bei Hunden. Die Behandlung mit
rhMMP-7 könnte die Abbauvorgänge bei Bandscheibenvorfällen beschleunigen
(HARO et al., 2005). Matrilysin ist eines der wenigen MMPs, das in polarisiertem
Epithel von MDCK-Zellen exprimiert wird (HARRELL et al., 2005). Latentes MMP-7
wurde sowohl im apikalen, als auch im basolateralen Kompartiment der MDCKZellen sezerniert, jedoch in viel größerem Ausmaß im basolateralen Bereich. Die
Aktivität von Matrilysin jedoch war im apikalen Bereich zweifach höher, als im
Basolateralen, was zu einer erhöhten Zellproliferation führte. Dies könnte durch die
apikale Freisetzung eines MMP-7-Aktivators erklärt werden. Die gesteigerte
Proliferation ist auf die Spaltung eines apikal vorhandenen Substrats und auf die
Bindung an Heparansulfat-Proteoglykan zurückzuführen, nicht auf die Entstehung
eines löslichen Faktors, der die Zellvermehrung auslösen würde. Bislang wurden
keine Untersuchungen zur Matrilysin-Expression bei Mammatumoren der Hündin
durchgeführt.
2.3.5.4 MMP-11-Allgemeines
MMP-11, auch Stromelysin-3 (ST3) genannt, besitzt, ähnlich den MT-MMPs, einen
Spaltungsbereich für intrazelluläre furinähnliche Konvertasen. Dieser Bereich ist
zwischen der Pro-Domäne und der katalytischen Domäne lokalisiert (MOTRESCU
und RIO, 2008). Stromelysin-3 wird im Gegensatz zu den meisten anderen
Matrixmetalloproteinasen nicht extrazellulär, sondern intrazellulär umgebaut und in
Literaturübersicht 29
aktiver Form sezerniert (PEI und WEISS, 1995; SANTAVICCA et al., 1996). Neben
Furin zählt auch das „furin/paired basic amino-acid-cleaving enzyme“ (PACE4), eine
Proprotein-Konvertase, zu den Aktivatoren von MMP-11 (BASSI et al., 2000). ST3 ist
transient in postlaktatischen Involutionsvorgängen, embryonaler Implantation,
Organogenese und bei der amphibischen Metamorphose exprimiert (RIO et al.,
1996). Bei Fröschen ist Stromelysin-3 für die intestinale Metamorphose notwendig
(SHI et al., 2007). Diese Thyroid-abhängigen Umbauvorgänge schließen die
Degenerierung des gesamten Schwanzes und die Apoptose des larvalen Epithels mit
ein und führen zur Entstehung adulten Epithels. Die Untersuchung ist ein Modell für
die Rolle von ST3 während der postembryonalen Entwicklung.
Doch obwohl die proteolytische Aktivität im Tiermodell mit Tumorgenese in
Zusammenhang gebracht wurde (NOEL et al., 2000), ist MMP-11 nicht in der Lage,
Hauptkomponenten der EZM zu spalten und die Substrate bleiben unbekannt
(AMANO et al., 2004; RIO, 2005).
Das Enzym nimmt Einfluss auf die Fettgewebshomöostase, indem es die
Differenzierung von Präadipozyten limitiert, oder reife Fettzellen verändert. MMP-11
wird von Adipozyten nahe der invasiven Front von Karzinomen, jedoch nicht in davon
weiter entfernten Fettzellen exprimiert, was den Schluss zulässt, dass invasive
Tumorzellen die Expression von MMP-11 in benachbarten Adipozyten induzieren
(ANDARAWEWA et al., 2005). Das ST3-Gen wird ebenfalls von stromalen Zellen bei
inflammatorischen Prozessen bei der Wundheilung produziert, vermutlich durch
Faktorenfreisetzung von Entzündungszellen (BASSET et al., 1993).
Neben den TIMPS, die als Inhibitoren dienen, zählt auch die Proteinkinase D1
(PKD1) zu den Hemmern von Stromelysin-3. PKD1 ist bei invasiven Karzinomen
stark vermindert und gilt als Marker für invasive Tumoren (EISELER et al., 2009).
2.3.5.5 MMP-11 in physiologischem und tumorösem Mammagewebe des
Menschen
In adulten Organen unter normalen physiologischen Bedingungen ist MMP-11 nur in
geringem Maße exprimiert (SHI et al., 2007). Während der Embryogenese ist es bei
zahlreichen Prozessen aufzufinden, darunter Zellmigration, Gewebsdifferenzierung
und apoptotischen Vorgängen (ALEXANDER et al., 1996; BASSET et al., 1990).
MMP-11 wurde erstmals in Mammatumoren, exprimiert von nicht-malignen
fibroblastenähnlichen Zellen, entdeckt (BASSET et al., 1990). Tumorassoziierte oder
Literaturübersicht 30
reaktive Stromazellen setzen sich aus endothelialen und inflammatorischen Zellen,
sowie aus Spindelzellen wie Fibroblasten und Myofibroblasten zusammen. Sie tragen
aktiv zu Tumorernährung und –progression mittels Neoangiogenese und der
Produktion einer Vielzahl von Proteasen, darunter MMP-11, bei (TETU et al., 2006).
Das Enzym wird nicht von epithelialen Tumorzellen exprimiert (KOSSAKOWSKA et
al., 1996; MOTRESCU und RIO, 2008), ist in umgebenden stromalen Zellen bei
nahezu allen invasiven humanen Karzinomen und dem Hauptteil der zugehörigen
Metastasen aufzufinden (BASSET et al., 1993; WOLF et al., 1993) und mit einem
ungünstigen klinischen Verlauf und schlechter Prognose assoziiert (BASSET et al.,
1997; RIO, 2005; TETU et al., 2006). Ein signifikanter Anstieg von MMP-11-mRNA,
-Propeptiden und -Peptiden wurde mittels Western Blot in Brusttumorgewebe
ermittelt (KOHRMANN et al., 2009). Brusttumorgewebe zeigte eine höhere MMP-11Expression als umliegendes nichtkanzerogenes Gewebe. Diese erhöhte MMP-11Expression korrelierte mit dem Auftreten von schlecht differenzierten Tumoren und
Lymphknotenmetastasen.
Zusätzlich
verstärkte
ein
Mangel
an
Progesteronrezeptoren nochmals die MMP-11-Expression (CHENG et al., 2010).
Auch der „basic fibroblast growth factor“ (bFGF) scheint in die Induktion von
Stromelysin-3-mRNA Expression in stromalen Zellen von Mammatumoren involviert
zu sein (LINDER et al., 1998). In einer vergleichbaren Untersuchung konnte jedoch
kein Einfluss des Wachstumsfaktors bFGF festgestellt werden (WANG und TETU,
2002). Diese Untersuchung mit Brusttumorzelllinien (MDA-MB-231, SK-BR-3, MCF7) und Zellkulturen aus physiologischen epithelialen Zellen der humanen Brust (NME,
184A1) ergab einen höheren ST3-Anteil bei Induktion von MMP-11 durch direkten
Zell-zu-Zell-Kontakt in den Tumorzellkulturen, verglichen mit indirekter Stimulation
der Zellkulturen durch Zugabe von isolierten tumorassoziierten Fibroblasten. Die
Stromelysin-3-Expression war schwach oder fehlte bei isolierten, unstimulierten
tumorassoziierten Stromazellen, sowie bei den physiologischen Mammaepithelien
(WANG und TETU, 2002). Nach der Behandlung von Mäusefibroblasten mit
Zytokinen ( IL-1β, TGF-β) und Matrixbestandteilen (Kollagen IV, Fibronektin) konnte
eine Stimulation von MMP-11 nachgewiesen werden (SELVEY et al., 2004).
Urokinase und ST3-Gene zeigten ein sehr ähnliches Expressionsmuster in
Brusttumoren, so dass möglicherweise deren Produkte bei der Tumorprogression
kooperieren (WOLF et al., 1993). Stromelysin-3 verringert die Apoptose- und
Nekroserate von Tumorzellen (WU et al., 2001) und erhöht in Zellkultur die
Literaturübersicht 31
Überlebenszeit von MCF-7 Zellen durch die p42/p44 MAP-Kinase (FROMIGUE et al.,
2003). Eine erhöhte Expression von MMP-11 korrelierte mit einer gesteigerten
Metastasierungsrate (KOSSAKOWSKA et al., 1996; VIZOSO et al., 2007). Oxytozin
induzierte die Proliferation und Migration von tumorassoziierten endothelialen Zellen
in humanen Mammatumoren mittels Erhöhung der Genexpression von MMP-11 und
Integrinβ6 (CASSONI et al., 2006).
Zusätzlich dient MMP-11 als Tumor-Promotor bei in vivo Maus-Tumormodellen,
einschließlich chemisch induzierten (MASSON et al., 1998) und ras-oncogeninduzierten Tumoren (ANDARAWEWA et al., 2003), sowie bei subkutanen
Tumorzellinjektionen (DENG et al., 2005; NOEL et al., 2000). Fibroblasten von
Mäusen, die MMP-11 exprimierten, führten zu gesteigertem Tumorzellwachstum,
wohingegen Stromelysin-defiziente Fibroblasten dies nicht vermögen (MASSON et
al., 1998). In MDA-MB-231 Zellen, die von menschlichen Brusttumoren stammen,
wirkte MMP-11 invasivitätsfördernd und der MMP-11-Level stieg nach Depletion von
MMP-17 kontinuierlich an, was auf eine Herabregulierung von Stromelysin durch
MMP-17 schließen lässt (HEGEDUS et al., 2008). Bei MMP-11-defizienten Mäusen
wurde ein signifikanter Anstieg von infiltrierenden neutrophilen Granulozyten und
Makrophagen festgestellt. Dies könnte auf die Fähigkeit von MMP-11, die Apoptose
von Tumorzellen zu unterdrücken, zurückzuführen sein (BOULAY et al., 2001). Durch
die
erhöhte
Anzahl
sterbender
epithelialer
Zellen
werden
vermutlich
Entzündungszellen angelockt, die in der Lage sind, Zellreste zu phagozytieren.
2.3.5.6 MMP-11-Untersuchungen bei Hunden
Wenige Untersuchungen beschäftigten sich bislang mit MMP-11 im kaninen Gewebe.
Bei
einer
Untersuchung
von
Hunden
mit
spontaner
demyelinisierender
Staupeenzephalitis auf die Expression verschiedener MMPs und TIMPs, darunter
MMP-11, wurde eine Aufregulierung aller untersuchter MMPs und TIMPs bei akuten
und subakuten nicht-entzündlichen Krankheitsverläufen beobachtet. Bei subakuten
entzündlichen und chronischen Plaques konnte eine Verminderung der MMP-und
TIMP-Level festgestellt werden, wobei MMP-11 noch in moderaten Mengen
vorhanden war (MIAO et al., 2003). Es scheint eine phasenabhängige Expression
von einer Vielzahl von MMPs, darunter MMP-11, und auch TIMPs bei der
Ausprägung der demyelinisierenden kaninen Staupeenzephalitis zu bestehen, und
eine Imbalance zwischen MMPs und TIMPs könnte für den Krankheitsverlauf
Literaturübersicht 32
entscheidend sein (ALLDINGER et al., 2006; MIAO et al., 2003). Zu Mammatumoren
der Hündin wurden bislang keine Untersuchungen durchgeführt.
2.3.5.7 MMP-12-Allgemeines
Einige der bisher bekannten MMPs, darunter auch MMP-12, werden von
Makrophagen produziert. Die sogenannte Makrophagen-Elastase wurde erstmals
von Werb und Gordon bei der Maus entdeckt (1975). Die humane Entsprechung der
Makrophagen-Elastase wurde dann aus den alveolären Makrophagen eines
Zigarettenrauchers geklont (SHAPIRO et al., 1993). MMP-12 ähnelt in Vielem
anderen
bekannten
MMPs,
einschließlich
seiner
Domänenstruktur,
seiner
Lokalisation auf dem humanen Chromosom 11q22, und seiner Kapazität, die
extrazelluläre
vorherrschend
Matrix
zu
degradieren.
Makrophagen-spezifische
Es
unterscheidet
Expression
und
sich
die
durch
seine
Fähigkeit,
die
carboxylterminale Domäne während seines Umbaus abzuspalten (SHAPIRO, 1999).
Das Enzym ist in der Lage, ein breites Spektrum extrazellulärer Matrixkomponenten
zu hydrolysieren, zum Beispiel lösliches und unlösliches Elastin. Zusätzlich spaltet es
zahlreiche Nicht-Matrixbestandteile, wie zum Beispiel Plasminogen (CORNELIUS et
al., 1998), sowie latenten „tumor necrosis factor α“ (TNF-α), wobei Angiostatin und
aktiver TNF-α entstehen (CHANDLER et al., 1996). Von allen bekannten MMPs hat
MMP-12 die größte katalytische Kapazität, Angiostatin aus Plasminogen zu
generieren (SHAPIRO, 1999). Es ist in der Lage, den „ urokinase-type plasminogen
activator receptor“ (u-PAR), der in die Angiogenese involviert ist, zu spalten
(KOOLWIJK et al., 2001). Physiologisch ist MMP-12 bei Prozessen der embryonalen
Entwicklung, der Reproduktion und dem Gewebs-„Remodelling“ beteiligt. Aber auch
bei
pathologischen
Erscheinungen,
wie
Arthritis,
Aneurysmenbildung,
Emphysementstehung, Metastasierung und Angiogenese von Tumoren ist MMP-12
ein Einflussfaktor (NENAN et al., 2005). Die Makrophagen-Elastase gilt als proinflammatorischer Mediator bei Lungenfibrose und „chronic obstructive pulmonary
disease“ (COPD) (NENAN et al., 2005). Eine deutliche Überexpression von MMP-12
wurde im Zusammenhang mit destruktiven, emphysematösen Lungenerkrankungen
bei Mäusen und einem assoziierten EZM-Abbau beobachtet (WANG et al., 2005).
Literaturübersicht 33
2.3.5.8 MMP-12 in physiologischem und tumorösem Mammagewebe des
Menschen
MMP-12 wird hauptsächlich von Makrophagen produziert. Diese sind Bestandteil von
Entzündungsprozessen,
die
auch
zur
Bildung
von
Tumoren
und
deren
Vaskularisierung führen können (ALLAVENA et al., 2008; ONO, 2008). Makrophagen
infiltrieren nach Ausschüttung inflammatorischer Zytokine umgebendes Gewebe und
produzieren Chemokine, Angiogenese-Faktoren wie VEGF A, Interleukin-8 (IL-8) und
Matrixmetalloproteinasen. Diese sogenannten „tumor associated macrophages“
(TAMs) entstehen aus Monozyten und werden in Tumorunterdrückende (mikrobizid
wirkend,
immunstimulierend,
tumorzellzytotoxisch)
und
Tumorunterstützende
(immunsuppressiv, tumorwachstumsfördernd) unterteilt. Klinische Studien zeigten,
dass ein Zusammenhang zwischen TAMs und einer schlechten Prognose bei
Mammatumoren besteht (ONO, 2008). Die „Makrophagen-Balance-Hypothese“
beschreibt die Interaktion zwischen TAMs und neoplastischen Zellen. Häufig sind die
durch Chemokine tumoröser Zellen angelockten Makrophagen an der Grenze
zwischen Tumor und gesundem Gewebe aufzufinden. Dies korreliert mit geringem
Sauerstoffgehalt im Gewebe und reguliert den funktionellen Phänotyp der TAMs
(SICA et al., 2002). Die Kokultivierung von Tumorzellen, Makrophagen und
inflammatorischen Stimuli beeinflusst die Entstehung und das klinische Auftreten von
malignen Entartungen, die Angiogenese in vivo, die Migration von vaskulären
endothelialen Zellen in vitro und die Expression von „monocyte chemotactic protein
1“ (MCP-1) , VEGF und IL-8. Blockiert werden die TAMs durch „NF-kappaB“ (NF-κB),
„APETALA1“ (AP-1) und „Cyclooxygenase-2“ (COX-2) -Inhibitoren (ONO, 2008). Es
wurden SNPs in den Promotorgenen von MMP-12 untersucht. Obwohl bei
Brusttumoren keine signifikante Beziehung zwischen auftretendem Genotyp von
MMP-12 und Krankheitsverläufen mit Metastasierungsneigung festgestellt wurde
(HUGHES et al., 2007), konnte ein Zusammenhang mit schlechterer Prognose
jedoch für Blasentumoren (KADER et al., 2006), nicht-kleinzellige Lungentumoren
(HEIST et al., 2006) und ovarielle maligne Entartungen (LI et al., 2009)
nachgewiesen werden. Serotonin ist in der Lage, MMP-12 in tumorinfiltrierenden
Makrophagen herabzuregulieren. Damit wird auch der Angiostatin-Level gesenkt, der
als Inhibitor der Angiogenese fungiert. Serotonin-Mangel führt demnach zu
geringerem Tumorwachstum, jedoch auch zu Hypoxie und spontaner Nekrose
(NOCITO et al., 2008; O'REILLY et al., 1997; SANG, 1998). MMP-12 gilt, gemeinsam
Literaturübersicht 34
mit weiteren MMPs, zudem als invasivitätsfördernd in Brusttumor-Zelllinien
(HEGEDUS et al., 2008). Eine Inkubation von Brustkrebszellen mit Monozyten oder
auch Makrophagen induziert eine höhere Expression von Faktoren, die auf die
Invasivität der Tumorzellen Einfluss nehmen und die Monozyten-Funktion gegenüber
entarteten Zellen modifizieren (BLOT et al., 2003; PUKROP et al., 2006). Eine
Hypothese ist, dass tumorsezernierte Faktoren eine Wundheilungsreaktion durch
tumorassoziierte und tumorinfiltrierende inflammatorische Zellen auslösen können,
diese Antwort jedoch irrtümlicherweise die Tumorprogression stimuliert (QUEEN et
al., 2005).
2.3.5.9 MMP-12-Untersuchungen bei Hunden
Es gibt wenige Untersuchungen zu MMP-12 bei Hunden. Ein Beispiel ist das renale
Alport Syndrom (AS) bei Hunden. Hier war die MMP-12-Expression in den Glomeruli
deutlich
heraufreguliert
(RAO
et
al.,
2006).
Die
Dicke
der
glomerulären
Basalmembran nahm unter Einfluss von der Makrophagen-Elastase kontinuierlich ab.
Bei Behandlung mit einem Breitspektrum-MMP-Inhibitor waren die Effekte auf die
Basalmembran nahezu reversibel, bei einem weiteren Breitspektrum-Inhibitor, der
MMP-12 jedoch nicht hemmt, konnte keine Verbesserung festgestellt werden, so
dass die Vermutung naheliegt, MMP-12 spiele bei der glomerulären Dysregulation
eine entscheidende Rolle. Bei der Monopolysaccharidose I und VII, die unter
Anderem die Akkumulation von Glykosaminoglykanen und die Dilatation der Aorta
hervorruft, wurde ein erhöhter Level der MMP-12-mRNA festgestellt. MMP-12 könnte
ein Mitverursacher der Elastindegradation sein und so zur Pathogenese der
Aortendilatation beitragen (METCALF et al., 2010). Bei der demyelinisierenden
Staupeenzephalitis wurden für MMP-12 ähnliche Expressionsmuster festgestellt, wie
für das bereits beschriebene MMP-11. Im akuten Krankheitsgeschehen war MMP-12
heraufreguliert, während in subakuten entzündlichen und chronischen Plaques die
Makrophagen-Elastase moderat exprimiert war (ALLDINGER et al., 2006; MIAO et
al., 2003). Bislang sind keine Untersuchungen zur MMP-12-Expression bei
verschiedenen kaninen Mammatumoren bekannt.
2.3.5.10
TIMP-3-Allgemeines
TIMPs sind komplexe Moleküle mit pro-und anti-Tumoreffekten. Sie nehmen Einfluss
auf unterschiedlichste Prozesse, wie Tumorwachstum, Apoptose und Angiogenese
(BAKER et al., 2002; BREW et al., 2000). Bei Säugetieren wurden bislang vier TIMPs
Literaturübersicht 35
(TIMP-1, -2, -3 und -4) geklont, aufgereinigt und charakterisiert. Grundsätzlich ähneln
sie sich in Struktur und Aufbau, weisen jedoch unterschiedliche biochemische
Eigenschaften und Expressionsmuster auf. Die TIMPs haben ein Molekulargewicht
von ca. 21 kDa, sind variabel glykosiliert, beinhalten sechs Disulfidbrücken, eine Cterminale Domäne und eine N-terminale Domäne. TIMP-3 liegt in der EZM an
heparansulfathaltige Proteoglykane und zum Teil an chondroitinsulfathaltige
Proteoglykane gebunden vor (YU und STAMENKOVIC, 2000). Alle vier TIMPs
inhibieren aktive Formen der MMPs, jedoch besitzt TIMP-3 zusätzlich die Fähigkeit,
Astazine, wie zum Beispiel ADAM-12, ADAM-17, ADAM-TS4 und ADAM-TS5 zu
inhibieren, jedoch im nanomolaren Bereich (AMOUR et al., 1998; AMOUR et al.,
2000; KASHIWAGI et al., 2001). Es steigert zum Einen die Zellproliferation bei glatter
Muskulatur und bei Tumorzellen, zum Anderen begünstigen hohe TIMP-3-Level die
Apoptose bei zahlreichen Zelltypen in vivo und in vitro, wie beispielsweise in glatter
Muskulatur, Tumorzellen und retinalen Epithelzellen (AHONEN et al., 1998; BAKER
et al., 1998; BOND et al., 2000). Dieser Effekt ist mit der Modulierung von
Apoptoserezeptoren verknüpft (BOND et al., 2002; SMITH et al., 1997). Der HGF
induziert
vorübergehend
einen
Anstieg
von
TIMP-3-mRNA
in
mammären
Epithelzellen. Eine Suppression von TIMP-3 ist mit gesteigerter Proliferation der
betroffenen Zellen und vermehrter Matrixinvasion assoziiert (CASTAGNINO et al.,
1998). Die Interaktion mit Angiotensin II Typ2-Rezeptor (AGTR2) inhibiert einer
neueren Studie nach die Angiogenese und fördert in vitro die Tumorzellapoptose
(KANG et al., 2008). Demnach inhibieren die additiven Effekte von TIMP-3 und
AGTR2 das Tumorzellwachstum. Gemeinsam mit TIMP-2 koreguliert TIMP-3 die
Stabilisierung der durch MT1-MMP neu induzierten Gefäße (SAUNDERS et al.,
2006).
Während der Embryogenese wird TIMP-3 in uterinen Deziduazellen exprimiert und
der TIMP-Level ist mit der Überlebenszeit dieser Zellen verbunden (ALEXANDER et
al., 1996). Auch beim steroidgesteuerten Zyklus des humanen Endometriums wirkt
TIMP-3 auf das Gewebe, jedoch nicht, wie die anderen TIMPs, während des
gesamten Zyklus, sondern vor allem in der späten sekretorischen und der
menstrualen Phase (GOFFIN et al., 2003).
Bei
TIMP-3-Knockout-Mäusen
zeigte
sich
eine
spontane
Erweiterung
der
Lungenkapazität, wobei die Tiere nach gut einem Jahr jedoch verstarben (LECO et
al., 2001). TIMP-3–negative Mäuse zeigten auch eine beschleunigte Apoptose des
Literaturübersicht 36
mammären Epithels bei der nach der Laktation erfolgenden Involution der Drüse
(FATA et al., 2001).
2.3.5.11 TIMP-3 in physiologischem und tumorösem Mammagewebe des
Menschen
Schon frühe Untersuchungen wiesen TIMP-3 in allen Karzinomen der Mamma nach
(URIA et al., 1994). Experimentelle Studien zeigten, dass TIMP-3 die Angiogenese
inhibiert und Apoptose induziert (AHONEN et al., 1998; SPURBECK et al., 2002).
Ebenso wird TIMP-3 mit einer guten Prognose bei Brustkrebs in Verbindung gebracht
(KOTZSCH et al., 2005). Bei Patienten, die mit Tamoxifen behandelt wurden, zeigte
sich bei denjenigen mit hohem TIMP-3-Level eine längere rückfallfreie Zeitspanne
(SPAN et al., 2004), was auf eine Beteiligung dieses Inhibitors bei der durch
Tamoxifen induzierten Apoptose hindeutet. Es wurde eine signifikant höhere TIMP-3Expression bei Östrogenrezeptor-positiven Tumoren festgestellt (SPAN et al., 2004;
VIZOSO et al., 2007). Bei einer Untersuchung von MYLONA et al. (2006), wurde das
TIMP-3-Protein im Zytoplasma der malignen Zellen und im peritumoralen Stroma,
sowohl beim Carcinoma in situ, als auch bei normalem Epithel detektiert.
Verminderte Expression in Tumorzellen war mit Karzinomen mit hoher histologischer
Differenzierung und geringer Östrogenrezeptorexpression korreliert. Ein deutliches
immunhistologisches Signal für TIMP-3 war invers mit der Expression von p53 und
Topoisomerase IIα korreliert. Reduzierte Mengen von TIMP-3 in Tumorzellen wirkten
sich ungünstig auf die rückfallfreie Überlebenszeit aus. Stromale Lokalisation dieses
Inhibitors hatte keine klinikopathologischen oder prognostischen Auswirkungen
(MYLONA et al., 2006).
Auch der Einfluss verschiedener Genotypen von TIMP-3 auf die Entstehung von
Brustkrebs wurde untersucht. Asiatische Brustkrebspatientinnen mit dem AAGenotyp von TIMP-3 waren in einer Studie mit über 1000 Fällen um 60 % seltener
anzutreffen, als Patientinnen mit dem GG-Genotyp (PETERSON et al., 2009). Des
Weiteren waren Brustkrebsfälle bei Personen mit dem TT-Genotyp von TIMP-3
fünfmal häufiger, als bei Frauen mit dem GG-Genotyp. Auch die krankheitsfreie
Zeitspanne war beim TT-Genotyp um das Vierfache vermindert. Limitierend wirkte in
dieser Studie allerdings die geringe Anzahl von homozygoten Patientinnen. Ein
weiteres SNP wurde von LEI et al. (2007) untersucht. Sie fanden ein moderat
Literaturübersicht 37
erhöhtes Risiko für Brusttumoren bei schwedischen Frauen, die das C-Allel von
TIMP-3 aufweisen.
Bei VIZOSO et al., (2007), wurde eine positive Korrelation zwischen der TIMP-3Expression in Fibroblasten, nicht jedoch in Tumorzellen mit dem Auftreten entfernter
Metastasen festgestellt. Auch in früheren Studien wurde eine enge Beziehung
zwischen stromalen Zellen und dem Prozess der Tumorgenese, sowie der Invasion
und Metastasierung nachgewiesen (KLAUSNER et al., 2002; LIOTTA und KOHN,
2001; WISEMAN und WERB, 2002). Tumorzellen der Mamma rekrutieren aktiv
fibroblastische Zellen und führen so zu einer vermehrten Degradierung der
extrazellulären Matrix durch MMP-Induktion (SLOANE et al., 2005).
2.3.5.12
TIMP-3-Untersuchungen bei Hunden
Bislang wurden nur wenige Untersuchungen zu TIMP-3 bei Hunden veröffentlicht.
Eine neue Studie weist eine Aufregulierung dieses Enzyms bei milder chronischer
Trikuspidalklappen-Erkrankung nach (AUPPERLE et al., 2009; 2010), was eine
Beteiligung am Matrixmetabolismus der Herzklappen nahelegt. Im Hundemodell
konnte in vivo eine gesteigerte TIMP-3-Expression bei regionaler myokardialer akuter
ischämischer Reperfusion festgestellt werden, wenn mit Angiotensin II Typ 1
Rezeptorblockern (ARBs) behandelt wurde (SAWICKI et al., 2004). In der Literatur
sind
keine Angaben zu
Untersuchungen
Zusammenhang mit TIMP-3 vorhanden.
von
caninen
Mammatumoren
in
Material und Methoden 38
3
Material und Methoden
3.1
Untersuchte Tiere
Die
Auswahl
der
Fälle,
die
Schnittpräparatherstellung,
sowie
die
HE-
Übersichtsfärbung und die Durchführung der Immunhistologie wurde im Rahmen
einer dieser Arbeit vorausgegangenen Dissertation von Frau Dr. Vanja Paltian
durchgeführt und die Schnitte zur weiteren Untersuchung zur Verfügung gestellt. Die
hierzu aufgeführten Daten wurden der Dissertation von Frau Dr. Vanja Paltian
entnommen.
Das untersuchte Material stammt aus Einsendungen der Jahre 2000-2003 des
Instituts für Pathologie der Stiftung Tierärztliche Hochschule Hannover. Von Hunden
unterschiedlicher Rasse und verschiedenen Alters wurde sowohl neoplastisches, als
auch nicht neoplastisches Gewebe der Mamma untersucht. Zusätzlich wurde der
assoziierte Lymphknoten mit entnommen und bei der Untersuchung miteinbezogen.
Zusätzliche
Auswahlkriterien
für
die
gewählten
Gewebeproben
waren
der
Frischegrad des Materials, die Menge des vorhandenen Restgewebes im Archivblock
zur Herstellung von Serienschnitten, sowie die vollständige Fixierung des Präparates.
Als Kontrollgewebe wurde physiologisches Mammadrüsengewebe von insgesamt 9
Fällen aus dem Einsendegut und von frischtoten Hunden aus dem Sektionsgut des
Instituts für Pathologie aus den Jahren 2003 und 2004 verwendet. Deren übrige
Organe wiesen keinerlei neoplastische Veränderungen auf.
Die morphologische Diagnose wurde mit Hilfe von HE-gefärbten Präparaten aus dem
Schnittarchiv anhand der WHO-Klassifikation (MISDORP et al., 1999) gestellt. Die zu
untersuchenden 101 Fälle wurden wie folgt in Tumor-, bzw. Kontrollgruppen
unterteilt: normales Mammagewebe (n= 9; Kontrollgruppe KG, siehe Anhang 10.1),
hyperplastisches Drüsengewebe (n=7; HYP, siehe Anhang 10.1), einfache Adenome
mit Lymphknoten (n= 15; eAd, siehe Anhang 10.1), komplexe Adenome mit
Lymphknoten (n= 19; kAd, siehe Anhang 10.1), benigne Mammamischtumoren mit
Lymphknoten (n= 15; bMMT, siehe Anhang 10.1), komplexe Karzinome mit
Lymphknoten (n=17; kCa, siehe Anhang 10.1) und einfache Karzinome mit
Lymphknoten (n= 19; eCa, siehe Anhang 10.1). Jeder Schnitt war individuell mit
Material und Methoden 39
einem Kürzel für die zu untersuchende Gruppe und einer fortlaufenden Nummer
innerhalb dieser Gruppe gekennzeichnet.
In den oben aufgeführten Tabellen finden sich neben der Diagnose zum
Mammadrüsengewebe
und
der
Untersuchungsnummer
auch
Informationen
bezüglich Alter, Geschlecht und Rasse des betreffenden Hundes. Diese Daten
wurden ebenfalls aus der Dissertation von Frau Vanja Paltian übernommen.
3.2
Untersuchungsmaterial für die histologische und immunhistologische
Auswertung
Die Schnitte wurden auf SuperfrostPlus®-Objektträger der Firma Menzel Gläser,
Glasbearbeitungswerk, Braunschweig aufgezogen und mit der Fallnummer und einer
fortlaufenden dauerhaften Bezifferung versehen. Nach Herstellung von 30 bis 50
Serienschnitten pro Fall mit einer Schichtdicke von 2-4 µm wurden diese dunkel und
trocken archiviert.
3.2.1 HE-Übersichtsfärbung
Die Färbung wurde mit Hilfe des Färbecenters Leica ST 4040 (Leica Mikrosystems
Nussloch GmbH, Nussloch) nach einem standardisierten Laborprotokoll mit
Hämatoxylin und Eosin durchgeführt.
3.3
Immunhistologie
Der Nachweis der Matrixmetalloproteinasen und des Inhibitors wurde mittels
immunhistologischer Verfahren geführt (Tab.1).
3.3.1 Antikörper und Seren
Bei den immunhistologischen Nachweisen von MMP-11 und TIMP-3 wurden die
primären und sekundären Antikörper in Tris-gepufferter Kochsalzlösung (TBS)
verdünnt (ALLDINGER et al., 1996). Die primären und sekundären Antikörper für
MMP-7 und MMP-12 wurden in TBS mit 20%igem Schweinenormalserum verdünnt.
Auch der als Detektionssystem verwendete Avidin-Biotin-Peroxidase-Komplex wurde
in Tris-gepufferter Kochsalzlösung verdünnt (ALLDINGER et al., 1996). Durch
Titration an Kontrollgeweben wurde die Gebrauchsverdünnung festgestellt. Eine
Übersicht über alle verwendeten Lösungen und Puffer findet sich im Anhang 10.5.
Material und Methoden 40
Tabelle 1: Mono- und polyklonale gegen MMPs und TIMPs gerichtete Antikörper mit
Spezifität, Klon, Vorbehandlung, Verdünnung, Puffer, Blockingserum, Sekundärantikörper
und Bezugsquelle
PrimärAntikörper
Klonalität,
Vorbe-
Ver-
Klon,
handlung
dünnung
Nein
1:2000
Puffer
Blocking-
Sekundär-
Serum
Antikörper
Bezugsquelle
SNS
Ziege-antiKaninchen
Triple Point
Biologics
Spezifität
MMP-7 (1)
polyklonal
RP3-mmp-7
---
SNS
Kanin.-antiMensch
MMP-11 (2)
TBS mit
20%
monoklonal
Nein
1:500
TBS
PNS
Pferd-antiMaus
NeoMarkers
Ja (4)
1:1000
TBS mit
20% SNS
SNS
Ziege-antiKaninchen
Triple Point
Biologics
Ja (5)
1:100
TBS
PNS
Pferd-antiMaus
Calbiochem
SL 3.05,
Maus-antiMensch
MMP-12 (1)
polyklonal
RP1-mmp-12
--Kanin.-antiMensch
TIMP-3 (3)
monoklonal,
136-13H4,
Maus-antiMensch
Kanin.= Kaninchen
MMPs = Matrixmetalloproteinasen
MW = Mikrowelle
PNS = Pferde-Normalserum
SNS = Schweine-Normalserum
TBS = Tris-Puffer
TIMPs = “Tissue inhibitors of metalloproteinases“
Bezugsquellen:
(1)= Triple Point Biologics Inc., Portland, OR, USA über Acris Antibodies GmbH,
Hiddenhausen
MMP-7-Antikörper, polyklonal, Kaninchen Anti-Mensch, RP3MMP-7
MMP12-Antikörper, polyklonal, Kaninchen Anti-Mensch, RP1MMP-12
(2)= NeoMarkers, Fremont, CA, USA, über Dunn Labortechnik GmbH, Asbach
MMP-11 (Ab-5), Klon SL3.05, MS-1035-PO
(3)= Calbiochem-Novabiochem GmbH, Schwalbach
TIMP-3 (Ab-1), Klon 136-13H4, Cat # IM 43L
(4)= Citratpuffer/Mikrowellenbehandlung
(5)= 20 Min. „Target Retrieval“
3.3.1.1 Blocking-Seren
Um unspezifische Antikörper-Bindungsstellen zu blockieren, wurde bei Verwendung
von monoklonalen Antikörpern vor deren Inkubation unverdünntes, inaktiviertes
Material und Methoden 41
Pferdenormalserum und bei den polyklonalen Antikörpern ebenfalls unverdünntes,
inaktiviertes Schweinenormalserum verwendet. Die Seren stammten von klinisch
gesunden Tieren der Klinik für Pferde, sowie der Klinik für kleine Klauentiere der
Stiftung
Tierärztliche
Hochschule
Hannover.
Das
Vollblut
wurde
in
Zentrifugenröhrchen 5 Stunden bei 4° C aufbewahrt und danach 10 Minuten bei 37°
C in einer Zentrifuge (Labofuge ® A, Heraeus Sepatech GmbH, Osterode) bei 190 x
G zentrifugiert. Anschließend wurden die Komplementkomponenten durch eine 30minütige Inkubation in einem Wasserbad bei 56° C inaktiviert. Danach wurde das
Serum aliquotiert und bei -20° C eingefroren bis zur Verwendung gelagert.
3.3.1.2 Sekundäre Antikörper
Bei MMP-11 und TIMP-3 wurde ein biotiniliertes Pferd-anti-Maus-Immunglobulin
(Vector
Laboratories,
USA,
BA
2000)
verwendet.
Bei
den
polyklonalen
Primärantikörpern von MMP-7 und MMP-12 wurde ein biotinilierter Ziege-antiKaninchen-Antikörper (Vector Laboratories, USA, BA 1000) eingesetzt. Die
Verdünnung aller Sekundärantikörper betrug jeweils 9 µl in 1 ml TBS.
3.3.1.3 Detektionssystem
Hierfür wurde der Avidin-Biotin-Peroxidase-Komplex (ABC; ABC-Elite-Kit, Vector
Labaratories, Burlingame; PK 6100) in einem Mischungsverhältnis von 9 µl Avidin
und 9 µl Biotin pro ml TBS verwendet. Mindestens 30 Minuten vor Verwendung
mussten die Komponenten des Komplexes gemischt werden, um eine gute
Komplexbildung zu ermöglichen.
3.3.2 Immunhistochemisches Färbeprotokoll (ABC-Methode)
Die immunhistologische Darstellung der Antigene wurde angelehnt an die von HSU
et al. (1981) beschriebene und von ALLDINGER et al. (1996) modifizierte AvidinBiotin-Peroxidase-Komplex-Methode durchgeführt:
1. Entparaffinierung der Schnitte für zweimal 5 Minuten in Roti-Clear ®, in
Isopropylalkohol einmal für 5 Minuten und in 96%igem Alkohol einmal für 3
Minuten.
2. Inaktivierung der endogenen Peroxidase in 0,5%igem H2O2 in Methanol reinst.
(99,9%) für 30 Minuten bei Raumtemperatur auf einem Magnetrührer.
3. Dreimaliges Waschen der Schnitte in TBS für je 5 Minuten.
Material und Methoden 42
4. Verbringen der Schnitte in Coverplates TM und Sequenza ®-Einsätze (Thermo
Electron, Dreieich)
5. Inkubation der Schnitte mit Blocking-Seren (10 Minuten bei Raumtemperatur)
•
unverdünntes Pferdenormalserum:
MMP-11, TIMP-3
•
unverdünntes Schweinenormalserum:
MMP-7, MMP-12
6. Auftragen des Primärantikörpers und Inkubation für 16 Stunden bei 4° C
7. Dreimaliges Waschen der Schnitte in TBS für je 5 Minuten
8. Auftragen des Sekundärantikörpers und Inkubation für 30 Minuten bei
Raumtemperatur (s. Anhang 10.5)
9. Dreimaliges Waschen der Schnitte in TBS für je 5 Minuten
10. Inkubation der Schnitte mit dem Avidin-Biotin-Peroxidase-Komplex (ABC) für
30 Minuten bei Raumtemperatur (Herstellung des ABC-Komplexes mindestens 30
Minuten vor Gebrauch)
11. Dreimaliges Waschen der Schnitte in TBS für je 5 Minuten
12. Umsetzen der Schnitte in TBS-gefüllte Glasküvetten
13. Inkubation der Schnitte mit 0,05% 3,3’-Diaminobenzidin-Tetrahydrochlorid
(DAB) mit 0,03% H2O2 in TBS (s. Anhang 10.5) für 10 Minuten auf dem
Magnetrührer bei Raumtemperatur
14. Dreimaliges Waschen der Schnitte in TBS für je 5 Minuten
15. Kurzes Eintauchen der Schnitte in Aqua dest. und Färben der Schnitte für
einige Sekunden bis zur gewünschten Farbintensität in Hämalaun nach Mayer
16. Bläuen der Schnitte unter fließendem Leitungswasser für 5 Minuten und
kurzes Eintauchen der Schnitte in Aqua dest.
17. Entwässern der Schnitte in einer aufsteigenden Alkoholreihe: 50%-iger, 70%iger, 96%-iger Alkohol für jeweils 3 Minuten, Isopropylalkohol (5 Minuten),
Essigsäurebutylester (EBE) für 2 x 5 Minuten und maschinelles Eindecken der
Schnitte mit Hilfe eines Eindeckautomaten (Promounter RCM 200, Firma Medite,
Burgdorf)
Material und Methoden 43
3.3.3 Kontrollen
3.3.3.1 Positivkontrollen
Als Positivkontrolle dienten folgende Organe und Gewebe:
•
Zellpellet einer Makrophagen/ Monozyten-Zelllinie (DH82) eines Hundes mit
maligner Histiozytose (Wellman et al., 1988): MMP-11, MMP-12, TIMP-3
•
Langer Röhrenknochen eines totgeborenen Welpen: MMP-7, MMP-11
Tabelle 2: Antikörper gegen untersuchte MMPs und TIMPs, ihre zugehörige
Positivkontrollen, Diagnosen und Herkunft
Antikörper Identifikation Gewebe
Diagnose
Rasse
gegen
MMP-11
DH 82 x
Makrophagen/ Maligne
MonozytenHistiozytose
Golden
10
Retriever
m
Zellpellet
TIMP-3
MMP-11
Geschlecht
(Jahre)
MMP-12
MMP-7
Alter
S 781/03
Langer
Totgeborener DSH
Welpe,
Ursache
ungeklärt
Röhrenknochen
DSH = Deutscher Schäferhund; m = männlich;
Wellman et al., 1988
x
0
m
®
= American Type Culture Collection (ATCC ): CRL-10389
TM
3.3.3.2 Negativkontrollen
Um die Spezifität der immunhistologischen Färbung zu ermitteln, wurde beim Einsatz
der monoklonalen Antikörper der Primärantikörper durch Aszitesflüssigkeit von nicht
immunisierten Balb/cJ Mäusen (Biologo, Kronshagen) ersetzt. Bei den polyklonalen
Antikörpern wurde anstelle des Primärantikörpers Kaninchennormalserum (SigmaAldrich Chemie GmbH, Taufkirchen) verwendet. Dabei wurden die
Negativkontrollseren so verdünnt, dass die Proteinkonzentration (Globulinfraktion)
mit der entsprechenden Antikörperkonzentration pro Schnitt identisch war. Zusätzlich
wurde bei den immunhistologischen Färbungen an jeweils einem Schnitt der
sekundäre Antikörper, beziehungsweise an einem anderen Schnitt der ABC durch
TBS ersetzt, um die Spezifität der Antikörperbindung zu überprüfen.
Material und Methoden 44
3.4
Diagnose, Auswertung und statistische Aufarbeitung
Die histologischen und immunhistologischen Schnitte wurden mit Hilfe eines BO 61Mikroskops der Firma Olympus, Hamburg ausgewertet. Die histologischen Präparate
wurden anhand der WHO-Klassifikation für Neoplasien des Mammadrüsengewebes
(MISDORP et al., 1999) beurteilt.
Bei
den
immunhistologischen
Gewebeschnitten
wurden
mit
Hilfe
eines
Auswertungsbogens folgende Strukturen (und Lokalisationen) in Bezug auf Intensität
und Anzahl des spezifischen Signals semiquantitativ erfasst:
-
Alveoläre Epithelien (in gesundem und hyperplastischem Mammagewebe, in
physiologischem peritumoralen Drüsengewebe, im Tumorzentrum und in der
Tumorperipherie)
-
Duktale Epithelien (in gesundem und hyperplastischem Mammagewebe, in
physiologischem peritumoralen Drüsengewebe, im Tumorzentrum und in der
Tumorperipherie)
-
Myoepithelien (in gesundem und hyperplastischem Mammagewebe, in
physiologischem peritumoralen Drüsengewebe, im Tumorzentrum und in der
Tumorperipherie)
-
Stromale
Zellen
(bei
Tumorpatienten
in
„tumornah“
und
„tumorfern“
differenziert und bei Kontrollgeweben und Hyperplasien als „tumorfern“
definiert)
-
Gefäßendothel (bei Tumorpatienten in „tumornah“ und „tumorfern“ differenziert
und bei Kontrollgeweben und Hyperplasien als „tumorfern“ definiert)
-
Gefäßmedia (bei Tumorpatienten in „tumornah“ und „tumorfern“ differenziert
und bei Kontrollgeweben und Hyperplasien als „tumorfern“ definiert)
-
Lymphknotenrinde (unverändert und/ oder metastasiert)
-
Lymphknotenmark (unverändert und/ oder metastasiert)
Für die Auswertung des spezifischen Signals wurden bei 40facher Vergrößerung in
fünf zufällig gewählten Gesichtsfeldern je Struktur und Lokalisation Werte für die
Parameter Signalintensität (I) und geschätzte Anzahl der Zellen (A) nach
folgenden Bewertungsskalen erhoben:
Material und Methoden 45
Intensität (I)
0= kein Signal
1= schwaches Signal, leichte Braunfärbung
2= mittelstarkes Signal, deutliche, mittelgradige Braunfärbung
3= starkes Signal, sehr deutliche, hochgradige Braunfärbung
Anzahl (A)
0= kein spezifisches Signal
1= 1-25% der Zellen waren markiert
2= 26-50% der Zellen waren markiert
3= 51-75% der Zellen war markiert
4= über 75% der Zellen zeigten ein spezifisches Signal
Aus den fünf randomisiert ermittelten Einzelbewertungen je Struktur wurde ein
Mittelwert gebildet, der für die Intensität zwischen 0,0 und 3,0 (Intensitätswert, I)
und für die geschätzte Anzahl (Häufigkeitswert, A) zwischen 0,0 und 4,0 liegen
konnte. Für die deskriptive und statistische Auswertung, sowie die graphische
Darstellung der ermittelten Ergebnisse wurden durch Multiplikation der nicht
gerundeten Intensitäts-, bzw. Häufigkeitswerte sogenannte „Scores“ (SINICROPE et
al., 1995) erstellt, die im Bereich von 0,0 bis 12,0 liegen konnten. Scores bis 3
wurden als „niedrig“, Scores zwischen 4 und 6 als „mittel“, Scores von 7 bis 9 als
„hoch“ und Scores über 9 als „sehr hoch“ eingestuft. Um die Epithelien des
unveränderten mammären Drüsengewebes mit dem tumorösen Gewebe vergleichen
zu können, wurde für Epithelien der Tumorperipherie und des –zentrums ein
Tumorgesamtwert (Tges AE) ermittelt. Dieser setzt sich aus dem Produkt aus dem
arithmetischen Mittel der Intensitätswerte von Zentrum und Peripherie (ITpAe+
ITzAE/2), und dem arithmetischen Mittel der Häufigkeitswerte von Zentrum und
Peripherie (ATpAE+ATzAE/2) zusammen. Sowohl für die pro Antikörper
entstandenen Scores, als auch für die Tumorgesamtwerte wurde nach den
allgemeingültigen Rundungsregeln auf-, beziehungsweise abgerundet.
Folgende 30 Scores wurden erhoben:
Material und Methoden 46
physiologische Mamma (PM):
alveoläres Epithel: aE
duktales Epithel: dE
myoepitheliales Epithel: mE
Entzündungszellen: EZ
Tumorzentrum (TZ):
alveoläres Epithel: aE
duktales Epithel: dE
myoepitheliales Epithel: mE
Entzündungszellen: EZ
Tumorperipherie (TP):
alveoläres Epithel: aE
duktales Epithel: dE
myoepitheliales Epithel: mE
Entzündungszellen: EZ
Lymphknoten unverändert (Lnn unv):
Rinde: R
Mark: M
Lymphknoten metastasiert (Lnn met):
Rinde: R
Mark: M
Tumornah (TN):
Gefäßendothel:GE
Gefäßmedia: GM
Stroma: S
Emboli: Em
Tumorfern (TF)
Gefäßendothel: GE
Gefäßmedia: GM
Stroma: S
Emboli: Em
Tumorgesamtwert (TGW):
alveoläres Epithel : aE
duktales Epithel: dE
myoepitheliales Epithel: mE
Entzündungszellen: EZ
Material und Methoden 47
Chondrozyten in benignen Mischtumoren:
Chondros
Cluster in einfachen Karzinomen:
Cluster
Die Prozentangaben im deskriptiven Ergebnisteil nehmen auf die jeweilige
Gruppengröße Bezug. Dies gilt auch für Ergebnisse, bei denen in Einzelfällen aus
verschiedenen Gründen (z. B. Struktur in dieser Lokalisation nicht vorhanden, oder
nicht beurteilbar) Einzelwerte nicht erhoben werden konnten.
Die statistische Aufbereitung der erhobenen Daten erfolgte mit der freundlichen
Unterstützung der Arbeitsgruppe Biomathematik und Datenverarbeitung der JustusLiebig-Universität Gießen. Die immunhistologischen Scores wurden mit Hilfe des
Programms SPSS (IBM, SPSS Statistics, Version 17) in Graphiken umgewandelt.
Da die erhobenen Daten sich mehrheitlich normalverteilt darstellten, erfolgte eine
parametrische Auswertung anhand einer zweifaktoriellen Varianzanalyse mit
Messwiederholung bezüglich der Lokalisation, um Unterschiede in der Expression
zwischen
den
Tumorgruppen
und
auch
den
Lokalisationen,
sowie
die
Wechselwirkung dieser Parameter zu untersuchen. Wegen teilweiser fehlender
Daten (z. B. Struktur in dieser Lokalität nicht vorhanden, oder nicht beurteilbar) wurde
der Wald-Test eingesetzt. Zusätzlich wurde eine einfaktorielle Varianzanalyse
durchgeführt, um Strukturen über die Tumorgruppen hinweg zu vergleichen. Ein
paarweiser Gruppenvergleich wurde für die Fälle durchgeführt, bei denen die
Ergebnisse der Varianzanalysen signifikant waren.
Für die Benennung der statistischen Signifikanzen wurde ein vergleichbezogenes
Signifikanzniveau von 0,05 zu Grunde gelegt. Dabei wurde bei den Paarvergleichen
der
Tumorgruppen
(TGr=
10)
wegen
mehrfachen
Testens
das
globale
Signifikanzniveau nach Bonferroni adjustiert, das heißt, der jeweilige p-Wert wurde
mit
10
multipliziert.
Bei
den
Lokalisationsvergleichen
(L=
3)
wurden
die
entsprechenden Ergebnisse mit 3 multipliziert. P-Werte mit p < 0,05 wurden als
statistisch signifikant gewertet. Werte mit p < 0,01 wurden als statistisch
hochsignifikant angesehen.
Da über alle Tumorgruppen, beziehungsweise über alle Lokalisationen die
Expression verglichen wurde, wurden signifikante, oder hochsignifikante Ergebnisse
mit dem Tukey Test weiter untersucht, um Aussagen machen zu können, welche
Gruppen oder Lokalisationen im Vergleich zu diesem Ergebnis geführt haben.
