Liquid Stable Lithium Enzymatic Assay

Diazyme Laboratories
12889 Gregg Court
Poway, CA 92064, USA
Tel: +1 858-455-4768 / Fax: +1 858-455-3701
Email [email protected]
Website: www.diazyme.com
Liquid Stable Lithium Enzymatic Assay
Assay-Prinzip
Ausführung
Die Reagenzien für den Liquid Stable Lithium Enzymatic Assay von
Diazyme sind nur in größeren Mengen in den folgenden
Ausführungen erhältlich:
Ausführung
Bestellnr.
Kit-Umfang
Alle
DZ116B-K
Kit mit halber
Menge
DZ116B-K01
Beckman CX/LX
DZ116B-KB1
Beckman CX/LX
DZ116B-KB2
Hitachi 917
DZ116B-KH1
Hitachi 917
DZ116B-KH2
R1: 2 x 20 mL
R2: 2 x 10 mL
Kal.: 3 x 3 mL
R1: 2 x 10 mL
R2: 2 x 5 mL
Kal.: 3 x 3 mL
R1: 1 x 20 mL
R2: 1 x 10 mL
Kal.: 5 x 3 mL
R1: 2 x 20 mL
R2: 2 x 10 mL
Kal.: 5 x 3 mL
R1: 2 x 10 mL
R2: 2 x 5 mL
Kal.: 3 x 3 mL
R1: 2 x 20 mL
R2: 2 x 10 mL
Kal.: 3 x 3 mL
Phosphatase
Substrat + H2O -------------------------------------------- → AMP+Pi
5’-NT/ADA/PNP/XOD
AMP+2H 2 O+Pi+2O 2 ----------------------- —> Pi+NH 3 +R-1P+Harnsäure+2H 2 O 2
Peroxidase
H2O2 +4-AA+EHSPT ------------------------------------ —> 4H 2 O +
Chinonfarbstoff
(max. λ: 556 nm)
Verwendungszweck
Das Lithium Enzymatic Assay Kit von Diazyme dient zur
quantitativen In-vitro-Bestimmung von Lithium in Humanserum.
Anhand von Lithiumbestimmungen wird im Wesentlichen
sichergestellt, dass die Medikamentierung von Patienten mit bipolarer
Störung korrekt eingestellt ist und Toxizität infolge von
Überdosierungen vermieden wird.
Klinische Bedeutung2,3
Seit mehreren Jahrzehnten ist Lithiumcarbonat eine der wirksamsten
Substanzen zur Behandlung von Patienten mit bipolarer Störung
(auch als „manisch-depressive Erkrankung“ bekannt). Lithium
verändert den intraneuronalen Katecholaminstoffwechsel, hemmt die
noradrenalinempfindlichen Adenylylcyclasen, verringert die
Neurotransmission und erhöht die neuronale Erregbarkeit durch
Veränderung des Aminspiegels im zentralen Nervensystem (ZNS).
Neuere Studien haben außerdem gezeigt, dass sich Lithium auch zur
Bekämpfung von Alzheimer eignen könnte. Lithium hat jedoch
zahlreiche Nebenwirkungen. Eine Überdosierung kann zu einer
akuten Li -Vergiftung führen, die aufgrund der geringen
therapeutischen Breite des Lithiums relativ häufig auftritt. Zum
Beispiel weisen Li -Spiegel von über 1,5 mM im Serum (12 Stunden
nach der Verabreichung) in der Regel auf ein hohes Vergiftungsrisiko
hin. Daher ist eine zeitnahe und exakte Beobachtung des
Lithiumspiegels im Serum nach der Verabreichung im Rahmen der
Therapie unerlässlich.