Material und Methoden 48
Um Vergleiche mit gesundem und hyperplastischem Gewebe vornehmen zu können,
wurden deren als „tumorfern“ definierten Werte statistisch auch mit den Werten der
Tumorgruppen aus „Tumorzentrum“ und „Tumorperipherie“ verglichen. Ebenso
wurden
die
„tumorfern“
erhobenen
Daten
der
Kontrollgruppe
und
der
Hyperplasiegruppe mit den „tumornahen“ und den „tumorfernen“ Daten der
Tumorgruppen verglichen. Dies führte bei der graphischen Darstellung der
Ergebnisse zu identischen Balken für die Lokalisationen „physiologische Mamma“,
„Tumorzentrum“ und „Tumorperipherie“ bei den Gruppen der Hyperplasie und des
Kontrollgewebes, denen stets die Werte aus physiologischem, beziehungsweise
tumorfernem Gewebe zugrunde liegen und nur dem statistischen Vergleich dienen.
Ergebnisse 49
4
Ergebnisse
4.1
Ergebnisse der histologischen Befunderhebung
Das unveränderte Milchdrüsengewebe, oder auch Kontrollgewebe, von insgesamt 9
Hündinnen (KG1-KG9) wies eine reguläre Läppchenstruktur mit gut differenzierten
Alveolen, anliegendem Myoepithel und umgebenden stromalen Zellen auf. Die
Alveolen zeigten unterschiedliche sekretorische Aktivität. Im Stroma waren Blut- und
Lymphgefäße
auffindbar.
Die
assoziierten
Lymphknoten,
die
von
einer
bindegewebigen Kapsel umgeben waren, wiesen eine reguläre Unterteilung in Mark
und Rinde auf. Neben einer gering- bis mittelgradigen Lymphopenie konnte in den
Lymphknoten
in
einigen
Fällen
eine
geringgradige
Stauung,
sowie
eine
Sinushistiozytose und eine geringgradige Hämosiderose festgestellt werden.
Das hyperplastische Drüsengewebe von 7 Hündinnen (HYP1-HYP7) fiel durch die
gesteigerte Gesamtzellzahl pro Läppcheneinheit auf, die zum Teil mit einem
moderaten Entzündungsgeschehen gekoppelt war. Neben Proliferationen von
intralobulären Duktepithelien, die teilweise mit der Einengung des Lumens
einhergingen (Epitheliosis), traten auch Proliferationen von Drüsenendstücken und
Myoepithelien (Adenosis) auf. Die sekretorische Aktivität der Alveolen war hoch. Die
Zellkerne waren groß, und eine Vermehrung des Zellumfangs erkennbar. Diese
unterschiedlichen Erscheinungsformen der Hyperplasie traten entweder einzeln oder
kombiniert auf, häufig auch neben physiologischem Mammagewebe. Die assoziierten
Lymphknoten zeigten einen charakteristischen Aufbau und waren leicht aktiviert.
Auch in dieser Untersuchungsgruppe war hier eine gering- bis mittelgradige
Sinushistiozytose, sowie eine geringgradige Hämosiderose vorhanden.
Die komplexen Adenome lagen solitär oder multinodulär vor und wurden bei 15
Hunden untersucht (kAd1-kAd15). Die Tumoren waren unterschiedlich groß und
zeichneten sich durch eine Proliferation alveolärer und myoepithelialer Bestandteile
aus. Die komplexen Adenome waren von einer Kapsel umgeben, die Blut- und
Lymphgefäße enthielt. In den Randbereichen war eine gesteigerte Proliferation zu
finden. Eine gering- bis mittelgradige Stauung konnte zum Teil im tumorös entarteten
Gewebe, aber auch in einigen Lymphknoten festgestellt werden. Darüber hinaus
fand sich in den Lymphknoten neben einer geringgradigen Lymphopenie und einer
Ergebnisse 50
gering-
bis
mittelgradigen
Sinushistiozytose
eine
gering-
bis
mittelgradige
Hämosiderose.
Die solitären oder multinodulären einfachen Adenome von 15 Hunden (eAd1-eAd15)
wiesen ein expansives Wachstum auf und lagen von einer Kapsel gut abgegrenzt im
Drüsenparenchym. Die Epithelien zeigten eine tubulär-alveoläre Anordnung und
waren gut differenziert. Das fibrovaskuläre Stroma und auch das Tumorgewebe
wiesen
eine
mittelgradige
Entzündungszellinfiltration
auf,
bestehend
aus
Makrophagen, neutrophilen Granulozyten und Lymphozyten. Die Lymphknoten
zeigten sich zum Teil leicht aktiviert und wiesen neben einer geringgradigen
Sinushistiozytose eine geringgradige Hämosiderose auf.
Bei den benignen Mammamischtumoren wurden in 15 Fällen (bMMT1-bMMT15)
neben den bei den komplexen Adenomen beschrieben Strukturen auch chondrale
und ossäre Bestandteile gefunden. Diese Tumorgruppe war klar zum umliegenden
physiologischen Gewebe abgegrenzt. Es zeigten sich zum Teil geringgradige
Stauungen, sowie lymphozytär-plasmazelluläre Infiltrationen in der Kapsel. Die
assoziierten
Lymphknoten
wiesen
neben
einer
gering-
bis
mittelgradigen
Lymphopenie auch eine gering- bis mittelgradige Hämosiderose, sowie eine geringbis mittelgradige Stauung auf. In vereinzelten Fällen war eine geringgradige
Hämorrhagie zu verzeichen.
In allen einfachen und komplexen Adenomen und benignen Mammamischtumoren
fehlten Nekroseareale und eine erhöhte Mitoserate.
Die 17 komplexen Karzinome (kCa1-kCa17) zeichneten sich durch eine Vermehrung
des epithelialen und myoepithelialen Anteils aus, die einfachen Karzinome hingegen
wiesen eine ausschließliche Proliferation des epithelialen Anteils auf und wurden bei
19 Hündinnen untersucht (eCa1-eCa19). Die Zell- und Kernpolymorphie waren ein
ebenso vorhandenes Merkmal, wie erhöhte Mitoseraten, fokale Invasionsfronten,
sowie zum Teil Nekrosen und Blutungen. Bei einigen Fällen konnte eine gering- bis
mittelgradige histiozytäre und lympho-plasmazelluläre entzündliche Infiltration im
Tumor beobachtet werden. Das Gewebe des assoziierten Lymphknotens war in
einigen Fällen der einfachen Karzinome weitestgehend durch neoplastische Zellen
ersetzt. Auch Nekrosen wurden beobachtet. Das verbliebene lymphatische Gewebe
der Lymphknoten zeigte neben einer gering- bis mittelgradigen Lymphopenie und
einer mittelgradigen Hämosiderose auch Einzelzellnekrosen. Die unveränderten
Ergebnisse 51
Lymphknoten beider Tumorgruppen zeigten einen regulären Aufbau von Rinde und
Mark und waren mitunter von gering- bis mittelgradiger Sinushistiozytose,
Hämosiderose und Stauung begleitet. Vereinzelt waren geringgradige Blutungen
erkennbar.
4.2
Ergebnisse der immunhistologischen Befunderhebung
Die bereits beschriebenen immunhistologischen „Scores“ sind für alle MMPs und
TIMPs nach Struktur (aE: alveoläres Epithel, dE: duktales Epithel, mE: Myoepithel,
EZ: Entzündungszellen, St: Stroma, GE: Gefäßendothel, GM: Gefäßmedia, Lnn unv
R: Lymphknotenrinde, Lnn unv M: Lymphknotenmark, Em: Emboli) und Lokalität
(PM: physiologische Mamma, TZ: Tumorzentrum, TP: Tumorperipherie, TN:
Tumornah, TF: Tumorfern) getrennt im Anhang 10.2, in den Tabellen 10 bis 37 zu
finden. Die fotografische Darstellung der immunhistologisch untersuchten Schnitte ist
in Kapitel 8, Abbildung 25-69 dargelegt. Die Werte für Median, Minimum und
Maximum sämtlicher untersuchter Strukturen aller Lokalisationen und Tumorgruppen
finden sich für alle untersuchten MMPs und TIMPs im Anhang 10.3 in den Tabellen
38 bis 65. Die p-Werte sind im Anhang 10.4., Tabelle 66-101 aufgelistet. Die
graphischen Darstellungen der Signifikanzen zu den einzelnen untersuchten
Enzymen sind im Anschluss an den Fließtext des Ergebnisteils zu finden (für MMP-7:
S. 66-68, Abbildung 1-5; für MMP-11: S. 87-90, Abbildung 6-13; für MMP-12: S.108110, Abbildung 14-19; für TIMP-3: S. 124-126, Abbildung 20-24).
4.2.1 MMP-7
4.2.1.1 MMP-7 in den Kontrollen
In der Positivkontrolle S 781/ 03 X (langer Röhrenknochen) zeigte sich ein
einheitliches, mittel- bis dunkelbraunes homogenes zytoplasmatisches Signal in etwa
70-80% der Zellen. In den Zellkernen war keine spezifische immunhistologische
Reaktion zu sehen. Sämtliche Negativkontrollen waren frei von spezifischem Signal.
Tabellarisch sind die p-Werte für MMP-7 dem Anhang 10.4.1, Tab. 66 bis 74 zu
entnehmen.
Ergebnisse 52
4.2.1.2 MMP-7 in unverändertem Milchdrüsengewebe
Das
alveoläre
und
das
duktale
Epithel
sowie
das
Myoepithel
des
Kontrollgewebes zeigten eine vergleichbare, mittelgradige (Median aE: 4,31)
Expressionsstärke von MMP-7 (Median, Min., Max.: Anhang 10.3; Tab. 38;
Fotodokumentation 8.1, Abb. 25) und wiesen im Vergleich zu den entsprechenden
Epithelien des unveränderten Mammagewebes der anderen Tumorgruppen keine
signifikanten Unterschiede auf (aE: p= 0,5304; dE: p= 0,2493; mE: p= 0,7567;
Anhang 10.4, Tab. 67). Die Entzündungszellen zeigten mit einem Median von 1,17
eine deutlich schwächere immunhistologische Reaktion als die Epithelien; der
Vergleich mit den Entzündungszellen in der unveränderten Mamma über alle
Tumorgruppen wies keine signifikanten Unterschiede auf (p= 0,6568).
Die Lymphknotenrinde (Anhang 10.4, Tab. 71) wies mit einem Median von 5,86 die
deutlichste MMP-7 Expression des Kontrollgewebes auf, zeigte im Vergleich über
alle Tumorgruppen jedoch keine signifikanten Unterschiede (p= 0,5888). Das
Lymphknotenmark zeigte eine den Epithelien vergleichbare Expression, war jedoch
im Tumorgruppenvergleich nicht signifikant unterschiedlich (p= 0,3650; Anhang 10.4,
Tab.71).
Die als tumorfern definierten Gefäße (Anhang 10.4, Tab. 73) des gesunden
Drüsengewebes waren in Endothel und Media frei von immunhistologischem Signal.
Das Endothel zeigte keine signifikanten Unterschiede (p= 0,0640) zu anderen
Tumorgruppen. Im Vergleich über alle Tumorgruppen hinweg wies die Gefäßmedia
signifikante Unterschiede in der Expression zu den Gruppen der Hyperplasie (Median
TF GM: 4,32) und der einfache Karzinome (Median TF GM: 4,48) auf (p= 0,0309).
Auch das Stroma war immunhistologisch negativ und im Vergleich mit dem Stroma
der komplexen Adenome (Median TF S: 1,44) hoch signifikant verschieden (p=
0,0028). Die graphischen Darstellungen der signifikanten Ergebnisse befinden sich
auf den Seiten 67 und 68, Abb.3, 4 und 5)
4.2.1.3 MMP-7 in hyperplastischem Milchdrüsengewebe
Die alveolären und duktalen Epithelien und das Myoepithel im hyperplastischen
Gewebe zeigten eine schwache Expression (Median, Min., Max.: Anhang 10.3, Tab.
39). Auch die Entzündungszellen wiesen eine ähnlich schwache Expression auf. Alle
genannten Strukturen zeigten im Tumorgruppenvergleich keine signifikanten
Ergebnisse 53
Unterschiede (aE: p= 0,5304; dE: p= 0,2493; mE: p= 0,7567; EZ: p= 0,6568; Anhang
10.4, Tab.67; Fotodokumentation 8.1, Abb. 26).
Die Lymphknotenrinde (Anhang 10.4, Tab. 71) zeigte mit einem Median von 4,72
das stärkste Signal der hyperplastischen Gruppe (Anhang 10.3, Tab. 39), war jedoch
wie
das
Lymphknotenmark
im
Tumorgruppenvergleich
nicht
signifikant
unterschiedlich zu den entsprechenden Strukturen (Lnn unv R: p= 0,5888; Lnn unv
M: p= 0,3650).
Das tumorferne Gefäßendothel (Anhang 10.4, Tab. 73) wies eine sehr schwache
MMP-7-Expression auf (Median: 0,08; Anhang 10.3, Tab. 39) und war im
Gruppenvergleich nicht signifikant verschieden (p= 0,0640). Dagegen war bei der
Media der Gefäße ein deutliches Signal zu verzeichnen (Median: 4,32). Dieses war
mit p= 0,0309 signifikant verschieden zur Gefäßmedia der Kontrollgruppe, die MMP7-negativ war (graphische Darstellung signifikanter Ergebnisse siehe Seite 67, Abb.
4). Das Stroma war frei von immunhistologischem Signal und mit p= 0,0028 hoch
signifikant verschieden zum tumorfernen Stroma der komplexen Adenome, das mit
einem Median von 1,44 eine geringe MMP-7-Expression aufwies. (graphische
Darstellung signifikanter Ergebnisse siehe Seite 68, Abb. 5)
4.2.1.4 MMP-7 in komplexen Adenomen
Die Epithelien der die komplexen Adenome umgebenden physiologischen Mamma
(Anhang 10.4, Tab. 67) zeigten eine gering- bis mittelgradige MMP-7-Expression
(Fotodokumentation 8.1, Abb. 27), wobei das duktale Epithel mit einem Median von
6,12 den höchsten Wert aller bei den komplexen Adenomen erhobenen Werte
erreichte (Anhang 10.3; Tab. 40). Keine der Epithelien der unveränderten Mamma
unterschied sich signifikant im Vergleich zu den anderen Tumorgruppen (aE: p=
0,5034; dE: p= 0,2493; mE: p= 0,7567; EZ: p= 0,6568;).
Bei der zweifaktoriellen Varianzanalyse wurden die Lokalisationen physiologische
Mamma,
Tumorzentrum
und
Tumorperipherie,
sowie
die
verschiedenen
Tumorgruppen miteinander verglichen (Anhang 10.4, Tab. 66). Dabei konnten für
die Entzündungszellen für alle Tumorgruppen hochsignifikante Unterschiede in der
Matrilysin-Expression für die unterschiedlichen Lokalisationen festgestellt werden (p=
0,0008; graphische Darstellung siehe Seite 66, Abb.2). Innerhalb der komplexen
Adenome konnte für die alveolären und duktalen Epithelien kein signifikanter
Expressionsunterschied
zwischen
den
drei
oben
genannten
Lokalisationen
Ergebnisse 54
nachgewiesen werden (aE: p= 0,3456; dE: p= 0,4813). Das Myoepithel unterschied
sich bei der Gruppe „komplexe Adenome“ in den Lokalisationen physiologische
Mamma und Tumorzentrum signifikant (mE: p= 0,0238), wobei das Tumorzentrum
eine stärkere Expression (Median 5,76) aufwies, als die umgebende physiologische
Mamma (Median 4,20). Zusätzlich war der Vergleich des Myoepithels über alle
Tumorgruppen hinweg signifikant (p= 0,0026). Die graphische Darstellung der
signifikanten Ergebnisse befindet sich auf der Seite 66, Abb.1.
Im Tumorzentrum (Anhang 10.4, Tab. 68) exprimierten das alveoläre und das
duktale Epithel mittelgradig und waren im Vergleich zu den anderen Tumorarten und
der Kontrollgruppe nicht signifikant unterschiedlich (aE: p= 0,5921; dE: p= 0,6989).
Das Myoepithel (Median 5,76) wies im Vergleich zum Tumorzentrum der
Tumorgruppen der einfachen Adenome (Median 2,24) und der einfachen Karzinome
(Median 1,84) einen signifikanten Unterschied und im Vergleich zu den komplexen
Karzinomen (Median 1,20) hochsignifikante Unterschiede in der Expression auf (p=
0,0028; graphische Darstellung siehe Seite 66, Abb.1). Die MMP-7-Expression der
Entzündungszellen war schwach (Median 0,54) und nicht signifikant unterschiedlich
zu den Tumorzentren der anderen Tumorgruppen (p= 0,4189).
In der Tumorperipherie (Anhang 10.4, Tab. 69) waren das alveoläre Epithel (Median
4,00) mit p= 0,3314 und das duktale Epithel (Median 5,60) mit p= 0,9254 nicht
signifikant
unterschiedlich
im
Vergleich
entsprechender
Strukturen
und
Lokalisationen der anderen Tumorgruppen. Beim Vergleich des Myoepithels konnte,
wie im Tumorzentrum, ein signifikanter Expressionsunterschied zu den einfachen
Adenomen nachgewiesen werden (p= 0,0099). Dabei exprimierte das Myoepithel der
komplexen Adenome mit einem Median von 4,80 mehr als doppelt soviel MMP-7, als
die vergleichbare Struktur der einfachen Adenome (Median 2,20). Die grafische
Darstellung dieser Signifikanz befindet sich auf Seite 66, Abb.1. Die Werte der
Entzündungszellen in der Tumorperipherie (Median 1,60) zeigten keine signifikanten
Unterschiede zu den entsprechenden Strukturen und Lokalisationen der anderen
Untersuchungsgruppen (p= 0,9873).
Bei der statistischen Auswertung des Tumorgesamtwertes (Anhang 10.4, Tab. 70)
waren der alveoläre und duktale Tumorgesamtwert folgerichtig nicht signifikant
auffällig (aE: p= 0,5624; dE: p= 0,9814), für das Myoepithel hingegen ergab sich eine
Signifikanz in der Expression von p= 0,0089 im Vergleich zu den Gruppen der
Ergebnisse 55
einfachen Adenome und der komplexen Karzinome. Die Entzündungszellen waren in
der Signalausprägung nicht auffällig (p= 0,8331).
Bei der Untersuchung der Lymphknotenrinde über alle Tumorgruppen hinweg
und im Vergleich zu den metastasierten Lymphknoten der einfachen Karzinome
(Anhang 10.4, Tab. 71) ergab sich keine Signifikanz (Lnn unv R: p= 0,5888).
Dasselbe galt für den entsprechenden Vergleich des Lymphknotenmarks (Lnn unv M:
p= 0,3650). Sowohl Rinde, als auch Mark wiesen in allen Tumorgruppen eine
ähnliche, mittelgradige MMP-7-Expression auf.
Der Vergleich des tumornahen Gefäßendothels über alle Tumorgruppen hinweg
(Anhang 10.4, Tab. 72) ergab hochsignifikante Expressionsunterschiede zwischen
allen untersuchten Tumorgruppen, sowie der Hyperplasie- und der Kontrollgruppe
(p= 0,0000). Dabei exprimierten die komplexen Adenome mit einem Median von 5,67
deutlich, während alle übrigen Untersuchungsgruppen nahezu kein Matrilysin
aufwiesen (graphische Darstellung siehe Seite 67, Abb. 3). Im Gegensatz dazu
konnte für die Gefäßmedia keine signifikant unterschiedliche immunhistologische
Reaktion für die Gruppe der komplexen Adenome im Vergleich zu anderen Gruppen
nachgewiesen werden. Die Expression der Untersuchungsgruppen war mit Medianen
zwischen 1,20 (bMMT) und 4,48 (kCa) gering- bis mittelgradig. Beim Vergleich des
tumornahen
Stromas
über
alle
Tumorgruppen
hinweg
wurden
signifikante
Expressionsunterschiede der komplexen Adenome (Median 3,70) zu den einfachen
Karzinomen (Median 1,36), und hochsignifikante Unterschiede zu allen übrigen
Untersuchungsgruppen, die nahezu keine MMP-7-Expression zeigten, nachgewiesen
(p= 0,0000; graphische Darstellung siehe Seite 68, Abb. 5).
Der Vergleich des tumorfernen Gefäßendothels über alle Gruppen hinweg
(Anhang 10.4; Tab. 73) ergab keine Expressionsunterschiede (p= 0,0640). Die
Expression war bei allen Untersuchungsgruppen geringgradig, in der Kontrollgruppe
war keine MMP-7- Expression zu verzeichnen. Die Expression in der Gefäßmedia
hingegen
war
mit
p=
0,0309
im
Tumorgruppenvergleich
zwar
signifikant
unterschiedlich, dies galt jedoch nicht für die Gruppe der komplexen Adenome. Das
tumorferne Stroma (Median 1,44) zeigte Unterschiede in der Expression im Vergleich
zu den Gruppen Kontrolle, Hyperplasie und benigne Mammamischtumore, deren
Stroma MMP-7-negativ war (p= 0,0028; graphische Darstellung siehe Seite 68, Abb.
5).
Ergebnisse 56
Beim Vergleich des tumornahen und tumorfernen Gefäßendothels über alle
Tumorgruppen und über alle Lokalisationen hinweg (Anhang 10.4; Tab. 74)
ergaben sich hochsignifikante Unterschiede zwischen den Tumorgruppen „einfache
Adenome“ (p= 0,0003), sowie „benigne Mammamischtumoren“ (p= 0,0001),
„komplexe Karzinome“ (p= 0,0005) und „einfache Karzinome“ (p= 0,0001). Dabei
erreichte das tumornahe Gefäßendothel der komplexen Adenome mit einem Median
von
5,67
einen
sehr
deutlichen
Wert,
die
Expression
der
anderen
Untersuchungsgruppen war schwach oder beinahe negativ (graphische Darstellung
siehe Seite 67, Abb.3). Die Lokalisationen waren mit einem p-Wert von 0,8490 nicht
signifikant unterschiedlich. Der Vergleich der tumornahen und tumorfernen
Gefäßmedia erbrachte ein signifikantes Ergebnis von p= 0,0381. Bei der weiteren
Untersuchung mit dem Tukey Test konnte im Vergleich der einzelnen Lokalisationen
diese Signifikanz nicht mehr nachgewiesen werden, was vermutlich auf eine zu
geringe Datenmenge oder fehlende Werte zurückzuführen ist.
Das tumornahe Stroma zeigte im Vergleich zum tumorfernen Stroma signifikante
Expressionsunterschiede bei den Tumorgruppenkombinationen komplexe und
einfache Adenome (p= 0,0141), sowie hochsignifikante Unterschiede zwischen
komplexen Adenomen und benignen Mammamischtumoren (p= 0,0000). Auch der
Vergleich mit den komplexen Karzinomen, sowie den einfachen Karzinomen führte
zu hochsignifikanten, beziehungsweise signifikanten Ergebnissen (kAd-kCa: p=
0,0006; kAd-eCa: p= 0,0367). Dies lässt sich auf die mittelgradige, tumornah und
tumorfern etwa gleich starke Matrilysin-Expression der komplexen Adenome und die
deutliche schwächere bis fehlende Expression aller übrigen Untersuchungsgruppen
in beiden Lokalisationen zurückführen. Die graphische Darstellung der Signifikanzen
findet sich auf Seite 68, Abb. 5.
4.2.1.5 MMP-7 in einfachen Adenomen
Die Epithelien der unveränderten Mamma der einfachen Adenome wiesen eine
ähnliche Matrilysin-Expression auf wie die der komplexen Adenome. Der deutlichste
Unterschied war beim duktalen Epithel der einfachen Adenome zu vermerken, das
mit einem Median von 4,50 schwächer als das der komplexen Adenome (Median
6,12) exprimierte (Anhang 10.3; Tab. 41). Keine der Epithelien der unveränderten
Mamma (Anhang 10.4; Tab. 67) unterschied sich jedoch signifikant im Vergleich zu
Ergebnisse 57
entsprechenden Strukturen der anderen Tumorgruppen (aE: p= 0,5034; dE: p=
0,2493; mE: p= 0,7567; EZ: p= 0,6568).
Beim paarweisen Gruppenvergleich der zweifaktoriellen Varianzanalyse wurden auch
die Lokalisationen physiologische Mamma, Tumorzentrum und Tumorperipherie
miteinander
verglichen
(Anhang
10.4;
Tab.
66).
Dabei
konnten
für
die
Entzündungszellen für alle Tumorgruppen hochsignifikante Unterschiede in der
Matrilysin-Expression für die Lokalisationen physiologische Mamma-Tumorzentrum
festgestellt werden (p= 0,0008). Dabei exprimierten stets die Entzündungszellen der
physiologischen Mamma mehr MMP-7, als das Tumorzentrum der jeweiligen
Tumorgruppen (graphische Darstellung siehe Seite 66, Abb. 2). Innerhalb der
einfachen Adenome konnte für die mittelgradige Expression der alveolären und
duktalen Epithelien kein signifikanter Expressionsunterschied zwischen den drei
oben genannten Lokalisationen nachgewiesen werden (aE: p= 0,3456; dE: p=
0,4813). Das Myoepithel unterschied sich innerhalb der Gruppe „einfache Adenome“
in den Lokalisationen physiologische Mamma (Median 4,00) und Tumorzentrum
(Median 2,24) signifikant (PM-TZ: p= 0,0238). Zusätzlich war der Vergleich des
Myoepithels zu den komplexen Adenomen, die in allen Lokalisationen deutlicher
exprimierten, signifikant (p= 0,0026). Die graphische Darstellung hierzu findet sich
auf der Seite 66, Abb. 1.
Im Tumorzentrum (Anhang 10.4; Tab. 68) waren das alveoläre und das duktale
Epithel im Vergleich zu den anderen Tumorarten und der Kontrollgruppe nicht
signifikant unterschiedlich (aE: p= 0,5921; dE: p= 0,6989) und beide Epithelien
zeigten eine mittelgradige Expression. Das Myoepithel (Median 2,24) exprimierte mit
p= 0,0028 signifikant verschieden im Vergleich zum Myoepithel des Tumorzentrums
der komplexen Adenome (Median 5,76; graphische Darstellung siehe Seite 66, Abb.
1). Die Entzündungszellen waren in der Expression nicht signifikant unterschiedlich
zu den Tumorzentren der anderen Tumorgruppen (p= 0,4189).
Auch in der Tumorperipherie (Anhang 10.4; Tab. 69) war ausschließlich das
Myoepithel (Median 2,20) im Tumorgruppenvergleich zu den komplexen Adenomen
(Median 4,80) signifikant unterschiedlich in der Expression mit p= 0,0099. Die
graphische Darstellung des Ergebnisses befindet sich auf der Seite 66, Abb. 1. Die
restlichen erhobenen Werte waren statistisch nicht auffällig (aE: p= 0,3314; dE: p=
0,9254; EZ: p= 0,9873; Fotodokumentation 8.1, Abb. 28).
Ergebnisse 58
Bei der statistischen Auswertung des Tumorgesamtwertes (Anhang 10.4; Tab. 70)
waren der alveoläre und duktale Tumorgesamtwert folgerichtig nicht signifikant (aE:
p= 0,5624; dE: p= 0,9814), für das Myoepithel hingegen ergab sich eine Signifikanz
in der Expression mit p= 0,0089 im Vergleich zu den Gruppen der komplexen
Adenome.
Die
Entzündungszellen
waren
in
der
Signalausprägung
nicht
unterschiedlich (p= 0,8331).
Sowohl die Matrilysin-Expression in der Lymphknotenrinde, als auch die im Mark
(Anhang 10.4; Tab. 71) waren mittelgradig und statistisch im Tumorgruppenvergleich
nicht auffällig (Lnn unv R: p= 0,5888; Lnn unv M: p= 0,3650).
Der Vergleich des tumornahen Gefäßendothels über alle Tumorgruppen hinweg
(Anhang 10.4; Tab. 72) erbrachte für die einfachen Adenome (Median 0,80)
hochsignifikante Unterschiede zur Gruppe der komplexen Adenome (Median 5,67)
mit p= 0,0003. Im Gegensatz dazu konnte für die Gefäßmedia der einfachen
Adenome keine signifikant unterschiedliche immunhistologische Reaktion im
Vergleich zu anderen Gruppen nachgewiesen werden, da die Expression bei allen
Tumorgruppen zwischen 1,20 und 2,16 im Median lag. Das Stroma der einfachen
Adenome (Median 0,96) war in der Expression zur Gruppe der komplexen Adenome
(Median
3,70)
hochsignifikant
verschieden
(p=
0,0000).
Die
graphischen
Darstellungen hierzu finden sich auf den Seiten 67 und 68, Abb. 3, 4 und 5.
Der Vergleich des tumorfernen Gefäßendothels über alle Gruppen hinweg
(Anhang 10.4; Tab. 73) ergab keine Expressionsunterschiede (p= 0,0640). Alle
Untersuchungsgruppen exprimierten in dieser Struktur nur sehr schwach oder
zeigten kein immunhistologisches Signal für MMP-7. Die Expression in der
Gefäßmedia hingegen war mit p= 0,0309 zwischen den Tumorgruppen zwar
signifikant unterschiedlich, jedoch nicht für die Gruppe der einfachen Adenome. Das
tumorferne Stroma (Median 1,44) zeigte für diese Gruppe keine Unterschiede in der
Expression im Vergleich zu den anderen Untersuchungsgruppen.
Beim Vergleich des tumornahen und tumorfernen Gefäßendothels über alle
Tumorgruppen und über alle Lokalisationen hinweg (Anhang 10.4; Tab. 74)
zeigten sich signifikante Unterschiede zu den komplexen Adenomen (p=0,0003).
Dabei exprimierten sowohl die einfachen, als auch die komplexen Adenome mit
einem Median von 1,20 tumorfern geringgradig, jedoch unterschied sich das
schwache tumornahe Signal der einfachen Adenome (Median 0,80) stark vom
Ergebnisse 59
deutlichen tumornahen Signal der komplexen Adenome (Median 5,67; graphische
Darstellung siehe Seite 67, Abb. 3). Der Vergleich der tumornahen und tumorfernen
Gefäßmedia über alle Gruppen hinweg erbrachte ein signifikantes Ergebnis von p=
0,0381. Bei der weiteren Untersuchung mit dem Tukey Test konnte im Vergleich der
einzelnen Lokalisationen diese Signifikanz nicht mehr nachgewiesen werden, was
vermutlich auf eine zu geringe Datenmenge oder fehlende Werte zurückzuführen ist.
Beim Stroma konnte ein signifikanter Unterschied zu den komplexen Adenomen
nachgewiesen werden (p= 0,0141), wobei die MMP-7-Expression tumorfern bei
beiden Gruppen identisch war (Median 1,44), die komplexen Adenome tumornah mit
einem Median von 3,70 jedoch nahezu viermal soviel Matrilysin aufwiesen, als die
einfachen Adenome (Median 0,96).
4.2.1.6 MMP-7 in benignen Mammamischtumoren
Wie bei allen anderen Tumorgruppen waren auch bei dieser die Epithelien der
physiologischen Mamma (Anhang 10.4; Tab. 67) im Vergleich zu den anderen
Gruppen nicht signifikant verschieden (aE: p= 0,5034; dE: p= 0,2493; mE: p= 0,7567;
EZ: p= 0,6568). Auffallend war, dass wiederum das duktale Epithel die mit Abstand
stärkste Expression aufwies (Median = 4,00). Ergebnisse für Median, Minimum und
Maximum können im Anhang 10.3 der Tabelle 42 entnommen werden.
Beim Vergleich der unterschiedlichen Lokalisationen (physiologische Mamma,
Tumorzentrum, Tumorperipherie) und den Tumorgruppen je Struktur (Anhang
10.4; Tab. 66) konnte beim Myoepithel für die Lokalisationen physiologische Mamma
(Median 2,40) und Tumorzentrum (Median 3,36) ein signifikanter Unterschied
nachgewiesen werden (p= 0,0068; graphische Darstellung siehe Seite 66, Abb.1).
Ebenfalls signifikant unterschieden sich die genannten Lokalisationen in der MMP-7Expression der Entzündungszellen mit einem p-Wert von p= 0,0002. Hier war
allerdings die Expression in der physiologischen Mamma (Median 1,80) deutlicher,
als im Tumorzentrum (Median 0,48; graphische Darstellung siehe Seite 66, Abb. 2).
Im Tumorzentrum (Anhang 10.4; Tab. 68; Fotodokumentation 8.1, Abb. 29)
exprimierten das alveoläre, das duktale und das myoepitheliale Epithel der benignen
Mammamischtumore mittelgradig und waren im Vergleich zu den anderen
Tumorarten und der Kontrollgruppe nicht signifikant unterschiedlich (aE: p= 0,5921;
dE: p= 0,6989; mE: p= 0,0028). Entsprechendes galt auch für die Entzündungszellen
(p= 0,4189).
Ergebnisse 60
In der Tumorperipherie (Anhang 10.4; Tab. 69) wurden für alle untersuchten
Strukturen keine Signifikanzen bei den benignen Mammamischtumoren festgestellt
(aE: p= 0,5921; dE: p= 0,6989; mE: p= 0,0099; EZ: p= 0,9873). Die mittelgradige
Expression (Median TP aE: 4,02) war mit der des Tumorzentrums vergleichbar. Der
signifikante p-Wert für das Myoepithel in Zentrum und Peripherie ergibt sich aus der
Art der statistischen Auswertung über alle Tumorgruppen hinweg, trifft jedoch nicht
für
die
Gruppe
der
benignen
Mammamischtumoren
zu.
Dies
wurde
im
anschließenden Tukey Test nachvollzogen.
Bei der statistischen Auswertung des Tumorgesamtwertes (Anhang 10.4; Tab. 70)
waren folglich weder der alveoläre oder duktale, noch der myoepitheliale
Tumorgesamtwert signifikant auffällig (aE: p= 0,5624; dE: p= 0,9814; mE: p=
0,0089). Die Entzündungszellen waren in der Signalausprägung nicht auffällig (p=
0,8331).
Sowohl die Lymphknotenrinde (Median 3,40), als auch das Mark (Median 1,40)
(Anhang 10.4; Tab. 71) waren statistisch im Tumorgruppenvergleich nicht auffällig
(Lnn unv R: p= 0,5888; Lnn unv M: p= 0,3650).
Der Vergleich des tumornahen Endothels (Median 0,00) über alle Tumorgruppen
hinweg (Anhang 10.4; Tab. 72) erbrachte eine hohe Signifikanz zur Gruppe der
komplexen Adenome (Median 5,67) mit p= 0,0000. Die graphische Darstellung findet
sich auf der Seite 67, Abb. 3. Dasselbe galt für das tumornahe negative Stroma der
benignen Mischtumoren im Vergleich zum mittelgradig exprimierenden tumornahen
Stroma der komplexen Adenome mit p= 0,000 (graphische Darstellung siehe Seite
68, Abb. 5). Die Gefäßmedia der benignen Mammamischtumoren hingegen war zu
den anderen Tumorgruppen laut Tukey Test nicht signifikant unterschiedlich (p=
0,0146).
Der Vergleich des tumorfernen Gefäßendothels über alle Gruppen hinweg
(Anhang 10.4; Tab 73) ergab keine Expressionsunterschiede (p= 0,0640). Die
Expression in der Gefäßmedia hingegen war mit p= 0,0309 zwischen den
Tumorgruppen zwar signifikant unterschiedlich, jedoch nicht für die Gruppe der
benignen Mammamischtumore. Das MMP-7-negative tumorferne Stroma dieser
Gruppe zeigte signifikante Unterschiede in der Expression im Vergleich zu den
komplexen Adenomen (Median 1,44; graphische Darstellung siehe Seite 68, Abb. 5)
Ergebnisse 61
Beim Vergleich des tumornahen und tumorfernen Gefäßendothels über alle
Tumorgruppen und über alle Lokalisationen hinweg (Anhang 10.4; Tab. 74)
zeigten sich ebenfalls hoch signifikante Expressionsunterschiede im Vergleich zu den
komplexen Adenomen (p= 0,0001). Dabei wiesen die benignen Mischtumoren in
beiden Lokalisationen eine gegen null gehende MMP-7-Expression auf, die
komplexen Adenome hingegen besonders tumornah einen sehr deutlichen MMP-7Wert (Median 5,67). Die Gefäßmedia zeigte geringe Expressionsunterschiede (p=
0,0381), die allerdings im Tukey Test nicht mehr zwischen den einzelnen
Lokalisationen nachgewiesen werden konnten. Vermutlich waren die benignen
Mischtumoren für den signifikanten p-Wert verantwortlich, da sich in dieser Gruppe
die Expression in den Lokalisationen „tumornah“ (Median 1,20) und „tumorfern“
(Median 4,00) am deutlichsten unterschied. Das negative Stroma war im Vergleich zu
den komplexen Adenomen (p= 0,0000) und zu den einfachen Karzinomen (p=
0,0080) hochsignifikant verschieden und zu den einfachen Adenomen signifikant
verschieden (p= 0,0108). Diese drei Tumorgruppen wiesen im tumornahen und –
fernen Stroma geringe MMP-7-Signale auf (Median eCa 0,80).
4.2.1.7 MMP-7 in komplexen Karzinomen
Wie bei allen anderen Tumorgruppen waren auch bei dieser die Epithelien der
unveränderten Mamma (Anhang 10.4; Tab. 67) im Vergleich zu den anderen
Gruppen nicht signifikant verschieden (aE: p= 0,5034; dE: p= 0,2493; mE: p= 0,7567;
EZ: p= 0,6568). Auffallend war, dass wiederum das duktale Epithel die stärkste
Matrilysin-Expression aufwies (Median= 5,76; Anhang 10.3; Tab. 43), alveoläres
Epithel (Median 4,86; Fotodokumentation 8.1, Abb. 30) und Myoepithel (Median
2,88) exprimierten schwächer. Die Entzündungszellen zeigten eine vergleichsweise
schwache immunhistologische Reaktion (Median 1,40).
Beim Vergleich der unterschiedlichen Lokalisationen (physiologische Mamma,
Tumorzentrum, Tumorperipherie) und den Tumorgruppen je Struktur (Anhang
10.4; Tab. 66) konnte beim Myoepithel für die Lokalisationen physiologische Mamma
(Median 2,88) und Tumorzentrum (Median 1,20) ein signifikanter Unterschied
nachgewiesen werden (PM-TZ: p= 0,0068). Dasselbe galt für die Entzündungszellen
mit einem p-Wert von 0,0002. Auch hier exprimierten die Entzündungszellen im
physiologischen Mammagewebe mit einem Median von 1,40 deutlicher, als die im
Ergebnisse 62
Tumorzentrum (Median 0,28). Die graphischen Darstellungen der signifikanten
Ergebnisse finden sich auf der Seite 66, Abb. 1 und 2.
Im Tumorzentrum (Anhang 10.4; Tab. 68) exprimierten die alveolären und duktalen
Epithelien mittelgradig und waren im Vergleich zu den anderen Tumorarten und der
Kontrollgruppe nicht signifikant unterschiedlich (aE: p= 0,5921; dE: p= 0,6989). Das
Myoepithel (Median 1,20) unterschied sich in der Expression hochsignifikant von
entsprechenden Strukturen der komplexen Adenome (Median 5,67), mit p= 0,0028
(graphische Darstellung siehe Seite 66, Abb.1). Die MMP-7-Expression der
Entzündungszellen war im gruppenübergreifenden Vergleich nicht auffällig (p=
0,4189).
In der Tumorperipherie (Anhang 10.4; Tab. 69) wurden für alle untersuchten
Strukturen keine Signifikanzen bei den komplexen Karzinomen festgestellt (aE: p=
0,3314; dE: p= 0,9254; mE: p= 0,0099; EZ: p= 0,9873). Der signifikante p-Wert beim
Myoepithel ist auf die Art der statistischen Auswertung (über alle Tumorgruppen
hinweg) zurückzuführen, trifft auf die komplexen Karzinome jedoch nicht zu. Dies ist
im Tukey Test ersichtlich.
Bei der statistischen Auswertung des Tumorgesamtwertes (Anhang 10.4; Tab. 70)
waren sowohl der alveoläre, als auch der duktale Tumorgesamtwert nicht signifikant
auffällig (aE: p= 0,5624; dE: p= 0,9814). Das Myoepithel exprimierte signifikant
schwächer im Vergleich zur Gruppe der komplexen Adenome (p= 0,0089; graphische
Darstellung siehe Seite 66, Abb. 1). Die Entzündungszellen waren in der
Signalausprägung nicht auffällig (p= 0,8331).
Sowohl die Lymphknotenrinde, als auch das Mark (Anhang 10.4; Tab. 71)
exprimierten mittelgradig und waren statistisch im Tumorgruppenvergleich nicht
auffällig (Lnn unv R: p= 0,5888; Lnn unv M: p= 0,3650).
Der Vergleich des tumornahen Endothels (Median 0,48) über alle Tumorgruppen
hinweg (Anhang 10.4; Tab. 72) erbrachte eine hohe Signifikanz zur Gruppe der
komplexen Adenome (p= 0,0000), die deutlich exprimierte (Median 5,67; graphische
Darstellung siehe Seite 67, Abb. 3). Dasselbe galt für das tumornahe Stroma mit p=
0,0000. Die komplexen Karzinome zeigten nur ein sehr geringes MMP-7-Signal
(Median 0,48), während das tumornahe Stroma der komplexen Adenome
mittelgradig exprimierte (Median 3,70; graphische Darstellung siehe Seite 68, Abb.
5). Die Gefäßmedia der komplexen Karzinome (Median 4,48) war zur Kontrollgruppe
Ergebnisse 63
(Median 0,00; graphische Darstellung siehe Seite 67, Abb. 4) signifikant
unterschiedlich (p= 0,0146).
Der Vergleich des tumorfernen Gefäßendothels (Median 0,80) über alle Gruppen
(Anhang 10.4; Tab. 73) hinweg ergab keine Expressionsunterschiede (p= 0,0640).
Die Expression in der Gefäßmedia (Median 2,72) war mit p= 0,0309 zwar signifikant
unterschiedlich, dies traf jedoch nicht auf die Gruppe der komplexen Karzinome zu.
Das tumorferne Stroma zeigte für diese Gruppe keine Unterschiede in der
geringgradigen
Expression
(Median
0,56)
im
Vergleich
zu
den
anderen
Tumorgruppen.
Beim Vergleich des tumornahen und tumorfernen Gefäßendothels über alle
Tumorgruppen und über alle Lokalisationen hinweg (Anhang 10.4; Tab. 74)
zeigten sich hoch signifikante Expressionsunterschiede im Vergleich zu den
komplexen Adenomen (p= 0,0001; graphische Darstellung siehe Seite 67, Abb. 3).
Die komplexen Karzinome wiesen hier in beiden Lokalisationen nur sehr geringe
MMP-7-Signale auf, wohingegen die komplexen Adenome vor allem tumornah
(Median 5,67) sehr deutlich exprimierten. Die Gefäßmedia zeigte geringe
Expressionsunterschiede (p= 0,0381), die allerdings im Tukey Test nicht mehr
zwischen den einzelnen Lokalisationen nachgewiesen werden konnten. Die
geringgradige Matrilysin-Expression des Stromas der komplexen Karzinome war im
Vergleich zu der mittelgradigen Expression der komplexen Adenomen (p= 0,0000;
graphische Darstellung siehe Seite 68, Abb. 5) hochsignifikant verschieden.
4.2.1.8 MMP-7 in einfachen Karzinomen
Alle Epithelien und die Entzündungszellen der unveränderten Mama (Anhang
10.4; Tab. 67; Fotodokumentation 8.1, Abb. 31) waren statistisch unauffällig (aE: p=
0,5034; dE: p= 0,2493; mE: p= 0,7567; EZ: p= 0,6568). Werte für Median, Minimum
und Maximum können im Anhang 10.3 der Tabelle 44 entnommen werden.
Beim Vergleich der unterschiedlichen Lokalisationen (physiologische Mamma,
Tumorzentrum, Tumorperipherie) und der Tumorgruppen je Struktur (Anhang
10.4; Tab. 66) konnte beim Myoepithel für die Lokalisationen physiologische Mamma
und Tumorzentrum ein signifikanter Unterschied nachgewiesen werden (p= 0,0068;
graphische Darstellung siehe Seite 66, Abb. 1). Das Myoepithel des physiologischen
Mammagewebes zeigte hier eine deutlichere MMP-7-Expression, als das des
Tumorzentrums. Dasselbe galt für die Entzündungszellen mit einem p-Wert von
Ergebnisse 64
0,0002. Graphisch ist dieses signifikante Ergebnis der Entzündungszellenexpression
auf der Seite 66, Abb. 2 zu finden. Beim Myoepithel unterschied sich die geringere
immunhistologische Reaktion der einfachen Karzinome zusätzlich hochsignifikant
von der deutlichen Expression der komplexen Adenome (p= 0,0010; graphische
Darstellung siehe Seite 66, Abb. 1).
Im Tumorzentrum (Anhang 10.4; Tab. 68) waren das alveoläre und das duktale
Epithel der einfachen Karzinome mit ihrer mittelgradigen Expression im Vergleich zu
den anderen Tumorarten und der Kontrollgruppe nicht signifikant unterschiedlich (aE:
p= 0,5921; dE: p= 0,6989). Das Myoepithel (Median 1,84) unterschied sich in der
Expression hochsignifikant von entsprechenden Strukturen der komplexen Adenome
(Median 5,76) mit p= 0,0028 (die graphische Darstellung befindet sich auf der Seite
66, Abb. 1). Die MMP-7-Expression der Entzündungszellen war schwach und im
gruppenübergreifenden Vergleich nicht auffällig (p= 0,4189).
In der Tumorperipherie (Anhang 10.4; Tab. 69) wurden für alle untersuchten
Strukturen keine Signifikanzen bei den einfachen Karzinomen festgestellt (aE: p=
0,3314; dE: p= 0,9254; mE: p= 0,0099; EZ: p= 0,9873). Der signifikante p-Wert beim
Myoepithel ist auf die Art der statistischen Auswertung (über alle Tumorgruppen
hinweg) zurückzuführen, trifft auf die einfachen Karzinome jedoch nicht zu. Dies ist
im Tukey Test ersichtlich.
Bei der statistischen Auswertung des Tumorgesamtwertes (Anhang 10.4; Tab. 70)
waren sowohl der Tumorgesamtwert für das alveoläre, als auch für das duktale
Epithel nicht signifikant auffällig (aE: p= 0,5624; dE: p= 0,9814). Das Myoepithel
zeigte zwar im gruppenübergreifenden Vergleich einen signifikanten Wert (mE: p=
0,0089), dieser bezog sich, wie im Tukey Test ersichtlich, jedoch auf den Vergleich
anderer Gruppen.
Sowohl die Lymphknotenrinde, als auch das Mark (Anhang 10.4; Tab.71)
exprimierten mittelgradig und waren statistisch weder metastasiert, noch unverändert
im Tumorgruppenvergleich auffällig (Lnn unv R: p= 0,5888; Lnn unv M: p= 0,3650).
Der Vergleich des geringgradig exprimierenden tumornahen Endothels (Median
0,16) über alle Tumorgruppen hinweg (Anhang 10.4; Tab. 72) erbrachte eine hohe
Signifikanz zur Gruppe der komplexen Adenome (Median 5,67) mit p= 0,0000. Die
graphische Darstellung ist auf der Seite 67, Abb. 3 zu finden. Signifikante
Unterschiede fanden sich beim Vergleich mit dem tumornahen Stroma der
Ergebnisse 65
komplexen Adenome mit p= 0,0000 (graphische Darstellung siehe Seite 68, Abb. 5),
wobei die komplexen Karzinome in dieser Struktur nur schwach exprimierten (Median
1,36), die komplexen Adenome dort mit einem Median von 3,70 ein mittelgradiges
MMP-7-Signal aufwiesen. Die Gefäßmedia der einfachen Karzinome war zu keiner
Vergleichsgruppe signifikant unterschiedlich (p= 0,0146) und zeigte ein eher
schwaches Matrilysin Signal (Median 2,16). Die Signifikanz des p-Wertes ergab sich
aus der Art der statistischen Auswertung, trifft auf die einfachen Karzinome jedoch
nicht zu.
Der Vergleich des tumorfernen Gefäßendothels (Median 0,12) über alle Gruppen
hinweg (Anhang 10.4; Tab. 73) ergab keine Expressionsunterschiede (p= 0,0640).
Die Expression in der Gefäßmedia war mit p= 0,0309 zwar signifikant verschieden
zwischen den einzelnen Gruppen, jedoch nicht im Vergleich mit den einfachen
Karzinomen. Das tumorferne Stroma zeigte für diese Gruppe ebenfalls keine
Expressionsunterschiede im Vergleich zu den anderen Tumorgruppen (p= 0,0028).
Beim Vergleich des tumornahen und tumorfernen Gefäßendothels über alle
Tumorgruppen und über alle Lokalisationen hinweg (Anhang 10.4; Tab. 74)
zeigten sich hochsignifikante Expressionsunterschiede im Vergleich zu den
komplexen Adenomen (p= 0,0001), wobei die einfachen Karzinome nur schwach, die
komplexen Adenome deutlich exprimierten. Die Gefäßmedia zeigte geringe
Expressionsunterschiede in den Lokalisationen (p= 0,0381), die allerdings im Tukey
Test nicht mehr nachgewiesen werden konnten. Das Stroma war im Vergleich zu den
komplexen
Adenomen
(p=
0,0367)
signifikant
und
zu
den
benignen
Mammamischtumoren hochsignifikant verschieden (p= 0,0080). Hier war die MMP-7Expression am deutlichsten im tumornahen und tumorfernen Stroma der komplexen
Adenome, die einfachen Karzinome zeigten ein schwaches, die benignen
Mischtumoren kein immunhistologisches Signal. Die graphische Darstellung ist auf
der Seite 68, Abb. 5 zu finden.
Die erhobenen Daten für tumornahe und tumorferne Emboli (Anhang 10.2; Tab.
15) konnten aufgrund der zu geringen Datenmenge nicht statistisch ausgewertet
werden.
Ergebnisse 66
Abbildung 1: MMP-7-Expression von Myoepithel in der physiologischen Mamma (PM), dem Tumorzentrum (TZ) und der
Tumorperipherie (TP); mE: Myoepithel, TGr: Tumorgruppe, KG: Kontrollgruppe, HYP: Hyperplasiegruppe, kAd: komplexe
Adenome, eAd: einfache Adenome, kCa: komplexe Karzinome, eCa: einfache Karzinome
Abbildung 2: MMP-7-Expression von Entzündungszellen in der physiologischen Mamma (PM), im Tumorzentrum (TZ) und in
der Tumorperipherie (TP); EZ: Entzündungszellen, TGr: Tumorgruppe, KG: Kontrollgruppe, HYP: Hyperplasiegruppe, kAd:
komplexe Adenome, eAd: einfache Adenome, kCa: komplexe Karzinome, eCa: einfache Karzinome
Ergebnisse 67
Abbildung 3: MMP-7-Expression im Gefäßendothel (GE), tumornah (TN) und tumorfern (TF), KG: Kontrollgruppe, HYP:
Hyperplasiegruppe, kAd: komplexe Adenome, eAd: einfache Adenome, kCa: komplexe Karzinome, eCa: einfache Karzinome
Abbildung 4: MMP-7-Expression in der Gefäßmedia (GM), tumornah (TN) und tumorfern (TF), KG: Kontrollgruppe, HYP:
Hyperplasiegruppe, kAd: komplexe Adenome, eAd: einfache Adenome, kCa: komplexe Karzinome, eCa: einfache Karzinome
Ergebnisse 68
Abbildung 5: MMP-7-Expression im Stroma (S), tumornah (TN) und tumorfern (TF) KG: Kontrollgruppe, HYP:
Hyperplasiegruppe, kAd: komplexe Adenome, eAd: einfache Adenome, kCa: komplexe Karzinome, eCa: einfache Karzinome,
Ergebnisse 69
4.2.2 MMP-11
4.2.2.1 MMP-11 in den Kontrollen
In der Positivkontrolle S781/03 (langer Röhrenknochen) und im DH82-Zellpellet
(Makrophagen/Monozytenzelllinie)
zeigte
sich
eine
einheitliche,
mittel-
bis
dunkelbraune zytoplasmatische homogene Färbung in etwa 80% der Zellen. Die
Zellkerne
waren
frei
von
immunhistologischem
Signal
für
MMP-11.
Alle
Negativkontrollen waren vollständig frei von spezifischem Signal.
Die tabellarische Übersicht über die MMP-11-Ergebnisse kann dem Anhang 10.4.2,
Tab. 75 bis 83 entnommen werden.
4.2.2.2 MMP-11 in unverändertem Milchdrüsengewebe
Das alveoläre Epithel der physiologischen Mamma (Anhang 10.4.2, Tab. 76) war
mit einem p-Wert von 0,0459 signifikant unterschiedlich zur Gruppe der benignen
Mammamischtumoren. Dabei wies das alveoläre Epithel der Kontrollgruppe ein
mittelgradiges Signal, die benignen Mischtumoren eine starke MMP-11-Expression
auf. Die graphische Darstellung hierzu ist auf der Seite 87, Abb. 6 zu finden. Sowohl
duktale, als auch myoepitheliale Strukturen und die Entzündungszellen waren
statistisch nicht auffällig (dE: p= 0,0938; mE: p= 0,0988; EZ: p= 0,5674). Die Werte
für Median, Minimum und Maximum können im Anhang 10.3 der Tabelle 45
entnommen werden. Die Fotodokumentation kann dem Kapitel 8.2, Abb. 32
entnommen werden.
Bei der statistischen Auswertung der Daten der Lymphknotenrinde (Median 4,12; pWert siehe Anhang 10.4.2, Tab. 80) ergab sich eine Signifikanz mit p= 0,0066
zwischen den Tumorgruppen. Dies betraf jedoch nicht die Kontrollgruppe. Das
Lymphknotenmark exprimierte schwach und war nicht signifikant unterschiedlich zu
anderen Gruppen (p= 0,3577).
Beim Vergleich der als tumorfern definierten Gefäße (Anhang 10.4.2, Tab. 82)
zeigte das Endothel, das nahezu keine MMP-11 exprimierte, einen signifikanten
Expressionsunterschied
zu
den
entsprechenden
Strukturen
der
benignen
Mammamischtumoren, die ein deutliches Signal in dieser Struktur aufwiesen (p=
0,0108; graphische Darstellung siehe Seite 90, Abb. 12). Die Gefäßmedia der
Kontrollgruppe hingegen exprimierte mittelgradig MMP-11 war jedoch beim
Ergebnisse 70
Tumorgruppenvergleich nicht signifikant unterschiedlich (p= 0,2782). Dies galt auch
für das MMP-11-negative tumorferne Stroma mit p= 0,1503.
4.2.2.3 MMP-11 in hyperplastischem Milchdrüsengewebe
Der gering signifikante p-Wert des alveolären Epithels der physiologischen Mamma
(Anhang
10.4.2,
Tab.
76;
Fotodokumentation
8.2,
Abb.
33)
beim
Tumorgruppenvergleich betraf laut Tukey Test nicht die mittelgradig MMP-11
exprimierende Gruppe der Hyperplasie (p= 0,0459). Sowohl duktale, als auch
myoepitheliale Strukturen und die Entzündungszellen waren statistisch nicht auffällig
(dE: p= 0,0938; mE: p= 0,0988; EZ: p= 0,5674). Die Werte für Median, Minimum und
Maximum können der Tabelle 46 entnommen werden.
Bei
der
statistischen
Auswertung
der
Daten
der
deutlich
exprimierenden
Lymphknotenrinde (Median 6,00; p-Wert siehe Anhang 10.4.2, Tab. 80) ergab sich
eine Signifikanz mit p= 0,0066 zwischen den Tumorgruppen. Dies betraf jedoch nicht
die Hyperplasiegruppe. Auch das Lymphknotenmark (Median 3,24) war nicht
signifikant unterschiedlich zu anderen Gruppen (p= 0,3577).
Beim Vergleich der als tumorfern definierten Gefäße über alle Gruppen (Anhang
10.4.2, Tab. 82) zeigte das Endothel einen signifikanten Expressionsunterschied (p=
0,0108). Auch dieser Wert betraf nicht die Gruppe der Hyperplasie, die mit einem
Median von 1,92 nur geringe Signale für Stromelysin-3 zeigte. Die Gefäßmedia
(Median 6,80) war beim Tumorgruppenvergleich nicht signifikant unterschiedlich (p=
0,2782). Dasselbe galt für das tumorferne Stroma (Median 0,36) mit p= 0,1503.
Folglich konnten für diese Gruppe keine signifikanten Signalunterschiede zu anderen
Gruppen festgestellt werden.
4.2.2.4 MMP-11 in komplexen Adenomen
Bei der physiologischen Mamma (Anhang 10.4.2, Tab. 76) konnte im Tukey Test
der für den Vergleich aller Tumorgruppen signifikante p-Wert (p= 0,0459) des
alveolären Epithels bei der Gruppe der komplexen Adenome (Median 4,34) als nicht
zutreffend identifiziert werden (die Signifikanz für diese Struktur betraf ausschließlich
den Vergleich Kontrollgruppe-benigne Mammamischtumoren). Sowohl duktale, als
auch myoepitheliale Strukturen und die Entzündungszellen waren statistisch nicht
auffällig (dE: p= 0,0938; mE: p= 0,0988; EZ: p= 0,5674). Die weiteren, statistisch
Ergebnisse 71
nicht auffälligen Werte für Median, Minimum und Maximum können der Tabelle 47
entnommen werden.
Der Vergleich der Lokalisationen physiologische Mamma (PM)-Tumorzentrum
(TZ)-Tumorperipherie (TP) über alle Gruppen (Anhang 10.4.2, Tab. 75;
Fotodokumentation 8.2, Abb. 34, 36) hinweg erbrachte beim alveolären Epithel
(Median 4,34) signifikante Unterschiede zu den deutlicher exprimierenden benignen
Mammamischtumoren (Median 7,96) mit p= 0,0205 (graphische Darstellung siehe
Seite 87, Abb. 6) und zum Teil hochsignifikante Werte in den Vergleichen PM-TZ (p=
0,0000), PM-TP (p= 0,0271) und TZ-TP (p= 0,0055). Bei den komplexen Adenomen
war das immunhistologische Signal in physiologischer Mamma, Tumorzentrum und –
peripherie mittelgradig und etwa gleich stark, bei den anderen Tumorgruppen war die
stärkste MMP-11-Expression stets in der physiologischen Mamma zu finden, gefolgt
von der Tumorperipherie. Das Tumorzentrum wies die schwächste Stromelysin-3Expression auf. Die graphische Darstellung hierzu findet sich auf der Seite 87, Abb.6.
Ebenso war das duktale Epithel in seiner Expression mit p= 0,0041 hochsignifikant
verschieden zu den benignen Mammamischtumoren, die in jeder Lokalisation etwa
doppelt soviel MMP-11 exprimierten (graphische Darstellung siehe Seite 87, Abb. 7).
Alle drei Lokalisationsvergleiche waren für das duktale Epithel signifikant
unterschiedlich über alle Gruppen hinweg (PM-TZ: p= 0,0000; PM-TP: p= 0,0402;
TZ-TP: p= 0,0148). Auch beim duktalen Epithel war die höchste Expression im
physiologischen Mammagewebe vorzufinden, gefolgt von Tumorperipherie und –
zentrum (graphische Darstellung siehe Seite 87, Abb. 7). Das Myoepithel war für die
Gruppe der komplexen Adenome laut Tukey Test nicht signifikant unterschiedlich zu
anderen Gruppen (p= 0,0214), jedoch im Vergleich der Lokalisationen über alle
Gruppen hinweg dagegen hoch signifikant unterschiedlich (PM-TZ: p= 0,0000; TZTP: p= 0,0063). Die stärkste Expression wies erneut die physiologische Mamma auf.
Die komplexen Adenome waren die einzige Gruppe, bei der das Myoepithel im
Tumorzentrum mehr MMP-11 exprimierte, als die Tumorperipherie (graphische
Darstellung siehe Seite 88, Abb. 8). Zwischen Tumorzentrum und –peripherie waren
gruppenübergreifend keine signifikanten Expressionsunterschiede auszumachen (p=
0,0644). Die Entzündungszellen der komplexen Adenome, die nur ein geringgradiges
Signal für MMP-11 aufwiesen, waren in ihrem immunhistologischen Signal für MMP11 hochsignifikant verschieden zu dem der benignen Mammamischtumoren, die in
allen Lokalisationen deutlich mehr MMP-11-Expression zeigten (p= 0,0005;
Ergebnisse 72
graphische Darstellung siehe Seite 88, Abb. 9 und Seite 89, Abb. 10; Werte für
Median, Minimum und Maximum im Anhang 10.3.2., Tab. 47). Auch alle
Lokalisationsvergleiche führten zu signifikanten, bzw. hochsignifikanten Ergebnissen
(PM-TZ: p= 0,0000; PM-TP: p= 0,0412; TZ-TP: p= 0,0149).
Beim Vergleich des Tumorzentrums über alle Gruppen (Anhang 10.4.2, Tab. 77)
hinweg
waren
die
mittelgradig
exprimierenden
Epithelien
nicht
signifikant
voneinander verschieden (aE: p= 0,0935; dE: p= 0,1904; mE: p= 0,1737). Die
Entzündungszellen der komplexen Adenome (Median 1,40) waren im Tumorzentrum
nicht signifikant verschieden in ihrer Expression im Vergleich zu den anderen
Gruppen, obwohl der Vergleich über alle Tumorgruppen eine Signifikanz ergab (p=
0,0069).
In der Tumorperipherie (Anhang 10.4.2, Tab. 78) konnten für das alveoläre Epithel
(Median 3,64) keine Unterschiede zwischen den Gruppen nachgewiesen werden (p=
0,2342). Beim duktalen Epithel (Median 3,80) ergab sich ein leicht signifikanter Wert
(p= 0,0469), der jedoch nicht für den Vergleich der komplexen Adenome und den
anderen Gruppen aussagekräftig war. Das Myoepithel (Median 3,56) war statistisch
nicht auffällig (p= 0, 0936). Bei den Entzündungszellen (Median 0,80) konnte ein
hochsignifikanter Unterschied in der Expression mit p= 0,0018 zu den benignen
Mammamischtumoren festgestellt werden, die deutlich MMP-11 exprimierten
(Median 4,68). Die graphische Darstellung hierzu befindet sich auf Seite 88, Abb. 9
und Seite 89, Abb. 10).
Der Tumorgesamtwert (Anhang 10.4.2, Tab. 79) war für alle Epithelien der
komplexen Adenome statistisch nicht auffällig (aE: p= 0,5158; dE: p= 0,1710; mE: p=
0,2637). Bei den Entzündungszellen ergab sich beim gruppenübergreifenden
Vergleich ein signifikanter Wert mit p= 0,0069, der für die komplexen Adenome
jedoch laut Tukey Test nicht zutraf.
Bei der statistischen Auswertung der Daten der Lymphknotenrinde (Anhang 10.4.2,
Tab. 80; Fotodokumentation 8.2, Abb. 35) ergab sich eine Signifikanz mit p= 0,0066
zwischen den Tumorgruppen. Dies betraf jedoch nicht die komplexen Adenome
(Median 3,64). Das Lymphknotenmark (Median 3,20) war nicht signifikant
unterschiedlich zu anderen Gruppen (p= 0,3577).
Bei der Auswertung der tumornahen Gefäße über alle Gruppen hinweg (Anhang
10.4.2, Tab. 81) war für das nur gering exprimierende Endothel (Median 0,56) ein
Ergebnisse 73
hochsignifikanter Unterschied zu dem der benignen Mammamischtumoren (Median
4,96) erkennbar (p= 0,0009; graphische Darstellung siehe Seite 90, Abb. 12). Weder
die Gefäßmedia, die deutlich exprimierte (p= 0,4763), noch das nahezu MMP-11negative Stroma (p= 0,1264) waren statistisch auffällig.
Bei den tumorfernen Strukturen zeigte sich beim Gruppenvergleich (Anhang
10.4.2, Tab. 82) ebenfalls der MMP-11-Wert (Median 1,70) des Gefäßendothels
statistisch signifikant zu den benignen Mammamischtumoren (p= 0,0108; graphische
Darstellung siehe Seite 90, Abb. 12), die mehr als doppelt soviel MMP-11-Expression
zeigten, während die Media (Median 6,00) und das Stroma (Median 1,48) statistisch
nicht auffällig waren (TF GM: p= 0,2782; TF S: p= 0,1503).
Der Vergleich von tumornahen und tumorfernen Gefäßen (Anhang 10.4.2, Tab.
83) erbrachte beim MMP-11-Signal des Endothels eine hohe Signifikanz zur Gruppe
der benignen Mammamischtumoren (p= 0,0000) und zur Gruppe der einfachen
Karzinome (p= 0,0063). Dabei war tumorfern bei allen Tumorgruppen mehr MMP-11Expression zu verzeichnen als tumornah und die benignen Mischtumoren und die
einfachen Karzinome wiesen eine deutlich stärkere Expression auf, als die
komplexen Adenome. Die graphische Darstellung dieser Ergebnisse findet sich auf
der Seite 90, Abb. 12. Für die Media (Median 5,92) konnten weder zwischen den
Tumorgruppen (p= 0,8421), noch zwischen den einzelnen Lokalisationen signifikante
Unterschiede festgestellt werden (p= 0,2428). Beim geringgradig exprimierenden
Stroma war im Vergleich zum Stroma der etwas stärker exprimierenden benignen
Mammamischtumoren ein signifikanter p-Wert mit 0,0303 festzustellen. graphische
Darstellung siehe Seite 90, Abb. 13. Die einzelnen Lokalisationen waren statistisch
nicht auffällig (p= 0,1343).
4.2.2.5 MMP-11 in einfachen Adenomen
Bei der unveränderten Mamma (Anhang 10.4.2, Tab. 76) konnte im Tukey Test der
für den Vergleich aller Tumorgruppen signifikante p-Wert (p= 0,0459) des alveolären
Epithels bei der Gruppe der einfachen Adenome (Median 4,64) als nicht zutreffend
identifiziert werden (die Signifikanz für diese Struktur betraf ausschließlich den
Vergleich Kontrollgruppe- benigne Mammamischtumoren). Sowohl duktale, als auch
myoepitheliale Strukturen und die Entzündungszellen waren statistisch nicht auffällig
(dE: p= 0,0938; mE: p= 0,0988; EZ: p= 0,5674). Die Werte für Median, Minimum und
Maximum können der Tabelle 48 entnommen werden.
Ergebnisse 74
Der Vergleich der Lokalisationen physiologische Mamma (PM)-Tumorzentrum
(TZ)-Tumorperipherie (TP) über alle Gruppen (Anhang 10.4.2, Tab. 75) hinweg
erbrachte beim alveolären Epithel signifikante Unterschiede zu den benignen
Mammamischtumoren (p= 0,0026) und zum Teil hochsignifikante Werte in den
Vergleichen PM-TZ (p=0,0000), PM-TP (p=0,0271) und TZ-TP (p= 0,0055). Dabei
exprimierten die einfachen Adenome in allen drei Lokalisationen geringere Mengen
MMP-11, als die benignen Mischtumoren. In allen Tumorgruppen war das deutlichste
MMP-11-Signal in der physiologischen Mamma zu finden, gefolgt von der
Tumorperipherie und dem Tumorzentrum. Die graphische Darstellung findet sich auf
der Seite 87, Abb. 6. Ebenso war das duktale Epithel in seiner Expression
hochsignifikant verschieden zu den benignen Mammamischtumoren mit p= 0,0028.
Hier war besonders der Expressionsunterschied im Tumorzentrum der beiden
Tumorgruppen auffallend, wobei die einfachen Adenome nur geringe MMP-11Expression (Median 1,00) zeigten, die benignen Mischtumoren jedoch mit einem
Median von 6,30 sehr deutlich MMP-11-positiv waren (graphische Darstellung siehe
Seite 87, Abb. 7). Lokalisationsvergleiche waren für das duktale Epithel signifikant
unterschiedlich über alle Gruppen hinweg (PM-TZ: p= 0,0000; PM-TP: p= 0,0402;
TZ-TP: p= 0,0148; graphische Darstellung siehe Seite 87, Abb. 7). Hier zeigte die
umgebende physiologische Mamma stets das deutlichste Signal, gefolgt von der
Tumorperipherie und dem –zentrum. Das Myoepithel war laut Tukey Test für die
Gruppe der einfachen Adenome, die in allen Lokalisationen geringer exprimierten,
signifikant unterschiedlich zu den benignen Mammamischtumoren, die in allen
Lokalisationen eine etwa doppelt so hohe Expression zeigten (p= 0,0089; graphische
Darstellung siehe Seite 88, Abb. 8) und im Vergleich der Lokalisationen über alle
Gruppen hinweg hochsignifikant unterschiedlich exprimierten (PM-TZ: p= 0,0000; TZTP: p= 0,0063). Lediglich zwischen Tumorzentrum und –peripherie waren keine
Expressionsunterschiede
auszumachen
(p=
0,0644).
Auch
hier
zeigte
die
umgebende physiologische Mamma stets das deutlichste Signal, gefolgt von der
Tumorperipherie und dem –zentrum (graphische Darstellung siehe Seite 88, Abb. 8).
Die Entzündungszellen der einfachen Adenome waren in ihrem immunhistologischen
Signal
für
MMP-11
hochsignifikant
verschieden
zu
dem
der
benignen
Mammamischtumoren, die stets eine wesentlich höhere Expression zeigten, als die
einfachen Adenome. Im Bereich des Tumorzentrums war die MMP-11-Expression
der Entzündungszellen der Mischtumoren (Median 3,12) beinahe siebenmal so hoch,
Ergebnisse 75
wie die der einfachen Adenome (p= 0,0000; graphische Darstellung siehe Seite 88,
Abb. 9 und Seite 89, Abb. 10). Auch alle Lokalisationsvergleiche führten zu
signifikanten, bzw. hochsignifikanten Ergebnissen (PM-TZ: p= 0,0000; PM-TP: p=
0,0412; TZ-TP: p= 0,0149). Auch hier zeigten die Entzündungszellen der
umgebenden physiologischen Mamma stets das deutlichste Signal, gefolgt von der
Tumorperipherie und dem –zentrum. Die graphische Darstellung der Ergebnisse ist
auf der Seite 88, Abb. 9 und Seite 89, Abb. 10 zu finden.
Beim Vergleich des Tumorzentrums über alle Gruppen (Anhang 10.4.2, Tab. 77)
hinweg waren die Epithelien bezüglich der MMP-11-Expression nicht signifikant
voneinander verschieden (aE: p= 0,0935; dE: p= 0,1904; mE: p= 0,1754). Die
Entzündungszellen der einfachen Adenome (Median 0,70) waren im Tumorzentrum
mit p= 0,0069 signifikant verschieden in ihrer Expression im Vergleich zu den
benignen Mammamischtumoren (Median 3,12; graphische Darstellung siehe Seite
88, Abb. 9 und Seite 89, Abb.10; Fotodokumentation 8.2, Abb. 37).
In der Tumorperipherie (Anhang 10.4.2, Tab. 78) konnten für das mittelgradig
exprimierende alveoläre Epithel keine Unterschiede zwischen den Gruppen
nachgewiesen werden (p= 0,2342). Beim duktalen Epithel (Median 3,08) ergab sich
ein
signifikanter
Wert
(p=
0,0469),
der
im
Vergleich
zu
den
benignen
Mammamischtumoren (Median 6,60; graphische Darstellung siehe Seite 87, Abb. 7)
auftrat. Das Myoepithel war statistisch nicht auffällig (p= 0, 0936). Bei den
Entzündungszellen (Median 1,12) konnte ein hochsignifikanter Unterschied in der
Expression zu den benignen Mammamischtumoren (Median 4,68) festgestellt
werden (p= 0,0018; graphische Darstellung siehe Seite 88, Abb. 9 und Seite 89, Abb.
10).
Der Tumorgesamtwert (Anhang 10.4.2, Tab 79) war für alle Epithelien der
einfachen Adenome statistisch nicht auffällig (aE: p= 0,5158; dE: p= 0,1710; mE: p=
0,2637). Bei den Entzündungszellen ergab sich beim gruppenübergreifenden
Vergleich ein signifikanter Wert mit p= 0,0069 zur Gruppe der benignen
Mammamischtumoren, die
in
Tumorzentrum
und
der Peripherie
deutlicher
exprimierten.
Bei der statistischen Auswertung der Daten der Lymphknotenrinde (Anhang 10.4.2,
Tab. 80) ergab sich eine Signifikanz mit p= 0,0066 zwischen den Tumorgruppen.
Dies betraf jedoch nicht die mittelgradig exprimierenden einfachen Adenome. Das
Ergebnisse 76
Lymphknotenmark (Median 3,00) war nicht signifikant unterschiedlich zu anderen
Gruppen (p= 0,3577).
Bei der Auswertung der tumornahen Gefäße über alle Gruppen hinweg (Anhang
10.4.2, Tab. 81) war für das Endothel (Median 0,96) ein hochsignifikanter
Unterschied zu dem fünfmal stärker exprimierenden Endothel der benignen
Mammamischtumoren erkennbar (p= 0,0009; graphische Darstellung siehe Seite 90,
Abb. 12). Weder die Gefäßmedia (Median 4,48; p= 0,4763), noch das Stroma
(Median 0,08; p= 0,1264) waren statistisch auffällig.
Bei den tumorfernen Strukturen zeigte sich beim Gruppenvergleich (Anhang
10.4.2, Tab. 82) das Gefäßendothel zwar statistisch signifikant zu anderen Gruppen
(p= 0,0108), dies traf jedoch nicht auf die geringgradig exprimierenden einfachen
Adenome zu. Auch die Media (Median 4,80) und das Stroma (Median 0,16) waren
nicht auffällig (TF GM: p= 0,2782; TF S: p= 0,1503).
Der Vergleich von tumornahen und tumorfernen Gefäßen (Anhang 10.4.2, Tab.
83) erbrachte
beim Endothel eine
Signifikanz zur Gruppe
der benignen
Mammamischtumoren (p= 0,0000) und zur Gruppe der einfachen Karzinome (p=
0,0379). Die benignen Mischtumoren wiesen in beiden Lokalisationen, die einfachen
Karzinome besonders tumorfern eine höhere MMP-11-Expression als die einfachen
Adenome auf (graphische Darstellung siehe Seite 90, Abb. 12). Die Lokalisationen
(PM-TZ-TP) waren nicht zueinander signifikant (p= 0,1291). Für die gering- bis
mittelgradig exprimierende Media konnten weder zwischen den Tumorgruppen (p=
0,8421), noch zwischen den einzelnen Lokalisationen signifikante Unterschiede
festgestellt werden (p= 0,2428). Beim nahezu negativen Stroma war im Vergleich zu
den benignen Mammamischtumoren ein signifikanter p-Wert mit 0,0196 festzustellen,
da diese vor allem tumorfern mehr MMP-11 in dieser Struktur exprimierten (Median
1,48; graphische Darstellung siehe Seite 90, Abb. 13). Die einzelnen Lokalisationen
waren statistisch nicht auffällig (p= 0,1343).
4.2.2.6 MMP-11 in benignen Mammamischtumoren
In der physiologischen Mamma (Anhang 10.4.2, Tab. 76) war das alveoläre Epithel
(Median 7,96) signifikant unterschiedlich zu dem der Kontrollgruppe (Median 4,00; p=
0,0459; graphische Darstellung siehe Seite 87, Abb. 6). Die übrigen Epithelien und
auch die Entzündungszellen waren statistisch nicht auffallend (dE: p= 0,0938; mE:
Ergebnisse 77
p= 0,0988; EZ: p= 0,5674). Die Werte für Median, Minimum und Maximum können
der Tabelle 49 entnommen werden.
Beim Vergleich der einzelnen Tumorgruppen (Anhang 10.4.2, Tab. 75) und der
Lokalisationen (PM-TZ-TP) ergaben sich für das alveoläre Epithel signifikante
Unterschiede zu den komplexen Adenomen (p= 0,0205) und zu den einfachen
Karzinomen (p= 0,0250), sowie hochsignifikante Unterschiede zur Gruppe der
einfachen Adenome (p= 0,0026). Dabei exprimierten die benignen Mischtumoren in
jeder Lokalisation deutlich mehr MMP-11 als die übrigen Untersuchungsgruppen
(graphische Darstellung siehe Seite 87, Abb. 6). Zum Teil hochsignifikante Werte
wurden in den Vergleichen PM-TZ (p=0,0000), PM-TP (p=0,0271) und TZ-TP (p=
0,0055) festgestellt. Bei allen Tumorgruppen war die höchste MMP-11-Expression im
physiologischen Mammagewebe zu finden. Außer der Gruppe der komplexen
Adenome, die mehr MMP-11 im Tumorzentrum, als in der Peripherie aufwies, zeigten
alle übrigen Tumorgruppen mehr Stromelysin-3 in den Tumorrandgebieten als im
Zentrum (graphische Darstellung siehe Seite 87, Abb. 6). Ebenso war das duktale
Epithel in seiner deutlichen Expression (Median 7,95) hochsignifikant verschieden zu
den drei mittelgradig exprimierenden Gruppen „komplexe Adenome“ (p= 0,0041),
„einfache Adenome“ (p= 0,0028) und „einfache Karzinome“ mit p= 0,0093
(graphische Darstellung siehe Seite 87, Abb. 7). Alle drei Lokalisationsvergleiche
waren für das duktale Epithel signifikant unterschiedlich über alle Gruppen hinweg
(PM-TZ: p= 0,0000; PM-TP: p= 0,0402; TZ-TP: p= 0,0148). Wieder war das
deutlichste Signal in der physiologischen Mamma zu finden, gefolgt von der
Tumorperipherie und dem –zentrum (graphische Darstellung siehe Seite 87, Abb. 7).
Das Myoepithel der benignen Mammamischtumoren exprimierte vor allem in der
physiologischen Mamma hochgradig (Median 8,24) und war laut Tukey Test
signifikant unterschiedlich zu den einfachen Adenomen (p= 0,0089), den komplexen
Karzinomen (p= 0,0031), sowie den einfachen Karzinomen (p= 0,0405), die alle in
sämtlichen
Lokalisationen
deutlich
geringere
MMP-11-Expression
zeigten
(graphische Darstellung siehe Seite 88, Abb. 8). Der Vergleich der Stromelysin-3Signale des Myoepithels in den Lokalisationen über alle Gruppen hinweg ergab
hochsignifikante Unterschiede (PM-TZ: p= 0,0000; TZ-TP: p= 0,0063). Bei allen
Tumorgruppen
war
die
höchste
MMP-11-Expression
im
physiologischen
Mammagewebe zu finden. Außer der Gruppe der komplexen Adenome, die mehr
MMP-11 im Tumorzentrum, als in der Peripherie aufwies, zeigten alle übrigen
Ergebnisse 78
Tumorgruppen mehr Stromelysin-3 in den Tumorrandgebieten als im Zentrum
(graphische Darstellung siehe Seite 88, Abb. 8). Lediglich zwischen Tumorzentrum
und –peripherie waren keine signifikanten Expressionsunterschiede zwischen den
Gruppen
auszumachen
(p= 0,0644).
Die
Entzündungszellen
der benignen
Mammamischtumoren waren in ihrem mittelgradigen immunhistologischen Signal für
MMP-11 hochsignifikant verschieden zu dem geringgradigen Expressionsprofil der
komplexen Adenome (p= 0,0005), der einfachen Adenome (p= 0,0000), der
komplexen Karzinome (p= 0,0001) und auch der einfachen Karzinome (p= 0,0001).
Die graphische Darstellung findet sich auf der Seite 88, Abb. 9 und Seite 89, Abb. 10.
Auch alle Lokalisationsvergleiche führten zu signifikanten, bzw. hochsignifikanten
Ergebnissen (PM-TZ: p= 0,0000; PM-TP: p= 0,0412; TZ-TP: p= 0,0149). Bei allen
Tumorgruppen
war
die
höchste
MMP-11-Expression
im
physiologischen
Mammagewebe zu finden. Außer der Gruppe der komplexen Adenome, die mehr
MMP-11 im Tumorzentrum, als in der Peripherie aufwies, zeigten alle übrigen
Tumorgruppen mehr Stromelysin-3 in den Tumorrandgebieten als im Zentrum
(graphische Darstellung siehe Seite 88, Abb. 9 und Seite 89, Abb. 10).
Beim Vergleich des Tumorzentrums über alle Gruppen (Anhang 10.4.2, Tab. 77;
Fotodokumentation 8.2, Abb. 38) hinweg waren die mittelgradig exprimierenden
Epithelien nicht signifikant voneinander verschieden (aE: p= 0,0935; dE: p= 0,1904;
mE: p= 0,1754). Die Entzündungszellen (Median 3,12) der benignen Mischtumoren
waren in ihrer Expression im Tumorzentrum laut Tukey Test signifikant verschieden
im Vergleich zu den einfachen Adenomen (Median 0,70) und hochsignifikant
verschieden zu den Entzündungszellen der komplexen Karzinome (Median 0,04)
und der einfachen Karzinome (Median 0,06; p= 0,0069; graphische Darstellung
siehe Seite 88, Abb. 9 und Seite 89, Abb. 10).
In der Tumorperipherie (Anhang 10.4.2, Tab. 78; Fotodokumentation 8.2, Abb. 40)
konnten für das alveoläre Epithel (Median 6,52) keine Unterschiede zwischen den
Gruppen nachgewiesen werden (p= 0,2342). Beim duktalen Epithel (Median 6,60)
ergab sich ein leicht signifikanter Wert (p= 0,0469), der im Vergleich mit den
einfachen Adenomen (Median 3,08; graphische Darstellung siehe Seite 87, Abb.7)
auftrat. Das Myoepithel war statistisch nicht auffällig (p= 0, 0936). Bei den
Entzündungszellen, die mittelgradig exprimierten (Median 4,68) konnte ein
hochsignifikanter Unterschied in der Expression zu den geringgradig positiven
Ergebnisse 79
einfachen Adenomen (Median 1,12) festgestellt werden (p= 0,0018; graphische
Darstellung siehe Seite 88, Abb. 9 und Seite 89, Abb. 10).
Der Tumorgesamtwert (Anhang 10.4.2, Tab. 79) war für alle Epithelien der
benignen Mischtumoren statistisch nicht auffällig (aE: p= 0,5158; dE: p= 0,1710; mE:
p= 0,2637). Bei den Entzündungszellen, die in Zentrum und Peripherie des Tumors
mittelgradig exprimierten ergab sich bei gruppenübergreifenden Vergleich ein
signifikanter Wert mit p= 0,0069 zur Gruppe der einfachen Adenome und zur Gruppe
der komplexen Karzinome, sowie ein hochsignifikanter Expressionsunterschied zur
Gruppe der einfachen Karzinome. Diese drei Tumorgruppen zeigten nur eine geringe
MMP-11-Expression in den genannten Lokalisationen (graphische Darstellung siehe
Seite 88, Abb. 9 und Seite 89, Abb. 10).
Bei der statistischen Auswertung der Daten der Lymphknotenrinde (Anhang 10.4.2,
Tab. 80; Fotodokumentation 8.2, Abb. 39) ergab sich eine Signifikanz mit p= 0,0066
zwischen den benignen Mammamischtumoren (Median 1,92) und den metastasierten
Lymphknoten der einfachen Karzinome (Median 6,12). Die Rinde der benignen
Mischtumoren war die einzige Struktur, bei der diese Gruppe in ihrer MMP-11Expression von einer Vergleichsgruppe deutlich übertroffen wurde (graphische
Darstellung siehe Seite 89, Abb. 11). Das Lymphknotenmark (Median 1,92) war in
der Expression nicht signifikant unterschiedlich zu anderen Gruppen (p= 0,3577).
Bei der Auswertung der tumornahen Gefäße über alle Gruppen hinweg (Anhang
10.4.2, Tab. 81) war für das Endothel (Median 4,96) ein hochsignifikanter
Unterschied zu dem der einfachen (Median 0,96) und komplexen Adenome (Median
0,56), sowie der komplexen Karzinome (Median 0,84) erkennbar (p= 0,0009;
graphische Darstellung siehe Seite 90, Abb. 12). Weder die Gefäßmedia (Median
6,00; p= 0,4763), noch das Stroma (Median 1,18; p= 0,1264) waren statistisch im
Gruppenvergleich auffällig.
Bei den tumorfernen Strukturen zeigte sich beim Gruppenvergleich (Anhang
10.4.2, Tab. 82) die MMP-11–Expression des Gefäßendothels (Median 4,62) mit p=
0,0108 statistisch hochsignifikant verschieden zu der der Kontrollgruppe (Median
0,40) und signifikant zu der der komplexen Adenome (Median 1,68). Die graphische
Darstellung ist auf der Seite 90, Abb. 12 zu finden. Die Media (Median 6,00) und das
Stroma (Median 1,48) waren im Gruppenvergleich nicht auffällig (TF GM: p= 0,2782;
TF S: p= 0,1503).
Ergebnisse 80
Der Vergleich von tumornahen und tumorfernen Gefäßen (Anhang 10.4.2, Tab.
83) erbrachte bezüglich der MMP-11-Expression des Endothels der mittelgradig und
im Gruppenvergleich in beiden Lokalisationen etwa doppelt so stark exprimierenden
Mischtumoren eine Signifikanz zur Gruppe der komplexen Adenome (p= 0,0000), zur
Gruppe der einfachen Adenome (p= 0,0000), zur Gruppe der komplexen Karzinome
(p= 0,0002), sowie zu der der einfachen Karzinome (p= 0,0122; graphische
Darstellung der Ergebnisse siehe Seite 90, Abb. 12). Die Lokalisationen (PM-TZ-TP)
waren nicht zueinander signifikant (p= 0,1291), jedoch zeigten die benignen
Mischtumoren in beiden Lokalisationen eine etwa gleich starke Expression, während
die übrigen Tumorgruppen tumorfern ein deutlich stärkeres MMP-11-Signal zu
verzeichnen hatten (graphische Darstellung siehe Seite 90, Abb. 12). Für die Media
konnten weder zwischen den Tumorgruppen (p= 0,8421), noch zwischen den
einzelnen Lokalisationen signifikante Unterschiede festgestellt werden (p= 0,2428).
Beim Stroma, das besonders tumorfern mehr MMP-11 aufwies, war im Vergleich zu
den komplexen Adenomen, das tumorfern nahezu kein MMP-11-Signal zeigte, ein
signifikanter p-Wert mit 0,0303 festzustellen (graphische Darstellung der Ergebnisse
siehe Seite 90, Abb.13). Im Vergleich zu den einfachen Adenomen betrug der p-Wert
0,0196. Auch die komplexen Karzinome (p= 0,0131) und die einfachen Karzinome
(p= 0,0002) unterschieden sich in der Ausprägung ihrer MMP-11-Expression zum
Teil hochsignifikant von den benignen Mischtumoren. Alle diese Tumorgruppen
exprimierten tumornah und -fern nur sehr geringgradig (graphische Darstellung der
Ergebnisse siehe Seite 90, Abb. 13). Die einzelnen Lokalisationen waren statistisch
nicht auffällig (p= 0,1343).
4.2.2.7 MMP-11 in komplexen Karzinomen
In
der
physiologischen
Mamma
(Anhang
10.4.2,
Tab.
76)
war
im
Tumorgruppenvergleich das alveoläre Epithel in der Expression von MMP-11
signifikant unterschiedlich (p= 0,0459). Dies traf jedoch nicht für die komplexen
Karzinome zu. Die übrigen Epithelien und auch die Entzündungszellen waren
statistisch nicht auffallend (dE: p= 0,0938; mE: p= 0,0988; EZ: p= 0,5674). Die Werte
für Median, Minimum und Maximum können der Tabelle 50 entnommen werden.
Beim Vergleich der einzelnen Tumorgruppen (Anhang 10.4.2, Tab. 75) und der
Lokalisationen (PM-TZ-TP) ergaben sich für das alveoläre Epithel der komplexen
Karzinome keine signifikanten Unterschiede zu den übrigen Tumorgruppen (p=
Ergebnisse 81
0,0395), jedoch zum Teil hochsignifikante Werte in den Vergleichen der
Lokalisationen PM-TZ (p=0,0000), PM-TP (p=0,0271) und TZ-TP (p= 0,0055). Die
höchsten MMP-11-Werte in allen Tumorgruppen erreichte die physiologische
Mamma. Außer der Gruppe der komplexen Adenome, die mehr MMP-11 im
Tumorzentrum, als in der Peripherie aufwies, zeigten alle übrigen Tumorgruppen
mehr Stromelysin-3 in den Tumorrandgebieten als im Zentrum (graphische
Darstellung siehe Seite 88, Abb. 8). Das duktale Epithel war auf die Gruppe der
komplexen Karzinome bezogen auf seine mittelgradige Expression nicht signifikant
verschieden zu den anderen Gruppen mit p= 0,0151. Der signifikante p-Wert hier
ergibt sich aus der Art der statistischen Auswertung über alle Gruppen hinweg,
konnte aber im Tukey Test für die oben genannte Gruppe als nicht zutreffend
identifiziert werden. Alle drei Lokalisationsvergleiche waren für das duktale Epithel
signifikant unterschiedlich über alle Gruppen hinweg (PM-TZ: p= 0,0000; PM-TP: p=
0,0402; TZ-TP: p= 0,0148). Beim duktalen Epithel zeigte sich für die Lokalisationen
ein sehr ähnliches Expressionsbild zu dem des alveolären Epithels (graphische
Darstellung siehe Seite 87, Abb. 7). Das geringgradig exprimierende Myoepithel war
für die Gruppe der komplexen Karzinome laut Tukey Test hochsignifikant
unterschiedlich im Vergleich zu den vor allem in der physiologischen Mamma sehr
deutlich exprimierenden benignen Mammamischtumoren (p= 0,0031; graphische
Darstellung siehe Seite 88, Abb. 8) und im Vergleich der Lokalisationen über alle
Gruppen hinweg hochsignifikant unterschiedlich (PM-TZ: p= 0,0000; TZ-TP: p=
0,0063).
Lediglich
zwischen
Tumorzentrum
und
–peripherie
waren
keine
Expressionsunterschiede auszumachen (p= 0,0644). Die höchsten MMP-11-Werte in
allen Tumorgruppen erreichte erneut die physiologische Mamma. Außer der Gruppe
der komplexen Adenome, die mehr MMP-11 im Tumorzentrum, als in der Peripherie
aufwies, zeigten alle übrigen Tumorgruppen im Myoepithel mehr Stromelysin-3 in
den Tumorrandgebieten als im Zentrum (graphische Darstellung siehe Seite 88, Abb.
8). Auch die geringgradig exprimierenden, im Tumorzentrum sogar negativen
Entzündungszellen der komplexen Karzinome waren in ihrem immunhistologischen
Signal für MMP-11 hochsignifikant verschieden zu dem in allen Lokalisationen
mittelgradigen Signal der benignen Mammamischtumore (p= 0,0001; graphische
Darstellung
siehe
Seite
88,
Abb.
9
und
Seite
89,
Abb.
10).
Alle
Lokalisationsvergleiche führten zu signifikanten, bzw. hochsignifikanten Ergebnissen
(PM-TZ: p= 0,0000; PM-TP: p= 0,0412; TZ-TP: p= 0,0149). Hier konnte bei allen
Ergebnisse 82
Tumorgruppen (außer bei den benignen Mischtumoren) das stärkste MMP-11-Signal
in der Tumorperipherie verzeichnet werden, gefolgt von der physiologischen Mamma
und dem Tumorzentrum. Die graphische Darstellung ist der Seite 88, Abb. 9 und
Seite 89, Abb. 10 zu entnehmen.
Beim Vergleich des Tumorzentrums über alle Gruppen (Anhang 10.4.2, Tab. 77)
hinweg waren die gering- bis mittelgradig exprimierenden Epithelien nicht signifikant
voneinander verschieden (aE: p= 0,0935; dE: p= 0,1904; mE: p= 0,1754). Die
Entzündungszellen der komplexen Karzinome (Median 0,04) waren in ihrer
Expression im Tumorzentrum signifikant verschieden im Vergleich zu den benignen
Mammamischtumoren (Median 3,12; p= 0,0069; die graphische Darstellung ist der
Seite 88, Abb. 9 und Seite 89, Abb. 10 zu entnehmen; Fotodokumentation 8.2, Abb.
41).
In der Tumorperipherie (Anhang 10.4.2, Tab. 78; Fotodokumentation 8.2, Abb. 42)
konnten für das mittelgradig MMP-11-positive alveoläre Epithel keine Unterschiede
zwischen den Gruppen nachgewiesen werden (p= 0,2342). Beim duktalen Epithel
ergab sich über alle Gruppen ein leicht signifikanter Wert (p= 0,0469), der für die
komplexen Karzinome jedoch laut Tukey Test nicht zutraf. Das Myoepithel war
statistisch nicht auffällig (p= 0,0936). Bei den Entzündungszellen (Median 1,20)
konnte ein hochsignifikanter Unterschied in der MMP-11-Expression zu den benignen
Mammamischtumoren festgestellt werden (Median 4,68; p= 0,0018; graphische
Darstellung siehe Seite 88, Abb. 9 und Seite 89, Abb. 10).
Der Tumorgesamtwert (Anhang 10.4.2, Tab. 79) war für alle Epithelien der
komplexen Karzinome statistisch nicht auffällig (aE: p= 0,5158; dE: p= 0,1710; mE:
p= 0,2637). Bei den Entzündungszellen ergab sich bei gruppenübergreifenden
Vergleich ein signifikanter Wert mit p= 0,0069 zur Gruppe der benignen
Mammamischtumoren, die drei- bis viermal soviel MMP-11 aufwiesen (graphische
Darstellung siehe Seite 88, Abb. 9 und Seite 89, Abb. 10).
Bei
der
statistischen
Auswertung
der
Daten
der
gering
exprimierenden
Lymphknotenrinde (Anhang 10.4.2, Tab. 80) ergab sich eine hohe Signifikanz mit
p= 0,0066 zu den metastasierten Lymphknoten der einfachen Karzinome (Median
6,12; graphische Darstellung siehe Seite 89, Abb. 11). Das Lymphknotenmark
(Median 1,96) war nicht signifikant unterschiedlich zu anderen Gruppen (p= 0,3577).
Ergebnisse 83
Bei der Auswertung der tumornahen Gefäße über alle Gruppen hinweg (Anhang
10.4.2, Tab. 81) war für das Endothel der komplexen Karzinome (Median 0,84) ein
hochsignifikanter Unterschied zu dem der benignen Mammamischtumoren (Median
4,96) erkennbar (p= 0,0009; graphische Darstellung siehe Seite 90, Abb. 12). Weder
die Gefäßmedia, die mittelgradig exprimierte (p= 0,4763), noch das nahezu negative
Stroma (p= 0,1264) waren im Gruppenvergleich statistisch auffällig.
Bei den tumorfernen Strukturen zeigte sich beim Gruppenvergleich (Anhang
10.4.2, Tab. 82) das Gefäßendothel statistisch signifikant zu anderen Gruppen (p=
0,0108), jedoch nicht für die Gruppe der komplexen Karzinome (Median 2,60). Die
Media (Median 4,80) und das Stroma (Median 0,16) waren nicht auffällig (TF GM: p=
0,2782; TF S: p= 0,1503).
Der Vergleich von tumornahen und tumorfernen Gefäßen (Anhang 10.4.2, Tab.
83) erbrachte beim Endothel eine hohe Signifikanz zur Gruppe der benignen
Mammamischtumoren (p= 0,0002). Dabei exprimierten die komplexen Karzinome in
beiden Lokalisationen geringgradig und nur etwa halb so stark, wie die benignen
Mischtumoren (graphische Darstellung siehe Seite 90, Abb. 12). Für die Media
konnte weder zwischen den Tumorgruppen (p= 0,8421), noch zwischen den
einzelnen Lokalisationen signifikante Unterschiede festgestellt werden (p= 0,2428).
Beim nahezu MMP-11-negativen Stroma war im Vergleich zu den benignen
Mammamischtumoren, die geringradig Stromelysin-3 exprimierten ein signifikanter pWert mit 0,0131 festzustellen (graphische Darstellung siehe Seite 90, Abb. 13). Die
einzelnen Lokalisationen waren für das Stroma statistisch nicht auffällig (p= 0,1343).
4.2.2.8 MMP-11 in einfachen Karzinomen
Das alveoläre Epithel der unveränderten Mamma (Anhang 10.4.2, Tab. 76) war im
Vergleich über alle Gruppen hinweg mit einem p-Wert von 0,0459 signifikant
unterschiedlich. Dies traf jedoch nicht für die einfachen Karzinome (Median 6,40) zu.
Sowohl duktale, als auch myoepitheliale Strukturen und die Entzündungszellen
waren statistisch nicht auffällig (dE: p= 0,0938; mE: p= 0,0988; EZ: p= 0,5674). Die
Werte für Median, Minimum und Maximum können der Tabelle 51 entnommen
werden.
Der Vergleich der Lokalisationen physiologische Mamma (PM)-Tumorzentrum
(TZ)-Tumorperipherie (TP) über alle Gruppen (Anhang 10.4.2, Tab. 75) hinweg
erbrachte beim alveolären Epithel signifikante Unterschiede zu den benignen
Ergebnisse 84
Mammamischtumoren, die in allen Lokalisationen mehr Expression zeigten (p=
0,0250; graphische Darstellung siehe Seite 87, Abb. 6) und zum Teil hochsignifikante
Werte in den Vergleichen PM-TZ (p=0,0000), PM-TP (p=0,0271) und TZ-TP (p=
0,0055). Die höchsten MMP-11-Werte im alveolären Epithel in allen Tumorgruppen
erreichte die physiologische Mamma. Außer der Gruppe der komplexen Adenome,
die mehr MMP-11 im Tumorzentrum, als in der Peripherie aufwies, zeigten alle
übrigen Tumorgruppen mehr Stromelysin-3 in den Tumorrandgebieten als im
Zentrum (graphische Darstellung siehe Seite 87, Abb. 6). Das duktale Epithel war in
seiner mittelgradigen Expression hochsignifikant verschieden zu der Hochgradigen
der benignen Mammamischtumoren mit p= 0,0093; die graphische Darstellung ist der
Seite 87, Abb. 7 zu entnehmen. Alle drei Lokalisationsvergleiche waren über alle
Gruppen hinweg für das duktale Epithel signifikant unterschiedlich (PM-TZ: p=
0,0000; PM-TP: p= 0,0402; TZ-TP: p= 0,0148). Dabei exprimierte die physiologische
Mamma das meiste MMP-11, gefolgt von der Tumorperipherie und dem
Tumorzentrum. Die gering- bis mittelgradige Expression des Myoepithels der
einfachen Karzinome war laut Tukey Test signifikant unterschiedlich zur Gruppe der
benignen Mischtumoren (p= 0,0405; graphische Darstellung siehe Seite 88, Abb.8),
die vor allem im physiologischen Mammagewebe und der Tumorperipherie mittel- bis
hochgradig exprimierten. Im Vergleich der Lokalisationen über alle Gruppen hinweg
zeigten sich diese hochsignifikant unterschiedlich (PM-TZ: p= 0,0000; TZ-TP: p=
0,0063). Lediglich zwischen Tumorzentrum und –peripherie waren über alle
Tumorgruppen hinweg keine Expressionsunterschiede auszumachen (p= 0,0644).
Die höchsten MMP-11-Werte im Myoepithel in allen Tumorgruppen erreichte die
physiologische Mamma. Außer der Gruppe der komplexen Adenome, die mehr
MMP-11 im Tumorzentrum, als in der Peripherie aufwies, zeigten alle übrigen
Tumorgruppen mehr Stromelysin-3 in den Tumorrandgebieten als im Zentrum
(graphische Darstellung siehe Seite 88, Abb. 8). Die Entzündungszellen der
einfachen Karzinome waren in ihrem immunhistologischen Signal für MMP-11 nicht
signifikant verschieden zu dem der anderen Gruppen. Der signifikante p-Wert ergibt
sich aus der Art der statistischen Auswertung, trifft auf diese Gruppe jedoch nicht zu.
Alle
Lokalisationsvergleiche
führten
zu
signifikanten, bzw.
hochsignifikanten
Ergebnissen (PM-TZ: p= 0,0000; PM-TP: p= 0,0412; TZ-TP: p= 0,0149). Auch bei
den Entzündungszellen war die stärkste Expression in der umgebenden Mamma zu
finden, jedoch zeigte nun die Peripherie der Tumoren ein stärkeres MMP-11-Signal,
Ergebnisse 85
als das Tumorzentrum (graphische Darstellung siehe Seite 88, Abb. 9 und Seite 89,
Abb. 10).
Beim Vergleich des Tumorzentrums über alle Gruppen (Anhang 10.4.2, Tab. 77;
Fotodokumentation 8.2, Abb. 43) hinweg war die gering- bis mittelgradige MMP-11Expression der Epithelien nicht signifikant voneinander verschieden (aE: p= 0,0935;
dE: p= 0,1904; mE: p= 0,1754). Die Entzündungszellen der einfachen Karzinome
(Median 0,06) waren in ihrer geringen Expression im Tumorzentrum hochsignifikant
verschieden im Vergleich zu den benignen Mischtumoren (Median 3,12; p= 0,0069,
graphische Darstellung siehe Seite 88, Abb. 9 und Seite 89, Abb. 10).
In der Tumorperipherie (Anhang 10.4.2, Tab. 78) konnten für das alveoläre Epithel
(Median 4,28) keine Unterschiede zwischen den Gruppen nachgewiesen werden (p=
0,2342). Beim duktalen Epithel (Median 4,80) ergab sich über alle Gruppen ein leicht
signifikanter Wert (p= 0,0469), der für die einfachen Karzinome jedoch im Tukey Test
nicht zutraf. Das Myoepithel (Median 3,96) war statistisch nicht auffällig (p= 0,0936).
Bei den Entzündungszellen (Median 1,00) konnte ein signifikanter Unterschied in der
Expression zu den benignen Mammamischtumoren (Median 4,68) festgestellt
werden (p= 0,0018; graphische Darstellung siehe Seite 88, Abb. 9 und Seite 89, Abb.
10).
Der Tumorgesamtwert (Anhang 10.4.2, Tab. 79) war für alle Epithelien der
einfachen Karzinome statistisch nicht auffällig (aE: p= 0,5158; dE: p= 0,1710; mE: p=
0,2637). Bei den Entzündungszellen der einfachen Karzinome ergab sich bei
gruppenübergreifenden Vergleich ein hochsignifikanter Wert mit p= 0,0069 zur
Gruppe der benignen Mammamischtumoren, die in allen Tumorbereichen mehr
MMP-11 exprimierten (graphische Darstellung siehe Seite 88, Abb. 9 und Seite 89,
Abb. 10).
Bei der statistischen Auswertung der Daten der Rinde der Lymphknotenmetastasen
(Anhang 10.4.2, Tab. 80; Fotodokumentation 8.2, Abb. 44 und 45; Median 6,12)
ergab
sich
ein
signifikanter
Wert
im
Vergleich
zu
den
benignen
Mammamischtumoren (Median 1,92) und eine hohe Signifikanz mit p= 0,0066 zu den
komplexen Karzinomen (Median 1,72; graphische Darstellung auf der Seite 89, Abb.
11). Die nicht veränderten Lymphknoten exprimierten nur geringe Mengen an MMP11 und zeigten keine Expressionsunterschiede zu denen der anderen Gruppen. Die
Ergebnisse 86
gering- bis mittelgradige Expression des Lymphknotenmarks war weder metastasiert,
noch unverändert signifikant unterschiedlich zu anderen Gruppen (p= 0,3577).
Bei der Auswertung der tumornahen Gefäße über alle Gruppen hinweg (Anhang
10.4.2, Tab. 81; Fotodokumentation 8.2, Abb. 46) war für das Endothel der einfachen
Karzinome (Median 1,44) kein signifikanter Expressionsunterschied zu andern
Gruppen erkennbar (p= 0,0009). Der signifikante Wert bezieht sich laut Tukey Test
auf andere Gruppen. Weder die Gefäßmedia (Median 4,32; p= 0,4763), noch das
Stroma (Median 0,00; p= 0,1264) waren statistisch auffällig.
Bei den tumorfernen Strukturen zeigte sich beim Gruppenvergleich (Anhang
10.4.2, Tab. 82) das Gefäßendothel (Median 3,76) statistisch signifikant zu anderen
Gruppen (p= 0,0108), jedoch nicht für die Gruppe der einfachen Karzinome. Die
Media (Median 3,97) und das Stroma (Median 0,32) waren nicht auffällig (TF GM: p=
0,2782; TF S: p= 0,1503).
Der Vergleich von tumornahen und tumorfernen Gefäßen über alle Gruppen
(Anhang 10.4.2, Tab. 83) erbrachte beim Endothel eine hohe Signifikanz zur Gruppe
der komplexen Adenome (p= 0,0063), sowie eine Signifikanz zu den einfachen
Adenomen (p= 0,0379) und den benignen Mammamischtumoren (p= 0,0122). Es war
bei diesen Gruppen tumorfern mehr MMP-11-Expression als tumornah vorhanden.
Die einfachen Karzinome zeigten nach den benignen Mischtumoren die zweitstärkste
MMP-11-Expression in dieser Struktur (graphische Darstellung auf der Seite 90, Abb.
12). Die Lokalisationen (PM-TZ-TP) waren nicht zueinander signifikant (p= 0,1291).
Für die Media konnte weder zwischen den Tumorgruppen (p= 0,8421), noch
zwischen den einzelnen Lokalisationen signifikante Unterschiede festgestellt werden
(p= 0,2428). Beim nahezu negativen Stroma war im Vergleich zu den benignen
Mammamischtumoren, die hier geringgradig exprimierten, ein hochsignifikanter pWert mit 0,0002 (graphische Darstellung auf der Seite 90, Abb. 13) festzustellen. Die
einzelnen Lokalisationen waren für das Stroma statistisch nicht auffällig (p= 0,1343).
Die erhobenen Daten für tumornahe und tumorferne Emboli (Anhang 10.2; Tab.
22) konnten aufgrund der zu geringen Datenmenge nicht statistisch ausgewertet
werden.
Ergebnisse 87
Abbildung 6: MMP-11-Expression im alveolären Epithel in der physiologischen Mamma (PM), im Tumorzentrum (TZ) und in der
Tumorperipherie (TP); aE: alveoläres Epithel, TGr: Tumorgruppe, KG: Kontrollgruppe, HYP: Hyperplasiegruppe, kAd: komplexe
Adenome, eAd: einfache Adenome, kCa: komplexe Karzinome, eCa: einfache Karzinome
Abbildung 7: MMP-11-Expression im duktalen Epithel der physiologischen Mamma (PM), im Tumorzentrum (TZ) und in der
Tumorperipherie (TP); dE: duktales Epithel, TGr: Tumorgruppe, KG: Kontrollgruppe, HYP: Hyperplasiegruppe, kAd: komplexe
Adenome, eAd: einfache Adenome, kCa: komplexe Karzinome, eCa: einfache Karzinome
Ergebnisse 88
Abbildung 8: MMP-11-Expression im Myoepithel in der physiologischen Mamma (PM), im Tumorzentrum (TZ) und in der
Tumorperipherie (TP); mE: Myoepithel, TGr: Tumorgruppe, KG: Kontrollgruppe, HYP: Hyperplasiegruppe, kAd: komplexe Adenome,
eAd: einfache Adenome, kCa: komplexe Karzinome, eCa: einfache Karzinome
Abbildung 9: MMP-11-Expression in Entzündungszellen in der physiologischen Mamma (PM), im Tumorzentrum (TZ) und in der
Tumorperipherie (TP); EZ: Entzündungszellen, TGr: Tumorgruppe; KG: Kontrollgruppe, HYP: Hyperplasiegruppe, kAd: komplexe
Adenome, eAd: einfache Adenome, kCa: komplexe Karzinome, eCa: einfache Karzinome Teil 1
Ergebnisse 89
Abbildung 10: MMP-11-Expression in Entzündungszellen in der physiologischen Mamma (PM), im Tumorzentrum (TZ) und in der
Tumorperipherie (TP); EZ: Entzündungszellen, TGr: Tumorgruppen; KG: Kontrollgruppe, HYP: Hyperplasiegruppe, kAd: komplexe
Adenome, eAd: einfache Adenome, kCa: komplexe Karzinome, eCa: einfache Karzinome Teil 2
Abbildung 11: MMP-11-Expression in Rinde (R) und Mark (M) der assoziierten Lymphknoten, unverändert (Lu) und metastasiert
(Lm); TGr: Tumorgruppe; KG: Kontrollgruppe, HYP: Hyperplasiegruppe, kAd: komplexe Adenome, eAd: einfache Adenome, kCa:
komplexe Karzinome, eCa: einfache Karzinome
Ergebnisse 90
Abbildung 12: MMP-11-Expression im Gefäßendothel (GE), tumornah (TN) und tumorfern (TF); KG: Kontrollgruppe, HYP:
Hyperplasiegruppe, kAd: komplexe Adenome, eAd: einfache Adenome, kCa: komplexe Karzinome, eCa: einfache Karzinome
Abbildung 13: MMP-11-Expression im Stroma (S), tumornah (TN) und tumorfern (TF); KG: Kontrollgruppe, HYP: Hyperplasiegruppe,
kAd: komplexe Adenome, eAd: einfache Adenome, kCa: komplexe Karzinome, eCa: einfache Karzinome
Ergebnisse 91
4.2.3 MMP-12
4.2.3.1 MMP-12 in den Kontrollen
In der Positivkontrolle DH82 zeigte sich eine zeigte sich eine einheitliche, mittel- bis
dunkelbraune zytoplasmatische homogene Färbung in etwa 70- 80% der Zellen. Die
Zellkerne
waren
frei
von
immunhistologischem
Signal
für
MMP-12.
Alle
Negativkontrollen waren frei von spezifischem Signal. Eine tabellarische Übersicht
über die p-Werte kann dem Anhang 10.4.3, Tab. 84 bis 92 entnommen werden.
4.2.3.2 MMP-12 in unverändertem Milchdrüsengewebe
Die Makrophagenelastasen-Expression war in den Epithelien des Kontrollgewebes
(Anhang 10.4.3,Tab. 85; Fotodokumentation 8.3, Abb. 47) geringgradig und nicht
signifikant unterschiedlich im Vergleich zu den anderen Gruppen (aE: p= 0,3201; dE:
p= 0,6670; mE: p= 0,5359). Bei den Entzündungszellen ergab sich über alle Gruppen
ein leicht signifikanter p-Wert von 0,0314, der jedoch im Tukey Test nicht einzelnen
Gruppen zugeordnet werden konnte. Die Werte für Median, Minimum und Maximum
können im Anhang der Tabelle 52 entnommen werden.
Die unveränderte Lymphknotenrinde der Kontrollgruppe (Anhang 10.4.3, Tab. 89)
war mit ihrem geringen immunhistologischen Signal für MMP-12 zu keiner anderen
Gruppe signifikant unterschiedlich (p= 0,0162). Der signifikante Wert ergibt sich aus
der Art der statistischen Auswertung, hat jedoch für die Kontrollgruppe laut Tukey
Test keine Gültigkeit. Dasselbe gilt für das Lymphknotenmark der Kontrollgruppe,
das ebenfalls keine signifikanten Unterschiede zu dem der anderen Gruppen aufwies
(p= 0,0256).
Das als tumorfern definierte Gefäßendothel der gesunden Gruppe (Anhang 10.4.3,
Tab. 91; Fotodokumentation 8.3, Abb. 48) war nahezu MMP-12-negativ und zeigte
keine statistischen Auffälligkeiten (p= 0,4209). Die Expression der vaskulären Media
(Median 3,60) hingegen war im Gruppenvergleich signifikant zu den komplexen
Adenomen (Median 1,44) und einfachen Adenomen (Median 2,02), sowie den
benignen Mammamischtumoren (Median 1,68; p= 0,0190; graphische Darstellung
siehe
Seite
110,
Abb.19).
Das
MMP-12-negative
Stroma
war
gruppenübergreifenden Vergleich nicht signifikant unterschiedlich (p= 0,4834).
im
Ergebnisse 92
4.2.3.3 MMP-12 in hyperplastischem Milchdrüsengewebe
Die geringgradige Expression der Epithelien der Hyperplasiegruppe
war im
Vergleich zu den anderen Gruppen (Anhang 10.4.3, Tab. 85; Fotodokumentation 8.3,
Abb.49) nicht signifikant unterschiedlich (aE: p= 0,3201; dE: p= 0,6670; mE: p=
0,5359). Bei den Entzündungszellen ergab sich über alle Gruppen ein leicht
signifikanter p-Wert von 0,0314, der jedoch im Tukey Test nicht einzelnen Gruppen
zugeordnet werden konnte.
Die
unveränderte,
gering
MMP-12
exprimierende
Lymphknotenrinde
der
Hyperplasiegruppe (Anhang 10.4.3, Tab. 89) war in ihrem immunhistologischen
Signal für MMP-12 zu keiner anderen Gruppe signifikant unterschiedlich (p= 0,0162).
Der signifikante Wert ergibt sich wieder aus der Art der statistischen Auswertung, hat
jedoch für die Hyperplasiegruppe laut Tukey Test keine Gültigkeit. Dasselbe gilt für
das Lymphknotenmark, das ebenfalls keine signifikanten Unterschiede zu dem der
anderen Gruppen aufwies (p= 0,0256).
Das als tumorfern definierte Gefäßendothel der hyperplastischen Mamma (Anhang
10.4.3, Tab. 91) zeigte keine statistischen Auffälligkeiten (p= 0,4209). Ebenso
verhielt es sich bei der vaskulären Media (p= 0,0190). Auch das Stroma war nicht
signifikant unterschiedlich im gruppenübergreifenden Vergleich (p= 0,4834).
4.2.3.4 MMP-12 in komplexen Adenomen
Die Expression von MMP-12 war in den Epithelien des physiologischen
Milchdrüsengewebes der Gruppe „komplexe Adenome“ (Anhang 10.4.3, Tab. 85)
geringgradig und nicht signifikant unterschiedlich im Vergleich zu den anderen
Gruppen (aE: p= 0,3201; dE: p= 0,6670; mE: p= 0,5359). Bei den Entzündungszellen
ergab sich über alle Gruppen ein leicht signifikanter p-Wert von 0,0314, der jedoch im
Tukey Test nicht einzelnen Gruppen zugeordnet werden konnte. Die Werte für
Median, Minimum und Maximum können im Anhang der Tabelle 54 entnommen
werden.
Der
Vergleich
unterschiedlicher
Lokalisationen
(PM-TZ-TP)
über
alle
Tumorgruppen hinweg (Anhang 10.4.3, Tab. 84) ergab für das alveoläre Epithel
hochsignifikante Werte mit p= 0,0000 für den Vergleich von physiologischer Mamma,
welche bei allen Gruppen das stärkste MMP-12-Signal aufwies und dem
Tumorzentrum, das am geringsten exprimierte, sowie p= 0,0108 für den Vergleich
physiologische Mamma und Tumorperipherie und p= 0,0077 für den Vergleich von
Ergebnisse 93
Tumorzentrum und –peripherie. Die Graphik hierzu findet sich auf der Seite 108,
Abb. 14. Der reine Tumorgruppenvergleich über alle Lokalisationen hinweg kam zu
keinem signifikanten Ergebnis (p= 0,1500). Auch beim duktalen Epithel waren die
Lokalisationen der unveränderten Mamma, die deutlicher exprimierte und des
Tumorzentrums, das das schwächste MMP-12-Signal zeigte, zueinander stark
unterschiedlich (PM-TZ: p= 0,0022; PM-TP: p= 0,2341; TZ-TP: p= 0,0708;
graphische Darstellung siehe Seite 108, Abb. 15). Der Tumorgruppenvergleich
erbrachte keine Signifikanz (p= 0,3160). Dasselbe Auftreten von Signifikanzen zeigt
sich auch bei der Untersuchung des myoepithelialen Anteils der komplexen
Adenome. Auch hier waren die Tumorgruppen zueinander über alle Lokalisationen
hinweg
nicht
signifikant
unterschiedlich
(p=
0,1819).
Jedoch
konnten
im
Lokalisationsvergleich Signifikanzen in der MMP-12-Expression nachgewiesen
werden (PM-TZ: p= 0,0099; PM-TP: p= 0,7261; TZ-TP: p= 0,0232; graphische
Darstellung siehe Seite 109, Abb.16). Die MMP-12-Signalstärke der einzelnen
Lokalisationen war ähnlich den anderen Epithelien, da auch hier die physiologische
Mamma am meisten exprimierte, gefolgt von der Peripherie und dem Zentrum der
Tumoren. Im Gegensatz zum duktalen Epithel war es hier neben dem Vergleich
physiologische Mamma-Tumorzentrum aber auch der Vergleich Tumorzentrum und –
peripherie, der statistisch auffallend war (graphische Darstellung siehe Seite 109,
Abb. 16). Eine Ausnahme stellten die benignen Mischtumoren dar, deren
Tumorperipherie mehr MMP-12 aufwies, als die umgebende Mamma. Die
Entzündungszellen zeigten sich sowohl tumorgruppenübergreifend, als auch im
Lokalisationsvergleich signifikant unterschiedlich, wobei keine Wechselwirkung
zwischen diesen Ergebnissen bestand. So waren die gering exprimierenden
Entzündungszellen der komplexen Adenome hochsignifikant verschieden zu denen
der benignen Mammamischtumoren (p= 0,0000) und den einfachen Karzinomen (p=
0,0005) und signifikant verschieden zu den komplexen Karzinomen (p= 0,0165).
Diese drei Gruppen exprimierten in allen Lokalisationen mehr MMP-12, als die
komplexen Adenome, allerdings dennoch in geringem Ausmaß (graphische
Darstellung siehe Seite 109, Abb. 17). Die geringe Expression in der physiologischen
Mamma unterschied sich hochsignifikant von der noch geringeren im Tumorzentrum
(p= 0,0025; graphische Darstellung siehe Seite 109, Abb.17). Die weiteren
Lokalisationsvergleiche zeigten keine Signifikanzen (PM-TP: p= 0,0659; TZ-TP: p=
0,2283).
Ergebnisse 94
Der Vergleich der Expression im Tumorzentrum (Anhang 10.4.3, Tab. 86) über alle
Gruppen hinweg war für die Epithelien nicht auffällig (aE: p= 0,1550; dE: p= 0,0996;
mE: p= 0,3117). Die MMP-12-negativen Entzündungszellen des Zentrums der
komplexen Adenome waren in der Signalausprägung für MMP-12 jedoch signifikant
unterschiedlich zu denen der Kontrollgruppe (Median 4,04; p= 0,0424; graphische
Darstellung siehe Seite 109, Abb.17).
Ebenso verhielt es sich in der Tumorperipherie (Anhang 10.4.3, Tab. 87). Die
geringgradig exprimierenden Epithelien waren nicht auffällig (aE: p= 0,3687; dE: p=
0,5355; mE: p= 0,1186). Für die Entzündungszellen konnte über alle Gruppen eine
leichte Signifikanz nachgewiesen werden (p= 0,0484), die vermutlich zwischen den
komplexen Adenomen und den benignen Mammamischtumoren bestand. Hierauf
gab der Tukey Test Hinweise (die Adenome wiesen bei den Entzündungszellen den
geringsten Median mit 0,04 auf, die benignen Mamamischtumoren hingegen mit 1,44
den höchsten aller Gruppen, siehe Tab. 54 und 56; graphische Darstellung siehe
Seite 109, Abb. 17; Fotodokumentation 8.3, Abb. 50).
Auch der Tumorgesamtwert (Anhang 10.4.3, Tab. 88) war nur für die
Entzündungszellen aussagekräftig. Die Epithelien zeigten im Gruppenvergleich keine
signifikanten Expressionsunterschiede (aE: p= 0,1415; dE: p= 0,1652; mE: p=
0,1146). Die Entzündungszellen waren in ihrer Expression einzig zwischen den
komplexen Adenomen und der Kontrollgruppe signifikant unterschiedlich. Dabei
zeigte das gesunde Gewebe bei den Entzündungszellen ein deutlich höheres
immunhistologisches Signal (Median 4,04), als das der komplexen Adenome
(Median: 0,24; graphische Darstellung siehe Seite 109, Abb. 17).
Bei der statistischen Auswertung der Daten der geringgradig MMP-12-positiven
Lymphknotenrinde (Anhang 10.4.3, Tab. 89) ergab sich ein signifikanter Wert im
Vergleich zu den metastasierten Lymphknoten der einfachen Karzinome (Median
4,04) mit p= 0,0162 (graphische Darstellung siehe Seite 110, Abb. 18). Das
Lymphknotenmark (Median 1,80) war signifikant unterschiedlich zu dem der
benignen Mammamischtumoren (Median 3,42; p= 0,0256; graphische Darstellung
siehe Seite 110, Abb. 18).
Die tumornahen Gefäße mit ihren Bestandteilen Endothel und Media, sowie das
Stroma (Anhang 10.4.3, Tab. 90) waren in der gruppenübergreifenden statistischen
Auswertung im Falle der Media (Median 0,96) hochsignifikant verschieden zur
Ergebnisse 95
Expression der entsprechenden Struktur der Kontrollgruppe (Median 3,60; p=
0,0002; graphische Darstellung siehe Seite 110, Abb. 19). Endothel und Stroma
waren in ihrer sehr geringen oder fehlenden Expression tumornah über alle Gruppen
hinweg nicht unterschiedlich (TN GE: p= 0,9054; TN S: p= 0,5811).
Das als tumorfern definierte gering exprimierende Gefäßendothel der komplexen
Adenome (Anhang 10.4.3, Tab. 91) zeigte keine statistischen Auffälligkeiten im
Gruppenvergleich (p= 0,4209). Die vaskuläre Media (Median 1,44) hingegen war im
Gruppenvergleich signifikant verschieden zur Kontrollgruppe (Median 3,60; p=
0,0190; graphische Darstellung siehe Seite 110, Abb. 19). Das Stroma hingegen war
im gruppenübergreifenden Vergleich nicht signifikant unterschiedlich (p= 0,4834).
Der Vergleich der tumornahen und tumorfernen Strukturen (Anhang 10.4.3, Tab.
92) erbrachte für das Gefäßendothel keine signifikanten p-Werte für die
Gruppenvergleiche (p= 0,3633). Die Media, die kaum MMP-12-Signal zeigte,
unterschied sich im Vergleich zu den einfachen Karzinomen, die etwa viermal soviel
Makrophagen-Elastase aufwiesen mit p= 0,0273 (graphische Darstellung siehe Seite
110,
Abb.19).
Die
Lokalisationen
tumornah
und
–fern
waren
signifikant
unterschiedlich in ihrer MMP-12-Expression (p= 0,0185). Tumorfern konnte mehr
MMP-12 ermittelt werden, als tumornah. Die Expression war jedoch insgesamt bei
allen Untersuchungsgruppen und Lokalisationen gering (graphische Darstellung
siehe Seite 110, Abb. 19).
4.2.3.5 MMP-12 in einfachen Adenomen
Die geringe Expression von MMP-12 in den Epithelien des unveränderten
Milchdrüsengewebes (Anhang 10.4.3, Tab. 85) der einfachen Adenome war nicht
signifikant unterschiedlich im Vergleich zu den anderen Gruppen (aE: p= 0,3201; dE:
p= 0,6670; mE: p= 0,5359). Bei den Entzündungszellen ergab sich über alle Gruppen
ein leicht signifikanter p-Wert von 0,0314, der jedoch im Tukey Test nicht einzelnen
Gruppen zugeordnet werden konnte. Werte für Median, Minimum und Maximum
können im Anhang 10.3 der Tabelle 55 entnommen werden.
Der
Vergleich
unterschiedlicher
Lokalisationen
(PM-TZ-TP)
über
alle
Tumorgruppen hinweg (Anhang 10.4.3, Tab. 84) ergab für das alveoläre Epithel
hochsignifikante Werte mit p= 0,0000 für den Vergleich von physiologischer Mamma,
die am stärksten exprimierte und dem Tumorzentrum, das am geringsten exprimierte,
sowie mit p= 0,0108 für den Vergleich physiologische Mamma und Tumorperipherie
Ergebnisse 96
und p= 0,0077 für den Vergleich von Tumorzentrum und –peripherie (graphische
Darstellung siehe Seite 108, Abb. 14). Der reine Tumorgruppenvergleich über alle
Lokalisationen hinweg kam zu keinem signifikanten Ergebnis (p= 0,1500). Auch beim
duktalen Epithel waren die Lokalisationen der unveränderten Mamma und des
Tumorzentrums zueinander stark unterschiedlich (PM-TZ: p= 0,0022; PM-TP: p=
0,2341; TZ-TP: p= 0,0708). Auch hier war das stärkste MMP-12-Signal im gesunden
Gewebe, das schwächste im Tumorzentrum auffindbar (graphische Darstellung siehe
Seite 108, Abb.15). Der Tumorgruppenvergleich erbrachte keine Signifikanz (p=
0,3160). Dasselbe Auftreten von Signifikanzen zeigt sich auch bei der Untersuchung
des myoepithelialen Anteils der einfachen Adenome. Auch hier waren die
Tumorgruppen zueinander über alle Lokalisationen hinweg nicht signifikant
unterschiedlich (p= 0,1819). Jedoch konnten im Lokalisationsvergleich Signifikanzen
in der MMP-12-Expression nachgewiesen werden (PM-TZ: p= 0,0099; PM-TP: p=
0,7261; TZ-TP: p= 0,0232). Im Gegensatz zum duktalen Epithel war es hier neben
dem Vergleich physiologische Mamma-Tumorzentrum also auch der Vergleich
Tumorzentrum und –peripherie, der statistisch auffallend war. Die Expressionsstärke
der Lokalisationen verhielt sich wie bei den anderen Epithelien, jedoch war nur beim
Myoepithel der benignen Mischtumoren eine nennenswerte Expression zu
verzeichnen (graphische Darstellung siehe Seite 109, Abb.16). Die einfachen
Adenome wiesen im Myoepithel nahezu kein Signal für MMP-12 auf. Die
Entzündungszellen zeigten sich sowohl tumorgruppenübergreifend, als auch im
Lokalisationsvergleich signifikant unterschiedlich, wobei keine Wechselwirkung
zwischen diesen Ergebnissen bestand. So waren die gering exprimierenden
Entzündungszellen der einfachen Adenome hochsignifikant verschieden zu denen
der deutlicher positiven benignen Mammamischtumoren (p= 0,0056) und einfachen
Karzinome (p= 0,0117; graphische Darstellung siehe Seite 109, Abb. 17). Die
physiologische Mamma, die von allen drei Lokalisationen die deutlichste Expression
zeigte, unterschied sich hochsignifikant vom Tumorzentrum (p= 0,0025; graphische
Darstellung siehe Seite 109, Abb. 17). Die weiteren Lokalisationsvergleiche zeigten
keine Signifikanzen (PM-TP: p= 0,0659; TZ-TP: p= 0,2283).
Der Vergleich der geringgradigen Expression im Tumorzentrum über alle Gruppen
hinweg (Anhang 10.4.3, Tab. 86) war auch für die Epithelien der einfachen Adenome
nicht auffällig (aE: 0,1550; dE: p= 0,0996; mE: p= 0,3117). Die Entzündungszellen
des Zentrums der einfachen Adenome (Median 0,18) waren in der Signalausprägung
Ergebnisse 97
für MMP-12 nicht signifikant unterschiedlich zu denen der anderen Gruppen (p=
0,0424).
Der
leicht
signifikante
p-Wert
ergab
sich
wieder
aus
der
gruppenübergreifenden statistischen Auswertung, konnte jedoch im Tukey Test für
die Gruppe der einfachen Adenome ausgeschlossen werden.
Ebenso verhielt es sich in der Tumorperipherie (Anhang 10.4.3, Tab. 87). Die
gering- bis mittelgradig exprimierenden Epithelien waren im Vergleich mit den
anderen Gruppen nicht auffällig (aE: p= 0,3687; dE: p= 0,5355; mE: p= 0,1186). Für
die fast negativen
Entzündungszellen konnte über alle Gruppen eine leichte
Signifikanz nachgewiesen werden (p= 0,0484), die jedoch nicht für die einfachen
Adenome Gültigkeit besaß. Hierüber gab der Tukey Test Aufschluss.
Der Tumorgesamtwert war nicht aussagekräftig (Anhang 10.4.3, Tab. 88). Die
Epithelien zeigten im Gruppenvergleich keine Expressionsunterschiede (aE:
p=0,1415; dE: p= 0,1652; mE: p= 0,1146). Die Entzündungszellen waren in ihrer
Expression für die einfachen Adenome im Vergleich nicht signifikant verschieden zu
den entsprechenden Strukturen der anderen Untersuchungsgruppen (p= 0,0455).
Bei der statistischen Auswertung der Daten der Lymphknotenrinde (Anhang 10.4.3,
Tab. 89; Fotodokumentation 8.3, Abb.52) ergab sich ein hochsignifikanter Wert
(Median 1,20) im Vergleich zu den metastasierten Lymphknoten der einfachen
Karzinome (Median 4,04) mit p= 0,0162 (graphische Darstellung siehe Seite 110,
Abb. 18). Dabei exprimierte die Lymphknotenrinde der einfachen Adenome am
schwächsten und die Rinde der metastasierten Karzinome am stärksten von allen
untersuchten Gruppen. Das Lymphknotenmark war im Vergleich nicht signifikant
unterschiedlich zu den übrigen Gruppen (Median 2,70; p= 0,0256). Der signifikante
Wert konnte im Tukey Test anderen Gruppen zugeordnet werden.
Die tumornahen Gefäße (Anhang 10.4.3, Tab. 90; Fotodokumentation 8.3, Abb.51)
mit ihren Bestandteilen Endothel und Media, sowie das Stroma waren in der
gruppenübergreifenden statistischen Auswertung im Falle der Media (Median 0,90)
hochsignifikant verschieden zur Expression der entsprechenden tumorfernen Struktur
der Kontrollgruppe (Median 3,60; p= 0,0002; graphische Darstellung siehe Seite 110,
Abb.19). Endothel und Stroma waren in ihrer sehr geringen Expression tumornah
über alle Gruppen hinweg nicht unterschiedlich (TN GE: p= 0,9054; TN S: p=
0,5811).
Ergebnisse 98
Das als tumorfern definierte Gefäßendothel (Anhang 10.4.3, Tab. 91) der einfachen
Adenome zeigte keine statistischen Auffälligkeiten (Median 0,00; p= 0,4209). Die
vaskuläre Media (Median 2,02) hingegen war im Gruppenvergleich signifikant
verschieden zur Kontrollgruppe (Median 3,60; p= 0,0190; graphische Darstellung
siehe Seite 110, Abb. 19). Das Stroma hingegen war im gruppenübergreifenden
Vergleich nicht signifikant unterschiedlich (p= 0,4834).
Der Vergleich der tumornahen und tumorfernen Strukturen (Anhang 10.4.3, Tab.
92) erbrachte für das geringgradig exprimierende Gefäßendothel keine signifikanten
p-Werte für die Gruppenvergleiche (p= 0,3633). Die Media der einfachen Adenome
unterschied sich mit einem tumorfern etwas stärkeren MMP-12-Signal (Median 2,02;
Graphik siehe Seite 110, Abb. 19) im Vergleich zu den einfachen Karzinomen mit p=
0,0221. Die Lokalisationen tumornah und –fern waren signifikant unterschiedlich in
ihrer MMP-12-Expression (p= 0,0185). Die gering- bis mittelgradige Expression der
Media war bei den Untersuchungsgruppen tumorfern etwas deutlicher, als tumornah
(Graphik siehe Seite 110, Abb.19). Das Stroma zeigte im Gruppenvergleich keine
statistisch signifikanten unterschiedlichen Expressionslevel (p= 0,6199).
4.2.3.6 MMP-12 in benignen Mammamischtumoren
Die gering- bis mittelgradige Expression von MMP-12 der Epithelien des
unveränderten Milchdrüsengewebes der Gruppe „benigne Mammamischtumore“
(Anhang 10.4.3, Tab. 85) war im Vergleich nicht signifikant unterschiedlich zu den
anderen Gruppen (aE: p= 0,3201; dE: p= 0,6670; mE: p= 0,5359). Bei den
Entzündungszellen ergab sich über alle Gruppen ein leicht signifikanter p-Wert von
0,0314, der jedoch im Tukey Test nicht einzelnen Gruppen zugeordnet werden
konnte. Werte für Median, Minimum und Maximum können dem Anhang, Tabelle 56
entnommen werden.
Der
Vergleich
unterschiedlicher
Lokalisationen
(PM-TZ-TP)
über
alle
Tumorgruppen hinweg (Anhang 10.4.3, Tab. 84) ergab für das alveoläre Epithel
hochsignifikante Werte mit p= 0,0000 für den Vergleich von physiologischer Mamma,
die am stärksten exprimierte und Tumorzentrum, das am wenigsten MMP-12
aufwies, sowie mit p= 0,0108 für den Vergleich physiologische Mamma und
Tumorperipherie und p= 0,0077 für den Vergleich von Tumorzentrum und –peripherie
(Graphik siehe Seite 108, Abb. 14). Der reine Tumorgruppenvergleich über alle
Lokalisationen hinweg kam zu keinem signifikanten Ergebnis (p= 0,1500). Auch beim
Ergebnisse 99
duktalen Epithel waren die Lokalisationen der unveränderten Mamma und des
Tumorzentrums zueinander stark unterschiedlich (PM-TZ: p= 0,0022; PM-TP: p=
0,2341; TZ-TP: p= 0,0708; Graphik siehe Seite 108, Abb. 15). Die benignen
Mischtumoren stellten in dieser Struktur eine Ausnahme dar, da sie als einzige
Gruppe
etwas mehr MMP-12 im Tumorzentrum, als im physiologischen
Mammagewebe aufwiesen. Der Tumorgruppenvergleich erbrachte keine Signifikanz
(p= 0,3160). Dasselbe Auftreten von Signifikanzen zeigte sich auch bei der
Untersuchung des myoepithelialen Anteils der benignen Mammamischtumoren. Auch
hier waren die Tumorgruppen zueinander über alle Lokalisationen hinweg nicht
signifikant unterschiedlich (p= 0,1819). Jedoch konnten im Lokalisationsvergleich
Signifikanzen in der MMP-12-Expression nachgewiesen werden (PM-TZ: p= 0,0099;
PM-TP: p= 0,7261; TZ-TP: p= 0,0232; Graphik siehe Seite 109, Abb. 16). Im
Gegensatz zum duktalen Epithel war es hier neben dem Vergleich physiologische
Mamma-Tumorzentrum also auch der Vergleich Tumorzentrum und –peripherie, der
statistisch auffallend war. Die benignen Mischtumoren zeigten als einzige
Tumorgruppe
eine
deutliche
MMP-12-Expression
im
Myoepithel
aller
drei
Lokalisationen, wobei das stärkste Signal in der Tumorperipherie gemessen wurde.
Die Entzündungszellen zeigten sich sowohl tumorgruppenübergreifend, als auch im
Lokalisationsvergleich signifikant unterschiedlich, wobei keine Wechselwirkung
zwischen diesen Ergebnissen bestand. So waren die Entzündungszellen der
benignen Mammamischtumoren in ihrer geringen Expression hochsignifikant
verschieden zu den nahezu negativen komplexen Adenomen (p= 0,0002) und
einfachen Adenomen (p= 0,0056). Die Graphik hierzu findet sich auf der Seite 109,
Abb.17. Die Expression von MMP-12 bei Entzündungszellen in der physiologischen
Mamma war bei allen Tumorgruppen höher und unterschied sich hochsignifikant von
der geringeren im Tumorzentrum (p= 0,0025; Graphik siehe Seite 109, Abb. 17). Die
weiteren Lokalisationsvergleiche zeigten keine Auffälligkeiten (PM-TP: p= 0,0659;
TZ-TP: p= 0,2283).
Der Vergleich der gering- bis mittelgradigen MMP-12-Expression im Tumorzentrum
(Anhang 10.4.3, Tab. 86) über alle Gruppen hinweg war auch für die Epithelien der
benignen Mammamischtumoren nicht auffällig (aE: p= 0,1550; dE: p= 0,0996; mE:
p= 0,3117). Die Entzündungszellen des Zentrums der bMMTs waren in der geringen
Signalausprägung für MMP-12 nicht signifikant unterschiedlich zu denen der anderen
Gruppen (p= 0,0424). Der leicht signifikante p-Wert ergab sich aus der
Ergebnisse 100
gruppenübergreifenden statistischen Auswertung, konnte jedoch im Tukey Test für
die Gruppe der Mischtumoren ausgeschlossen werden.
Ebenso verhielt es sich in der Tumorperipherie (Anhang 10.4.3, Tab. 87;
Fotodokumentation 8.3, Abb.53). Die gering- bis mittelgradig exprimierenden
Epithelien waren nicht auffällig (aE: p= 0,3687; dE: p= 0,5355; mE: p= 0,1186). Für
die Entzündungszellen konnte über alle Gruppen eine leichte Signifikanz
nachgewiesen werden (p= 0,0484; Graphik siehe Seite 109, Abb. 17), die vermutlich
für den Vergleich benigne Mischtumoren- komplexe Adenome zutraf. Hierauf gab der
Tukey Test Hinweise. Die benignen Mischtumoren waren für MMP-12 geringgradig
positiv (Median 1,44), die komplexen Adenome fast negativ (Median 0,04).
Der Tumorgesamtwert war nicht aussagekräftig (Anhang 10.4.3, Tab. 88). Die
Epithelien zeigten im Gruppenvergleich keine Unterschiede in der Expression von
MMP-12 (aE: p= 0,1415; dE: p= 0,1652; mE: p= 0,1146). Die Entzündungszellen der
Mischtumoren waren im Expressionsvergleich nicht signifikant verschieden zu den
entsprechenden Strukturen der anderen Untersuchungsgruppen (p= 0,0455). Die
Signifikanz bezog sich auf andere Gruppen.
Bei der statistischen Auswertung der Daten der Lymphknotenrinde (Anhang 10.4.3,
Tab. 89; Median 2,52) ergaben sich keine Unterschiede im direkten Vergleich der
benignen Mammamischtumoren mit den anderen Gruppen. Der p-Wert bezieht sich
auf den gruppenübergreifenden Vergleich und wird im Tukey Test für die bMMTs
nicht verifiziert (p= 0,0162). Das Lymphknotenmark (Median 3,42) war in der MMP12-Expression signifikant unterschiedlich zu dem der komplexen Adenome (Median
1,80; p=. 0,0256; Graphik siehe Seite 110, Abb. 18).
Die tumornahen Gefäße (Anhang 10.4.3, Tab. 90) mit ihren Bestandteilen Endothel
und Media, sowie das Stroma waren in der gruppenübergreifenden statistischen
Auswertung im Falle der Media (Median 0,84) hochsignifikant verschieden zur
Expression der entsprechenden Struktur der als tumorfern definierten Kontrollgruppe
(Median 3,60; p= 0,0002; Graphik siehe Seite 110, Abb. 19). Dabei zeigte die
Kontrollgruppe mit deutlichem Abstand die stärkste Expression. Die benignen
Mammamischtumoren lagen beim Gruppenvergleich im unteren Expressionsbereich.
Endothel und Stroma waren tumornah über alle Gruppen hinweg in ihrer Expression
gering und nicht unterschiedlich (TN GE: p= 0,9054; TN S: p= 0,5811).
Ergebnisse 101
Das als tumorfern (Anhang 10.4.3, Tab. 91) definierte Gefäßendothel (Median 0,32)
der benignen Mischtumoren zeigte keine statistischen Auffälligkeiten (p= 0,4209). Die
vaskuläre Media (Median 1,68) hingegen war im Gruppenvergleich signifikant
verschieden zur Kontrollgruppe (Median 3,60; p= 0,0190; Graphik siehe Seite 110,
Abb. 19). Das Stroma war negativ und im gruppenübergreifenden Vergleich nicht
signifikant unterschiedlich (p= 0,4834).
Der Vergleich der tumornahen und tumorfernen Strukturen (Anhang 10.4.3, Tab.
92) erbrachte für das Gefäßendothel keine signifikanten p-Werte für die
Gruppenvergleiche (p= 0,3633). Die Media der benignen Mischtumoren unterschied
sich im Vergleich zu den stärker exprimierenden einfachen Karzinomen mit p=
0,0291 (Graphik siehe Seite 110, Abb. 19). Die Lokalisationen tumornah und –fern
waren signifikant unterschiedlich in ihrer MMP-12-Expression (p= 0,0185). Es konnte
tumorfern etwas mehr MMP-12 nachgewiesen werden, als in der entsprechenden
tumornahen Struktur. Dies ist ebenfalls der Graphik 19 zu entnehmen.
4.2.3.7 MMP-12 in komplexen Karzinomen
Die Expression von MMP-12 war in den Epithelien des physiologischen
Milchdrüsengewebes (Anhang 10.4.3, Tab. 85) der Gruppe „komplexe Karzinome“
nicht signifikant unterschiedlich im Vergleich zu den anderen Gruppen (aE: p=
0,3201; dE: p= 0,6670; mE: p= 0,5359). Bei den Entzündungszellen ergab sich über
alle Gruppen ein leicht signifikanter p-Wert von 0,0314, der jedoch im Tukey Test
nicht einzelnen Gruppen zugeordnet werden konnte. Die Werte für Median, Minimum
und Maximum können im Anhang der Tabelle 57 entnommen werden.
Der
Vergleich
unterschiedlicher
Lokalisationen
(PM-TZ-TP)
über
alle
Tumorgruppen hinweg (Anhang 10.4.3, Tab. 84) ergab für das alveoläre Epithel
hochsignifikante Werte mit p= 0,0000 für den Vergleich von physiologischer Mamma,
die mittelgradig und von allen Lokalisationen am meisten MMP-12 exprimierte und
Tumorzentrum, das das schwächste Signal aufwies, sowie mit p= 0,0108 für den
Vergleich physiologische Mamma und Tumorperipherie, die im Falle der komplexen
Karzinome etwas weniger als das umgebende gesunde Gewebe exprimierte und mit
p= 0,0077 für den Vergleich von Tumorzentrum und –peripherie (graphische
Darstellung siehe Seite 108, Abb. 14). Der reine Tumorgruppenvergleich über alle
Lokalisationen hinweg kam zu keinem signifikanten Ergebnis (p= 0,1500). Auch beim
duktalen Epithel waren die Lokalisationen der unveränderten Mamma (mit
Ergebnisse 102
mittelgradiger Expression) und des Tumorzentrums (nahezu MMP-12-negativ)
zueinander stark unterschiedlich (PM-TZ: p= 0,0022; PM-TP: p= 0,2341; TZ-TP: p=
0,0708). Die Tumorperipherie zeigte in dieser Gruppe beim duktalen Epithel ein
annähernd
so
deutliches
MMP-12-Signal,
wie
die
physiologische
Mamma
(graphische Darstellung siehe Seite 108, Abb. 15). Der Tumorgruppenvergleich
erbrachte keine Signifikanz (p= 0,3160). Dasselbe Auftreten von Signifikanzen zeigte
sich auch bei der Untersuchung des myoepithelialen Anteils der komplexen
Karzinome. Auch hier waren die Tumorgruppen zueinander über alle Lokalisationen
hinweg
nicht
signifikant
unterschiedlich
(p=
0,1819).
Jedoch
konnten
im
Lokalisationsvergleich Signifikanzen in der MMP-12-Expression nachgewiesen
werden (PM-TZ: p= 0,0099; PM-TP: p= 0,7261; TZ-TP: p= 0,0232). Im Gegensatz
zum duktalen Epithel war es hier neben dem Vergleich physiologische MammaTumorzentrum also auch der Vergleich Tumorzentrum und –peripherie, der
statistisch auffallend war. Für die komplexen Karzinome allein betrachtet war die
MMP-12-Expression im Myoepithel jedoch in allen drei Lokalisationen kaum
unterschiedlich und sehr gering (graphische Darstellung siehe Seite 109, Abb. 16).
Die Entzündungszellen zeigten sich sowohl tumorgruppenübergreifend, als auch im
Lokalisationsvergleich signifikant unterschiedlich, wobei keine Wechselwirkung
zwischen diesen Ergebnissen bestand. So waren die Entzündungszellen der
komplexen Karzinome signifikant verschieden zu denen der komplexen Adenome
(p= 0,0165). Die Expression bei Entzündungszellen in der physiologischen Mamma,
die geringgradig exprimierte unterschied sich hochsignifikant von der gegen null
gehenden im Tumorzentrum (p= 0,0025; graphische Darstellung siehe Seite 109,
Abb. 17). Die weiteren Lokalisationsvergleiche für die Entzündungszellen zeigten
keine Auffälligkeiten (PM-TP: p= 0,0659; TZ-TP: p= 0,2283).
Der Vergleich der Expression im Tumorzentrum (Anhang 10.4.3, Tab. 86) über alle
Gruppen hinweg war für die Epithelien der sehr gering exprimierenden Karzinome
nicht auffällig (aE: p= 0,1550; dE: p= 0,0996; mE: p= 0,3117). Die Entzündungszellen
(Median 0,28) des Zentrums dieser Gruppe waren in der Signalausprägung für MMP12 nicht signifikant unterschiedlich zu denen der anderen Gruppen (p= 0,0424). Der
leicht signifikante p-Wert ergab sich aus der gruppenübergreifenden statistischen
Auswertung, konnte jedoch im Tukey Test für die Gruppe der komplexen Karzinome
ausgeschlossen werden.
Ergebnisse 103
Ebenso verhielt es sich in der Tumorperipherie (Anhang 10.4.3, Tab. 87;
Fotodokumentation 8.3, Abb. 54). Die Expression der Epithelien war deutlicher, als
im alveolären Epithel, jedoch statistisch nicht auffällig (aE: p= 0,3687; dE: p= 0,5355;
mE: p= 0,1186). Für die Entzündungszellen konnte über alle Gruppen eine leichte
Signifikanz nachgewiesen werden (p= 0,0484; graphische Darstellung siehe Seite
109, Abb. 17), die vermutlich für den Vergleich „benigne Mischtumoren“-„komplexe
Adenome“ zutraf. Hierauf gab der Tukey Test Hinweise.
Der Tumorgesamtwert war nicht aussagekräftig (Anhang 10.4.3, Tab. 88). Die
Epithelien zeigten im Gruppenvergleich keine Unterschiede (aE: p= 0,1415; dE: p=
0,1652; mE: p= 0,1146). Die Entzündungszellen waren in ihrer Expression für
komplexe
Karzinome
nicht
signifikant
verschieden
im
Vergleich
mit
den
entsprechenden Strukturen der anderen Untersuchungsgruppen (p= 0,0455). Die
Signifikanz bezog sich auf andere Gruppen.
Bei der statistischen Auswertung der Daten der gering MMP-12-positiven
Lymphknotenrinde (Anhang 10.4.3, Tab. 89) ergaben sich keine Unterschiede im
direkten Vergleich der komplexen Karzinome mit den anderen Gruppen. Der p-Wert
bezieht sich auf den gruppenübergreifenden Vergleich und wird im Tukey Test für die
komplexen Karzinome nicht verifiziert (p= 0,0162). Das Lymphknotenmark (median
2,70) war nicht signifikant unterschiedlich zu anderen Tumorgruppen (p= 0,0256).
Der signifikante p-Wert entstand aufgrund der Art der statistischen Auswertung, war
für das Mark dieser Untersuchungsgruppe jedoch nicht zutreffend.
Die tumornahen Gefäße mit ihren Bestandteilen Endothel und Media, sowie das
Stroma (Anhang 10.4.3, Tab. 90) waren in der gruppenübergreifenden statistischen
Auswertung im Falle der Media (Median 1,34) hochsignifikant verschieden zur
Expression der entsprechenden tumorfernen Struktur der Kontrollgruppe (Median
3,60; p= 0,0002; graphische Darstellung siehe Seite 110, Abb. 19). Dabei zeigte die
Kontrollgruppe mit deutlichem Abstand die stärkste Expression aller Gruppen. Die
komplexen
Karzinome
lagen
mit
einem
Median
von
1,34
im
unteren
Expressionsbereich. Endothel und Stroma waren tumornah über alle Gruppen
hinweg in ihrer Expression gering und nicht unterschiedlich (TN GE: p= 0,9054; TN
S: p= 0,5811).
Das als tumorfern (Anhang 10.4.3, Tab. 91) definierte Gefäßendothel (Median 0,36)
der komplexen Karzinome zeigte keine statistischen Auffälligkeiten (p= 0,4209). Die
Ergebnisse 104
vaskuläre Media (Median 1,46) war im Gruppenvergleich nicht signifikant
verschieden zu anderen Gruppen (p= 0,0190). Der p-Wert bezieht sich laut Tukey
Test auf andere Gruppen. Das
MMP-12-negative Stroma war nicht signifikant
unterschiedlich im gruppenübergreifenden Vergleich (p= 0,4834).
Der Vergleich der tumornahen und tumorfernen Strukturen (Anhang 10.4.3, Tab.
92) erbrachte für das Gefäßendothel keine signifikanten p-Werte für die
Gruppenvergleiche (p= 0,3633). Ebenso verhielt es sich mit der Media mit p= 0,1164.
Die Lokalisationen tumornah und –fern waren signifikant unterschiedlich in ihrer
MMP-12-Expression (p= 0,0185). Es konnte tumorfern in den Strukturen im
Gruppenvergleich mehr Signal für die Makrophagen-Elastase festgestellt werden, als
tumornah (graphische Darstellung siehe Seite 110, Abb. 19).
4.2.3.8 MMP-12 in einfachen Karzinomen
Die Expression
von MMP-12
war in
den Epithelien des unveränderten
Milchdrüsengewebes (Anhang 10.4.3, Tab. 85) der Gruppe „einfache Karzinome“
gering- bis mittelgradig und nicht signifikant unterschiedlich im Vergleich zu den
anderen Gruppen (aE: p= 0,3201; dE: p= 0,6670; mE: p= 0,5359). Bei den
Entzündungszellen ergab sich über alle Gruppen ein leicht signifikanter p-Wert von
0,0314, der jedoch im Tukey Test nicht einzelnen Gruppen zugeordnet werden
konnte. Die Werte für Median, Minimum und Maximum können dem Anhang der
Tabelle 58 entnommen werden.
Der
Vergleich
unterschiedlicher
Lokalisationen
(PM-TZ-TP)
über
alle
Tumorgruppen hinweg (Anhang 10.4.3, Tab. 84) ergab für das alveoläre Epithel
hochsignifikante Werte mit p= 0,0000 für den Vergleich von physiologischer Mamma
mit der deutlichsten Expression aller Lokalisationen und dem vergleichsweise
schwach positiven Tumorzentrum, sowie mit p= 0,0108 für den Vergleich
physiologische Mamma und Tumorperipherie, die im Falle der einfachen Karzinome
eine annähernd gleich starke MMP-12-Expression aufwies wie die physiologische
Mamma (Median 3,00), sowie mit p= 0,0077 für den Vergleich von Tumorzentrum
und –peripherie (graphische Darstellung siehe Seite 108, Abb. 14). Der reine
Tumorgruppenvergleich über alle Lokalisationen hinweg kam zu keinem signifikanten
Ergebnis (p= 0,1500). Auch beim duktalen Epithel waren die Lokalisationen der
unveränderten Mamma mit deutlicherer Expression und des Tumorzentrums mit
geringerer MMP-12-Reaktion zueinander stark unterschiedlich (PM-TZ: p= 0,0022;
Ergebnisse 105
PM-TP: p= 0,2341; TZ-TP: p= 0,0708). Der Tumorgruppenvergleich erbrachte keine
Signifikanz (p= 0,3160). Dasselbe Auftreten von Signifikanzen zeigte sich auch bei
der Untersuchung des myoepithelialen Anteils der einfachen Karzinome. Auch hier
waren die Tumorgruppen zueinander über alle Lokalisationen hinweg nicht signifikant
unterschiedlich (p= 0,1819). Jedoch konnten im Lokalisationsvergleich Signifikanzen
in der MMP-12-Expression nachgewiesen werden (PM-TZ: p= 0,0099; PM-TP: p=
0,7261; TZ-TP: p= 0,0232). Im Gegensatz zum duktalen Epithel war es hier neben
dem Vergleich physiologische Mamma-Tumorzentrum also auch der Vergleich
Tumorzentrum und –peripherie, der statistisch auffallend war. Die physiologische
Mamma exprimierte geringe Mengen MMP-12, jedoch etwa doppelt soviel wie das
Tumorzentrum
(graphische
Darstellung
siehe
Seite
109,
Abb.
16).
Die
Entzündungszellen zeigten sich sowohl tumorgruppenübergreifend, als auch im
Lokalisationsvergleich signifikant unterschiedlich, wobei keine Wechselwirkung
zwischen diesen Ergebnissen bestand. So waren die Entzündungszellen der
einfachen Karzinome, die mit einem Median von 2,16 in der physiologischen Mamma
den höchsten Wert aller Untersuchungsgruppen in dieser Struktur aufwiesen,
signifikant verschieden zu den fast vollständig negativen Entzündungszellen der
komplexen (p= 0,0005) und einfachen Adenome (p= 0,0117; graphische Darstellung
siehe Seite 109, Abb. 17). Die Expression bei Entzündungszellen in der
physiologischen Mamma unterschied sich hochsignifikant von der geringeren im
Tumorzentrum (p= 0,0025; graphische Darstellung siehe Seite 109, Abb. 17). Die
weiteren Lokalisationsvergleiche zeigten keine Auffälligkeiten (PM-TP: p= 0,0659;
TZ-TP: p= 0,2283).
Der Vergleich der Expression im Tumorzentrum (Anhang 10.4.3, Tab. 86) über alle
Gruppen hinweg war für die geringgradig exprimierenden Epithelien der einfachen
Karzinome nicht auffällig (aE: p= 0,1550; dE: p= 0,0996; mE: p= 0,3117). Die
Entzündungszellen des Zentrums dieser Gruppe (Median
1,02) waren in der
Signalausprägung für MMP-12 nicht signifikant unterschiedlich zu denen der anderen
Gruppen (p= 0,0424). Der leicht signifikante p-Wert ergab sich wieder aus der
gruppenübergreifenden statistischen Auswertung, konnte jedoch im Tukey Test für
die Gruppe der einfachen Karzinome ausgeschlossen werden.
Ebenso verhielt es sich in der Tumorperipherie (Anhang 10.4.3, Tab. 87;
Fotodokumentation 8.3, Abb. 55). Die geringgradig positiven Epithelien waren nicht
auffällig (aE: p= 0,3687; dE: p= 0,5355; mE: p= 0,1186). Für die Entzündungszellen
Ergebnisse 106
(Median 0,18) konnte über alle Gruppen eine leichte Signifikanz nachgewiesen
werden (p= 0,0484), die vermutlich nur für den Vergleich benigne Mischtumorenkomplexe Adenome zutraf. Hierauf gab der Tukey Test Hinweise.
Der Tumorgesamtwert (Anhang 10.4.3, Tab. 88) war nicht aussagekräftig. Die
Epithelien zeigten im Gruppenvergleich keine Unterschiede (aE: p= 0,1415; dE: p=
0,1652; mE: p= 0,1146). Die Entzündungszellen waren in ihrer MMP-12-Expression
für einfache Karzinome im Gruppenvergleich nicht signifikant verschieden zu den
entsprechenden Strukturen der anderen Untersuchungsgruppen (p= 0,0455). Die
Signifikanz bezog sich auf andere Gruppen.
Bei der statistischen Auswertung der Daten der Lymphknotenrinde (Anhang 10.4.3,
Tab. 89; Median unveränderter Rinde 2,32; Median metastasierter Rinde 4,04)
ergaben sich keine Unterschiede im direkten Vergleich der einfachen Karzinome mit
den anderen Gruppen, weder für metastasierte, noch für unveränderte Lymphknoten.
Der p-Wert bezieht sich auf den gruppenübergreifenden Vergleich und wird im Tukey
Test für diese Gruppe nicht verifiziert (p= 0,0162). Das Lymphknotenmark war, weder
metastasiert
(Median
3,62),
noch
unverändert
(Median
2,62),
signifikant
unterschiedlich zu anderen Tumorgruppen (p= 0,0256). Der p-Wert entstand auf
oben genannte Weise.
Die tumornahen Gefäße (Anhang 10.4.3, Tab. 90) mit ihren Bestandteilen Endothel
und Media, sowie das Stroma waren in der gruppenübergreifenden statistischen
Auswertung im Falle der Media (Median 2,22) nicht signifikant verschieden zur
Expression der entsprechenden Struktur der anderen Gruppen. Der unten genannte
signifikante p-Wert bezieht sich auf den Vergleich anderer Gruppen. Endothel
(Median 0,38) und Stroma (Median 0,00) waren tumornah über alle Gruppen hinweg
in ihrer Expression nicht unterschiedlich (TN GE: p= 0,9054; TN GM: p= 0,0002; TN
S: p= 0,5811).
Das als tumorfern (Anhang 10.4.3, Tab. 91) definierte, gering exprimierende
Gefäßendothel der einfachen Karzinome zeigte keine statistischen Auffälligkeiten (p=
0,4209). Die vaskuläre Media (Median 3,00) war im Gruppenvergleich nicht
signifikant verschieden zu anderen Gruppen (p= 0,0190). Der p-Wert bezieht sich
laut Tukey Test auf andere Gruppen. Das Stroma wies keine MMP-12-Expression
auf und war nicht signifikant unterschiedlich im gruppenübergreifenden Vergleich (p=
0,4834).
Ergebnisse 107
Der Vergleich der tumornahen und tumorfernen Strukturen (Anhang 10.4.3, Tab.
92) erbrachte für das Gefäßendothel keine signifikanten p-Werte für die
Gruppenvergleiche (p= 0,3633). Ebenso verhielt es sich mit der Media mit p= 0,1164.
Die Lokalisationen tumornah und –fern waren signifikant unterschiedlich in ihrer
MMP-12 Expression (p= 0,0185). Tumorfern konnte in der Media etwas mehr MMP12 nachgewiesen werden, als tumornah (graphische Darstellung siehe Seite 110,
Abb. 19).
Das Stroma war im Vergleich „tumornah-tumorfern“ statistisch nicht
auffallend (p= 0,5641).
Die erhobenen Daten für tumornahe und tumorferne Emboli (Anhang 10.2; Tab.
29) konnten aufgrund der zu geringen Datenmenge nicht statistisch ausgewertet
werden.
Ergebnisse 108
12
10
TGr über alle
Lokalisationen:
hochsignifikant
8
signifikant
über die TGr::
6
Score
PM-TZ
hochsignifikant
signifikant
4
TZ-TP
hochsignifikant
signifikant
2
PM-TP
hochsignifikant
signifikant
0
KG
HYP
kAd
eAd
bMMT
kCa
eCa
Tumorgruppe
Abbildung 14: MMP-12-Expression im alveolären Epithel in der physiologischen Mamma (PM), im Tumorzentrum (TZ) und in
der Tumorperipherie (TP); aE: alveoläres Epithel, TGr: Tumorgruppe, KG: Kontrollgruppe, HYP: Hyperplasiegruppe, kAd:
komplexe Adenome, eAd: einfache Adenome, kCa: komplexe Karzinome, eCa: einfache Karzinome
12
10
über die TGr::
PM-TZ
8
hochsignifikant
signifikant
TZ-TP
6
Score
hochsignifikant
signifikant
4
PM-TP
hochsignifikant
signifikant
2
0
KG
HYP
kAd
eAd
bMMT
kCa
eCa
Tumorgruppe
Abbildung 15: MMP-12-Expression im duktalen Epithel in der physiologischen Mamma (PM), im Tumorzentrum (TZ) und in der
Tumorperipherie (TP); dE: duktales Epithel, TGr: Tumorgruppe, KG: Kontrollgruppe, HYP: Hyperplasiegruppe, kAd: komplexe
Adenome, eAd: einfache Adenome, kCa: komplexe Karzinome, eCa: einfache Karzinome
Ergebnisse 109
12
10
über die TGr::
PM-TZ
8
hochsignifikant
signifikant
TZ-TP
6
Score
hochsignifikant
signifikant
PM-TP
4
hochsignifikant
signifikant
2
KG
HYP
kAd
eAd
bMMT
kCa
eCa
Tumorgruppe
Abbildung 16: MMP-12-Expression im Myoepithel in der physiologischen Mamma (PM), im Tumorzentrum (TZ) und in der
Tumorperipherie (TP); mE: Myoepithel, TGr: Tumorgruppe, KG: Kontrollgruppe, HYP: Hyperplasiegruppe, kAd: komplexe
Adenome, eAd: einfache Adenome, kCa: komplexe Karzinome, eCa: einfache Karzinome
12
10
TGr über alle
Lokalisationen:
hochsignifikant
signifikant
8
über die TGr::
hochsignifikant
6
Score
PM-TZ
signifikant
TZ-TP
4
hochsignifikant
signifikant
PM-TP
2
hochsignifikant
Signifikant
TP über alle
Gruppen:
KG
HYP
kAd
eAd
bMMT
kCa
eCa
hochsignifikant
signifikant
Tumorgruppe
Abbildung 17: MMP-12-Expression in Entzündungszellen in der physiologischen Mamma (PM), im Tumorzentrum (TZ) und in
der Tumorperipherie (TP); EZ: Entzündungszellen, TGr: Tumorgruppe, KG: Kontrollgruppe, HYP: Hyperplasiegruppe, kAd:
komplexe Adenome, eAd: einfache Adenome, kCa: komplexe Karzinome, eCa: einfache Karzinome
Ergebnisse 110
10
8
TGr :
6
hochsignifikant
Score
signifikant
4
2
0
KG
HYP
kAd
eAd
bMMT
kCa
eCa
Tumorgruppe
Abbildung 18: MMP-12-Expression in Rinde (R) und Mark (M) der assoziierten Lymphknoten, unverändert (Lu) und metastasiert
(Lm); TGr: Tumorgruppe, KG: Kontrollgruppe, HYP: Hyperplasiegruppe, kAd: komplexe Adenome, eAd: einfache Adenome,
kCa: komplexe Karzinome, eCa: einfache Karzinome
12
TN, TF:
10
hochsignifikant
signifikant
8
Vergleich TN-TF:
hochsignifikant
6
Score
signifikant
4
2
0
KG
HYP
kAd
eAd
bMMT
kCa
eCa
Tumorgruppe
Abbildung 19: MMP-12-Expression in der Gefäßmedia (GM), tumornah (TN) und Tumorfern (TF); KG: Kontrollgruppe, HYP:
Hyperplasiegruppe, kAd: komplexe Adenome, eAd: einfache Adenome, kCa: komplexe Karzinome, eCa: einfache Karzinome
Ergebnisse 111
4.2.4 TIMP-3
4.2.4.1 TIMP-3 in den Kontrollen
In der Positivkontrolle DH 82-Zellpellet (Makrophagen-/ Monozytenzelllinie) zeigte
sich eine einheitliche, mittel- bis dunkelbraune zytoplasmatische homogene Färbung
in etwa 70- 80% der Zellen. Die Zellkerne waren frei von immunhistologischem
Signal für MMP-12. Sämtliche Negativkontrollen waren frei von immunhistologischem
Signal. Die p- Werte für TIMP-3 können tabellarisch im Anhang 10.4.4 den Tabellen
93-101 entnommen werden.
4.2.4.2 TIMP-3 in unverändertem Milchdrüsengewebe
Das alveoläre Epithel der Kontrollgruppe (Median 0,40; Fotodokumentation 8.4, Abb.
56) mit ausschließlich physiologischem Mammagewebe war hochsignifikant
verschieden in der Ausprägung des immunhistologischen Signals für TIMP-3 zu den
Gruppen der komplexen (Median 5,74) und einfachen Adenome (Median 5,76),
sowie der komplexen Karzinome (Median 5,76; p= 0,0013; graphische Darstellung
siehe Seite 124, Abb. 20) und signifikant verschieden zu den Gruppen der
Hyperplasie (Median 5,40) und der benignen Mammamischtumore (Median 5,60; p=
0,0013; ebenfalls Abb. 20). Dabei exprimierte die Kontrollgruppe mit einem Median
von 0,40 vergleichsweise gering, die anderen Gruppen mit Medianen über 5 relativ
hoch. Auch das duktale Epithel (Median 0,48) war im Vergleich zu den komplexen
(Median 5,68) und einfachen Adenomen (Median 4,48) und den komplexen
Karzinomen (Median 4,00) hoch signifikant verschieden (p= 0,0017; graphische
Darstellung siehe Seite 124, Abb. 21), wobei im gesunden Gewebe der
Kontrollgruppe eine geringe Expression zu verzeichnen war, die Tumorgruppen
hingegen eine deutlich höhere Signalintensität für TIMP-3 aufwiesen. Das Myoepithel
und die Entzündungszellen waren statistisch nicht auffällig (mE: p= 0,6066; EZ: p=
0,6186). Die Werte für Median, Minimum und Maximum können im Anhang der
Tabelle 59 entnommen werden.
Weder die gering positive Lymphknotenrinde, noch das geringgradig exprimierende
Mark zeigten im Vergleich zu anderen Gruppen auffällige TIMP-3 Signale (Lnn unv
R: p= 0,2193; Lnn unv M: p= 0,1448).
Ergebnisse 112
DieTIMP-3-Expression der als tumornah definierten Gefäße und das Stroma waren
gering und statistisch nicht auffällig (TN GE: p= 0,1572; TN GM: p= 0,1004; TN S: p=
0,3245).
4.2.4.3 TIMP-3 in hyperplastischem Milchdrüsengewebe
In der physiologischen Mamma war das alveoläre Epithel der Hyperplasiegruppe
(Median 5,40; Fotodokumentation 8.4, Abb. 57) signifikant verschieden in der
Ausprägung des immunhistologischen Signals für TIMP-3 zur Kontrollgruppe (p=
0,0013; graphische Darstellung siehe Seite 124, Abb. 20). Das duktale Epithel
(Median 3,18) war in keinem Gruppenvergleich signifikant verschieden in der TIMP3-Expression (p= 0,0017), wobei die signifikanten p-Werte sich aus der Art der
statistischen Auswertung ergaben, in nachfolgenden Tests jedoch für diese Gruppen
ausgeschlossen wurden. Das Myoepithel und die Entzündungszellen exprimierten
geringgradig und waren statistisch nicht auffällig (mE: p= 0,6066; EZ: p= 0,6186). Die
Werte für Median, Minimum und Maximum können im Anhang der Tabelle 60
entnommen werden.
Weder die Lymphknotenrinde, noch das Mark zeigten mit ihrer mittelgradigen
Expression im Vergleich zu anderen Gruppen statistisch auffällige TIMP-3-Signale
(Lnn unv R: p= 0,2193; Lnn unv M: p= 0,1448).
Die geringe TIMP-3-Expression der als tumornah definierten Gefäße und des
Stromas waren statistisch ebenfalls nicht auffällig (TN GE: p= 0,1572; TN GM: p=
0,1004; TN S: p= 0,3245).
4.2.4.4 TIMP-3 in komplexen Adenomen
In der physiologischen Mamma war das alveoläre Epithel der komplexen Adenome
(Median 5,74; Fotodokumentation 8.4, Abb. 58 und 59) hoch signifikant verschieden
in der Ausprägung des immunhistologischen Signals für TIMP-3 zur Kontrollgruppe
(Median 0,40; p= 0,0013; graphische Darstellung siehe Seite 124, Abb. 20). Auch
das duktale Epithel (Median 5,68) exprimierte im Vergleich zu Kontrollgruppe hoch
signifikant verschieden (Median 0,48; p= 0,0017; graphische Darstellung siehe Seite
124, Abb. 21). Das Myoepithel und die Entzündungszellen exprimierten nur geringe
Mengen TIMP-3 und waren statistisch nicht auffällig (mE: p= 0,6066; EZ: p= 0,6186).
Die Werte für Median, Minimum und Maximum können im Anhang der Tabelle 61
entnommen werden.
Ergebnisse 113
Beim Vergleich aller Gruppen über die Lokalisationen PM-TZ-TP hinweg waren
die Ergebnisse sämtlicher Lokalisationsvergleiche für das alveoläre Epithel hoch
signifikant (PM-TZ: p= 0,0000; PM-TP: p= 0,0001; TZ-TP: p= 0,0033), die
Tumorgruppen zueinander jedoch nicht statistisch auffällig (p= 0,5976). Die höchsten
Werte in alle Gruppen für TIMP-3 wurden in der physiologischen Mamma erreicht,
gefolgt von der Tumorperipherie und dem –zentrum (graphische Darstellung siehe
Seite 124, Abb. 20). Das duktale Epithel zeigte in der Expression keine signifikanten
Unterschiede (p= 0,4380) zwischen den Untersuchungsgruppen, jedoch zwischen
den Lokalisationen PM-TZ (p= 0,0076). Auch hier war in der physiologischen
Mamma rund um den Tumor bei allen Tumorgruppen die stärkste TIMP-3-Reaktion
messbar. Außer bei den benignen Mischtumoren, die mehr TIMP-3 im Tumorzentrum
als in der Peripherie aufwiesen, war bei den restlichen Gruppen der Randbereich der
Neoplasien der Ort der zweitstärksten TIMP-3-Expression (graphische Darstellung
siehe Seite 124, Abb. 21). Beim Myoepithel waren lediglich die Lokalisationen in ihrer
Signalausprägung unterschiedlich. Hier war es der Vergleich PM-TP, der zu einem
hochsignifikanten Ergebnis führte (p= 0,0058; graphische Darstellung siehe Seite
125, Abb. 22), sowie der Vergleich PM-TZ, der signifikante Expressionsunterschiede
erbrachte (p= 0,0484; graphische Darstellung siehe Seite 125, Abb. 22). Interessant
war hier die höhere TIMP-3-Expression der Peripherie im Vergleich zu dem Zentrum
der Tumoren und dem physiologischem Mammagewebe, das am wenigste TIMP-3
aufwies. Die Gruppen waren in ihrer Expression nicht unterschiedlich (p= 0,4042).
Die geringgradig exprimierenden Entzündungszellen der komplexen Adenome
zeigten zu den deutlich TIMP-3-positiven einfachen Karzinomen signifikante
Expressionsunterschiede mit p= 0,0003 (graphische Darstellung siehe Seite 125,
Abb. 23), die Lokalisationsvergleiche waren hier statistisch nicht aussagekräftig (p=
0,1321).
Im Tumorzentrum war das alveoläre Epithel in seiner Expression über alle
Tumorgruppen signifikant unterschiedlich (aE: p= 0,0218; graphische Darstellung
siehe Seite 124, Abb. 20), dies galt jedoch nicht für die komplexen Adenome (Median
5,04). Die übrigen Epithelien und die Entzündungszellen des Zentrums zeigten keine
deutlichen Unterschiede in ihrer Signalausprägung (dE: p= 0,1365; mE: p= 0,1792;
EZ: p= 0,1043).
Das alveoläre Epithel der Tumorperipherie (Median 5,12) unterschied sich
signifikant in der Signalintensität im Vergleich zur Kontrollgruppe (Median 0,40; p=
Ergebnisse 114
0,0116; graphische Darstellung siehe Seite 124, Abb. 20). Weder der duktale, noch
der myoepitheliale Anteil waren statistisch auffällig (dE: p= 0,1807; mE: p= 0,1306).
Die
Entzündungszellen
exprimierten
nur
schwach
und
waren
signifikant
unterschiedlich zu der deutlichen Expression der einfachen Karzinome (Median 6,00;
p= 0,0370; graphische Darstellung siehe Seite 125, Abb. 23).
Der Tumorgesamtwert war nicht aussagekräftig. Im tumorgruppenübergreifenden
Vergleich ergab sich ein p-Wert von 0,0241 für das alveoläre Epithel, der jedoch nicht
für die komplexen Adenome zutraf. Alle übrigen Strukturen waren in ihrer
Signalausprägung nicht signifikant unterschiedlich (dE: p= 0,3169; mE: p= 0,1303;
EZ: p= 0,1124).
Weder die Lymphknotenrinde, noch das Mark zeigten im Vergleich zu anderen
Gruppen auffällige TIMP-3-Signale (Lnn unv R: p= 0,2193; Lnn unv M: p= 0,1448).
Beide Strukturen exprimierten mittelgradig.
Die tumornahen Gefäße und das Stroma wiesen geringe Mengen an TIMP-3 auf
und waren statistisch nicht auffällig (TN GE: p= 0,1572; TN GM: p= 0,1004; TN S: p=
0,3245).
Auch die gering TIMP-3-positiven tumorfernen Gefäße und das Bindegewebe waren
im tumorgruppenübergreifenden Vergleich nicht aussagekräftig (TF GE: p= 0,5848;
TF GM: p= 0,1509; TF S: p= 0,9525).
Der Vergleich von tumornahen und tumorfernen obengenannten Strukturen
erbrachte für die nahezu TIMP-3-negative Gefäßmedia der komplexen Adenome
Expressionsunterschiede zu den geringgradig exprimierenden einfachen Karzinomen
mit p= 0,0248; graphische Darstellung siehe Seite 126, Abb. 24. Das Endothel zeigte
eine schwache TIMP-3-Reaktion und war über alle Untersuchungseinheiten nicht
signifikant unterschiedlich (p= 0,4132). Auch die Lokalisationen „tumornah“ und
„tumorfern“ waren hier nicht zueinander signifikant (p= 0,1164). Das Stroma war
weder im Gruppenvergleich (p= 0,2887), noch im Vergleich nah-fern signifikant
(p=0,0944).
4.2.4.5 TIMP-3 in einfachen Adenomen
In der physiologischen Mamma war das alveoläre Epithel der einfachen Adenome
(Median
5,76)
hoch
signifikant
verschieden
in
der
Ausprägung
des
immunhistologischen Signals für TIMP-3 zur Kontrollgruppe (Median 0,40; p= 0,0013;
Ergebnisse 115
graphische Darstellung siehe Seite 124, Abb.20; Fotodokumentation 8.4; Abb. 61).
Auch das duktale Epithel (Median 4,48) war in der Expression im Vergleich zur
Kontrollgruppe (Median 0,48) hoch signifikant verschieden (dE: p= 0,0017;
graphische Darstellung siehe Seite 124, Abb. 21). Das Myoepithel und die
Entzündungszellen exprimierten nur geringgradig und waren statistisch nicht auffällig.
(mE: p= 0,6066; EZ: p= 0,6186). Die Werte für Median, Minimum und Maximum
können im Anhang der Tabelle 62 entnommen werden.
Beim Vergleich aller Gruppen über die Lokalisationen PM-TZ-TP hinweg waren
für das alveoläre Epithel der einfachen Adenome sämtliche Lokalisationsvergleiche
hoch signifikant (PM-TZ: p= 0,0000; PM-TP: p= 0,0001; TZ-TP: p= 0,0033), die
Tumorgruppenvergleiche zueinander jedoch statistisch nicht auffällig (p= 0,5976).
Die physiologische Mamma (Median 5,76) exprimierte von allen Lokalisationen das
meiste TIMP-3 und etwa dreimal soviel, wie das Tumorzentrum, das die geringsten
Mengen TIMP-3 aufwies (graphische Darstellung siehe Seite 124, Abb.20). Das
duktale Epithel zeigte zwar zwischen den Untersuchungsgruppen keine signifikanten
Unterschiede in der Expression (p= 0,4380), jedoch zwischen den Lokalisationen
PM-TZ (p= 0,0076), wobei sich auch hier die physiologische Mamma mit ihrer
deutlichen TIM-3-Expression
von
der geringen
des Tumorzentrums
abhob
(graphische Darstellung siehe Seite 124, Abb.21). Beim Myoepithel waren lediglich
die Lokalisationen unterschiedlich in ihrer Signalausprägung. Hier war es der
Vergleich PM-TP, der zu einem hochsignifikanten Ergebnis führte (p= 0,0058), sowie
der Vergleich PM-TZ, der signifikante Expressionsunterschiede erbrachte (p=
0,0484). Obwohl alle drei Lokalisationen nur geringgradig TIMP-3 aufwiesen, war es
interessanterweise die Tumorperipherie, die für das Myoepithel am stärksten
exprimierte. Die physiologische Mamma zeigte in dieser Struktur das geringste
Signal (graphische Darstellung siehe Seite 125, Abb.22). Die Gruppen waren in ihrer
Expression nicht unterschiedlich (p= 0,4042). Die Entzündungszellen, die vor allem in
der Tumorperipherie und im umgebenden Mammagewebe gering-bis mittelgradig
exprimierten, zeigten zu den deutlicher exprimierenden einfachen Karzinomen
signifikante Unterschiede mit p= 0,0143, die Lokalisationen waren hier statistisch
nicht aussagekräftig (p= 0,1321; graphische Darstellung siehe Seite 125, Abb.23).
Im Tumorzentrum der einfachen Adenome war das alveoläre Epithel (Median 2,08)
in seiner Expression signifikant unterschiedlich zum Gewebe der Hyperplasiegruppe
(Median 5,40; p= 0,0218; graphische Darstellung siehe Seite 124, Abb.20). Die
Ergebnisse 116
übrigen Epithelien und die Entzündungszellen des Zentrums zeigten keine deutlichen
Unterschiede in ihrer Signalausprägung (dE: p= 0,1365; mE: p= 0,1792; EZ: p=
0,1043).
Das alveoläre Epithel der Tumorperipherie (Median 3,52) unterschied sich
signifikant in der Signalintensität im Vergleich zu anderen Gruppen (p= 0,0116), dies
traf jedoch laut Tukey Test nicht für die einfachen Adenome zu. Der gering- bis
mittelgradig exprimierende duktale und myoepitheliale Anteil waren statistisch nicht
auffällig (dE: p= 0,1807; mE: p= 0,1306). Die Entzündungszellen (Median 3,00)
waren nicht signifikant unterschiedlich im Vergleich zu anderen Gruppen (EZ: p=
0,0370).
Auch
hier
ergab
sich
der
signifikante
p-Wert
durch
die
gruppenübergreifende Auswertung, konnte für die einfachen Adenome jedoch
ausgeschlossen werden.
Der Tumorgesamtwert war nicht aussagekräftig. Über alle Gruppen ergab sich ein
p-Wert von 0,0241 für das alveoläre Epithel, der jedoch nicht für die einfachen
Adenome zutraf. Alle übrigen Strukturen waren in ihrer Signalausprägung nicht
signifikant unterschiedlich (dE: p= 0,3169; mE: p= 0,1303; EZ: p= 0,1124).
Weder die Lymphknotenrinde, noch das Mark zeigten im Vergleich zu anderen
Gruppen auffällige TIMP-3-Signale (Lnn unv R: p= 0,2193; Lnn unv M: p= 0,1448;
Fotodokumentation 8.4, Abb. 62). Beide Strukturen zeigten mittelgradige Signale für
TIMP-3.
Die gering exprimierenden tumornahen Gefäße und das Stroma (Median 0,32)
waren statistisch nicht auffällig (TN GE: p= 0,1572; TN GM: p= 0,1004; TN S: p=
0,3245).
Auch die gering exprimierenden tumorfernen Gefäße und das Bindegewebe
(Median 0,36) waren im tumorgruppenübergreifenden Vergleich nicht aussagekräftig
(TF GE: p= 0,5848; TF GM: p= 0,1509; TF S: p= 0,9525).
Der Vergleich von tumornahen und tumorfernen obengenannten Strukturen
erbrachte für die nahezu TIMP-3-negative Gefäßmedia der einfachen Adenome
hochsignifikante Expressionsunterschiede zu den einfachen Karzinomen, die etwa
fünfmal soviel TIMP-3 aufwiesen (p= 0,0020; graphische Darstellung siehe Seite 126,
Abb.24). Das Endothel exprimierte gering und war über alle Untersuchungseinheiten
nicht unterschiedlich in der TIMP-3-Expression (p= 0,4132). Auch die Lokalisationen
„tumornah“ und „tumorfern“ waren hier nicht zueinander signifikant (p= 0,1164). Das
Ergebnisse 117
Stroma zeigte kaum Signale für TIMP-3 und war weder im Gruppenvergleich (p=
0,2887), noch im Vergleich nah-fern signifikant (p= 0,0944).
4.2.4.6 TIMP-3 in benignen Mammamischtumoren
In der physiologischen Mamma war das alveoläre Epithel der Mischtumoren
(Median 5,60) signifikant verschieden in der Ausprägung des immunhistologischen
Signals für TIMP-3 zur Kontrollgruppe (Median 0,40; p= 0,0013; graphische
Darstellung siehe Seite 124, Abb.20). Das duktale Epithel exprimierte mittelgradig
und war im Vergleich nicht signifikant verschieden in der Expression (p= 0,0017). Die
Signifikanz des p-Wertes ist dem gruppenübergreifenden Vergleich zuzuschreiben,
trifft jedoch nicht für die benignen Mammamischtumoren zu. Das Myoepithel und die
Entzündungszellen waren statistisch nicht auffällig (mE: p= 0,6066; EZ: p= 0,6186)
und zeigten geringe TIMP-3-Reaktionen. Die Werte für Median, Minimum und
Maximum können im Anhang der Tabelle 63 entnommen werden.
Beim Vergleich aller Gruppen über die Lokalisationen PM-TZ-TP hinweg waren
für das alveoläre Epithel der bMMTs sämtliche Lokalisationsvergleiche hoch
signifikant (PM-TZ: p= 0,0000; PM-TP: p= 0,0001; TZ-TP: p= 0,0033), die
Tumorgruppenvergleiche zueinander jedoch nicht statistisch auffällig (p= 0,5976).
Die physiologische Mamma wies die stärkste TIMP-3-Expression auf, danach folgten
das Tumorzentrum und die Peripherie. Die benignen Mischtumoren waren die
einzige Untersuchungsgruppe, bei der das Tumorzentrum mehr TIMP-3 exprimierte,
als die Peripherie (graphische Darstellung siehe Seite 124, Abb.20). Das duktale
Epithel zeigte zwar zwischen den Untersuchungsgruppen keine signifikanten
Unterschiede in der Expression (dE: p= 0,4380), jedoch zwischen den Lokalisationen
PM-TZ (p= 0,0076). Diese sind dem gruppenübergreifenden Vergleich zuzuschreiben
und für die benignen Mischtumoren nicht aussagekräftig, da deren Expression in
physiologischer Mamma und dem Tumorzentrum nahezu gleich war (graphische
Darstellung siehe Seite 124, Abb. 21). Beim Myoepithel waren lediglich die
Lokalisationen unterschiedlich in ihrer Signalausprägung. Hier war es der Vergleich
PM-TP, der zu einem signifikanten Ergebnis führte (p= 0,0058), sowie der Vergleich
PM-TZ, der signifikante Expressionsunterschiede erbrachte (p= 0,0484). Das
Myoepithel zeigte bei allen Tumorgruppen die höchste Expression in der
Tumorperipherie, gefolgt von Tumorzentrum und gesundem umgebenden Gewebe
(graphische Darstellung siehe Seite 125, Abb.22). Die Gruppen waren in ihrer
Ergebnisse 118
Expression nicht unterschiedlich (p= 0,4042). Die Entzündungszellen exprimierten
geringgradig und zeigten keine signifikanten Unterschiede zu anderen Gruppen (p=
0,0072). Wiederum ist der p-Wert aufgrund der Auswertungsart auffällig, jedoch für
Mischtumoren laut Tukey Test nicht zutreffend. Die Lokalisationen waren statistisch
nicht aussagekräftig (p= 0,1321).
Im Tumorzentrum der benignen Mammamischtumore war das alveoläre Epithel
(Median 4,40; Fotodokumentation 8.4, Abb. 63) in seiner Signalausprägung nicht
signifikant (aE: p= 0,0218). Auch die übrigen Epithelien und die Entzündungszellen
des Zentrums zeigten ähnlich starke Reaktionen und keine deutlichen Unterschiede
in ihrer Expression (dE: p= 0,1365; mE: p= 0,1792; EZ: p= 0,1043).
Das alveoläre Epithel der Tumorperipherie (Median 3,36) unterschied sich
signifikant in der Signalausprägung im Vergleich zu anderen Gruppen (aE: p=
0,0116), dies traf jedoch laut Tukey Test nicht für die bMMTs zu. Weder der duktale,
noch der myoepitheliale Anteil waren statistisch auffällig (dE: p= 0,1807; mE: p=
0,1306). Die Entzündungszellen waren im Vergleich zu anderen Gruppen nicht
signifikant unterschiedlich (EZ: p= 0,0370). Auch hier ergab sich der signifikante pWert durch die gruppenübergreifende Auswertung, konnte für die benignen
Mischtumoren mit Hilfe des Tukey Tests jedoch ausgeschlossen werden.
Der Tumorgesamtwert war nicht aussagekräftig. Über alle Gruppen ergab sich ein
p-Wert von 0,0241 für das alveoläre Epithel, der jedoch nicht für die bMMTs zutraf.
Alle
übrigen
Strukturen
waren
in
ihrer Signalausprägung
nicht
signifikant
unterschiedlich (dE: p= 0,3169; mE: p= 0,1303; EZ: p= 0,1124).
Weder die Lymphknotenrinde, noch das Mark zeigten mit ihrer geringgradigen
Expression im Vergleich zu anderen Gruppen auffällige TIMP-3-Signale (Lnn unv R:
p= 0,2193; Lnn unv M: p= 0,1448; Fotodokumentation 8.4, Abb. 64).
Die tumornahen Gefäße und das Stroma exprimierten nur geringe Mengen TIMP-3
und waren statistisch nicht auffällig (TN GE: p= 0,1572; TN GM: p= 0,1004; TN S: p=
0,3245).
Auch die geringgradig positiven tumorfernen Gefäße und das nahezu TIMP-3negative Bindegewebe waren im tumorgruppenübergreifenden Vergleich nicht
aussagekräftig (TF GE: p= 0,5848; TF GM: p= 0,1509; TF S: p= 0,9525).
Ergebnisse 119
Der Vergleich von tumornahen und tumorfernen obengenannten Strukturen
erbrachte für die Gefäßmedia der benignen Mischtumoren Expressionsunterschiede
zu den einfachen Karzinomen, die etwa doppelt soviel TIMP-3 in beiden
Lokalisationen aufwiesen mit p= 0,0453 (graphische Darstellung siehe Seite 126,
Abb.24). Das Endothel exprimierte gering und war über alle Untersuchungseinheiten
nicht unterschiedlich in der TIMP-3-Expression (p= 0,4132). Auch die Lokalisationen
„tumornah“ und „tumorfern“ waren hier nicht zueinander signifikant (p= 0,1164). Das
Stroma exprimierte fast kein TIMP-3 und war weder im Gruppenvergleich (p=
0,2887), noch im Vergleich nah-fern signifikant (p=0,0944).
4.2.4.7 TIMP-3 in komplexen Karzinomen
In der physiologischen Mamma war das alveoläre Epithel der komplexen
Karzinome (Median 5,76) hoch signifikant verschieden in der Ausprägung des
immunhistologischen Signals für TIMP-3 zur Kontrollgruppe (Median 0,40; p= 0,0013;
graphische Darstellung siehe Seite 124, Abb.20). Das duktale Epithel (median 4,00)
war ebenfalls im Vergleich zu Kontrollgruppe hoch signifikant verschieden (Median
0,48; p= 0,0017; graphische Darstellung siehe Seite 124, Abb.21). Das Myoepithel
und die Entzündungszellen exprimierten geringgradig und waren statistisch nicht
auffällig (mE: p= 0,6066; EZ: p= 0,6186). Die Werte für Median, Minimum und
Maximum können im Anhang der Tabelle 63 entnommen werden.
Beim Vergleich aller Gruppen über die Lokalisationen PM-TZ-TP hinweg waren
für das mittelgradig exprimierende alveoläre Epithel der komplexen Karzinome
sämtliche Lokalisationsvergleiche hoch signifikant (PM-TZ: p= 0,0000; PM-TP: p=
0,0001; TZ-TP: p= 0,0033), die Tumorgruppenvergleiche zueinander jedoch
statistisch nicht auffällig (p= 0,5976). Die physiologische umgebende Mamma zeigte
dabei das deutlichste, das Tumorzentrum die schwächste TIMP-3-Reaktion
(graphische Darstellung siehe Seite 124, Abb.20; Fotodokumentation 8.4, Abb. 65
und 66). Das duktale Epithel zeigte in der Expression zwar keine signifikanten
Unterschiede zwischen den Untersuchungsgruppen (p= 0,4380), jedoch zwischen
den Lokalisationen PM-TZ (p= 0,0076), wobei hier die umgebende Mamma etwa die
gleiche Expression zeigte, wie die Tumorperipherie und eine etwas höhere, als das
Tumorzentrum.
Der
sehr
deutlich
signifikante
Wert
ergibt
sich
aus
der
gruppenübergreifenden Vergleichsweise (graphische Darstellung siehe Seite 124,
Abb.21). Beim Myoepithel waren lediglich die Lokalisationen unterschiedlich in ihrer
Ergebnisse 120
Signalausprägung. Hier war es der Vergleich PM-TP, der zu einem signifikanten
Ergebnis führte (p= 0,0058), sowie der Vergleich PM-TZ, der signifikante
Expressionsunterschiede erbrachte (p= 0,0484). Die höchste Expression aller
Lokalisationen wies hier die Tumorperipherie auf, gefolgt vom Zentrum und der
umgebenden Mamma (graphische Darstellung siehe Seite 125, Abb.22). Die
Gruppen waren in ihrer Expression nicht unterschiedlich (p= 0,4042). Die
Entzündungszellen, die in alle drei Bereichen geringradig exprimierten, zeigten
hochsignifikante Unterschiede im Vergleich zu den mittelgradig TIMP-3-positiven
einfachen Karzinomen (p= 0,0081; graphische Darstellung siehe Seite 125, Abb.23).
Die Lokalisationen waren statistisch nicht aussagekräftig (p= 0,1321).
Im Tumorzentrum der komplexen Karzinome war das alveoläre Epithel (Median
3,28) in seiner Signalausprägung nicht signifikant (aE: p= 0,0218). Auch die übrigen
Epithelien und die Entzündungszellen des Zentrums zeigten keine deutlichen
Unterschiede in ihrer geringgradigen Expression (dE: p= 0,1365; mE: p= 0,1792; EZ:
p= 0,1043).
Das alveoläre Epithel der Tumorperipherie (4,48) unterschied sich signifikant in der
Signalintensität im Vergleich zur Kontrollgruppe (Median 0,40; p= 0,0116; graphische
Darstellung siehe Seite 124, Abb. 21). Weder der mittelgradig exprimierende duktale,
noch der gering positive myoepitheliale Anteil waren statistisch auffällig (dE: p=
0,1807; mE: p= 0,1306). Die Entzündungszellen (Median 2,80) waren im Vergleich
nicht signifikant unterschiedlich mit anderen Gruppen (p= 0,0370). Auch hier ergab
sich der signifikante p-Wert durch die gruppenübergreifende Auswertung, konnte für
die komplexen Karzinome jedoch ausgeschlossen werden.
Der Tumorgesamtwert war nicht aussagekräftig. Über alle Gruppen ergab sich ein
p-Wert von 0,0241 für das alveoläre Epithel, der jedoch nicht für die komplexen
Karzinome zutraf. Alle übrigen Strukturen waren in der TIMP-3-Signalausprägung der
Tumorgruppen nicht signifikant unterschiedlich (dE: p= 0,3169; mE: p= 0,1303; EZ:
p= 0,1124).
Weder die Lymphknotenrinde (Median 2,64), noch das Mark (Median 4,20) zeigten
im Vergleich zu anderen Gruppen statistisch auffällige TIMP-3-Signale (Lnn unv R:
p= 0,2193; Lnn unv M: p= 0,1448; Fotodokumentation 8.4, Abb. 67).
Ergebnisse 121
Die geringgradig exprimierenden tumornahen Gefäße und das nur leicht positive
Stroma waren statistisch nicht auffällig (TN GE: p= 0,1572; TN GM: p= 0,1004; TN S:
p= 0,3245).
Auch die tumorfernen Gefäße, die geringe Mengen TIMP-3 exprimierten, und das
leicht positive Bindegewebe waren im tumorgruppenübergreifenden Vergleich nicht
aussagekräftig (TF GE: p= 0,5848; TF GM: p= 0,1509; TF S: p= 0,9525).
Der Vergleich von tumornahen und tumorfernen obengenannten Strukturen
erbrachte
für
die
Gefäßmedia
der
komplexen
Karzinome
keine
Expressionsunterschiede (p= 0,0323). Der signifikante p-Wert bezog sich auf andere
Gruppen. Das Endothel war über alle Untersuchungseinheiten nicht unterschiedlich
in der TIMP-3-Expression (p= 0,4132). Auch die Lokalisationen „tumornah“ und
„tumorfern“ waren hier nicht zueinander signifikant (p= 0,1164). Das Stroma war
weder im Gruppenvergleich (p= 0,2887), noch im Vergleich nah-fern signifikant
(p=0,0944). Alle genannten Strukturen exprimierten in den Lokalisationen „nah“ und
„fern“ geringgradig TIMP-3.
4.2.4.8 TIMP-3 in einfachen Karzinomen
In der physiologischen Mamma war das alveoläre Epithel (Median 5,00) der
einfachen
Karzinome
signifikant
verschieden
in
der
Ausprägung
des
immunhistologischen Signals im Vergleich zur Kontrollgruppe (Median 0,40; p=
0,0013; graphische Darstellung siehe Seite 124, Abb. 20). Das duktale Epithel
(Median 5,24) war im Tukey Test nicht signifikant verschieden im Vergleich zu
anderen
Gruppen
(p=
0,0017).
Das
Myoepithel
(Median
1,32)
und
die
Entzündungszellen (Median 4,40) waren statistisch nicht auffällig (mE: p= 0,6066;
EZ: p= 0,6186). Die Werte für Median, Minimum und Maximum können im Anhang
der Tabelle 65 entnommen werden.
Beim Vergleich aller Gruppen über die Lokalisationen PM-TZ-TP hinweg waren
für das alveoläre Epithel der einfachen Karzinome sämtliche Lokalisationsvergleiche
hoch signifikant (PM-TZ: p= 0,0000; PM-TP: p= 0,0001; TZ-TP: p= 0,0033), die
Tumorgruppenvergleiche zueinander jedoch nicht statistisch auffällig (p= 0,5976).
Dabei exprimierte die physiologische Mamma und die Peripherie der einfachen
Karzinome mittelgradig und etwa gleich stark, währen das Tumorzentrum deutlich
Ergebnisse 122
geringere Mengen TIMP-3 aufwies (graphische Darstellung siehe Seite 124, Abb.
20). Das duktale Epithel zeigte zwar zwischen den Untersuchungsgruppen keine
signifikanten Unterschiede in der Expression (dE: p= 0,4380), jedoch zwischen den
Lokalisationen PM-TZ (p= 0,0076), wobei die physiologische Mamma einen fast
doppelt so hohen Median (5,24) aufwies, als das Tumorzentrum (3,16; graphische
Darstellung siehe Seite 124, Abb. 21). Beim Myoepithel waren ebenfalls lediglich die
Lokalisationen unterschiedlich in ihrer Signalausprägung. Hier war es der Vergleich
PM-TP, der zu einem signifikanten Ergebnis führte (p= 0,0058), sowie der Vergleich
PM-TZ, der signifikante Expressionsunterschiede erbrachte (p= 0,0484). Die höchste
Expression war in der Tumorperipherie zu finden, gefolgt vom Tumorzentrum und der
umgebenden Mamma (graphische Darstellung siehe Seite 125, Abb. 22).
Die
Gruppen waren in ihrer Expression nicht unterschiedlich (p= 0,4042). Die deutlich in
allen
drei
Lokalisationen
exprimierenden
Entzündungszellen
zeigten
im
Tumorgruppenvergleich eine Signifikanz zu den geringgradig positiven komplexen
Adenomen (p= 0,0003), einfachen Adenomen (p= 0,0143) und komplexen
Karzinomen (p= 0,0081). Die graphische Darstellung hierzu findet sich auf der Seite
125, Abb. 23.
Im Tumorzentrum der einfachen Karzinome war das alveoläre Epithel (Median 3,20;
Fotodokumentation 8.4, Abb. 68) in seiner Signalausprägung nicht signifikant (p=
0,0218)
im
Gruppenvergleich.
Auch
die
übrigen
Epithelien
und
die
Entzündungszellen des Zentrums zeigten keine deutlichen Unterschiede in ihrer
Expression (dE: p= 0,1365; mE: p= 0,1792; EZ: p= 0,1043).
Das alveoläre Epithel der Tumorperipherie (Median 5,04; Fotodokumentation 8.4,
Abb.69) exprimierte deutlich, unterschied sich jedoch im Vergleich zu anderen
Gruppen nicht in der Signalausprägung (aE: p= 0,0116). Der signifikante p-Wert
entstand durch die gruppenübergreifende Auswertung, konnte für die einfachen
Karzinome jedoch ausgeschlossen werden. Weder der duktale, noch der
myoepitheliale Anteil, die etwas weniger TIMP-3 zeigten, als das alveoläre Epithel,
waren im Gruppenvergleich statistisch auffällig (dE: p= 0,1807; mE: p= 0,1306). Die
Entzündungszellen (Median 6,00) waren signifikant unterschiedlich zu den
komplexen Adenomen (Median 1,92; p= 0,0370; graphische Darstellung siehe Seite
125, Abb. 23).
Ergebnisse 123
Der Tumorgesamtwert war nicht aussagekräftig. Über alle Gruppen ergab sich ein
p-Wert von 0,0241 für das alveoläre Epithel, der jedoch nicht für die einfachen
Karzinome zutraf. Alle übrigen Strukturen waren in ihrer Signalausprägung im
gruppenübergreifenden Vergleich nicht signifikant unterschiedlich (dE: p= 0,3169;
mE: p= 0,1303; EZ: p= 0,1124).
Weder die Lymphknotenrinde (Median unverändert 2,80; p= 0,1306; Median
metastasiert 2,64; p= 0,2193), noch das Mark (Median unverändert 5,04; p= 0,1365;
Median metastasiert 3,92; p= 0,1448) zeigten im Vergleich zu anderen Gruppen
statistisch auffällige TIMP-3-Signale.
Die geringgradig exprimierenden tumornahen Gefäße und das schwach positive
Stroma waren statistisch nicht auffällig (TN GE: p= 0,1572; TN GM: p= 0,1004; TN S:
p= 0,3245).
Auch die tumorfernen Gefäße und das Bindegewebe zeigten geringe TIMP-3Reaktionen
und
waren
im
tumorgruppenübergreifenden
Vergleich
nicht
aussagekräftig (TF GE: p= 0,5848; TF GM: p= 0,1509; TF S: p= 0,9525).
Der Vergleich von tumornahen und tumorfernen obengenannten Strukturen
erbrachte für die Gefäßmedia der einfachen Karzinome (die tumornah etwas mehr
TIMP-3 aufwiesen als tumorfern) Expressionsunterschiede im Vergleich zu den
komplexen Adenomen (p= 0,0248), den einfachen Adenomen (p= 0,0020) und den
benignen Mischtumoren (p= 0,0453). Diese Tumorgruppen exprimierten in beiden
Lokalisationen etwa die gleich Menge TIMP-3 (graphische Darstellung siehe Seite
126, Abb. 24). Das Endothel exprimierte gering- bis mittelgradig und war in der TIMP3-Expression über alle Untersuchungseinheiten nicht unterschiedlich (p= 0,4132).
Auch die Lokalisationen „tumornah“ und „tumorfern“ waren hier nicht zueinander
signifikant (p= 0,1164). Das Stroma zeigte sich geringgradig TIMP-3-positiv und war
weder im Gruppenvergleich (p= 0,2887), noch im Vergleich nah-fern signifikant
(p=0,0944).
Die erhobenen Daten für tumornahe und tumorferne Emboli (Anhang 10.2; Tab.
37) konnten aufgrund der zu geringen Datenmenge nicht statistisch ausgewertet
werden.
Ergebnisse 124
Abbildung 20: TIMP-3-Expression im alveolären Epithel in der physiologischen Mamma (PM), im Tumorzentrum (TZ) und in der
Tumorperipherie (TP); aE: alveoläres Epithel, TGr: Tumorgruppe KG: Kontrollgruppe, HYP: Hyperplasiegruppe, kAd: komplexe
Adenome, eAd: einfache Adenome, kCa: komplexe Karzinome, eCa: einfache Karzinome
Abbildung 21: TIMP-3-Expression im duktalen Epithel in der physiologischen Mamma (PM), im Tumorzentrum (TZ) und in der
Tumorperipherie (TP); dE: duktales Epithel, TGr: Tumorgruppe; KG: Kontrollgruppe, HYP: Hyperplasiegruppe, kAd: komplexe
Adenome, eAd: einfache Adenome, kCa: komplexe Karzinome, eCa: einfache Karzinome (fehlende Werte von Tumorzentrum und –
peripherie bei den komplexen Adenomen aufgrund zu geringer Datenmengen)
Ergebnisse 125
Abbildung 22: TIMP-3-Expression im Myoepithel in der physiologischen Mamma (PM), im Tumorzentrum (TZ) und in der
Tumorperipherie (TP); mE: Myoepithel, TGr: Tumorgruppe; KG: Kontrollgruppe, HYP: Hyperplasiegruppe, kAd: komplexe Adenome,
eAd: einfache Adenome, kCa: komplexe Karzinome, eCa: einfache Karzinome
Abbildung 23: TIMP-3-Expression in Entzündungszellen in der physiologischen Mamma (PM), im Tumorzentrum (TZ) und in der
Tumorperipherie (TP), EZ: Entzündungszellen, TGr: Tumorgruppe; KG: Kontrollgruppe, HYP: Hyperplasiegruppe, kAd: komplexe
Adenome, eAd: einfache Adenome, kCa: komplexe Karzinome, eCa: einfache Karzinome
Ergebnisse 126
Abbildung 24: TIMP-3-Expression in der Gefäßmedia (GM), tumornah (TN) und tumorfern (TF); KG: Kontrollgruppe, HYP:
Hyperplasiegruppe, kAd: komplexe Adenome, eAd: einfache Adenome, kCa: komplexe Karzinome, eCa: einfache Karzinome
Diskussion 127
5
Diskussion
Im Folgenden werden die Ergebnisse der immunhistologischen Untersuchungen von
MMP-7, MMP-11, MMP-12 und TIMP-3 vorwiegend anhand von Studien diskutiert,
die beim Menschen in Bezug auf Tumorentstehung, -progression und deren
Metastasierung im Zusammenhang mit diesen MMPs erstellt wurden, da hierzu
Untersuchungsergebnisse bei Hunden entweder noch nicht vorhanden oder nicht
zahlreich sind.
5.1
Immunhistologischer Nachweis von MMP-7
Bei der Auswertung des Matrilysin-Signals über alle Untersuchungsgruppen waren
statistisch 5 Strukturen auffallend: das Myoepithel, die Entzündungszellen, das
Stroma und die Gefäßbestandteile Endothel und Media. Die genannten Strukturen
unterschieden sich in ihrem MMP-7-Signal besonders in der Gruppe der komplexen
Adenome signifikant von den übrigen Untersuchungsgruppen.
Das Myoepithel exprimierte bei der Gruppe der komplexen Adenome sowohl im
Tumorzentrum, als auch in der Tumorperipherie sehr deutlich und unterschied sich
hiermit zum Teil hochsignifikant von den Myoepithelien der Gruppen „einfache
Adenome“, „komplexe Karzinome“ und „einfache Karzinome“, die nur ein maximal
halb so starkes Matrilysin-Signal aufwiesen. Diese Expressionsunterschiede ergaben
sich sowohl bei den Vergleichen der Tumorzentren, als auch beim Vergleich der
Tumorperipherien dieser Gruppen. Auch der Vergleich der drei Lokalisationen
„umgebende physiologische Mamma“, „Tumorzentrum“ und „Tumorperipherie“
miteinander erbrachte hochsignifikante Ergebnisse zwischen den komplexen
Adenomen einerseits, die stärker exprimierten und den einfachen Adenomen, den
komplexen Karzinomen und den einfachen Karzinomen andererseits, die geringere
MMP-7-Signale aufwiesen. Der Tumorgesamtwert für das Myoepithel der komplexen
Adenome unterschied sich ebenfalls hochsignifikant von dem der einfachen
Adenome und dem der komplexen Karzinome, wobei die komplexen Adenome ein
etwa doppelt so starkes MMP-7-Signal als die anderen beiden Gruppen aufwiesen.
Bislang wurden weder in der Human-, noch in der Veterinärmedizin Untersuchungen
zu MMP-7-Expression in Myoepithelien durchgeführt. Allerdings ist bekannt, dass
sich myoepitheliale Zellen von benignen humanen Brusttumoren in ihrem Phänotyp
Diskussion 128
von physiologischen Myoepithelien unterscheiden (NICKOLAY et al., 2003).
Immunhistologisch konnte bei 56% der untersuchten Fälle ein kompletter Verlust von
CD10
(auch
NEP
oder
Neprilysin
oder
neutrale
Endopeptidase
genannt)
nachgewiesen werden, das die Zellmigration inhibiert (HARRISSON et al., 1995;
SUMITOMO et al., 2000), die Apoptose fördert (CUTRONA et al., 1999) und wichtige
Signalwege für Wachstumsfaktoren beeinflusst (GANJU et al., 1996). Möglicherweise
ist die signifikant erhöhte Expression von MMP-7 in myoepithelialen Zellen der
vorliegenden Arbeit ein Hinweis auf ähnliche Effekte in benignen myoepithelialen
Tumoren, da auch Matrilysin die Invasivität von Tumorzellen fördert (GONZALEZ et
al., 2008; LI et al., 2008), die Apoptose inhibiert (FINGLETON et al., 2001) und das
Wachstum von Tumoren begünstigt (JIANG et al., 2005).
In einer Studie von HOLLIDAY et al. (2009) wurde in vitro gezeigt, dass die humane
myoepitheliale Zellpopulation der Brust als Bindeglied zwischen den luminalen und
den stromalen Zellen fungiert. Es wurden isolierte luminale Zellen mit myoepithelialen
Zellen kokultiviert, was zur Lokalisierung der Myoepithelien um die luminalen Zellen
führte. Die Beigabe von tumorassoziierten Fibroblasten führte zur Auflösung dieses
glandulären Aufbaus, während Fibroblasten aus der gesunden Mamma dies nicht
vermochten. Die Zugabe von MMP-Inhibitoren verhinderte den strukturauflösenden
Effekt der tumorassoziierten Fibroblasten auf die luminalen und myoepithelialen
Zellen. Möglicherweise hängt der in der vorliegenden Arbeit ermittelte signifikant
erhöhte MMP-7-Wert der myoepithelialen Zellen mit dem ebenfalls signifikant
erhöhten Matrilysin-Wert des Stromas zusammen und dient dem Wachstum und der
Invasivität der Brusttumoren. Ob dieser Effekt speziell auf MMP-7 zutrifft, müsste in
weiteren Untersuchungen geklärt werden. Ebenfalls zu klären bleibt, warum die
myoepithelialen Anteile der komplexen Adenome, jedoch nicht die der komplexen
Karzinome signifikant mehr MMP-7 als die übrigen Untersuchungsgruppen
exprimierten. Möglicherweise hat die Dignität eines Tumors Einfluss auf die
Expression von MMP-7 im Myoepithel, Publikationen hierzu sind bislang jedoch nicht
erschienen.
Die Entzündungszellen zeigten über alle Untersuchungsgruppen zwischen den
Lokalisationen „physiologische Mamma“ und „Tumorzentrum“ hochsignifikante
Unterschiede.
Dabei
exprimierten
die
Entzündungszellen
des
gesunden
umgebenden Gewebes bei allen Gruppen doppelt bis maximal etwa siebenmal soviel
Diskussion 129
MMP-7, als die Tumorzentren der entsprechenden Tumorgruppe, die nur sehr
geringe Matrilysin-Signale aufwiesen.
Entzündungszellen in Mammatumoren setzen sich mengenmäßig schwankend aus
Makrophagen,
Plasmazellen,
Mastzellen
und
Lymphozyten
zusammen
und
beeinflussen die Angiogenese, das Tumorwachstum und die Invasion neoplastischer
Zellen in umliegendes Gewebe (ADAMS et al., 1987; COUSSENS and WERB, 2002;
DANIEL et al., 2005). Die Expression von MMP-7 in mononukleären Zellen von
Brusttumoren war mit einer schlechten klinischen Prognose und dem Auftreten von
entfernt liegenden Metastasen assoziiert (GONZALEZ et al., 2007). Eine ungeklärte
Frage ist, ob die Entzündungszellen durch Tumorzellen zur MMP-Expression
angeregt werden, oder sich durch die Tumorprogression gegenseitig induzieren
(GONZALEZ et al., 2007). Die in dieser Arbeit signifikant erhöhten MMP-7-Werte der
Entzündungszellen des den Tumor umgebenden gesunden Gewebes könnten dafür
sprechen, dass die Entzündungszellen nicht direkt durch die Tumorzellen zur MMPExpression veranlasst werden, sondern auf die Progression des Tumors selbst
reagieren. Dies bleibt jedoch ungeklärt. Im Gegenzug wird die MMP-Genexpression
in epithelialen Tumorzellen unter Anderem durch inflammatorische Zellen induziert,
die den Tumor umgeben (VISSCHER et al., 1994; NIELSEN et al., 2001;
NAKOPOULOU et al., 2002b; de WEVER und MAREEL, 2003). Möglicherweise
wirken die in der vorliegenden Arbeit untersuchten MMP-7-exprimierenden
Entzündungszellen des umgebenden gesunden Gewebes auf diese Weise auf die
neoplastischen Zellen ein und könnten ein Erklärungsansatz für die hohen MMP-7Expressionslevel der myoepithelialen neoplastischen Zellen in dieser Lokalisation
sein.
Das Stroma zeigte tumornah zwischen den komplexen Adenomen und allen übrigen
Untersuchungsgruppen hochsignifikante, beziehungsweise signifikante (zu den
einfachen Karzinomen) Unterschiede. Dabei erschien das Matrilysin-Signal der
komplexen Adenome deutlich, während die übrigen Untersuchungsgruppen nahezu
kein MMP-7 aufwiesen.
Tumorfern war die Matrilysin-Expression des Stromas der komplexen Adenome nur
noch etwa halb so stark, während bei den anderen Untersuchungsgruppen die
Expressionsstärke ähnlich der tumornah Ermittelten, nämlich nahezu null war. Dies
führte beim Vergleich der MMP-7-Expression des tumorfernen Stromas der
Diskussion 130
komplexen Adenome zu signifikanten Ergebnissen mit den benignen Mischtumoren,
der Hyperplasiegruppe und der Kontrollgruppe. GARCIA et al. (2010) fand bei der
Untersuchung der Expressionslevel von MMP-7 in Brusttumoren die auffälligsten
Unterschiede beim Vergleich von stromalen Zellen unterschiedlicher Lokalisationen.
Dabei
waren
ortsbezogene
Expressionsunterschiede
signifikanter
als
Ortsunabhängige. Fibroblastenähnliche Zellen des Tumorzentrums exprimierten bei
GARCIA et al., 2010 in signifikant höherer Prozentzahl MMP-7, als die
entsprechenden Zellen der Tumorperipherie. In der hier vorliegenden Arbeit war bei
allen Untersuchungsgruppen im Stroma tumornah stets mehr MMP-7 Signal
nachzuweisen, als tumorfern (Stroma wurde in dieser Arbeit jedoch nicht in
Tumorzentrum und Tumorperipherie untersucht). Der tumornah höhere MMP-7-Level
im Stroma könnte mit der Induzierung der MMP-7-Produktion durch Tumorzellen in
stromalen Zellen erklärbar sein, die tumornah (beziehungsweise im Tumorzentrum
bei del CASAR et al., 2009; GARCIA et al., 2010; GONZALEZ et al., 2010b) stärker
ausgeprägt ist, als tumorfern (beziehungsweise in der Tumorperipherie bei del
CASAR et al., 2009; GARCIA et al., 2010; GONZALEZ et al., 2010b). Ob dies jedoch
auch
an
der
möglicherweise
höheren
Zelldichte
im
Tumorzentrum,
oder
ausschließlich einer höheren Aktivität der Tumorzellen im Zentrum liegt, bleibt
ungeklärt. Es ist auch bekannt, dass nicht nur Tumor-, sondern auch Stromazellen
durch Wachstumsfaktor- und Zytokinsekretion parakrin die MMP-Expression in
neoplastischen Geweben regulieren (MUELLER und FUSENIG, 2004). Eventuell
könnten die im Vergleich zu anderen Gruppen relativ hohen tumornahen Werte des
Stromas
der
komplexen
Adenome
durch
die
gut
ausgeprägten
Bindegewebsstrukturen der meist vollständig erhaltenen Kapsel erklärbar sein, die
die neoplastischen Zellen aktivieren könnten.
Das
Gefäßendothel erbrachte
tumornah
bei der statistischen
Auswertung
hochsignifikante Ergebnisse beim Vergleich der komplexen Adenome, die sehr
deutliche MMP-7-Signale aufwiesen, und allen übrigen Untersuchungsgruppen, die
nahezu Matrilysin-negativ waren.
Die Gefäßmedia war die einzige Struktur, die nicht im Vergleich der komplexen
Adenome mit anderen Gruppen auffiel. Tumorfern unterschied sich die Media der
Kontrollgruppe, die MMP-7-negativ war, signifikant von der Media der einfachen
Karzinome, sowie von der Media der Hyperplasiegruppe, die deutlich mehr MMP-7
exprimierten.
Diskussion 131
Einige MMPs regulieren die Angiogenese in zwei verschiedene Richtungen: Zum
Einen mobilisieren sie Proangiogenese-Faktoren (STETLER-STEVENSON, 1999);
zum Anderen generieren sie Angiostatin und Endostatin, die die Einsprossung von
Gefäßen verhindern (RIFKIN et al., 1999). In der vorliegenden Arbeit waren bei
Bestandteilen der Gefäße signifikant unterschiedliche Expressionsstärken für MMP-7
messbar, sowohl im Endothel, als auch in der Media.
Durch
die
Behandlung
von
Fibroblasten
mit
MMP-7
konnten
in
vitro
Endothelzellsprossungen hervorgerufen werden (ITOH et al., 2007). Stromale Zellen
haben folglich neben dem Einfluss auf neoplastische Zellen auch aktivierende
Wirkung auf die Angiogenese. Die Endothelzellsprossung scheint im apikalen
Kompartiment der Zellen induziert zu werden. In einer kaninen Nieren-Zelllinie wurde
MMP-7 vor allem in diesem Bereich nachgewiesen. Dies lässt auf einen dort
lokalisierten Matrilysin-Aktivator schließen, der proliferative Prozesse auslöst
(HARREL et al., 2005). In einer weiteren Untersuchung resultierte die Unterbrechung
der Interaktion von „CD-44 heparan sulfate proteoglycane“ (CD44HSPG) und MMP-7
der laktierenden Mamma in einer Relokalisierung des MMPs von der apikalen zur
basalen Zelloberfläche und damit in steigendem Zelltod und übermäßig starkem
Gewebs-“Remodelling“ (STAMENKOVIC, 2003; YU et al., 2002). MMP-7 hat
demnach einen nachweislichen Einfluss auf die Angiogenese in der Mamma und bei
Tumoren, wobei die Lokalisierung und das Vorhandensein von Aktivatoren eine
erhebliche Rolle zu spielen scheint. Die Expression von MMP-7 im Endothel bei
humanen Tumorarten war mit einer schlechten Überlebensrate und malignem
Wachstum assoziiert (SIER et al., 2008). Dies könnte in der vorliegenden Arbeit
teilweise bestätigt werden, da die Gefäßmedia der einfachen Karzinome die
deutlichste (mittelgradige) MMP-7-Expression aufwies, während die Media der
Kontrollgruppe Matrilysin-negativ war.
Neu und in der Humanmedizin nicht beschrieben ist die in dieser Arbeit
hervorstechende MMP-7-Expression der kaninen komplexen Adenome in allen
oben beschriebenen Strukturen im Vergleich zu den anderen Tumorarten und dem
Kontrollgewebe. Es wird vermutet, dass Matrilysin eher die Überlebenszeit der
Tumorzellen, als deren Invasivität fördert (RUDOLPH-OWEN et al., 1998). Dies
könnte möglicherweise eine Erklärung für das vermehrte Auftreten von MMP-7 in
gutartigen Tumoren sein. Zwei Mechanismen führen zu der erhöhten Lebensdauer
der Tumorzellen: Zum Einen spaltet MMP—7 den Fas-Liganden an der
Diskussion 132
Zelloberfläche, wobei die dabei entstehende lösliche Form sFasL, die an den FasRezeptor bindet, eine signifikant herabgesetzte Effektivität zur Einleitung der
Zellapoptose besitzt (SHEU et al., 2001). Zum Anderen spaltet MMP-7 auch eine
Vorstufe von heparinbindendem EGF an der Zelloberfläche; das freigesetzte aktive
Molekül bindet an die ErbB1- und ErbB4-Rezeptoren. Dies führt zu weiteren Signalen
zum Schutz vor Apoptose (MITSIADES et al., 2001). Möglicherweise könnten diese
Vorgänge bei langsam wachsenden gutartigen Tumoren eine Steigerung der MMP-7Expression erklären. In einer Studie, die benigne myoepitheliale Brusttumoren mit
Spindelzellkarzinomen
vergleicht
(NICKOLAY
et
al.,
2003),
wurden
immunhistologisch zwar nicht MMP-7, jedoch zahlreiche andere Enzyme und
Zellstrukturen untersucht, um deren Eignung als diagnostische Marker festzustellen.
Hierbei zeigte sich, dass Adenomyoepitheliome weniger häufig CD10 und Myosin
exprimieren, jedoch unter anderem eine höhere Expression von Steroid-Rezeptoren
aufwiesen.
Andere
Studien
wiesen
Östrogen-Rezeptor-positive
Adenomyoepitheliome und benigne Mischtumoren der Brust beim Menschen nach
(ROSEN et al., 2001; SEGEN et al., 1986). Möglicherweise ist das vermehrte
Vorhandensein von Steroid-Rezeptoren in komplexen benignen Brusttumoren ein
Erklärungsansatz für die signifikant erhöhte MMP-7-Expression der kaninen
komplexen Adenome. Matrilysin war bei Androgenrezeptor-positiven humanen
Brusttumoren erhöht (GONZALEZ et al., 2008). Diese Rezeptoren schienen in der
Lage zu sein, MMP-7 aufzuregulieren. Dies führte auch zu einem gesteigerten
Invasionspotential der Tumorzellen. Ob die MMP-7-Expression jedoch ursächlich mit
dem Rezeptorstatus der komplexen Adenome zusammenhängt, bleibt ungeklärt.
Auch andere Studien bringen Matrilysin mit benignen Tumoren in Zusammenhang.
Die Elimination von MMP-7 in Mäusen führte zu einer zahlenmäßigen Verringerung
von benignen intestinalen Tumoren (WILSON et al., 1997). In einer Publikation von
MYLONA et al., 2005, wurde die Matrilysin-Expression mit weniger aggressiven
Phänotypen von Brusttumoren assoziiert, jedoch eine Einflussnahme auf das
Invasionsverhalten festgestellt. Möglicherweise zeigt sich dies auch in der
vergleichsweise hohen, statistisch jedoch nicht signifikant zu anderen Gruppen
unterschiedlichen MMP-7-Expression der metastasierten Lymphknoten der hier
untersuchten einfachen Karzinome. Matrilysin ist in der Lage, neben Kollagen IV und
Laminin auch Integrine auf der Tumorzelloberfläche zu spalten (ABDEL-GHANY et
al., 2001). Es bildet mit CD44 einen Komplex an der Zelloberfläche, vermutlich, um
Diskussion 133
tumorzellvermittelte Matrixdegeneration zu koordinieren (YU et al., 2002). Indem es
E-Cadherin spaltet, induziert es das invasive Potential der Tumorzellen (DAVIES et
al., 2001; NOE et al., 2001). Frühere Theorien postulierten den Einfluss von MMPs
auf das Metastasierungsverhalten einzig über das „Remodelling“ der extrazellulären
Matrix
(GARCIA
et
al.,
2010).
Inzwischen
sind
die
Möglichkeiten
der
Tumorzellbeeinflussung vielfältig untersucht. Ihre Fähigkeit, Wachstumsfaktoren,
Zelloberflächenrezeptoren,
Zelladhäsionsmoleküle
und
Chemokine,
beziehungsweise Zytokine zu spalten (EGEBLAD und WERB, 2002; RIFKIN et al.,
1999; STERNLICHT und WERB, 2001) sind ebenso belegt, wie die Bildung eines
aggressiven Tumorzellphänotyps, der sich apoptoseresistent zeigt (FINGLETON et
al.,
2001).
Es
scheint,
dass
die
Tumorzellen
der
Metastasen
eine
Induktionsmöglichkeit der Proteinproduktion in den Lymphknoten-spezifischen Zellen
besitzen. Dies gilt vor allem für MMP-7 in stromalen Zellen der entarteten
Lymphknoten und betont die Bedeutung der stromal-epithelialen Interaktion
(GARCIA et al., 2010). Vor der Untersuchung von GARCIA et al. gab es keine
Untersuchungen
über
MMP-
und
TIMP-Expressionsprofile
in
assoziierten
Lymphknoten von Brusttumoren. Allerdings sind drainierende Lymphknoten höchst
aufschlussreich,
da
sie
mit
einer
Vielzahl
von
löslichen
Faktoren
des
Brusttumorgewebes in Kontakt kommen und, wie auch diese Untersuchung bei der
Betrachtung der einfachen Karzinome zeigt, von aggressiven Klonen des
Primärtumors durchsetzt sein können, die signifikant mehr MMP-7 exprimieren
(GARCIA et al., 2010). MMP-7-Expression korrelierte zum Beispiel auch mit der
Lymphknotenmetastasierung beim Plattenepithelkarzinom der Mundhöhle (DE
VICENTE et al., 2007) und diente dort als prognostischer Indikator. Daher könnten
die auffallend hohen, jedoch statistisch nicht signifikant unterschiedlichen Werte der
Lymphknotenmetastasen der einfachen Karzinome in der vorliegenden Arbeit einen
Hinweis auf den Einfluss von MMP-7 auf das Invasionsverhalten von malignen
Tumoren geben. Aufgrund der relativ geringen Fallzahl der metastasierten einfachen
Karzinome dieser Arbeit bleiben die Ergebnisse statistisch interpretierbar.
Diskussion 134
5.2
Immunhistologischer Nachweis von MMP-11
Beim immunhistologischen Nachweis von MMP-11 war die Gruppe der benignen
Mammamischtumoren mit ihrer sehr deutlichen MMP-11-Expression zum Teil
hochsignifikant
verschieden
zu
den
anderen
Untersuchungsgruppen.
Diese
herausragenden Signalunterschiede betrafen die Strukturen „alveoläres“ und
„duktales
Epithel“,
„Myoepithel“,
„Entzündungszellen“,
„Lymphknotenrinde“,
„Gefäßendothel“ und „Stroma“. Der Vergleich der Lokalisationen „tumornah“ und
„tumorfern“ ergab bei den benignen Mischtumoren im Vergleich zu den übrigen
Untersuchungsgruppen signifikante und hochsignifikante Expressionsunterschiede
für die Strukturen „Gefäßendothel“ und „Stroma“. Die Lokalisationsvergleiche
zwischen dem physiologischen umgebenden Gewebe, dem Tumorzentrum und der
Tumorperipherie waren über alle Untersuchungsgruppen für die alveolären und
duktalen Epithelien, das Myoepithel und die Entzündungszellen
zum Teil
hochsignifikant, zum Teil signifikant unterschiedlich.
Das alveoläre Epithel wies im physiologischen umgebenden Mammagewebe der
benignen Mischtumoren etwa doppelt so starke MMP-11-Signale als das gesunde
Kontrollgewebe auf und war somit signifikant verschieden zu deren mittelgradigen
Stromelysin-3-Expression. Zusätzlich war das alveoläre Epithel der Mischtumoren im
Vergleich
der
Lokalisationen
„physiologische
Mamma“-
„Tumorzentrum“-
„Tumorperipherie“ signifikant verschieden zu den Gruppen „komplexe Adenome“,
„einfache Adenome“ und „einfache Karzinome“. Dabei zeigten die benignen
Mischtumoren stets die höchste MMP-11-Expression je Lokalisation im Vergleich zu
den anderen Untersuchungsgruppen, die nur mittelgradige Stromelysin-3-Signale
aufwiesen. In der Literatur korreliert eine erhöhte MMP-11-Expression meist mit einer
ungünstigen klinischen Prognose (DUFFY et al, 2000). Dies konnte in der
vorliegenden Arbeit so nicht bestätigt werden, da die malignen Tumoren eine
wesentlich
schwächere
MMP-11-Expression
aufwiesen,
als
die
benignen
Mammamischtumoren. Allerdings sind keine Arbeiten zu MMP-11-Signalen in der
kaninen
Mamma bekannt.
Dies
könnte den
Schluss
zulassen,
dass
die
neoplastischen Veränderungen der Gesäugeleiste der Hündin möglicherweise
anderen Gesetzmäßigkeiten folgen, als die humaner Brusttumoren. Auch die in der
Diskussion 135
vorliegenden Arbeit vorgenommene Differenzierung in einzelne Epithelzellarten fehlt
bei den meisten humanen Publikationen, so dass ein direkter Vergleich nur bedingt
möglich ist. Das deutliche Signal in den alveolären Epithelien der Tumoren ist
bemerkenswert, da die meisten MMPs vermehrt von stromalen Zellen und nicht von
Tumorzellen produziert werden (DE WEVER und MAREEL, 2002; NOEL et al.,
2000).
Das
duktale
Epithel
der
benignen
Mischtumoren
exprimierte
sowohl
im
Tumorzentrum, als auch in der Peripherie der Tumoren und im umgebenden
physiologischen Gewebe sehr deutlich und unterschied sich hochsignifikant von der
nur etwa halb so starken Expression der Gruppen „komplexe Adenome“, „einfache
Adenome“ und „einfache Karzinome“ über alle drei genannten Lokalisationen.
Angaben zu Expression von MMP-11 in duktalen Epithelien waren in der Literatur
nicht
verzeichnet.
Bei
KOHRMANN
(2009)
war
das
MMP-11-Signal
in
Mammatumorzellen im Vergleich zu normalem Mammagewebe erhöht. Diese
Untersuchungsergebnisse können durch die vorliegende Arbeit gestützt werden, da
das Duktepithel des Kontrollgewebes deutlich weniger MMP-11 exprimierte, als die
entsprechende Struktur der Tumorgruppen. Die Art der Zellen wurde in der oben
genannten Publikation jedoch nur als „Tumorzellen“ spezifiziert, detaillierte
Vergleiche der Ergebnisse sind daher nicht möglich. Auch PACHECO et al. (1998)
und KOSSAKOWSKA et al. (1996) hatten einen moderaten Anstieg von MMP-11mRNA, -Propeptiden und –Peptiden bei humanen Brusttumorzellen festgestellt.
Das Myoepithel zeigte ebenfalls zwischen den benignen Mischtumoren, die in allen
Tumorbereichen und dem umgebenden physiologischen Gewebe ein deutliches
MMP-11-Signal aufwiesen und den Gruppen „einfache Adenome“, „komplexe
Karzinome“ und „einfache Karzinome“ signifikante Unterschiede. Die Medianwerte
dieser Untersuchungsgruppen zeigten eine nur maximal halb so starke Stromelysin3-Expression
im
Vergleich
zu
den
hochgradig
exprimierenden
benignen
Mischtumoren. Das Myoepithel benigner kaniner Mammamischtumoren wurde
bereits untersucht und spielt eine Rolle bei der Metaplasie in Knorpel oder
Knochengewebe. Die Histogenese benigner Mammamischtumoren wurde kontrovers
diskutiert. ALLEN (1940) erklärte die Entstehung von Knorpel durch die Metaplasie
epithelialer Zellen. Andere Autoren (HUGGINS und MOULDER, 1944; BLOOM,
1954; PALMER und MONLUX, 1979) führten die Entstehung von Knorpel und
Knochen durch die Metaplasie stromaler Zellen zurück. PULLEY (1973) und
Diskussion 136
BOMBARD und SANDERSLEBEN (1974) unterstützten die These, dass Knorpel und
Knochen in Mischtumoren durch Metaplasie myoepithelialer Zellen entsteht, eine
Vermutung, die auch in neueren immunhistologischen Studien bestätigt wird
(GÄRTNER, 1999). Die Expression von MMP-11 in Myoepithelzellen benigner
Mischtumoren wurde bislang nicht untersucht. Das vorgefundene identische DNAMaterial der epithelialen und mesenchymalen Bestandteile benigner Mischtumoren
legt jedoch eine gemeinsame Histogenese dieser Zellen nahe und zahlreiche
Umbauvorgänge zeigen, dass vor allem die Myoepithelien benigner Mischtumoren
aktiviert sind (GÄRTNER et al., 1999). Möglicherweise ist der aktive Zustand der
Myoepithelien auch ein Erklärungsansatz für die vermehrte Expression von MMP-11
bei kaninen Mischtumoren. NEDERBRAGT et al. (2005) identifizierten ebenfalls die
Myoepithelzellen als Ausgangspunkt der Knorpelentstehung in benignen kaninen
Mischtumoren mittels „epithelial to mesenchymal transition“ (EMT). Zudem scheinen
Myofibroblasten im Tumorstroma Vorläuferzellen von Knorpelzellen zu sein und in
physiologischem Mammagewebe sind Myofibroblasten fähig, sich in Myoepithelzellen
zu differenzieren. Dies zeigt, dass in Mischtumoren vielfältige Umbauprozesse
induziert werden und die Myoepithelzellen und die stromalen Zellen durch EMT eng
miteinander verknüpft sind. Dies könnte eine Erklärung für die hohen MMP-11-Werte
in den myoepithelialen Zellen benigner Mischtumoren liefern, obwohl in der Literatur
bislang bei humanen Tumoren MMP-11-Signale vorrangig in stromalen Zellen
beschrieben wurden.
Sämtliche untersuchten Epithelien zeigten im Tumor und auch im umgebenden
physiologischen Mammagewebe, das vermutlich durch die Neoplasie aktiviert war,
deutlich höhere MMP-11-Expression als die vergleichbaren Strukturen der
Kontrollgruppe. Bei den benignen Mammamischtumoren ergaben sich bei allen
Epithelien doppelt so hohe Werte als bei den Epithelien der Kontrollgruppe.
Bei der Untersuchung der Entzündungszellen stellten sich beim Vergleich der
benignen Mischtumoren mit den übrigen Tumorgruppen ebenfalls signifikante
Unterschiede dar. In allen untersuchten Lokalisationen wiesen die Mischtumoren
eine mittelgradige MMP-11-Expression in den Entzündungszellen auf, wobei die
Signalstärke für Stromelysin-3 in der Tumorperipherie am stärksten ausgeprägt war.
Die anderen Tumorgruppen exprimierten nur etwa halb soviel MMP-11, oder
weniger. Zum Teil waren die inflammatorischen Zellen der einzelnen Lokalisationen
anderer
Tumorgruppen
nahezu
negativ.
Die
Expression
von
MMP-11
in
Diskussion 137
Entzündungszellen des Tumorzentrums wurde mit dem Auftreten von entfernten
Metastasen in Zusammenhang gebracht (GARCIA et al., 2010). Dies konnte durch
die vorliegende Arbeit nicht bestätigt werden, da die einfachen Karzinome im
Tumorzentrum nahezu keine MMP-11-Expression in den inflammatorischen Zellen
aufwiesen. Allerdings umfasste die Untersuchungsgruppe der einfachen Karzinome
dieser Arbeit sowohl metastasierende, als auch nicht metastasierende Tumoren. Die
sehr geringen MMP-11-Signale im Tumorzentrum der nicht metastasierenden
einfachen Karzinome hatten Einfluss auf den insgesamt sehr geringen Medianwert in
dieser Lokalisation. Die metastasierenden einfachen Karzinome allein betrachtet,
zeigten im Tumorzentrum einen Wert, der mit dem Median des Tumorzentrums der
für
Entzündungszellen
Mammamischtumoren
am
deutlichsten
vergleichbar
Metastasierungsneigung
von
war.
exprimierenden
Damit
Brusttumoren
bei
ergibt
benignen
sich
für
MMP-11-Expression
die
in
Entzündungszellen des Tumorzentrums ein anderes Bild und den Ergebnissen von
GARCIA et al. (2010) wird durch die vorliegende Arbeit nicht widersprochen. Ein
direkter Zusammenhang zwischen der MMP-11-Expression in inflammatorischen
mononukleären Zellen und der Neigung zur Metastasenbildung wurde in dieser
Arbeit jedoch nicht untersucht. Die hier auftretenden relativ hohen Stromelysin-3Werte im Tumorzentrum benigner Mischtumoren wurden in der Literatur bislang nicht
beschrieben.
Ob
diese
Ergebnisse
Besonderheiten
der
kaninen
Mamma
widerspiegeln, müsste noch geklärt werden.
Bei der vergleichenden Gegenüberstellung der Lymphknoten ergaben sich für die
Lymphknotenrinde
zum
Teil
hochsignifikante
Unterschiede
zwischen
den
metastasierten Lymphknoten der einfachen Karzinome und den unveränderten
Lymphknoten der benignen Mischtumoren, sowie den der komplexen Karzinome.
Dabei wies die neoplastisch veränderte Lymphknotenrinde der einfachen Karzinome
eine
deutliche
MMP-11-Expression
auf,
während
die
unveränderte
Lymphknotenrinde der Mischtumoren und der komplexen Karzinome nur geringe
Mengen von Stromelysin-3 zeigten. Das Auftreten von MMP-11 in Tumoren steigert
deren Invasionsfähigkeit und die Metastasierungsrate (KOSSAKOWSKA et al., 1996;
VIZOSO et al., 2007). Dies kann mit der Reorganisation des lymphatischen
Netzwerkes rund um die Tumoren in Zusammenhang stehen (GARCIA et al., 2010).
Es ist bekannt, dass innerhalb der Brusttumoren nahezu keine lymphatischen
Gefäße anzutreffen sind (VLEUGEL et al., 2004). Es gibt jedoch Hinweise auf eine
Diskussion 138
höhere peritumorale Dichte an lymphatischen Gefäßen (AGARWAL et al., 2005), was
die lymphatische Migration metastatischer Zellen in die Axillarlymphknoten
erleichtern und auf eine eventuelle Aktivierung des umliegenden Gewebes schließen
lassen könnte. Möglicherweise führen auch die relativ hohen MMP-11-Werte in der
Tumorperipherie und dem umliegenden Gewebe der hier vorliegenden Arbeit zur
Bildung lymphatischer Gefäße. Die deutliche Stromelysin-3-Expression in der
Lymphknotenrinde der malignen Tumorarten im Vergleich zur entsprechenden
Struktur der benignen Mischtumoren stützt somit eventuell Ergebnisse aus
Publikationen, die die MMP-11-Expression bei Brusttumoren mit der Neigung zur
Metastasierung assoziieren (CHENG et al., 2010; KOSSAKOWSKA et al., 1996;
VIZOSO et al., 2007). Das Auftreten von Lymphknotenmetastasen, verbunden mit
einer
schlechten
klinischen
Prognose
korrelierte
auch
bei
fehlenden
Progesteronrezeptoren mit verstärkter MMP-11-Expression (CHENG et al., 2010).
Der Rezeptorstatus der einzelnen Tumorgruppen war jedoch nicht Gegenstand der
vorliegenden Arbeit. Ob einfache Karzinome der kaninen Mamma ebenfalls einen
Mangel an Progesteronrezeptoren aufweisen, müsste noch geklärt werden. Generell
konnten für Mamatumoren der Hündin Östrogen- und Progesteronrezeptoren
nachgewiesen
werden
(OWEN,
1979).
Das
Vorhandensein
hoher
Progesteronspiegel in der kaninen Mamma führt zur Entstehung hyperplastischer
und neoplastischer Noduli (OWEN, 1979). Der hormonelle Einfluss auf die
Expression von MMP-11 der kaninen Mama wurde bislang nicht untersucht, ein
Zusammenhang lässt sich jedoch vermuten.
Das
Stroma
exprimierte
nur
schwach
und
war
ausschließlich
im
Lokalisationsvergleich „tumornah“- „tumorfern“ signifikant unterschiedlich zwischen
den benignen Mammamischtumoren und allen anderen Tumorgruppen, wobei sich
die Mischtumoren mit ihrer geringen MMP-11-Expression
Stromelysin-3-negativen
Stromazellen
der
anderen
von den nahezu
Tumorgruppen
abhoben.
Ähnliche Ergebnisse erzielte eine Untersuchung, die fibroblastenähnliche Zellen bei
Brusttumoren auf MMP-11-Expression untersuchte. Die Stromelysin-3-Expression
war schwach oder fehlte bei unstimulierten tumorassoziierten Stromazellen (WANG
und TETU, 2002). Zusätzlich könnte die bereits oben erwähnte Umwandlung
stromaler Zellen in Myoepithelien einen Erklärungsansatz für die relativ geringen
MMP-11-Werte im Stroma und die hohen Werte des Myoepithels bieten.
Diskussion 139
Das Gefäßendothel der benignen Mammamischtumoren exprimierte tumornah etwa
vier- bis fünfmal soviel MMP-11 als die sich hochsignifikant unterscheidenden
Gruppen der komplexen und einfachen Adenome, sowie der komplexen Karzinome.
Endothelzellen zählen gemeinsam mit fibroblastenähnlichen Zellen und Spindelzellen
zu den reaktiven stromalen Zellen, die im Tumorumfeld zu finden sind und sich unter
anderem durch MMP-11-Produktion an der Tumorprogression beteiligen (TETU et
al., 2006). Eine in vitro Studie wies die Aufregulierung von Stromelysinen durch den
„basic fibroblast growth factor“ (bFGF) nach. Dies führte zur Angiogenese
(BURBRIDGE et al., 2002).
Der Vergleich des MMP-11-Signals im Endothel zwischen den Lokalisationen
„tumornah“ und „tumorfern“ zeigte ebenfalls hochsignifikante Unterschiede zwischen
den benignen Mischtumoren, und allen anderen Tumorgruppen, die in deutlich
geringerem Ausmaß MMP-11 exprimierten als die bMMTs. Dabei zeigten die
benignen Mischtumoren eine mittel- bis hochgradige Expression in beiden
Lokalisationen, die übrigen Tumorgruppen wiesen tumorfern eine höhere Expression
auf, als in der Nähe der Neoplasien. Auffallend war zusätzlich die Tumorgruppe der
einfachen Karzinome. Sie unterschieden sich mit ihrer tumorfern mittelgradigen
MMP-11-Expression hochsignifikant von den einfachen und komplexen Adenomen,
die in dieser Lokalisation nur geringe Stromelysin-3-Reaktionen zeigten. Dies
bestätigt sich in der Literatur, in der das Vorhandensein von MMP-11 mit einer
ungünstigeren klinischen Prognose und gesteigerter Invasivität in Verbindung
gebracht wird (DUFFY et al., 2000).
Die Lokalisationsvergleiche zwischen dem physiologischen umgebenden Gewebe,
dem Tumorzentrum und der Tumorperipherie waren über alle Untersuchungsgruppen
für
die
alveolären
und
duktalen
Epithelien,
das
Myoepithel
und
die
Entzündungszellen zum Teil hochsignifikant, zum Teil signifikant unterschiedlich.
Dabei zeigten stets die benignen Mischtumoren das stärkste MMP-11-Signal im
Vergleich zu den anderen Untersuchungsgruppen. Das deutlichste Stromelysin-3Signal wies die physiologische Mamma auf, gefolgt von der Tumorperipherie und
dem
Tumorzentrum.
Möglicherweise
konnte
das
aktivierte
umgebende
physiologische Mammagewebe eine MMP-11-Produktion in den Tumorzellen der
Tumorrandbereiches
induzieren
und
somit
das
Wachstum
der
Neoplasie
begünstigen. Vergleiche zwischen einzelnen Tumorbereichen, wie dem Zentrum und
der invasiven Front sind in der Literatur nicht zahlreich. GARCIA et al. (2010) fanden
Diskussion 140
jedoch
einen
Zusammenhang
von
MMP-11-Expression
mononukleärer
inflammatorischer Zellen des Tumorzentrums und auftretenden Metastasen.
Allerdings scheinen regionale Lymphknotenmetastasen bei Mammatumoren der
Hündin eine weniger bedeutende Rolle als bei Brusttumoren des Menschen zu
spielen (OWEN, 1979). Dies könnte den in dieser Arbeit vorgefundenen Mangel an
MMP-11-Signal in Entzündungszellen des Tumorzentrums und dem fehlenden
Auftreten in Metastasen erklären. FRESE et al. konnte in einer Untersuchung 1989
jedoch bei etwa der Hälfte der exstirpierten Lymphknoten maligner Mammatumoren
der Hündin zum Zeitpunkt der Erstoperation bereits Lymphknotenmetastasen
histologisch nachweisen, die je nach Tumorart zum Teil abhängig von der Größe des
Primärtumors waren. Allerdings ist bei der hier vorliegenden Studie zu bedenken,
dass die Fallzahl (n=9) der metastasierten malignen Mammatumoren nicht sehr groß
war und die Fälle der nicht metastasierten Karzinome und der benignen Tumoren
überwogen. Deshalb ist das geringgradige Ergebnis für die MMP-11-Expression in
Metastasen eventuell nicht direkt mit den Resultaten von GARCIA et al. (2010)
vergleichbar.
Bei einer vergleichenden Studie kaniner und humaner Mammatumoren konnten
grundlegende Unterschiede, aber auch Gemeinsamkeiten für Neoplasien von Hund
und Mensch festgestellt werden (OWEN, 1979). So war die Inzidenz kaniner
Mammatumoren dreimal so hoch wie die humaner Brusttumoren (OWEN, 1979;
DONNAY et al., 1989). Beim Hund findet sich ein kontinuierlicher Anstieg von
Mammatumorerkrankungen bis etwa zu Alter von zehn bis elf Jahren, danach fällt die
Erkrankungsrate wieder ab (FRESE et al., 1989). Eine identische Inzidenzrate für
Mensch und Hund ergibt sich bis zu einem Alter von 44 bis 47 Jahren (entsprechend
einem Hundealter von etwa 7 Jahren), danach steigt die Erkrankungsrate des
Menschen langsamer weiter an, während die der Hündin sich auf die vorhergehend
beschriebene Weise verhält. Die meisten Neoplasien der Gesäugeleiste der Hündin
waren gemischte Tumoren und etwa ein Drittel aller Mammatumoren waren
Karzinome, die im Aufbau denen der Frau ähneln (OWEN, 1979). Die WHOKlassifikation für kanine Tumoren und Dysplasien folgt weitestgehend der WHOKlassifikation humaner Tumoren.
Im Folgenden sollen mögliche Ursachen für die hervorstechende MMP-11Expression bei benignen Mammamischtumoren diskutiert werden. Benigne
Tumoren der Hündin sind in der Regel komplex oder gemischt (HAMPE und
Diskussion 141
MISDORP, 1974; BASTIANELLO, 1983; NERURKAR et al., 1989; HELLMEN und
LINDGREN, 1989; MOULTON, 1990) und charakterisiert durch spindelzellige,
myoepitheliale Zellen, sowie Knorpel, Knochen oder Fett und epitheliale Zellen
(HAMPE und MISDORP, 1974; MOULTON, 1990).
MMP-11 nimmt auf die Desmoplasie bei der Tumorgenese Einfluss (MOTRESCU
und RIO, 2008). Durch das Eindringen von Tumorzellen in umliegendes Gewebe wird
in Adipozyten die MMP-11-Produktion induziert. Dies führt zu
reduzierter
Differenzierung der Präadipozyten und kehrt die Differenzierung maturer Fettzellen
um.
Diese
Stromelysin-3-vermittelte
Dedifferenzierung
führt
zur
Anhäufung
nonmaligner peritumoraler fibroblastenähnlicher Zellen, die das Tumorzellwachstum
und die –progression begünstigen. Dies ist ein bidirektionaler Einfluss von MMP-11
auf die Desmoplasie bei der Tumorgenese und zeigt eine molekulare Verbindung
zwischen Obesitas und Tumorosen. Der benigne Mammamischtumor enthält
Komponenten, die morphologisch an epitheliale (luminale oder myoepitheliale) und
an mesenchymale Tumoren erinnern. Die mesenchymalen Bestandteile produzieren
Knorpel und / oder Knochen und / oder Fett in Kombination mit Bindegewebe.
Möglicherweise ist der Anteil an Fettgewebe bei den benignen Mischtumoren ein
Erklärungsansatz für die hier ermittelten relativ hohen Stromelysin-3-Werte.
Aufgrund der Malignität und der schlechten Prognose befasst sich die Literatur über
humane
Brusttumoren
Mammamischtumoren
meist
fehlen
mit
Karzinomen.
Literaturangaben.
Zu
Die
humanen
benignen
invasiven
tubulären
Adenokarzinome und die invasiven soliden Karzinome der Hündin stellen
histologisch die besten Vergleichsmöglichkeiten für humane Brusttumoren dar
(OWEN, 1979), daher sind hierzu vermutlich mehr Veröffentlichungen zu finden. Laut
FRESE et al. (1989) stellt die häufige Beteiligung myoepithelialer Zellen an
Neoplasien der Mamma eine Besonderheit der Hündin dar, die in ähnlicher Weise
beim Menschen nur selten vorkommt. Die Sonderstellung dieser Zellen wird in der
vorliegenden Arbeit bestätigt, da im Myoepithel und in benignen Mischtumoren,
deren Bestandteile wie bereits erwähnt eng mit der Histogenese der Myoepithelien
verbunden sind, auffallende MMP-11-Expression zu verzeichnen war. Auch PALTIAN
wies 2006 in ihrer Dissertation die Aufregulierung eines weiteren MMPs (MMP-9),
sowie von TIMP-1 in epithelialen zentralen und peripheren Zellen der benignen
Mischtumoren der Hündin nach. Die vorliegende Arbeit zeigt somit ebenfalls die
Notwendigkeit, besonders die benignen Mammamischtumoren der Hündin auf
Diskussion 142
Expression von MMPs zu untersuchen, um einen besseren Einblick in die
Wirkungsweise von MMPs auf die kanine Mamma zu erhalten.
5.3
Immunhistologischer Nachweis von MMP-12
Bei der Auswertung des MMP-12-Signals über alle Untersuchungsgruppen waren
statistisch 6 Strukturen auffallend: das alveoläre Epithel, das Myoepithel, die
Entzündungszellen, die Rinde und das Mark der assoziierten Lymphknoten und die
Gefäßmedia. Die höchsten MMP-12-Level wurden in den Gruppen der einfachen
Karzinome und der benignen Mischtumoren nachgewiesen. Diese unterschieden sich
zum Teil hochsignifikant von der weitaus geringeren MMP-12-Expression der übrigen
Untersuchungsgruppen. Eine Besonderheit wurde bei der statistischen Auswertung
der Kontrollgruppe festgestellt, deren Gefäßmedia die stärkste MMP-12-Expression
aller Untersuchungsgruppen in dieser Struktur zeigte.
Das alveoläre Epithel wies einzig beim Tumorgruppenvergleich über alle
Lokalisationen („physiologische Mamma“-„Tumorzentrum“-„Tumorperipherie“) hinweg
signifikante Unterschiede in der MMP-12-Expression auf. Diese betrafen die Gruppen
„einfache Karzinome“, die mittelgradig MMP-12 exprimierten und „einfache
Adenome“, die nur geringe Mengen Makrophagen-Elastase exprimierten. Auch die
benignen Mammamischtumoren zeigten mittelgradige MMP-12-Signale
und
unterschieden sich signifikant von den einfachen Adenomen, die nur gering
exprimierten. Die Betrachtung des alveolären Epithels getrennt nach Lokalisation
über alle Untersuchungsgruppen erbrachte keine signifikanten Ergebnisse. Generell
zeigte in jeder Untersuchungsgruppe die umgebende physiologische Mamma stets
das stärkste Signal für die Makrophagen-Elastase, gefolgt von der Tumorperipherie.
Das Tumorzentrum wies in jeder Tumorgruppe das geringste MMP-12-Signal auf. So
erbrachten die Vergleiche zwischen der physiologischen Mamma und dem
Tumorzentrum,
sowie
zwischen
Tumorzentrum
und
–peripherie
über
alle
Untersuchungsgruppen hochsignifikante Expressionsunterschiede. Der Vergleich
zwischen physiologischer Mamma und der Tumorperipherie ergab signifikante
Expressionsunterschiede. Möglicherweise hängt die geringere MMP-12-Expression
im Tumorzentrum mit der dort geringeren Anzahl von Gefäßen und damit eventuell
verbundener geringerer Sauerstoffspannung zusammen. Es wurde eine Korrelation
zwischen der MMP-12-Expression und der vorhandenen Sauerstoffspannung im
Gewebe festgestellt (ONO et al., 2008). Allerdings wurden dabei MMP-12-Signale in
Diskussion 143
tumorassoziierten Makrophagen untersucht. Ob dieser Zusammenhang auch für die
Makrophagen-Elastasen-Expression in epithelialen Zellen gilt, wurde bislang nicht
beschrieben. Es existieren in der Literatur nur wenige Angaben zur MMP-12Expression in epithelialen Zellen. Die Makrophagen-Elastasen-Expression bei
humanen Plattenepithelkarzinomen der Vulva korrelierte mit gesteigerter Invasivität
(KERKELÄ et al., 2002). Auch bei nicht-kleinzelligen Lungenkarzinomen des
Menschen korrelierte die MMP-12-Expression in epithelialen Zellen mit dem
Auftreten von lokalen Rezidiven und metastatischen Krankheitsverläufen (HOFMANN
et al., 2005). Die in der vorliegenden Arbeit ermittelten relativ hohen Werte des
alveolären Epithels der malignen einfachen Karzinome im Vergleich zu den
gutartigen Tumorarten könnten möglicherweise diese Ergebnisse stützen.
Es konnten keine Angaben zu benignen Mammamischtumoren und MMP-12Expression gefunden werden. Da jedoch bereits bei der Untersuchung von MMP-11
die
benignen
Mischtumoren
der
Hündin
durch
stark
von
den
übrigen
Untersuchungsgruppen abgehobene Expression auffiel, könnte diese Tumorart beim
Hund in Bezug auf die MMP-Expression eine Besonderheit darstellen. Weitere
Untersuchungen
dieser
Tumorgruppe
könnten
den
Einfluss
der
Matrixmetalloproteinasen auf Mischtumoren eventuell klären.
Das Myoepithel wies für alle Untersuchungsgruppen beim Vergleich über die
Lokalisationen nur ein sehr geringes MMP-12-Signal auf. Eine Ausnahme stellte die
Gruppe der benignen Mischtumoren dar, die besonders in der Tumorperipherie
deutliche Makrophagen-Elastase-Signale zeigte. Diese Gruppe unterschied sich
somit signifikant von den Gruppen „komplexe Adenome“ und „einfache Adenome“.
Die herausragende Expression in der Tumorperipherie der benignen Mischtumoren
stellte
eine
Besonderheit
dieser
Gruppe
dar.
Für
alle
anderen
Untersuchungsgruppen zeigte die umgebende physiologische Mamma eine zwar
schwache, jedoch etwa doppelt so hohe Expression, als die Tumorperipherie. Das
Zentrum der Neoplasien war bei allen Gruppen nahezu MMP-12-negativ.
Dementsprechend erbrachte der statistische Vergleich zwischen der physiologischen
Mamma und dem Tumorzentrum hochsignifikante und der Vergleich zwischen dem
Tumorzentrum und der Tumorperipherie signifikante Ergebnisse. Die Betrachtung
des Myoepithels getrennt nach Lokalisation ergab keine signifikanten Unterschiede
zwischen den Untersuchungsgruppen. Eine MMP-12-Expression in myoepithelialen
Zellen wurde bislang in der Literatur nicht beschrieben.
Diskussion 144
Die Entzündungszellen wiesen in der Gruppe der einfachen Karzinome
das
stärkste immunhistologische Signal aller Gruppen auf und exprimierten doppelt bis
etwa zwanzigmal so viel MMP-12 als die entsprechende Struktur anderer
Untersuchungsgruppen. So unterschieden sich die einfachen Karzinome im
lokalisationsübergreifenden Vergleich hochsignifikant von den Gruppen „komplexe
Adenome“ und „einfachen Adenome“. Auch in den Entzündungszellen der benignen
Mammamischtumoren ließ sich MMP-12 nachweisen. Diese unterschieden sich im
lokalisationsübergreifenden Vergleich in ihrer Makrophagen-Elastasen-Expression
hochsignifikant von den Gruppen „komplexe Adenome“ und „einfache Adenome“, die
kaum exprimierten. Der Vergleich aller Untersuchungsgruppen zwischen den
einzelnen
Lokalisationen
(„physiologische
Mamma“-
„Tumorzentrum“-
„Tumorperipherie“) erbrachte hochsignifikante Expressionsunterschiede zwischen
der physiologischen Mamma, die in jeder Gruppe den höchsten MMP-12-Level
aufwies, und dem Tumorzentrum, das nur geringe Makrophagen-Elastase-Mengen in
Entzündungszellen zeigte. Dies könnte damit zu erklären sein, dass es zwei Sorten
von
assoziierten
Makrophagen
im
Tumorumfeld
gibt.
Zum
Einen
die
Tumorsuppressiven, die mikrobizid, immunstimulierend und tumorzellzytotoxisch
sind.
Zum
Anderen
gibt
es
tumorunterstützende
Makrophagen
mit
immunsuppressiver und tumorwachstumsfördernder Wirkung (ONO et al., 2008). Es
ist möglich, dass in der vorliegenden Arbeit beide Arten von Makrophagen in den
Präparaten vorkommen.
In der Literatur wird das Vorkommen von MMP-12 vor allem in Makrophagen
beschrieben (SHAPIRO et al., 1999). Im Gegensatz zu Makrophagen im gesunden
Mammagewebe, die vor allem immunstimulierend wirken, indem sie beispielsweise
tumorassoziierte Antigene präsentieren und für die Lyse von Tumorzellen sorgen,
sind tumorassoziierte Makrophagen (TAMs) in Neoplasien für Tumorprogression,
Metastasierung und Angiogenese verantwortlich. Vor allem maligne Brusttumoren
des Menschen sind häufig von einem deutlichen Entzündungsgeschehen begleitet
(LEWIS et al., 2006). Die TAMs , die mitunter auch tumorsuppressiv wirken können
(ONO et al., 2003), exprimieren unter anderem MMP-12 und sind assoziiert mit einer
geringeren Überlebenszeit der Patienten (LEEK et al.,1999; TSUTSUI et al., 2005),
Tumorzellproliferation in Mammakarzinomen (TSUTSUI et al., 2005), Angiogenese in
malignen Mammatumoren (LEEK et al, 1996; POLVERINI et al.,1987) und deren
Metastasierung (HANADA et al., 2000; LEEK et al, 1996). Dabei werden die TAMs
Diskussion 145
durch geringe Sauerstoffspannung, niedrigen pH-Wert und steigende Laktatwerte im
Gewebe und vermutlich mittels Phagozytose des durch Nekrose entstehenden
Zelldedritus chemotaktisch angelockt (LEWIS et al., 2006). Mittels MMP-12Expression kommt es zur Herabregulierung von Serotonin. Dies senkt den
Angiostatin-Level und fördert so die Angiogenese, auch in sauerstoffarmen Gebieten
des Tumors (NOCITO et al., 2008). Dies wiederum führt zur Tumorprogression. In
der vorliegenden Arbeit konnten diese Untersuchungen gestützt werden, da die
malignen,
metastasierenden
einfachen
Karzinome
die
deutlichste
MMP-12-
Expression aller untersuchten Gruppen in Entzündungszellen aufwiesen. Die
Makrophagen mit MMP-12-Signal lagen bei den einfachen Karzinomen auffallend
häufig in aktiven Bereichen des Tumors, wie in den Randgebieten, oder an Stellen,
an denen der Tumor in das gesunde Mammagewebe eindrang. Dies könnte ein
weiterer Hinweis darauf sein, dass MMP-12-exprimierende tumorassoziierte
Makrophagen die Motilität neoplastischer Zellen beeinflussen und somit deren
Progression begünstigen. Auch Studien von GOSWAMI et al. (2005) und WYCKOFF
et al. (2004) bestätigen diese These. ONO et al. (2008) zeigte den Zusammenhang
zwischen der Anzahl der TAMs und einer schlechten Prognose bei Brustkrebs. Bei in
vitro induzierten Mammatumoren von Mäusen waren tumorassoziierte Makrophagen
in Bereichen zu finden, in denen die Basalmembran durchbrochen wurde.
DOMAGALA et al. (1992) und HAGEMANN et al. (2004) zeigten, dass eine
Kokultivierung von Makrophagen mit Tumorzellen, abhängig von TNF-α und
Matrixmetalloproteinasen
deren
invasives
Potential
erhöht.
Die
deutlichen
Expressionsunterschiede zwischen den in der vorliegenden Arbeit untersuchten
malignen einfachen Karzinomen und den benignen Tumorarten, die ein nur
schwaches Signal der Makrophagen-Elastase aufwiesen, könnten ebenfalls für eine
ungünstige Prognose bei vermehrter MMP-12-Expression in Entzündungszellen des
Tumors sprechen.
Da die TAMs, unter Anderem auch durch MMP-12-Expression, für Angiogenese und
das Vordringen in hypoxische Bereiche des Tumors zuständig sind, gibt es einen
therapeutischen Ansatz, der tumorassoziierte Makrophagen als therapeutische
Vektoren für Gene oder Medikamente nutzen will. Dies wäre eine sehr nützliche
Entwicklung, da die meisten therapeutischen Vektoren nicht in der Lage sind, mehr
als einige hundert Mikrometer entfernt ihrer Applikationsstelle (den Gefäßen) zu
wirken.
Dadurch
bleiben
avaskuläre
Tumorbereiche
bei
den
meisten
Diskussion 146
Therapieansätzen
unerreicht
(LEWIS
et
al,
2006).
Es
wurden
kleine
Brusttumorsphäroide mit Makrophagen infiltriert, die mit Adenoviren infiziert waren.
Diese Adenoviren beinhalteten ein Hypoxie-gesteuertes Vorstufen-Aktivierendes
Enzym
(Zytochrom
Sphäroiden die
P450).
Nach
der
korrespondierende
Makrophagen-Infiltration
wurden
den
Medikamenten-Vorstufe, Zyclophosphamid,
appliziert und die hypoxischen Makrophagen in den Sphäroiden wandelten die
Vorstufe
in
einen
aktiven
zytotoxischen
Metaboliten
um
(4-Hydroxy-
Zyclophosphamid). Dieses Zellmembran-permissive Zytotoxin diffundierte dann von
den infizierten Makrophagen, wurde in die DNA der umgebenden Tumorzellen
eingebaut und verursachte deren Zelltod während der anschließenden Mitose
(GRIFFITHS et al, 2000). Somit könnten tumorinfiltrierende, MMP-12-exprimierende
Makrophagen als prognostischer Indikator dienen und eventuell für Therapieansätze
geeignet sein.
Auch bei den Strukturen Rinde und Mark der assoziierten Lymphknoten waren
wieder die Gruppen „einfache Karzinome“ und „benigne Mammamischtumoren“ mit
ihrer relativ hohen MMP-12-Expression zum Teil signifikant, zum Teil hochsignifikant
verschieden zur geringeren Signalstärke der übrigen Untersuchungsgruppen. Die
metastasierten
Lymphknoten
der
einfachen
Karzinome
zeigten
mit
ihrer
mittelgradigen Expression in der Rinde den höchsten Wert sämtlicher untersuchter
Strukturen für MMP-12 und unterschieden sich so hochsignifikant von den gering
exprimierenden einfachen Adenomen und signifikant von
den schwach positiven
komplexen Adenomen.
Eine Metastasierung von assoziierten Lymphknoten maligner Mammatumoren
korrelierte mit erhöhtem Vorkommen von TAMs in hypoxischen Bereichen des
Tumors (CORRY et al., 2004). Möglicherweise stehen die sich von den anderen
Tumorarten abhebenden MMP-12-Werte der metastasierten Lymphknoten der
einfachen Karzinome dieser Arbeit in Zusammenhang mit deren Expressionsprofil in
den Entzündungszellen. TAMs scheinen sowohl in der Ablösung metastatischer
Zellen vom Primärtumor, als auch bei der Entstehung von Sekundärtumoren beteiligt
zu sein (FOSTER et al., 1998; MORRIS et al., 2003). Eine erhöhte Anzahl von
Makrophagen
in
Zusammenhang
regionalen
mit
Lymphknoten-Metastasen
schlechter
Überlebensprognose
stand
für
in
die
direktem
Patienten
(SCHOPPMANN et al., 2002). Die Überlebenszeit war nicht Bestandteil der
vorliegenden
Arbeit,
allerdings
sprechen
die
hohen
MMP-12-Werte
der
Diskussion 147
metastasierten
Lymphknoten
der
einfachen
Karzinome
für
diese
Untersuchungsergebnisse. Auch exprimieren die TAMs den “lymphatic endothelial
growth factor“ (VEGF-C), was vermutlich die Bildung von Lymphgefäßen in Tumoren
begünstigt
(SCHOPPMANN
et
al.,
2002).
Dies
wiederum
erleichtert
die
Metastasierung maligner Tumoren. Die in dieser Arbeit gefundenen Werte für MMP12 bei den metastasierten Lymphknoten und den Entzündungszellen der einfachen
Karzinome waren die höchsten aller Untersuchungsgruppen. Somit konnte MMP-12Expression
mit
malignen
Brusttumoren
und
Metastasierungsverhalten
in
Zusammenhang gebracht werden und damit eventuell diese Studien stützen. Auch
HOFMANN et al. (2005) beschreiben eine Korrelation von der MMP-12-Expression
und metastatischen Krankheitsverläufen, sowie einem lokalen Wiederauftreten von
Tumoren.
Das Mark der Lymphknoten wies innerhalb der untersuchten Gruppen höhere MMP12-Werte
auf
als
Mammamischtumoren
Adenome.
die
Rinde
und
unterschied
sich
bei
den
benignen
signifikant von der geringeren Expression der komplexen
Untersuchungen
zu
MMP-12-Expression
in
benignen
Mammamischtumoren wurden in der Literatur bislang nicht beschrieben. Ob diese
Tumorgruppe wie bereits erwähnt in Bezug auf die MMP-Expression eine
Besonderheit der Hündin darstellt, könnte in weiteren Untersuchungen beleuchtet
werden. Die Nukleotid-Polymorphismen der Makrophagen-Elastase beeinflussen das
pathologische Verhalten von Brusttumoren (HUGHES et al., 2007). Möglicherweise
existieren genetische Varianten von MMP-12, die besonders in Mischtumoren
exprimieren. Vergleiche zwischen einzelnen Brusttumorgruppen und MMP-12Expression sind in der Literatur nicht beschrieben.
Die Gefäßmedia wies beim Vergleich der Werte der Kontrollgruppe und der
tumornahen Werte aller übriger Untersuchungsgruppen (ausschließlich der der
einfachen Karzinome) hochsignifikante Expressionsunterschiede für MMP-12 auf.
Dabei
exprimierte
die
Kontrollgruppe
deutlich
und
die
übrigen
Untersuchungsgruppen tumornah nur gering. Der für die Kontrollgruppe erhobene
Wert wurde sowohl mit den tumornahen, als auch mit den tumorfernen Werten der
anderen Untersuchungsgruppen verglichen. Für die tumorfern gelegenen Gefäße
dieser Untersuchungsgruppen wurden beim Vergleich mit den Expressionswerten
der Gefäßmedia der Kontrollgruppe signifikante Unterschiede festgestellt. Tumorfern
exprimierten die Tumorgruppen generell mehr (jedoch trotzdem geringgradig) MMP-
Diskussion 148
12 als tumornah. Beim Vergleich von tumornahen und tumorfernen Bereichen
zeigten die Gefäße signifikante Expressionsunterschiede zwischen den einfachen
Karzinomen einerseits und den komplexen Adenomen, den einfachen Adenomen
und den benignen Mammamischtumoren andererseits. Die einfachen Karzinome
wiesen sowohl tumornah, als auch tumorfern eine etwa doppelt so hohe MMP-12Expression auf, als die genannten drei anderen Tumorarten. Alle diese Gruppen
exprimierten jedoch noch im unteren Bereich. Die Makrophagen-Elastase beeinflusst
die Angiogenese. Allerdings ist die deutliche Expression in der Gefäßmedia bislang
in der Literatur nicht beschrieben. Ob die in dieser Arbeit ermittelte MMP-12Expression der Gefäßmedia einen Einfluss auf die Angiogenese hat, kann vermutet
werden, bleibt jedoch zu klären.
Die Angiogenese wird laut Literaturangaben vielmehr durch MMP-12-exprimierende
Makrophagen beeinflusst. Es wird ein Zusammenhang zwischen erhöhter TAMAnzahl und einem höheren vaskulären Grad der Tumorarten, einschließlich der
Brusttumoren postuliert (LEEK et al., 1996; POLVERINI et al., 1990). Die
Kokultivierung von Makrophagen und Tumorzellen steigerte die Migration von
vaskulären endothelialen Zellen in vitro und führte zur Angiogenese in vivo. Durch
MMP-12 wird Serotonin in tumorinfiltrierenden Makrophagen herabreguliert. Dies
senkt den Angiostatin-Level und fördert wie bereits erwähnt die Angiogenese
(NOCITO et al., 2008). Dabei führt ein Mangel an Serotonin zu geringerem
Tumorwachstum, aber auch zu Hypoxie und spontaner Nekrose im vorhandenen
Tumorgewebe (SICCA et al, 2002). Die durch Hypoxie angelockten Makrophagen
sorgen durch Expression von VEGF und MMP-12 wiederum für die Bildung neuer
Gefäße. In dieser Arbeit war eine hohe Vaskularisierung sowohl im gesunden
Gewebe der Mamma, als auch bei den nicht abgekapselten, häufig diffus im
Mammagewebe verteilten, einfachen Karzinomen vorzufinden. Diese Gefäßdichte
stützt die These der proangiogenetischen Wirkung der Makrophagen-Elastase und
könnte auch ein Erklärungsansatz für die hohen MMP-12-Werte in der Media des
Kontrollgewebes darstellen. Das Kontrollgewebe war meist sekretorisch tätig und
wies eine hohe Gefäßdichte auf. MMP-12 scheint somit auch auf die physiologische
Mamma der Hündin mittels Angiogenese Einfluss zu nehmen. Die MakrophagenElastasen-Expression in der Media der einfachen Karzinome hingegen deckt sich mit
Untersuchungen, die MMP-12 mit Angiogenese und einer schlechten klinischen
Prognose in Zusammenhang bringen (NOCITO et al., 2008; SICCA et al., 2002).
Diskussion 149
Manche Untersuchungen beschreiben auch einen antiangiogenen Effekt von MMP12, indem es Plasminogen in Angiostatin umwandelt (SANG et al., 1998). Dies
bestätigt auch eine neuere Studie, bei der in vitro mittels Transfektion MMP-12 in
eine endotheliale Zelllinie verbracht wurde. Dies hatte antiangiogene Wirkung
(MARGHERI et al., 2010). Der Verlust der MMP-12-Funktion in den endothelialen
Zellen führte zur Vaskularisierung. Bei der Untersuchung von hepatozellulären
Karzinomen führte das Vorhandensein von Angiostatin und MMP-12 zu einer
geringeren Dichte von Mikrogefäßen (KIM et al., 2004). Bei Hunden mit
Mucopolysaccharidose I und IV wurde MMP-12 mittels Elastindegradierung mit
Aortendilatation in Zusammenhang gebracht (METCALF et al., 2010). Die
Angiogenese-hemmende Wirkung könnte möglicherweise mit der in der vorliegenden
Arbeit
tumornah
geringeren
MMP-12-Expression
der
Gefäße
und
der
hervorstechenden Expression der Media des gesunden Gewebes in Zusammenhang
stehen.
5.4
Immunhistologischer Nachweis von TIMP-3
Die statistische Auswertung des immunhistologischen Signals für TIMP-3 ergab in
folgenden
Strukturen
hochsignifikante,
beziehungsweise
signifikante
Expressionsunterschiede zwischen den Untersuchungsgruppen: im alveolären
Epithel, im duktalen Epithel, im Myoepithel, in den Entzündungszellen und der
Gefäßmedia. Dabei exprimierten alle Tumorgruppen, besonders jedoch die einfachen
Karzinome sehr deutlich TIMP-3, wohingegen die Kontrollgruppe in allen Strukturen
nur ein schwaches Signal aufwies.
Das alveoläre Epithel des Kontrollgewebes exprimierte nur schwach und
unterschied
sich
von
der
sehr
deutlichen
Expression
des
umgebenden
physiologischen Gewebes aller Tumorgruppen zum Teil hochsignifikant, zum Teil
signifikant.
Der
Vergleich
der
Tumorgruppen
über
alle
Lokalisationen
(„physiologische Mamma“- „Tumorzentrum“- Tumorperipherie“) erbrachte für das
TIMP-3-Signal des alveolären Epithels hochsignifikante Expressionsunterschiede
zwischen der physiologischen Mamma der Tumorgruppen und dem Tumorzentrum.
Dasselbe
Ergebnis
erbrachten
die
Vergleiche
der
TIMP-3-Expression
von
physiologischer Mamma und der Tumorperipherie, sowie von Tumorzentrum und –
Diskussion 150
peripherie. Dabei exprimierte das umgebende gesunde Gewebe stets am stärksten
und deutlich, gefolgt von der mittelgradig exprimierenden Tumorperipherie und dem
gering- bis mittelgradig positiven Tumorzentrum. TIMP-3 wurde auch in anderen
Publikationen im Tumorzentrum gefunden, wobei die TIMP-3-Expression in
Tumorzellen des Zentrums mit schlechter Prognose assoziiert war (GARCIA et al.,
2010). TIMP-3 ist demnach
für den Krankheitsverlauf nicht nur günstig
einzuschätzen und die biologische Funktion als Inhibitor scheint auch an die
Lokalisation der Expression gekoppelt zu sein. So bindet TIMP-3
an die
extrazelluläre Membran, nachdem es sezerniert wurde und ist damit in der Lage,
MMPs zu hemmen, ähnlich dem membrangebundenen MMP-Inhibitor RECK. TIMP-3
antagonisiert das primäre Tumorwachstum, die Angiogenese, die Apoptose, die
Tumorinvasion und das Entstehen von Metastasen (EDWARDS, 2004). Diese
vielfältigen antitumoralen Eigenschaften könnten die höheren TIMP-3-Werte der
untersuchten Tumorgruppen in der Tumorperipherie und dem umgebenden,
vermutlich aktivierten physiologischen Mammagewebe, im Gegensatz zu den
geringeren Signalen des Kontrollgewebes der vorliegenden Arbeit erklären. Die
höchsten Werte für TIMP-3 in der vorliegenden Arbeit wurden in den Gefäßemboli
der komplexen Karzinome gemessen, die aufgrund der geringen Datenmenge jedoch
nicht statistisch ausgewertet werden konnten. Da TIMP-3 in Veröffentlichungen zu
verschiedenen Neoplasien jedoch auch mit einer besseren Prognose und einem
günstigeren klinischen Verlauf korreliert wird (EDWARDS, 2004), ist die Bedeutung
der hohen TIMP-3-Expression in den Emboli nicht ohne weiteres erklärbar.
Möglicherweise
stellt
die
auffallend
hohe TIMP-3-Expression
bei malignen
Tumorarten eine Art Gegenregulation dar. So könnten durch die höhere TIMP-3Expression ein langsameres Wachstum und so die Versorgung des Tumorgewebes
besser
gewährleistet
sein.
Verschiedene
Studien
weisen
TIMP-3
eine
tumorsupprimierende Wirkung bei verschiedenen Tumorarten nach, auch bei
malignen Tumoren. Edwards (2004) vermutet, dass TIMP-3-mRNA in Brusttumoren
die endokrine, jedoch nicht die chemotherapeutische Therapie unterstützt. Die in der
vorliegenden Arbeit ermittelten hohen TIMP-3-Werte der einfachen Karzinome
sprechen möglicherweise ebenfalls für einen hemmenden Effekt dieses Enzyms. Die
höchsten Werte für TIMP-3 wurden in der Tumorperipherie, dem Bereich des
Tumorwachstums gemessen. Vermutlich wird es hier vermehrt zur Antagonisierung
verschiedener MMPs sezerniert. Dafür spricht auch das nahezu TIMP-3-negative
Diskussion 151
alveoläre Epithel des Kontrollgewebes dieser Arbeit, da im gesunden Gewebe TIMP3 als Tumorsuppressor nicht benötigt wird. TIMP-3 wird jedoch auch mit der
Steigerung der Angiogenese in Zusammenhang gebracht. Humane Brusttumoren
können in einer „schlafenden“, langsam wachsenden Form vorliegen (ALMOG et al.,
2009). Die Umwandlung von einem „schlafenden“ in einen exponentiell wachsenden
Tumor steht in engem Zusammenhang mit seiner gesteigerten Vaskularisierung und
ist unter Anderem mit der Herabregulierung von Thrombospondin und Angiostatin,
sowie der Aktivierung von TIMP-3 verbunden. Möglicherweise stehen die hohen
TIMP-3-Werte der malignen Tumoren und der Gefäßemboli dieser Arbeit auch mit
der Vaskularisierung dieser Neoplasien in Zusammenhang.
Die statistische Auswertung des TIMP-3-Signals des duktalen Epithels ergab
zwischen der nur gering exprimierenden Kontrollgruppe einerseits und den Gruppen
„komplexe Adenome“, „einfache Adenome“ und „komplexe Karzinome“, die deutliche
TIMP-3-Signale aufwiesen hochsignifikante Unterschiede. Der Lokalisationsvergleich
erbrachte hochsignifikante Expressionsunterschiede zwischen dem Duktepithel der
umgebenden physiologischen Mamma und den Tumorzentren aller Tumorgruppen.
Dabei exprimierte die physiologische Mamma bis zu sechsmal so viel TIMP-3, wie
das Tumorzentrum. Möglicherweise ist das direkt den Tumor umgebende
Mammagewebe durch die Tumorzellen aktiviert und die TIMP-3-Expression dort,
ähnlich wie beim umgebenden Stroma bereits diskutiert, von den neoplastischen
Zellen induziert.
In der Literatur sind im Zusammenhang mit duktalen Epithelien und TIMP-3Expression bislang keine Untersuchungen veröffentlicht worden. Jedoch kann von
ähnlichen tumorantagonistischen (beziehungsweise auch tumorunterstützenden)
Mechanismen wie bei der Expression des alveolären Epithels ausgegangen werden.
Für die inhibitorische Funktion sprechen die hohen TIMP-3 Werte der Tumorgruppen
komplexe Adenome und Karzinome, sowie der einfachen Adenome. TIMP-3 ist als
Inhibitor im tumorösen Gewebe deutlich exprimiert, während es in der gesunden
Mamma der Hündin fast vollständig fehlt.
Die Untersuchung des Myoepithels zeigte für alle Tumorgruppen je Lokalisation eine
geringgradige,
ähnliche,
nicht
signifikante
TIMP-3-Expression,
lediglich
die
Lokalisationen umgebende „physiologische Mamma“, die nur geringe Mengen TIMP3 aufwies unterschied sich bei allen Tumorgruppen signifikant vom Tumorzentrum
Diskussion 152
und hochsignifikant von der Tumorperipherie, die geringgradig, doch deutlicher als
das normale Gewebe exprimierten. Angaben zu TIMP-3 Expression in Myoepithelien
sind in der Literatur nicht verzeichnet.
In einer Studie über Mammatumoren und der MMP- und TIMP-Expression bei
Brusttumoren in den verschiedenen Bereichen der Tumoren (Tumorzentrum und –
peripherie) wurde eine höhere TIMP-3-Expression im Zentrum als in der Peripherie
vermerkt, allerdings bei tumorassoziierten Fibroblasten (DEL CASAR et al., 2009).
Patienten mit einer ausgeprägten MMP- und TIMP-3-Expression in Zentrum und
Peripherie der Tumoren wiesen die höchste Wahrscheinlichkeit für entfernte
Metastasen auf, Patienten mit niedriger MMP- und TIMP-3-Expresssion in beiden
Fibroblasten- Populationen hatten des geringste Metastasenrisiko. Auch die alleinige
vermehrte Expression von TIMP-3 in Fibroblasten des Tumorzentrums korrelierte mit
dem Auftreten von Metastasen. Dies wird in einer weiteren Studie bestätigt, bei der
neben Fibroblasten allerdings auch die TIMP-3-exprimierenden, nicht weiter
spezifizierten Tumorzellen des Tumorzentrums mit entfernt auftretenden Metastasen
in Zusammenhang gebracht werden (GARCIA et al., 2010). Hier spricht die
Expression von TIMP-3 folglich für einen ungünstigen klinischen Verlauf. Die
Karzinome in der vorliegenden Arbeit zeigten im Zentrum eine etwa dreimal so hohe
TIMP-3-Expression, als die komplexen und einfachen Adenome und eine deutlich
höhere als die Kontrollgruppe und die Hyperplasiegruppe, die beide im Myoepithel
TIMP-3-negativ waren. Diese Ergebnisse könnten die zitierten Studien von GARCIA
et al. und DEL CASAR et al. in Bezug auf Korrelation von TIMP-3-Expression im
Tumorzentrum mit Malignität und Metastasierungsverhalten stützen. Eine für die
endgültige Unterscheidung von Myoepithelzellen und Fibroblasten notwendige
Spezialfärbung wurde an den in dieser Arbeit untersuchten Präparaten nicht
durchgeführt, so dass die Ergebnisse interpretierbar bleiben. Der von GARCIA et al.
festgestellte höhere TIMP-3-Level in Fibroblasten des Tumorzentrums konnte in der
vorliegenden Arbeit nicht nachvollzogen werden, da das Stroma hier nur „tumornah“
(rund um Randbereiche das Tumors) und „tumorfern“, jedoch nicht im Zentrum des
Tumors untersucht wurde. Die ermittelten niedrigen Werte des Stromas aller
Tumorgruppen sind somit nicht vergleichbar und widersprechen den Ergebnissen
von GARCIA folglich nicht.
Die
Entzündungszellen
Untersuchungsgruppe
exprimierten
der
einfachen
besonders
deutlich
Karzinome,
die
TIMP-3
sich
in
der
beim
Diskussion 153
lokalisationsübergreifenden Vergleich hochsignifikant von den komplexen Adenomen
und den komplexen Karzinomen, sowie signifikant von der Expression der einfachen
Adenome abhoben. Die einfachen und komplexen Adenome und die komplexen
Karzinome zeigten wesentlich geringere TIMP-3-Signale in allen Lokalisationen, als
die einfachen Karzinome. Bei einer neueren immunhistologischen Studie werden
TIMP-3-Signale vermehrt in im Tumor gelegenen Entzündungszellen gefunden
(GONZALEZ et al., 2010a). Die in der vorliegenden Arbeit ermittelten TIMP-3-Werte
des Tumorzentrums und der –peripherie der einfachen Karzinome waren die
höchsten Werte die über alle Tumorgruppen in diesen Lokalisationen gemessen
wurden und stützen die Untersuchungsergebnisse von GONZALEZ et al..
Tumorzellen induzieren eine immunologische Antwort durch Sekretion von Zytokinen
und Chemokinen, die ihrerseits Makrophagen und Mastzellen aktivieren. Diese
rekrutieren Monozyten und Lymphozyten (LE BITOUX und STAMENKOVIC, 2008).
Häufig werden Primärtumoren von inflammatorischen Infiltraten begleitet, die in
Zusammensetzung und Intensität variieren (BRIGATI et al., 2002). Es wird vermutet,
das Leukozyten, die aus dem peripheren Blut stammen, im Tumor ihren Phänotyp
modifizieren, um den Tumor penetrieren zu können, und zwar von der Peripherie ins
Zentrum (GARCIA et al., 2010; GONZALEZ et al., 2010a). Dies scheint ein
dynamischer
Prozess
immunmodulierende
zu
sein,
Mediatoren
in
die
dem
inflammatorische
Immunantwort
Zellen
beeinflussen
und
und
die
Tumorprogression vorantreiben. Es gibt im Hinblick auf diese zellulären Infiltrate eine
biologische Heterogenität unter den Brusttumoren des Menschen, wobei TIMP-3 in
zahlreichen Entzündungszellen vorhanden ist. In der vorliegenden Arbeit war zu
erkennen, dass die malignen Tumorarten der Hündin deutlich mehr TIMP-3
exprimierten, als die Benignen. Allerdings war in der Tumorperipherie stets ein etwas
stärkeres positives Signal aufzufinden, als im Zentrum. Dies könnte mit der
inhibitorischen Funktion des Enzyms erklärbar sein, da die Peripherie der Bereich ist,
in dem der Tumor wächst.
Die Gefäßmedia wies beim Vergleich der Lokalisationen „tumornah“ und „tumorfern“
zum Teil hochsignifikante Expressionsunterschiede zwischen den einfachen
Karzinomen, die eine geringgradige TIMP-3-Expression zeigten und den einfachen
und komplexen Adenomen, sowie den benignen Mischtumoren auf, die alle nahezu
TIMP-3 negativ waren.
Diskussion 154
TIMP-3 ist ein Negativ-Regulator von TNF, interagiert mit dem Angiotensin II Typ 2
Rezeptor (AGTR2) und inhibiert so die Angiogenese durch Hemmung der
Endothelzellproliferation (KANG et al., 2008). Indem es MT-1-MMP inhibiert, trägt es
zur Stabilisierung der Gefäße bei (SAUNDERS et al, 2006). In gesunden Geweben
ist es in Gefäßen kaum vorzufinden, allerdings kann der inhibitorische Effekt bei
malignen Tumorarten, die die Sekretion proangiogener MMPs induzieren, verstärkt
sein (SAUNDERS et al, 2006). Dies bestätigt sich auch in der vorliegenden Arbeit
durch die im Kontrollgewebe sehr geringen TIMP-3 Werte und die bei den malignen
einfachen Karzinomen deutlich stärkeren Signale der Gefäßbestandteile.
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass MMP-7, MMP-11, MMP-12 und TIMP-3 in
verschiedenen
Strukturen
und
Lokalisationen
der
Tumoren
unterschiedlich
exprimieren. Eine Zuordnung verschiedener MMPs zu bestimmten Tumoren,
Dignitäten und Strukturen ist möglich. Unter Umständen könnten weitere
veterinärmedizinische Untersuchungen den Nutzen dieser MMPs und TIMP-3 für
klinische Tests oder auch für Therapien der Mammatumoren der Hündin klären.
Zusammenfassung 155
6
Zusammenfassung
Immunhistologische Untersuchung ausgewählter Matrix-Metalloproteinasen (MMPs)
und deren Inhibitoren in der neoplastisch veränderten Mamma und den assoziierten
Lymphknoten von Hunden
Julia Bornbaum
Die Literaturübersicht widmet sich dem morphologischen Aufbau der kaninen
Milchdrüse, der Epidemiologie, Ätiologie und Pathogenese von Mammatumoren der
Hündin und teilt die Tumorarten anhand der WHO-Klassifikation ein. Die
extrazelluläre Matrix wird kurz in Aufbau und Funktion beschrieben und die
Matrixmetalloproteinasen und deren Inhibitoren (MMP-7, MMP-11, MMP-12, TIMP-3)
anhand von Klassifikation, Funktion und Aufbau zuerst allgemein, dann im Speziellen
vorgestellt. Auch die Regulation und die Substrate der MMPs werden thematisiert
und der Einfluss dieser Enzyme auf Tumoren behandelt. Ihre Expression in
physiologischem und pathologischem Gewebe von Mensch und Hund, vor allem in
der Milchdrüse wird dargelegt.
Zur
Kategorisierung
des
Untersuchungsmaterials
wurden
formalinfixierte,
parafineingebettete und H.-E.-gefärbte Schnittpräparate der kaninen Mamma
mikroskopisch gesichtet und in folgende Gruppen unterteilt: Kontrollgruppe (n= 9),
Hyperplasiegruppe (n= 7), komplexe Adenome (n= 19), einfache Adenome (n= 15),
benigne Mischtumoren (n= 15), komplexe Karzinome (n= 17) und einfache
Karzinome (n= 19). Die immunhistologische Darstellung der Antigene wurde mit der
Avidin-Biotin-Peroxidase-Komplex-Methode durchgeführt (Durchführung: Dr. Vanja
Paltian). Dabei wurden für MMP-7 und MMP-12 polyklonale Kaninchen-anti-MenschPrimärantikörper und ein biotinilierter Ziege-anti-Kaninchen-Sekundärantikörper
verwendet. Für MMP-11 und TIMP-3 wurden monoklonale Maus-anti-MenschPrimärantikörper,
sowie
ein
biotiniliertes
Pferd-anti-Maus-Immunglobulin
als
Sekundärantikörper eingesetzt. Die immunhistologisch behandelten Präparate
wurden qualitativ und semiquantitativ erfasst und statistisch ausgewertet.
Zusammenfassung 156
MMP-7: Bei der Auswertung des Matrilysin-Signals über alle Untersuchungsgruppen
waren statistisch 5 Strukturen auffallend: das Myoepithel, die Entzündungszellen, das
Stroma und die Gefäßbestandteile Endothel und Media. Die genannten Strukturen
unterschieden sich in ihrem MMP-7-Signal besonders in der Gruppe der komplexen
Adenome, die am deutlichsten exprimierte, signifikant oder hochsignifikant von den
übrigen Untersuchungsgruppen. Möglicherweise ist die signifikant erhöhte MMP-7Expression des Stromas auf die Induktion durch Tumorzellen zurückzuführen, wie
dies in der Literatur bereits für MMP-7 beschrieben wurde. Zusätzlich wird die MMP7-Produktion in Epithelien des Tumors durch stromale Zellen reguliert. Ob die
erhöhten MMP-7-Werte der komplexen Adenome durch aktivierte mesenchymale
Zellen im Tumor und in der deutlich ausgeprägten Kapsel mit verursacht werden,
bleibt ungeklärt, geben jedoch möglicherweise Anlass zu weiteren Untersuchungen.
MMP-11: Beim immunhistologischen Nachweis von MMP-11 war die Gruppe der
benignen Mammamischtumoren mit ihrer sehr deutlichen MMP-11-Expression zum
Teil hochsignifikant verschieden zu den anderen Untersuchungsgruppen. Diese
herausragenden Signalunterschiede betrafen die folgende Strukturen: das alveoläre
und
das
duktale
Epithel,
das
Myoepithel,
die
Entzündungszellen,
die
Lymphknotenrinde, das Gefäßendothel und das Stroma. Die Lokalisationsvergleiche
zwischen dem physiologischen umgebenden Gewebe, dem Tumorzentrum und der
Tumorperipherie waren über alle Untersuchungsgruppen für die alveolären und
duktalen Epithelien, das Myoepithel und die Entzündungszellen
zum Teil
hochsignifikant, zum Teil signifikant unterschiedlich. Dabei zeigten stets die benignen
Mischtumoren das stärkste MMP-11-Signal im Vergleich zu den anderen
Untersuchungsgruppen.
Das
physiologische
auf,
Mamma
deutlichste
gefolgt
von
Stromelysin-3-Signal
wies
die
der
und
dem
Tumorperipherie
Tumorzentrum. In allen Tumorgruppen, besonders aber bei den benignen
Mischtumoren konnte in den Epithelien mehr MMP-11-Expression nachgewiesen
werden, als in den Epithelien der Kontrollgruppe. Dieses Verteilungsmuster ist auch
in der Literatur zu finden. Die deutliche MMP-11-Expression in den metastasierten
Lymphknoten der einfachen Karzinome deckt sich mit Publikationen, die MMP-11 vor
allem in Brusttumoren mit metastatischem Potential nachgewiesen haben. Die
vorgefundene auffallend starke Expression in benignen Mischtumoren der Hündin
stellt ein überraschendes und in der Literatur bislang noch nicht beschriebenes
Ergebnis dar und die Bedeutung der MMP-11-Reaktion in dieser Tumorart bleibt
Zusammenfassung 157
unklar. Möglicherweise könnten weitere Untersuchungen Korrelationen zwischen der
Expression dieses MMPs und den benignen Mischtumoren beleuchten.
MMP-12: Bei der Auswertung des MMP-12-Signals über alle Untersuchungsgruppen
waren statistisch 6 Strukturen auffallend: das alveoläre Epithel, das Myoepithel, die
Entzündungszellen, die Rinde und das Mark der assoziierten Lymphknoten und die
Gefäßmedia. Die höchsten MMP-12-Level wurden in diesen Strukturen in den
Gruppen der einfachen Karzinome und der benignen Mischtumoren nachgewiesen.
Diese unterschieden sich zum Teil hochsignifikant von der weitaus geringeren MMP12-Expression der übrigen Untersuchungsgruppen. In der Literatur wird die
Expression von MMP-12 in Verbindung mit tumorassoziierten Makrophagen, den
sogenannten TAMs beschrieben, die mit geringerer Überlebensspanne, der
Tumorzellproliferation, Angiogenese und Metastasierung in Verbindung gebracht
werden. Die vorliegende Studie unterstützt diese Ergebnisse, da für die
Entzündungszellen die stärkste MMP-12-Expression in den metastasierten einfachen
Karzinomen gefunden wurde. Eine Besonderheit wurde bei der statistischen
Auswertung der Kontrollgruppe festgestellt, deren Gefäßmedia die stärkste MMP-12Expression aller Untersuchungsgruppen in dieser Struktur zeigte. Die MakrophagenElastase beeinflusst die Angiogenese. Allerdings ist die deutliche Expression in der
Gefäßmedia bislang in der Literatur nicht beschrieben. Ob die in dieser Arbeit
ermittelte MMP-12-Expression der Gefäßmedia einen Einfluss auf die Angiogenese
hat, kann vermutet werden, bleibt jedoch zu klären.
TIMP-3: Die statistische Auswertung des immunhistologischen Signals für TIMP-3
ergab in folgenden Strukturen hochsignifikante, beziehungsweise signifikante
Expressionsunterschiede zwischen den Untersuchungsgruppen: im alveolären
Epithel, im duktalen Epithel, im Myoepithel, in den Entzündungszellen und der
Gefäßmedia. Dabei exprimierten alle Tumorgruppen, besonders jedoch die einfachen
Karzinome sehr deutlich TIMP-3, wohingegen die Kontrollgruppe in allen Strukturen
nur ein schwaches Signal aufwies. Die einfachen Karzinome zeigten in den
Entzündungszellen das deutlichste TIMP-3-Signal aller Untersuchungsgruppen.
Diese Ergebnisse stimmen mit Untersuchungen überein, die TIMP-3 vor allem in
inflammatorischen Zellen im Tumor gefunden haben. Es scheinen auch bei der
Hündin
(wie
bei
humanen
Brusttumoren)
Neoplasien
der
Mamma
von
Entzündungszellen begleitet zu sein, die TIMP-3 exprimieren. Generell wurde in der
vorliegenden Arbeit mehr TIMP-3 in malignen als in benignen Tumoren detektiert.
Zusammenfassung 158
Diese
Verteilung
Tumorperipherie,
und
dem
die
hohen
Bereich
des
Expressionswerte
des
Tumorwachstums,
Enzyms
könnten
in
mit
der
dem
inhibitorischen Effekt des Enzyms erklärbar sein.
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass kanine Mammatumoren in der MMP- und
TIMP-Expression in verschiedenen Strukturen und Lokalisationen von Tumoren
variieren. Eine Zuordnung verschiedener MMPs zu bestimmten Tumoren, Dignitäten
und
Strukturen
ist
möglich.
Möglicherweise
könnten
weitere
Studien
an
veterinärmedizinischem Untersuchungsmaterial die Eignung dieser Enzyme für
klinische Tests oder auch Therapien klären.
Summary 159
7
Summary
Immunohistochemical study on selected matrix metalloproteinases and their
inhibitors in canine mammary tumours and their associated lymph nodes.
Julia Bornbaum
Following the literature section, addressing the morphology, epidemiology, etiology
and pathogenetic factors of canine mammary tumours, the experimental design
including the study groups is described. These groups include simple adenomas (n=
15) and complex adenomas (n= 19), benign mixed mammary tumours (n= 15),
simple carcinomas (n= 19) and complex carcinomas (n= 17) and also physiological
(n=
9)
and
hyperplastic
tissues
(n=
7).
The
paraffin
sections
were
immunohistochemically investigated for MMP-7, MMP-11, MMP-12 and TIMP-3 in
various structures and localisations. Therefore the avidin-biotin-peroxidase-complextechnique was used (performed by Dr. Vanja Paltian). For MMP-7 and MMP-12 there
were applied polyclonal rabbit-anti-human-primary-antibodies and a biotinylated goatanti-rabbit-secondary-antibody.
For
MMP-11
and
TIMP-3
there
were
used
monoclonal Mouse-anti-human-primary-antibodies and a biotinylated horse-antimouse-secondary-antibody.
MMP-7: The analysis of the MMP-7 signal for all investigation groups depicted five
outstanding structures: the myoepithelial cells, the inflammatory cells, the stromal
cells and the blood vessel components “endothelial cells” and “media”. These
structures showed the strongest immunohistological signal for MMP-7 in the group of
complex adenomas and they were significantly or highly significantly different to the
other investigation groups. This finding is in accordance to the literature, where the
high expression level of the MMP-7 in stromal cells was also found, dependent on
their distance to mammary tumours. This was explained by the induction of MMP-7
expression in stromal cells by tumour cells. The present study confirms these results.
It is also well known, that stromal cells influence the expression of MMPs by tumour
cells due to paracrine secretion of growth factors and cytokines. Therefore the high
MMP-7 expression level of the complex adenomas in this study could maybe
Summary 160
explained by induction by cells of the well organized activated stromal cells and
capsule. This could be verified in further studies.
MMP-11: The group of the benign mixed mammary tumours with its very distinct
MMP-11 expression was highly significantly different to the other investigation
groups. The alveolar und ductal epithelial cells, the myoepithelial and inflammatory
cells, the cortex of the lymph nodes, the endothelial cells of the vessels and the
stromal cells showed these outstanding differences in MMP-11 expression. In the
vicinity of the tumour and distant to the tumour the benign mixed mammary tumours
showed (highly-) significant expression differences in MMP-11 expression in
endothelial and stromal cells compared to the other investigation groups. The benign
mixed tumors were strongly MMP-11 positive in both localisations of these structures.
For the epithelial and inflammatory cells, the strongest MMP-11 signal was depicted
in the physiological mamma, followed by the periphery and centre of the tumour. In
all tumour groups, especially the benign mixed tumours, there was a higher
expression level in epithelial cells compared to the same cell population of the control
group. This result was confirmed by others, who found a higher MMP-11 expression
in tumour cells than in normal mammary tissue. The prominent expression in this
study within metastasized lymph nodes of the simple carcinomas is according to
publications describing MMP-11 expression in breast carcinomas with metastatic
potential. The outstanding expression in benign mixed tumours is a surprising and
not yet published result. There should be further investigations to clear a possible
correlation between the expression of MMP-11 and this tumour type.
MMP-12: the evaluation of the MMP-12 signal for all investigation groups showed six
outstanding structures: the alveolar and myoepithelial cells, the inflammatory cells,
the cortex and medulla of the associated lymph nodes and the media of the vessels.
The highest MMP-12 level in these structures was found in the groups of the simple
carcinomas and the benign mixed tumours. Their expression was highly significantly
different to the weaker MMP-12 signals of the other investigated groups. In literature,
the MMP-12 expression is associated with tumour associated macrophages, so
called TAMs, which are correlated with decreased survival, tumour cell proliferation,
angiogenesis in malignant mammary tumours and metastasis. Our results suggest
this, as the inflammatory cells in metastasising simple carcinomas showed the
highest MMP-12 expression. The control group displayed the strongest MMP-12
expression in the vessel media of all groups. It is known, that MMP-12 can influence
Summary 161
the angiogenesis, but an outstanding expression level in the media of blood vessels
is not described. A correlation between the MMP-12 signal in the media and
angiogenesis is possible, but not proved.
TIMP-3: The statistical evaluation for the immunohistological TIMP-3 signal showed
highly significant or significant values for the alveolar, ductal and myoepithelial cells,
the inflammatory cells, and the media of the vessels of the tumour groups. All tumour
groups, but especially the simple carcinomas showed distinct signals for TIMP-3,
whereas the control group expressed only weakly. In inflammatory cells, the simple
carcinomas showed the highest TIMP-3 expression level. This is according to
publications, which found prominent TIMP-3 signals in inflammatory cells within the
tumour. Similarly to human studies, the canine mammary tumours seemed to be
accompanied by inflammatory cells expressing TIMP-3. In general, in our study there
is more TIMP-3 expression in malignant than in benign tumours. This may be due to
the inhibitory effect of the enzyme. Thus the highest TIMP-3 values were found in the
tumour periphery, the area of tumour growth.
In conclusion, in canine mammary tumours the MMP and TIMP expression varies in
localizations and structures. A correlation with the tumour type is possible. There
should be further studies on canine samples to clear the possibilities of using MMPs
or TIMPs in clinical tests or even therapies.
Fotodokumentation 162
8
Fotodokumentation
8.1
MMP-7-Expression in den Untersuchungsgruppen
Abbildung 25 (links): mittelgradige MMP-7Expression in unveränderter Mamma (KG4)
in alveolärem Epithel (Pfeile) und Stroma
(gestrichelter Pfeil)
Abbildung 26 (rechts): geringgradige MMP-7Expression
in
hyperplastischem
Gewebe
(HYP3) in alveolärem Epithel (Pfeile)
Abbildung 27 (links): geringgradige MMP-7Expression im komplexen Adenom (kAd4):
alveoläres Epithel (Pfeile)
Abbildung 28 (rechts): MMP-7-Expression im
einfachen
Adenom
(eAd3):
vereinzelte
mittelgradig positive alveoläre Epithelien in der
Tumorperipherie
Fotodokumentation 163
Abbildung 29 (links): MMP-7-Expression im
benignen Mischtumor (bMMT11): mittel- bis
hochgradiges
Signal
in
alveolären
Epithelzellen (Pfeil) und Geringgradiges in
Chondrozyten (gestrichelter Pfeil)
Abbildung 30 (rechts): MMP-7-Expression im
komplexen
Karzinom
(kCa11):
vereinzelt
hochgradig positive alveoläre Epithelzellen im
unveränderten Mammagewebe (Pfeile)
Abbildung
mittelgradige
einfachen
31
(links):
gering-
MMP-7-Expression
Karzinom
(eCa3):
bis
im
positive
schlecht differenzierte Tumorzellen (Pfeil)
und Lymphozyten (gestrichelter Pfeil)
Fotodokumentation 164
8.2
MMP-11-Expression in den Untersuchungsgruppen
Abbildung 32 (links): mittelgradige MMP-11Expression
in
Milchdrüsengewebe
Epithel
(Pfeil),
unverändertem
(KG4):
Myoepithel
alveoläres
(gestrichelter
Pfeil), Stroma (Blockpfeil)
Abbildung 33 (rechts): MMP-11-Expression in
hyperplastischem Gewebe (HYP3): deutliches
Signal in duktalem Epithel (Pfeilkopf), in
Myoepithel (Pfeil) und alveolärem Epithel
(gestrichelter Pfeil); G: Gefäß (Vene)
Abbildung 34 (links): gering- bis mittelgradig
positive alveoläre und duktale Epithelzellen
im komplexen Adenom (kAd9) in der
Tumorperipherie
Abbildung 35 (rechts): mittelgradige MMP-11Expression
in
einem
assoziierten
Lymphknoten von kAd9: positive Lymphozyten
(Pfeil) und Makrophagen (gestrichelter Pfeil)
Fotodokumentation 165
Abbildung 36 (links): deutlich weniger MMP11-Signal im Tumorzentrum (kAd9), als in
der
Tumorperipherie
(Abb.
19)
und
Lymphknoten (Abb. 20)
Abbildung 37 (rechts): positive alveoläre
Epithelzellen
(Pfeil)
und
Myoepithelzellen
(gestrichelter Pfeil) im einfachen Adenom
(eAd1)
Abbildung 38 (links): sehr deutliche MMP11-Expression im Zentrum eines benignen
Mischtumors
(bMMT14):
positives
alveoläres Epithel (Pfeil), duktales Epithel
(gestrichelter
Pfeil)
Chondrozyten (Pfeilkopf)
Abbildung 39 (rechts): mittel- bis hochgradig
positive
Lymphozyten
im
assoziierten Lymphknotens
Mischtumors bMMT14
Mark
des
des
benignen
und
positive
Fotodokumentation 166
Abbildung 40 (links): Tumorperipherie des
benignen Mischtumors (bMMT14): mittel-bis
hochgradige Expression in Epithelien und
stromalen Zellen
Abbildung 41 (rechts): MMP-11-Expression im
Zentrum eines komplexen Karzinoms (kCa6):
positive
alveoläre
Epithelien
(Pfeil)
und
Myoepithelien (gestrichelter Pfeil)
Abbildung
42
(links):
Tumorperipherie
desselben komplexen Karzinoms (kCa6):
deutlich positive alveoläre Epithelien, leicht
positives Stroma (Pfeil)
Abbildung 43 (rechts): einfaches Karzinom
(eCa9) exprimiert sehr deutlich MMP-11 in:
alveolärem
duktalem
Epithel
Epithel
(gestrichelter
(Pfeilkopf),
Pfeil),
Myoepithel
(Blockpfeil) und in als Embolus liegenden
Tumorzellen (Pfeil); LG: Lymphgefäß
Fotodokumentation 167
Abbildung 44 (links): mittel- bis hochgradige
MMP-11-Expression in Tumorzell-Embolus
in Lymphgefäß (eCa9)
Abbildung 45 (rechts): positive Tumorzellen
neben negativen Lymphozyten im assoziierten
Lymphknoten (eCa9)
Abbildung 46 (links): MMP-11-Expression in
Arterie bei einfachem Karzinom (eCa9):
mittel- bis hochgradig positives Endothel
(Pfeil) und hochgradig positive Media (M)
Fotodokumentation 168
8.3
MMP-12-Expression in den Untersuchungsgruppen
Abbildung
47
(links):
keine
MMP-12-
Expression im Kontrollgewebe (KG6)
Abbildung 48 (rechts): MMP-12 positive Vene
in
immunhistologisch
negativem
Kontrollgewebe (KG9): positives Endothel
(Pfeil) und positive Media (M), umgebendes
Stroma (S) negativ
Abbildung 49 (links): MMP-12-negatives
hyperplastisches Mammagewebe (HYP4)
Abbildung 50 (rechts): MMP-12-exprimierende
Makrophagen (Pfeile) in immunhistologisch
negativem komplexen Adenom (kAd19)
Fotodokumentation 169
Abbildung 51 (links): mittelgradige MMP-12Expression
in
Gefäßmedia
(Pfeil)
und
Stroma (gestrichelter Pfeil) von einfachem
Adenom (eAd6)
Abbildung
52
Lymphknoten
(rechts):
eines
assoziierter
einfachen
Adenoms
(eAd4): geringgradig positive Makrophagen
(Pfeil)
und
negative
Lymphozyten
(gestrichelter Pfeil)
Abbildung 53 (links): MMP-12-Expression im
benignen
Mischtumor
(bMMT6):
mittelgradiges Signal in der Gefäßmedia
(Pfeil), im alveolären Epithel (gestrichelter
Pfeil) und in Makrophagen (Blockpfeil) in
Lymphgefäß
Abbildung 54 (links): MMP-12-Expression in
Makrophagen
eines
(Pfeil)
nahezu
der
Tumorperipherie
negativen
Karzinoms (kCa16).
T= Tumorzellen; S= Stroma
komplexen
Fotodokumentation 170
Abbildung 55 (links): gering- bis mittelgradig
MMP-12-positive,
schlecht
differenzierte
Tumorzellen in der Tumorperipherie eines
einfachen Karzinoms (eCA9)
Fotodokumentation 171
8.4
TIMP-3-Expression in den Untersuchungsgruppen
Abbildung
56 (links): immunhistologisch
negatives Kontrollgewebe (KG4)
Abbildung 57 (rechts): leicht-bis mittelgradig
positives
alveoläres
Epithel
(Pfeil)
in
hyperplastischem Mammagewebe (HYP4)
Abbildung 58 (links): einzelne
positive
Zellen
im
sonst
TIMP-3negativen
Tumorzentrum eines komplexen Adenoms
(kAd19)
Abbildung 59 (rechts): deutlich positives
alveoläres
Epithel
komplexe
physiologischen
(Pfeil)
Adenom
in
dem
das
umgebenden
Mammagewebe
(kAd19).
Leicht positive stromale Zellen (Gestrichelter
Pfeil)
Fotodokumentation 172
Abbildung
60
(links):
nahezu
TIMP-3-
negatives Tumorzentrum eines einfachen
Adenoms
(eAd12).
Leicht
positives
Myoepithel (Pfeil)
Abbildung 61 (rechts): hochgradig TIMP-3positives, den Tumor (eAd12, s. Abb. 60)
umgebendes physiologisches Mammagewebe
Abbildung
62
Lymphknoten
(eAd12):
(links):
zu
hochgradig
Lymphozyten im Mark
Abbildung 63 (rechts): TIMP-3-Expression im
benignen
Mammamischtumor
positives
immunhistologisches
(bMMT3):
Signal
in
alveolärem Epithel (Pfeil), stromalen Zellen
(gestrichelter
(Blockpfeil)
Pfeil)
und
Chondrozyten
assoziierter
einfachem
Adenom
TIMP-3-positive
Fotodokumentation 173
Abbildung
64
(links):
assoziierter
Lymphknoten zu bMMT3: TIMP-3-positive
Lymphozyten im Mark
Abbildung 65 (rechts): geringgradige TIMP-3Expression
komplexen
im
Tumorzentrum
Karzinoms
(kCA11).
eines
Leicht
positives Stroma (Pfeil)
Abbildung 66 (links): deutliches TIMP-3Signal
im
den
Tumor
umgebenden
Mammagewebe (kCa8). Positives alveoläres
Epithel (gestrichelter Pfeil) und Stroma
(Pfeil)
Abbildung
67
(rechts):
assoziierter
Lymphknoten zu kCa8: hochgradig positive
Lymphozyten im Mark
Fotodokumentation 174
Abbildung
68
Lymphozyten
(links):
in
TIMP-3-positive
immunhistologisch
negativen einfachen Karzinom (eCa11). T=
Tumorzentrum
Abbildung 69 (rechts): Tumorperipherie von
eCa11:
deutliche
TIMP-3-Expression
in
alveolärem Epithel (Pfeil), stromalen Zellen
(gestrichelter Pfeil) und Entzündungszellen
(Blockpfeil)
Literaturverzeichnis 175
9
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Anhang 198
10
Anhang
Die unter dem Abschnitt 10.1 folgenden Tabellen wurden aus der Dissertation von Frau Dr.
Vanja Paltian (PALTIAN, 2006) übernommen, die die Untersuchungsmaterialien im Rahmen
ihrer Doktorarbeit zusammengestellt und die Präparatschnitte bearbeitet hat.
10.1 Untersuchtes Tiermaterial
Tabelle 3: Kontrollgewebe unveränderter Mamma: Hunde- und Fallnummer, Rasse, Alter
und Geschlecht
Kontrollgewebe
Alter
Hunde-Nummer
Fall-Nummer
Hunderasse
Geschlecht
(Jahre)
KG1
E 6174 /01
Beagle
KG2
E 2334 /02
KG3
o.A.
w
Rottweiler
7
w
S 1169 /03
Golden Retriever
9
wk
KG4
S 1849 /03
Sheltie
5
w
KG5
S 1896 /03
Rottweiler
o.A.
w
KG6
S 1907 /03
Deutscher Schäferhund
o.A.
w
KG7
S 1974 /04
Am. Staffordshire Terrier
6
w
KG8
S 2023 /04
Großer Münsterländer
4
w
KG9
S 2089 /04
Berner Sennenhund
o.A.
wk
KG = unverändertes Mamma (Kontroll-)gewebe; Am. = Amerikanischer; o. A. = ohne
Angaben; w = weiblich; wk = weiblich kastriert
Anhang 199
Tabelle 4: Hyperplastisches Mammagewebe: Hunde- und Fallnummer, Rasse, Alter und
Geschlecht
Lobuläre Hyperplasien
HundeNummer
Alter
Fall-Nummer
Hunderasse
Geschlecht
(Jahre)
HYP1
E 2056 /00
Mischling
11
w
HYP2
E 1475 /02
Deutscher Schäferhund
7
w
HYP3
E 2589 /02
Mischling
9
w
HYP4
E 5749 /02
Deutscher Schäferhund
6
w
HYP5
E 1340 /03
Mischling
13
w
HYP6
E 1725 /03
unbekannt
7
w
HYP7
E 1948 /03
Golden Retriever
10
w
HYP = hyperplastisches Mammagewebe; w = weiblich
Anhang 200
Tabelle 5: Komplexe Adenome der Mamma: Hunde- und Fallnummer, Rasse, Alter und
Geschlecht
Komplexe Adenome
HundeNummer
Alter
Fall-Nummer
Hunderasse
Geschlecht
(Jahre)
kAd1
E 4878 /00
Mischling
11
w
kAd2
E 6384 /01
Zwergpudel
9
w
kAd3
E 283 /02
Mischling
7
w
kAd4
E 1726 /02
Rauhhaardackel
11
w
kAd5
E 3285 /02
Deutscher Schäferhund
8
w
kAd6
E 3518 /02
Cocker Spaniel
11
w
kAd7
E 3781 /02
Dalmatiner
11
w
kAd8
E 3926 /02
Berner Sennenhund
6
wk
kAd9
E 5634 /02
Toypudel
9
w
kAd10
E 2003 /03
Mischling
5
w
kAd11
E 2870 /03
Mischling
7
w
kAd12
E 3155 /03
Puli
10
w
kAd13
E 3721 /03
Westhighland White Terrier
9
w
kAd14
E 4413 /03
Cocker Spaniel
8
w
kAd15
E 4491 /03
Labrador Retriever
7
w
kAd16
E 4507 /03
Mischling
7
wk
kAd17
E 4705 /03
Cocker Spaniel
5
w
kAd18
E 4772 /03
Cocker Spaniel
11
w
kAd19
E 5033 /03
Westhighland White Terrier
8
w
kAd = komplexes Adenom; w = weiblich; wk = weiblich kastriert
Anhang 201
Tabelle 6: Einfache Adenome der Mamma: Hunde- und Fallnummer, Rasse, Alter und
Geschlecht
Einfache Adenome
HundeNummer
Alter
Fall-Nummer
Hunderasse
Geschlecht
(Jahre)
eAd1
E 2045 /00
unbekannt
6
w
eAd2
E 4861 /00
Boxer
4
w
eAd3
E 5391 /00
Mittelschnauzer
4
w
eAd4
E 2014 /01
Foxterrier
10
w
eAd5
E 4359 /01
Bouvier de Flandres
7
wk
eAd6
E 4556 /01
Zwergpinscher
8
w
eAd7
E 204 /02
Am. Cocker Spaniel
11
wk
eAd8
E 1103 /02
Yorkshire Terrier
11
w
eAd9
E 2671 /02
Riesenschnauzer
7
w
eAd10
E 5799 /02
Deutscher Schäferhund
5
w
eAd11
E 518 /03
Bayr. GSH
12
wk
eAd12
E 758 /03
Mischling
8
w
eAd13
E 2404 /03
Chihuahua
10
w
eAd14
E 4964 /03
Deutsch Langhaar
8
w
eAd15
E 5028 /03
Pudel
9
w
eAd
=
einfaches
Gebirgsschweißhund;
Adenom;
w
Am.
=
=
Amerikanischer;
weiblich;
wk
Bayr.
=
GSH
=
Bayrischer
weiblich
kastriert
Anhang 202
Tabelle 7: Benigne Mischtumoren: Hunde- und Fallnummer, Rasse, Alter und Geschlecht
Benigne Mischtumoren
HundeNummer
Alter
Fall-Nummer
Hunderasse
Geschlecht
(Jahre)
bMMT1
E 3843 /00
Mischling
8
w
bMMT2
E 6036 /00
Bedlington Terrier
10
w
bMMT3
E 383 /01
Mischling
8
w
bMMT4
E 1800 /01
Kuvasz
11
wk
bMMT5
E 2312 /01
Rauhhaardackel
8
w
bMMT6
E 4591 /01
Barsoi
9
w
bMMT7
E 202 /02
Kurzhaardackel
11
w
bMMT8
E 206 /02
Deutscher Schäferhund
6
w
bMMT9
E 1624 /02
Elo
9
w
bMMT10
E 2753 /02
Boxer
6
w
bMMT11
E 356 /03
Jack Russel Terrier
10
w
bMMT12
E 922 /03
Airedale Terrier
10
w
bMMT13
S 1913 /03
Mischling
9
w
bMMT14
E 3689 /03
Neufundländer
8
w
bMMT = benigner Mischtumor; w = weiblich; wk = weiblich kastriert
Anhang 203
Tabelle 8: Komplexe Adenokarzinome: Hunde- und Fallnummer, Rasse, Alter und
Geschlecht
Komplexe Adenokarzinome
Alter
Hunde-
Fall-
Nummer
Nummer
kCa1
E 6031 /00
Nein
Nein
Staff. Bullterrier
6
w
KCa2
E 4522 /01
Nein
Nein
Yorkshire Terrier
11
w
kCa3
E 5588 /01
Nein
Nein
Mischling
10
w
kCa4
E 238 /02
Nein
Nein
Mischling
7
wk
kCa5
E 1029 /03
Nein
Nein
Rottweiler
7
w
kCa6
E 1716 /03
Nein
Nein
Rauhhaardackel
11
w
kCa7
E 1749 /03
Nein
Nein
Zwergdackel
9
w
kCa8
E 1869 /03
Nein
Nein
Irish Setter
5
w
kCa9
E 3235 /03
Nein
Nein
Rauhhaardackel
12
w
kCa10
E 3539 /03
Nein
Nein
Rauhhaardackel
9
w
kCa11
E 3591 /03
Nein
Nein
Mischling
9
w
kCa12
E 3617 /03
Nein
Nein
Rauhhaardackel
14
w
kCa13
E 3680 /03
Nein
Nein
Airedale Terrier
11
w
kCa14
E 3723 /03
Nein
Nein
Rauhhaardackel
8
w
kCa15
E 4506 /03
Nein
Nein
Bayr. GSH
9
w
kCa16
E 4689 /03
Nein
Nein
WHWT
9
w
kCa17
E 4866 /03
Nein
Nein
Cocker Spaniel
9
w
Lnn. Met.
La. carc.
Hunderasse
Geschlecht
(Jahre)
kCa = komplexe Karzinome; Lnn. Met. = Lymphknotenmetastasen; La. carc.= Lymphangiosis
carcinomatosa; Staff. = Staffordshire; Bayr. GSH = Bayrischer Gebirgsschweißhund;
WHWT= Westhighland White Terrier; w = weiblich; wk = weiblich kastriert
Anhang 204
Tabelle 9: Einfache Adenokarzinome der Mamma: Hunde- und Fallnummer, Rasse, Alter
und Geschlecht
Einfache Adenokarzinome
Hunde- FallNumme Nummer
r
eCa1
E 605 /00
Tumortyp
solide
La.
Lnn.
carc. Metastasen
Ja
tasen
Ja
Hunderasse
Kl.
Alter
Ge-
(Jahre) schlecht
5
w
Mischling
8
w
Münsterländer
eCa2
E 1145 /00 solide
Nein
Nein
eCa3
E 2093 /00 tubulo-pap.
Nein
Ja
DSH
8
w
eCa4
E 2429 /00 tubulo-pap.
Ja
Ja
DSH
6
w
eCa5
E 3920 /00 anaplastisch*
Ja
Ja
Mischling
10
w
eCa6
E 4966 /00 anaplastisch*
Ja
Ja
Labrador
Retriever
3
w
eCa7
E 1139 /01 solide, teils Nein
spindelzellig
Nein
Mischling
13
w
eCa8
E 1830 /01 tubulär
Nein
Nein
Mischling
5
w
eCa9
E 860 /02
solide *
Ja
Ja
unbekannt
9
w
eCa10
E 952 /02
tubulär
Nein
Nein
DSH
3
w
eCa11
E 3458 /02 solide
Ja
Ja
Gr. Schw. SH
9
w
eCa12
E 5495 /02 anaplastisch
Ja
Ja
Australischer
Schäferhund
12
w
eCa13
E 986 /03
Ja
Ja
Pudel
o.A.
w
eCa14
E 1129 /03 anaplastisch
Ja
Ja
Mischling
8
w
eCa15
E 2257 /03 tubulär/solid
Nein
Nein
Dobermann
8
w
eCa16
E 2303 /03 tubulär
Nein
Nein
Mischling
4
w
eCa17
E 3117 /03 tubulo-pap.
Nein
Ja
Cocker
Spaniel
10
w
solide
eCa = einfaches Karzinom; tubulo-pap. = tubulo-papillär; * = ohne Primärtumor; La. carc.=
Lymphangiosis carcinomatosa; Lnn. Metastasen = Lymphknotenmetastasen; Kl.= Kleiner;
DSH= Deutscher Schäferhund; Gr. Schw. SH = Großer Schweizer Sennenhund; o.A. = ohne
Angabe; w = weiblich
Tabelle 10: MMP-7 "Scores" in der Kontrollgruppe (KG)
10.2.1 MMP-7 „Scores“ in den Untersuchungsgruppen
unterschiedliche Proben eines Falles.
Die Großbuchstaben (A, B, CQ) hinter den Fallnummern sind Bestandteil der institutsinternen Fallbezeichnung und stehen für
Tumorfern (TF). Leere Felder stellen fehlende Werte dar (Parameter nicht vorhanden, oder technisch nicht auswertbar).
Lokalisationen: physiologische Mamma (PM), Tumorzentrum (TZ), Tumorperipherie (TP), Lymphknoten (Lnn), Tumornah (TN),
met M), Gefäßendothel (GE), Gefäßmedia (GM), Stroma (S), Emboli (Em), Chondrozyten (Chondros), Cluster (Cluster) in folgenden
unverändertes Lymphknotenmark (Lnn unv M), metastasierte Lymphknotenrinde (Lnn met R), metastasiertes Lymphknotenmark (Lnn
Epithelien (aE), duktale Epithelien (dE), Myoepithel (mE), Entzündungszellen (EZ), unveränderte Lymphknotenrinde (Lnn unv R),
Die ermittelten Werte für alle Untersuchungsgruppen finden sich in den Tabellen 10- 37 unterteilt in folgende Strukturen: alveoläre
10.2 Immunhistologische „Scores“ aller untersuchten Antikörper
Anhang 205
Tabelle 12: MMP-7 "Scores" in komplexen Adenomen (kAd)
Tabelle 11: MMP-7 "Scores" in der Hyperplasiegruppe (HYP)
Anhang 206
Tabelle 13: MMP-7 "Scores" in einfachen Adenomen (eAd)
Anhang 207
Tabelle 14: MMP-7 "Scores" in benignen Mammamischtumoren (bMMT)
Anhang 208
Tabelle 15: MMP-7 "Scores" in komplexen Karzinomen (kCa)
Anhang 209
Tabelle 16: MMP-7 "Scores" in einfachen Karzinomen (eCa)
Anhang 210
Tabelle 18: MMP-11 "Scores" in der Hyperplasiegruppe (HYP)
Tabelle 17: MMP-11 "Scores" in der Kontrollgruppe (KG)
10.2.2 MMP-11 „Scores“ in den Untersuchungsgruppen
Anhang 211
Tabelle 19: MMP-11 "Scores" in komplexen Adenomen (kAd)
Anhang 212
Tabelle 20: MMP-11 "Scores" in einfachen Adenomen (eAd)
Anhang 213
Tabelle 21: MMP-11 "Scores" in benignen Mammamischtumoren (bMMT)
Anhang 214
Tabelle 22: MMP-11 "Scores" in komplexen Karzinomen (kCa)
Anhang 215
Tabelle 23: MMP-11 "Scores" in einfachen Karzinomen (eCa)
Anhang 216
Tabelle 25: MMP-12 "Scores" in der Hyperplasiegruppe (HYP)
Tabelle 24: MMP-12 "Scores" in der Kontrollgruppe (KG)
10.2.3 MMP-12 „Scores“ in den Untersuchungsgruppen
Anhang 217
Tabelle 26: MMP-12 "Scores" in komplexen Adenomen (kAd)
Anhang 218
Tabelle 27: MMP-12 "Scores" in einfachen Adenomen (eAd)
Anhang 219
Tabelle 28: MMP-12 "Scores" in benignen Mammamischtumoren (bMMT)
Anhang 220
Tabelle 29: MMP-12 "Scores" in komplexen Karzinomen (kCa)
Anhang 221
Tabelle 30: MMP-12 "Scores" in einfachen Karzinomen (eCa)
Anhang 222
Tabelle 32: TIMP-3 "Scores" in der Hyperplasiegruppe (HYP)
Tabelle 31: TIMP-3 "Scores" in der Kontrollgruppe (KG)
10.2.4 TIMP-3 „Scores“ in den Untersuchungsgruppen
Anhang 223
Tabelle 33: TIMP-3 "Scores" in komplexen Adenomen (kAd)
Anhang 224
Tabelle 34: TIMP-3 "Scores" in einfachen Adenomen (eAd)
Anhang 225
Tabelle 35: TIMP-3 "Scores" in benignen Mammamischtumoren (bMMT)
Anhang 226
Tabelle 36: TIMP-3 "Scores" in komplexen Karzinomen (kCa)
Anhang 227
Tabelle 37: TIMP-3 "Scores" in einfachen Karzinomen (eCa)
Anhang 228
Anhang 229
10.3 Statistische Daten
Die
ermittelten
Werte
für
Median,
Minimum
und
Maximum
aller
Untersuchungsgruppen finden sich in den Tabellen 38- 65 unterteilt in folgende
Strukturen: alveoläre Epithelien (aE), duktale Epithelien (dE), Myoepithel (mE),
Entzündungszellen
(EZ),
unveränderte
Lymphknotenrinde
(Lnn
unv
R),
unverändertes Lymphknotenmark (Lnn unv M), metastasierte Lymphknotenrinde
(Lnn met R), metastasiertes Lymphknotenmark (Lnn met M), Gefäßendothel (GE),
Gefäßmedia (GM), Stroma (S), Emboli (Em), Chondrozyten (Chondros), Cluster
(Cluster), TGW (Tumorgesamtwert)
in folgenden Lokalisationen: physiologische Mamma (PM), Tumorzentrum (TZ),
Tumorperipherie (TP), Lymphknoten (Lnn), Tumornah (TN), Tumorfern (TF).
Die Abkürzungen können auch dem Anhang, Kapitel 10.8 entnommen werden.
10.3.1 Median, Min., Max. für MMP-7
Tabelle 38: Median, Min., Max. für MMP-7 in der Kontrollgruppe (KG)
Tabelle 39: Median, Min., Max. für MMP-7 in der Hyperplasiegruppe (HYP)
Anhang 230
Tabelle 40: Median, Min., Max. für MMP-7 in komplexen Adenomen (kAd)
Tabelle 41: Median, Min., Max. für MMP-7 in einfachen Adenomen (eAd)
Anhang 231
Tabelle 42: Median, Min., Max. für MMP-7 in benignen Mammamischtumoren (bMMT)
Tabelle 43: Median, Min., Max. für MMP-7 in komplexen Karzinomen (kCa)
Anhang 232
Tabelle 44: Median, Min., Max. für MMP-7 in einfachen Karzinomen (eCa)
Anhang 233
10.3.2 Median, Min., Max. für MMP-11
Tabelle 45: Median, Min., Max. für MMP-11 im Kontrollgewebe (KG)
Tabelle 46: Median, Min., Max. für MMP-11 in der Hyperplasiegruppe (HYP)
Anhang 234
Tabelle 47: Median, Min., Max. für MMP-11 in komplexen Adenomen (kAd)
Tabelle 48: Median, Min., Max. für MMP-11 in einfachen Adenomen (eAd)
Anhang 235
Tabelle 49: Median, Min., Max. für MMP-11 in benignen Mammamischtumoren (bMMT)
Tabelle 50: Median, Min., Max. für MMP-11 in komplexen Karzinomen (kCa)
Anhang 236
Tabelle 51: Median, Min., Max. für MMP-11 in einfachen Karzinomen
Anhang 237
10.3.3 Median, Min., Max. für MMP-12
Tabelle 52: Median, Min., Max. für MMP-12 im Kontrollgewebe (KG)
Tabelle 53: Median, Min., Max. für MMP-12 in der Hyperplasiegruppe (HYP)
Tabelle 54: Median, Min., Max. für MMP-12 in komplexen Adenomen (kAd)
Anhang 238
Tabelle 55: Median, Min., Max. für MMP-12 in einfachen Adenomen (eAd)
Tabelle 56: Median, Min., Max. für MMP-12 in benignen Mammamischtumoren (bMMT)
Anhang 239
Tabelle 57: Median, Min., Max. für MMP-12 in komplexen Karzinomen (kCa)
Anhang 240
Tabelle 58: Median, Min., Max. für MMP-12 in einfachen Karzinomen (eCa)
10.3.4 Median, Min., Max. für TIMP-3
Tabelle 59: Median, Min., Max. für TIMP-3 in der Kontrollgruppe (KG)
Anhang 241
Tabelle 60: Median, Min., Max. für TIMP-3 in der Hyperplasiegruppe (HYP)
Tabelle 61: Median, Min., Max. für TIMP-3 in komplexen Adenomen (kAd)
Anhang 242
Tabelle 62: Median, Min., Max. für TIMP-3 in einfachen Adenomen (eAd)
Tabelle 63: Median, Min., Max. für TIMP-3 in benignen Mammamischtumoren (bMMT)
Anhang 243
Tabelle 64: Median, Min., Max. für TIMP-3 in komplexen Karzinomen (kCa)
Anhang 244
Tabelle 65: Median, Min., Max. für TIMP-3 in einfachen Karzinomen (eCa)
Anhang 245
10.4 p-Werttabellen
Im Nachfolgenden finden sich die p-Werte aus den parametrischen Paarvergleichen,
sowie den einfachen Gruppenvergleichen, ergänzt mit dem Tukey Test. Die
Abkürzungen sind auch dem Anhang, S. 263 zu entnehmen.
Werte unter 0,05 sind signifikant (x), Werte unter 0,01 hochsignifikant (xx).
Tumorgruppe (TGr) 1: komplexe Adenome (kAd); Tumorgruppe (TGr) 2: einfache
Adenome
(eAd);
Tumorgruppe
(TGr)
3:
benigne
Mischtumoren
(bMMT);
Tumorgruppe (TGr) 4: komplexe Karzinome (kCa); Tumorgruppe (TGr) 5: einfache
Karzinome (eCa); Tumorgruppe (TGr) 6: Kontrollgruppe (KG); Tumorgruppe (TGr) 7:
Hyperplasiegruppe (HYP)
In den Lokalisationen physiologische Mamma (PM), Tumorzentrum (TZ), und
Tumorperipherie (TP), bzw. Tumornah (TN) und Tumorfern (TF) wurden die
Strukturen alveoläre Epithelien (aE), duktale Epithelien (dE), Myoepithel (mE),
Entzündungszellen
(EZ),
unveränderte
Lymphknotenrinde
(Lnn
unv
R),
unverändertes Lymphknotenmark (Lnn unv M), metastasierte Lymphknotenrinde
(Lnn met R), metastasiertes Lymphknotenmark (Lnn met M), Gefäßendothel (GE),
Gefäßmedia (GM) und Stroma (S) untersucht.
Anhang 246
10.4.1 p-Werte für MMP-7
Tabelle 66: MMP-7: Paarweiser Gruppenvergleich von den alveolären (aE), duktalen (dE),
myoepithelialen (mE) Anteilen und Entzündungszellen (EZ) in den Lokalisationen
physiologische Mamma (PM), Tumorzentrum (TZ) und Tumorperipherie (TP); TGr =
Tumorgruppen
Tabelle 67: MMP-7: Vergleich von alveolärem Epithel (aE), duktalem Epithel (dE),
Myoepithel (mE) und Entzündungszellen (EZ) in physiologischem Mammagewebe (PM) über
alle Tumorgruppen (TGr)
Anhang 247
Tabelle 68: MMP-7: Vergleich von alveolärem Epithel (aE), duktalem Epithel (dE),
Myoepithel
(mE)
und Entzündungszellen
(EZ)
im
Tumorzentrum
(TZ)
über
alle
Tumorgruppen (TGr)
Tabelle 69: MMP-7: Vergleich von alveolärem Epithel (aE), duktalem Epithel (dE),
Myoepithel (mE) und Entzündungszellen (EZ) in der Tumorperipherie (TP) über alle
Tumorgruppen (TGr)
Anhang 248
Tabelle 70: MMP-7: Vergleich des Tumorgesamtwertes (TGW) von alveolärem Epithel (aE),
duktalem
Epithel
(dE),
Myoepithel
(mE)
und
Entzündungszellen
(EZ)
über
alle
Tumorgruppen (TGr)
Tabelle 71: MMP-7: Vergleich von Rinde (R) und Mark (M) der assoziierten Lymphknoten
(Lnn), unverändert (unv) und metastasiert (met), über alle Untersuchungsgruppen
Anhang 249
Tabelle 72: MMP-7: Einfacher Gruppenvergleich ergänzt mit dem Tukey Test von
Gefäßendothel (GE), Gefäßmedia (GM) und Stroma (S), Tumornah (TN)
Anhang 250
Tabelle 73: MMP-7: Einfacher Gruppenvergleich ergänzt mit dem Tukey Test, von
Gefäßendothel (GE), Gefäßmedia (GM) und Stroma (S), Tumorfern (TF)
Tabelle 74: MMP-7: Paarweiser Gruppenvergleich von Gefäßendothel (GE), Gefäßmedia
(GM) und Stroma (S) in den Lokalisationen Tumornah (TN) und Tumorfern (TF)
Anhang 251
10.4.2 p-Werte für MMP-11
Tabelle 75: MMP-11: Paarweiser Gruppenvergleich von alveolärem Epithel (aE), duktalem
Epithel (dE), Myoepithel (mE) und Entzündungszellen (EZ) in den Lokalisationen
physiologische Mamma (PM), Tumorzentrum (TZ) und Tumorperipherie (TP); TGr =
Tumorgruppe
Anhang 252
Tabelle 76: MMP-11: Einfacher Gruppenvergleich ergänzt mit dem Tukey Test, von
alveolärem Epithel (aE), duktalem Epithel (dE), Myoepithel (mE) und Entzündungszellen
(EZ) im physiologischen Mammagewebe (PM); TGr = Tumorgruppen
Anhang 253
Tabelle 77: MMP-11: Einfacher Gruppenvergleich, ergänzt mit dem Tukey Test von
alveolärem Epithel (aE), duktalem Epithel (dE), Myoepithel (mE) und Entzündungszellen
(EZ) im Tumorzentrum (TZ); TGr = Tumorgruppen
Anhang 254
Tabelle 78: MMP-11: Einfacher Gruppenvergleich, ergänzt mit dem Tukey Test, von
alveolärem Epithel (aE), duktalem Epithel (dE), Myoepithel (mE) und Entzündungszellen
(EZ) in der Tumorperipherie (TP); TGr = Tumorgruppen
Anhang 255
Tabelle 79: MMP-11: Einfacher Gruppenvergleich, ergänzt mit dem Tukey Test von
alveolärem Epithel (aE), duktalem Epithel (dE), Myoepithel (mE) und Entzündungszellen
(EZ) des Tumorgesamtwertes (TGW); TGr = Tumorgruppen
Anhang 256
Tabelle 80: MMP-11: Einfacher Gruppenvergleich, ergänzt mit dem Tukey Test von Rinde
(R) und Mark (M) der assoziierten Lymphknoten (Lnn), unverändert (unv) und metastasiert
(met)
Anhang 257
Tabelle 81: MMP-11: Einfacher Gruppenvergleich, ergänzt mit dem Tukey Test, von
Gefäßendothel (GE), Gefäßmedia (GM) und Stroma (S), Tumornah (TN)
Anhang 258
Tabelle 82: MMP-11: Einfacher Gruppenvergleich, ergänzt mit dem Tukey Test, von
Gefäßendothel (GE), Gefäßmedia (GM) und Stroma (S), Tumorfern (TF)
Tabelle 83: MMP-11: Paarweiser Gruppenvergleich von Gefäßendothel (GE), Gefäßmedia
(GM) und Stroma (S), Tumornah (TN) und Tumorfern (TF)
Anhang 259
10.4.3 p-Werte für MMP-12
Tabelle 84: MMP-12: Paarweiser Gruppenvergleich von alveolärem Epithel (aE), duktalem
Epithel (dE), Myoepithel (mE) und Entzündungszellen (EZ) in den Lokalisationen
physiologische Mamma (PM), Tumorzentrum (TZ) und Tumorperipherie (TP); TGr =
Tumorgruppe
Anhang 260
Tabelle 85: MMP-12: Einfacher Gruppenvergleich ergänzt mit dem Tukey Test, von
alveolärem Epithel (aE), duktalem Epithel (dE), Myoepithel (mE) und Entzündungszellen
(EZ) im physiologischen Mammagewebe (PM); TGr = Tumorgruppen
Anhang 261
Tabelle 86: MMP-12: Einfacher Gruppenvergleich, ergänzt mit dem Tukey Test von
alveolärem Epithel (aE), duktalem Epithel (dE), Myoepithel (mE) und Entzündungszellen
(EZ) im Tumorzentrum (TZ); TGr = Tumorgruppen
Anhang 262
Tabelle 87: MMP-12: Einfacher Gruppenvergleich, ergänzt mit dem Tukey Test von
alveolärem Epithel (aE), duktalem Epithel (dE), Myoepithel (mE) und Entzündungszellen
(EZ) in der Tumorperipherie; TGr = Tumorgruppen
Anhang 263
Tabelle 88: MMP-12: Einfacher Gruppenvergleich, ergänzt mit dem Tukey Test von
alveolärem Epithel (aE), duktalem Epithel (dE), Myoepithel (mE) und Entzündungszellen
(EZ) des Tumorgesamtwertes; TGr = Tumorgruppen
Anhang 264
Tabelle 89: MMP-12: Einfacher Gruppenvergleich, ergänzt mit dem Tukey Test von Rinde
(R) und Mark (M) der assoziierten Lymphknoten (Lnn), unverändert (unv) und metastasiert
(met)
Anhang 265
Tabelle 90: MMP-12: Einfacher Gruppenvergleich, ergänzt mit dem Tukey Test, von
Gefäßendothel (GE), Gefäßmedia (GM) und Stroma (S), Tumornah (TN)
Anhang 266
Tabelle 91: MMP-12: Einfacher Gruppenvergleich, ergänzt mit dem Tukey Test, von
Gefäßendothel (GE), Gefäßmedia (GM) und Stroma (S), Tumorfern (TF)
Tabelle 92: MMP-12: Paarweiser Gruppenvergleich von Gefäßendothel (GE), Gefäßmedia
(GM) und Stroma (S), Tumornah (TN) und Tumorfern (TF)
Anhang 267
10.4.4 p-Werte für TIMP-3
Tabelle 93: TIMP-3: Paarweiser Gruppenvergleich von alveolärem Epithel (aE), duktalem
Epithel (dE), Myoepithel (mE) und Entzündungszellen (EZ) in den Lokalisationen
physiologische Mamma (PM), Tumorzentrum (TZ) und Tumorperipherie (TP); TGr =
Tumorgruppe
Anhang 268
Tabelle 94: TIMP-3: Einfacher Gruppenvergleich, ergänzt mit dem Tukey Test von
alveolärem Epithel (aE), duktalem Epithel (dE), Myoepithel (mE) und Entzündungszellen
(EZ) im physiologischen Mammagewebe (PM); TGr = Tumorgruppe
Anhang 269
Tabelle 95: TIMP-3: Einfacher Gruppenvergleich, ergänzt mit dem Tukey Test von
alveolärem Epithel (aE), duktalem Epithel (dE), Myoepithel (mE) und Entzündungszellen
(EZ) im Tumorzentrum (TZ); TGr = Tumorgruppe
Anhang 270
Tabelle 96: TIMP-3: Einfacher Gruppenvergleich, ergänzt mit dem Tukey Test von
alveolärem Epithel (aE), duktalem Epithel (dE), Myoepithel (mE) und Entzündungszellen
(EZ) in der Tumorperipherie (TP); TGr = Tumorgruppe
Anhang 271
Tabelle 97: TIMP-3: Einfacher Gruppenvergleich, ergänzt mit dem Tukey Test von
alveolärem Epithel (aE), duktalem Epithel (dE), Myoepithel (mE) und Entzündungszellen
(EZ) des Tumorgesamtwertes (TGW)
Anhang 272
Tabelle 98: TIMP-3: Einfacher Gruppenvergleich, ergänzt mit dem Tukey Test von Rinde (R)
und Mark (M) der assoziierten Lymphknoten (Lnn), unverändert (unv) und metastasiert (met)
Anhang 273
Tabelle 99: TIMP-3: Einfacher Gruppenvergleich, ergänzt mit dem Tukey Test, von
Gefäßendothel (GE), Gefäßmedia (GM) und Stroma (S), Tumornah (TN)
Anhang 274
Tabelle 100: TIMP-3: Einfacher Gruppenvergleich, ergänzt mit dem Tukey Test, von
Gefäßendothel (GE), Gefäßmedia (GM) und Stroma (S), Tumorfern (TF)
Tabelle 101: TIMP-3: Paarweiser Gruppenvergleich von Gefäßendothel (GE), Gefäßmedia
(GM) und Stroma (S), Tumornah (TN) und Tumorfern (TF)
Anhang 275
10.5 Lösungen und Puffer
Die Angaben der Punkte 10.5, 10.6 und 10.7 wurden aus der Dissertation von Frau
Dr. Vanja Paltian (PALTIAN, 2006) entnommen.
Citratpuffer (pH 6,0)
2,1 g Citronensäuremonohydrat in einem Liter Aqua dest. lösen und den pHWert der Lösung mit 1 N NaOH auf 6,0 einstellen.
3,3’-Diaminobenzidin-tetrahydrochloridlösung (DAB)
100 mg DAB in 200 ml TBS, pH 7,6 lösen und auf dem Magnetrührer mischen,
anschließend filtrieren und 200 µl 30 %iges H2O2 hinzugeben.
0,5 %iges H2O2 in Methanol oder TBS
3 ml 30%iges H2O2 in 200 ml Methanol, reinst. oder 200 ml TBS, pH 7,6 geben
und auf dem Magnetrührer mischen.
1 normale Natriumhydroxid-Lösung (1 N NaOH)
40 g Natriumhydroxid-Plätzchen in einem Liter Aqua dest. lösen.
Tris-Puffer ("tris-buffered saline", TBS), pH 7,6
Stammlösung
60,57g Tris-(hydroxymethyl)-aminomethan in 610 ml Aqua dest. lösen und ca.
390 ml 1 N HCl zufügen, bis ein pH-Wert von 7,6 erreicht ist.
Gebrauchslösung
500 ml Stammlösung in 4500 ml 0,8%ige NaCl- Lösung geben (36 mg NaCl in
4500 ml Aqua dest.) und den pH-Wert auf 7,6 einstellen.
Anhang 276
10.6 Bezugsquellen für Chemikalien und Antikörper
10.6.1 Antikörper und Seren
Calbiochem-Novabiochem GmbH, Schwalbach
TIMP-3 (Ab-1), Klon 136-13H4, Cat # IM 43L
Klinik für Pferdekrankheiten, Stiftung Tierärztliche Hochschule Hannover
Pferdeserum, unverdünnt
Klinik für Kleine Klauentiere, Stiftung Tierärztliche Hochschule Hannover
Schweineserum, unverdünnt
NeoMarkers, Fremont, CA, USA, über Dunn Labortechnik GmbH, Asbach
MMP-11 (Ab-5), Klon SL3.05, MS-1035-PO
Triple Point Biologics Inc., Portland, OR, USA über Acris Antibodies GmbH,
Hiddenhausen
MMP-7-Antikörper, polyklonal, Kaninchen Anti-Mensch, RP3MMP-7
MMP12-Antikörper, polyklonal, Kaninchen Anti-Mensch, RP1MMP-12
Vector Laboratories Inc., Burlingame, CA, USA (über Biologo, Kronshagen)
Biotinylierter Ziege-anti-Kaninchen-Antikörper, BA-1000
Biotinylierter Pferd-anti-Maus-Antikörper, BA-2000
Vectastain Elite ABC-Kit, PK-6100
10.6.2 Chemikalien
Biologo, Dr. Hartmut Schultheiß e.K., Immunbiologische Produkte, Kronshagen
Aszitesflüssigkeit von nicht-immunisierten Balb/cJ Mäusen, CL8100
Anhang 277
CVH Chemie-Vertrieb GmbH & Co. Hannover KG, Hannover
Formaldehyd, 37%, Art.Nr. 101064
Hämatoxylin, 4305
Natriumhydroxid-Plätzchen (NaOH) p.a., 6498
Nobaglove Verbandmittel GmbH u. Co. KG, Wetter
Nobaglove® -Nitril
Roth C. GmbH & Co. KG, Karlsruhe
Citronensäure-Monohydrat, Art.-Nr. 3958.1
Essigsäure-n-butylester (EBE), Art.-Nr. 4600.7
Ethanol, vergällt, Art.-Nr. K928.2
Formaldehyd 37%, Art.-Nr. 7398
Hämalaunlösung sauer nach Mayer, Art.-Nr. T865.2
Methanol, Rotipuran®, 99,9%, p.a., Art.-Nr. 4627
Natriumchlorid (NaCl), Art.-Nr. P029.2
2-Propanol, Art.-Nr. 9866.4
Roti-Clear® Art.-Nr. A 5381
Roti®-Histol, Art.-Nr. 6640
Roti®-Histokitt II, Art.-Nr. T160.2
Rotiprotect®-Nitrilhandschuhe, Art.-Nr. P777.1
Salzsäure 25% reinst, Art.-Nr. X 897.1
Tris-(hydroxymethyl)-aminomethan, TRIS Ultra Qualität, Art.-Nr. 5429.3
Wasserstoffperoxid 30% Rotipuran® p.a., Art.-Nr. 8070.1
Sigma-Aldrich Chemie GmbH, Taufkirchen (ehemals Sigma, Fluka, Riedel de
Haën)
3,3’-Diaminobenzidin-tetrahydrochlorid Dihydrat purum (DAB) p.a., 32750
Citronensäure-1-hydrat p.a., 33114
Kaninchenserum, R4505
Waldeck GmbH & Co. KG, Münster
Eiweiß-Glycerin für Mikrotom-Schnitte, 3T 012
Anhang 278
VWR TM International GmbH, Darmstadt (vormals Merck KGaA, Darmstadt)
Natriumhydroxid-Plätzchen (NaOH) p.a., 1.06498.1000
Natronlauge (NaOH) p.a., 1.09137
Salzsäure (HCl) 1N, 1.09057.1000
Hämatoxylin, krist., 1.15938.0100
10.7 Bezugsquellen für Geräte und Einmalartikel
Engelbrecht Medizin-und Labortechnik GmbH, Edermünde
Automat Star, Deckgläser für Mikroskopie, 24 x 40 mm, St1
Gerhard Menzel Glasbearbeitungswerk GmbH & Co. KG, Braunschweig
SuperFrost®Plus Objektträger, 041300
Gesellschaft für Labortechnik mbH, Burgwedel
Paraffinstreckbad 1052
G. Kisker, Steinfurt
PAP-Pen®, MKP-1
Heraeus Sepatech GmbH, Osterode
Zentrifuge Labofuge®A, 2500
Köttermann Labortechnik, Uetze-Hänigsen
Wasserbad Typ 3047
Leica Microsystems Nussloch GmbH, Nussloch
Färbegerät Leica ST 4040
Medite Medizintechnik, Burgdorf
Objektträger-Eindeckautomat Promounter RCM 2000
Anhang 279
Olympus, Hamburg
Standard-Binokular, Lichtmikroskop BO 61
Sartorius AG, Göttingen
Elektronische Präzisionswaage L310, WL-6006-m88091
Papierfaltenfilter 270 mm Durchmesser, FT-4-303-270
Schleicher & Schuell, Dassel
Papierfilter, S&S Rundfilter 150 mm Durchmesser, 311612
Thermo Electron GmbH, Dreieich
Shandon CoverplatesTM, 72110013
Shandon Sequenza® Slide Racks (Einsätze für Coverplates), 7331017
Pathcentre (Gewebeeinbettungsapparat)
Vogel GmbH & Co. Kg, Gießen
Tissue-Tec® TECTM 5, Einbettsytem
Zeiss, Oberkochen
Axiophot, Photomikroskop
Anhang 280
10.8 Abkürzungsverzeichnis
A
Anzahl
ABC
Avidin-Biotin-PeroxidaseKomplex
Hd.
Hund
HB-EGF
Heparin
Epidermal
Factor
A
Disintegrin
Metalloproteinase
Aqua dest.
Aqua destillata
HE
Hämatoxylin-Eosin
aE
alveoläres Epithel
HCl
Salzsäure
AGTR2
Angiotensin
Rezeptor
HYP
Hyperplasie
AK
Antikörper
I
Signalintensität
AS
Alport Syndrom
IGF-BP
insulin-like-growthfactor-binding-protein
bMMT
benigner
Mammamischtumor
kAd
komplexes Adenom
BSH
Berner Sennenhund
kCa
komplexes Karzinom
kDa
Kilodalton
KG
Kontrollgewebe
Lnn
Lymphknoten
La. Carc.
Lymphangiosis
carcinomatosa
m
männlich
MCF-7
Michigan-CancerFoundation-7
CLEC3A
II
and
Binding
Growth
ADAMs
Typ
2
C-type lectin domain family
member A
CD 10
Neutrale Endopeptidase
CD44HSPG
CD44 heparan sulfate
proteoglycane
Chondros
Chondrozyten
dE
duktales Epithel
DSH
Deutscher Schäferhund
eAd
einfaches Adenom
eCa
einfaches Karzinom
EGF
Epidermal Growth Factor
E (-Nr.)
Einsendungsnummer
Em
Emboli
EMT
epithelial to mesenchymal
transition
EZM
Extrazelluläre Matrix
mE
myoepitheliales Epithel
mk
männlich kastriert
M
Molarität
M
Mark
Max.
Maximum
met.
metastasiert
Min.
Minimum
Min.
Minuten
MMPs
FGF
Matrixmetalloproteinasen
fibroblast growth factor
MT-1-MMP
membrane
type-1
matrixmetalloproteinase
g
Gramm
G
Gravitation
MW
Mikrowelle
GE
Gefäßendothel
MW
Molekulargewicht
GM
Gefäßmedia
Anhang 281
TBS
n
Anzahl
N
Normalität
NaOH
Natronlauge
Nr.
Nummer
o.b.B.
ohne
Befund
o.A.
ohne Angaben
PCPE
„Tris-buffered saline“,
Trisgepufferte
Kochsalzlösung
TF
Tumorfern
TN
Tumornah
TNF
tumor necrosis factor
TFPI-2
tissue
inhibitor
TGF
transforming
factor
TGr
Tumorgruppe
TGW
Tumorgesamtwert
TIMPs
Tissue Inhibitors
Matrixmetalloproteinases
besonderen
type 1 C-proteinase
enhancer protein
pathway
growth
PM
physiologische
Mamma
PNS
Pferdenormalserum
TP
Tumorperipherie
R
Rinde
Tris
RECK
reversion
inducing
cysteine-rich
protein
with kazal motifs
Tris-(hydroxymethyl)aminomethan
TZ
Tumorzentrum
rekombinantes
humanes MMP-7
UGr.
Untersuchungsgruppe
unv.
unverändert
VEGF-C
lymphatic endothelial
growth factor
rhMMP-7
RT
Raumtemperatur
S (-Nr.)
Sektionsnummer
S
Stroma
SNP
single
nucleotid
polymorphisms
SNS
Schweinenormalserum
ST3
Stromelysin-3
TAMs
tumorassoziierte
Makrophagen
w
weiblich
WHO
World
Organisation
wk
weiblich kastriert
Zn
Zink
of
Health
Danksagung 282
11
Danksagung
Frau Priv. Doz. Dr. Susanne Alldinger danke ich ganz besonders für die Vermittlung
der Dissertation und das interessante Dissertationsthema, das Überlassen ihres
privaten Mikroskops zur Auswertung der Schnitte, die konstruktive und zügige
Beantwortung von Fragen aller Art rund um die Doktorarbeit und die „Anlaufstelle in
Gießen“, die Korrektur des Manuskripts und nicht zuletzt für die Stelle bei der DVG,
die es mir ermöglichte, zusätzlich zur Dissertation mit einem Bein im Berufsleben zu
stehen.
Ich danke Herrn Prof. Dr. Wolfgang Baumgärtner, PhD für seine flexible
Terminbereitstellung für meine Dissertationsvorträge, sein Verständnis und die stets
offene Tür für die „Doktorandin aus Gießen“.
Ich danke Herrn Dr. Klaus Failing und ganz herzlich Frau Marion Sparenberg von der
Arbeitsgruppe Biomathematik und Datenverarbeitung der Justus-Liebig-Universität
Gießen, die mir spontan bei der statistischen Auswertung meiner „Datenberge“ mit
Rat und Tat zur Seite standen und auch die hundertste Frage meinerseits mit
Engelsgeduld klärten.
Vielen Dank an Herrn Christoph Grevelding und Herrn Prof. Dr. Zahner, die mir zur
Klärung offener Fragen mit Frau Dr. Alldinger bezüglich der immunhistologischen
Auswertung spontan und herzlich Zugang zu einen binokulären Mikroskop des
Fachbereiches Parasitologie der Justus-Liebig-Universität-Gießen ermöglichten.
Dr. Verena Haist und Dr. Frauke Seehusen sei ein herzlicher Dank ausgesprochen
für die stets sehr herzliche Begrüßung, Aufnahme und Hilfe bei Recherchen während
meiner Ausflüge ins Pathologische Institut der TiHo Hannover. Verena möchte ich
auch sehr für die Übernachtungsmöglichkeit während meiner Hannover-Aufenthalte
danken.
Herrn Prof. Dr. Manfred Reinacher und meinem Freund Dr. Manfred Henrich aus
dem Institut für Veterinär- Pathologie der Justus-Liebig-Universität Gießen danke ich
für die unbürokratische Bereitstellung eines Fotomikroskopes, um Aufnahmen der
Schnittpräparate machen zu können. Diese spontane Hilfe war bei einer externen
Doktorarbeit immens wichtig, danke!
Danksagung 283
Herrn Dr. Philip Bridger, meinem Freund und zeitweiligen Mitbewohner danke ich für
die
Erläuterung
des
SPSS-Programms
und
seiner
geduldigen
Hilfe
bei
Computerproblemen.
Meinem Mann Sven danke ich aufs allerherzlichste für zwei Vormittage pro Woche,
die er sich in der frühen Phase meiner Doktorarbeit freischaufelte, um „Dienst am
Kind“ zu tun und mir die Auswertung meiner Daten zu ermöglichen. Danke für
unzählige weitere Stunden, die er mir zur Verfügung stellte, indem er die Brut
betreute, für unendlich viele motivierende Gespräche, den Computerpannendienst
und seinen unerschütterlichen Glauben an mich und diese Arbeit. Ohne ihn hätte
diese Arbeit nicht verwirklicht werden können!
Meinen Kindern Leo und Oskar danke ich für ihre Geduld, ihre Lebensfreude und
ihren Egoismus, der mich stets den richtigen Ausgleich zu den Stunden vor dem
Computer finden ließ.
Meinem Vater danke ich für seine Ermunterung, Tiermedizin zu studieren, seine
immerwährende Unterstützung und seine Beharrlichkeit, wenn es darum ging, mich
von der immensen Bedeutung einer Dissertation zu überzeugen. Er hat die Hoffnung
nie aufgegeben, hier ist das Ergebnis.
Auch meiner Mutter möchte ich herzlich danken, die meinen Weg durch Studium und
Dissertation eng begleitet und unterstützt hat.
Allen weiteren Freunden und Familienmitgliedern, besonders Estelle, Manfred und
Kika, die so manchen Motivationsstau meinerseits auflösten, sei hiermit ein dickes
Dankeschön ausgesprochen, ihr seid die Besten!
Und nicht zuletzt möchte ich meinem inneren Schweinehund danken, dass er sich
auf das Agility-Training eingelassen hat und mittlerweile den Wesenstest mit Bravour
besteht.