+
+
70417 Rev. I DE
Die Lithiumbestimmung erfolgt spektrophotometrisch anhand eines
kinetisch gekoppelten Enzymassay-Systems mit der SpezialPhosphatase von Diazyme1, deren Aktivität lithiumempfindlich ist
(IC50 = 0,1 mM). Durch enzymatische Kopplung wird das
Phosphatasesubstrat durch eine Reihe enzymatischer Reaktionen in
Hypoxanthin umgewandelt, was zur Bildung von Harnsäure und
Hydrogenperoxid (H 2 O 2 ) führt. Das so entstandene H 2 O 2 reagiert
mit N-ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3-m-toluidin (EHSPT)
und 4-Aminoantipyrin (4-AA) in Gegenwart von Peroxidase (POD)
zu einem Chinonfarbstoff mit einer maximalen Absorption bei
556 nm. Die Bildungsrate des Chinonfarbstoffs ist antiproportional
zur Lithiumkonzentration in Serumproben. Die Reaktionsgleichung
der gekoppelten Enzymassay-Reaktion lautet folgendermaßen:
5’-NT: 5’-Nucleotidase
ADA: Adenosindesaminase
PNP: Purin-Nukleosid-Phosphorylase
XOD: Xanthinoxidase
AMP: Adenosin-5'-phosphat
R-1-P: Ribose-1-phosphat
Zusätzlich benötigte Materialien
Temperaturgeregelter Analyzer (37 °C) zur Dispensierung von
2 Reagenzien und zur Messung der Absorption bei 550 nm. Im
Rahmen der Guten Laborpraxis wird die Verwendung von
Kontrollmaterialien empfohlen.
Zusammensetzung der Reagenzien
Aktive Inhaltsstoffe
Reagenz 1: Flüssigreagenz
Enzym-/Substratflüssigkeit, die Good’s Puffer,
Phosphatasesubstrat, 4-AA, Enzyme und Stabilisatoren enthält
Reagenz 2: Flüssigreagenz
Enzym-/Substratflüssigkeit, die Good’s Puffer, Enzyme, EHSPT,
MgCl 2 und Stabilisatoren enthält
Diazyme Laboratories
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Gültig ab: 02/01/12
Vorbereitung der Reagenzien
Kalibrierung
Die Lithium-Flüssigreagenzien von Diazyme sind gebrauchsfertig.
Die Kontrollen werden in lyophilisierter Form bereitgestellt.
Rekonstituieren Sie die Kontrollen vorsichtig gemäß den Anweisungen in der beiliegenden chargenspezifischen Dokumentation.
Das Verfahren zur Vorbereitung der Kontrollen ist der Packungsbeilage der jeweiligen Kontrolle zu entnehmen.
Dieser Assay sollte vierzehntägig mit Lithiumkalibratoren mit
niedriger, mittlerer und hoher Konzentration auf dem Hitachi
917 Analyzer für die Klinische Chemie kalibriert werden.
Lagerung und Haltbarkeit der Reagenzien
Bei vorschriftsmäßiger Lagerung bei 2-8 °C sind die
Reagenzien, Kalibratoren und Kontrollen bis zu dem auf dem
Etikett angegebenen Verfallsdatum haltbar.
Validierungsstudien mit dem Hitachi 717 Analyzer für die
Klinische Chemie haben gezeigt, dass die Reagenzien ab dem
Herstellungsdatum mindestens 12 Monate lang haltbar sind. Die
Stabilität der Reagenzien im Hitachi 717 System beträgt laut der
Studien mindestens 1 Monat.
Entnahme und Handhabung von Proben
2,3
Der Assay ist zur Verwendung mit nicht hämolysiertem Serum
vorgesehen. Es ist keine besondere Handhabung oder Vorbehandlung notwendig. Zur Beurteilung der Therapiewirksamkeit
wird empfohlen, standardmäßig 12 Stunden nach der Verabreichung
die Lithiumkonzentration im Serum zu bestimmen. Die Serumproben sind so zu entnehmen, dass die Messung so schnell wie
möglich nach der Entnahme beginnen kann.
Vorsichtsmaßnahmen
NICHT EINNEHMEN. Kontakt mit Haut und Augen vermeiden.
Kontrollen sind Humanserumderivate. Proben, die Material
humanen Ursprungs enthalten, sind als potenziell infektiös zu
betrachten und gemäß den Vorschriften für sicheres Arbeiten im
Labor zu behandeln, wie im Dokument „Biosafety in
Microbiological and Biomedical Laboratories“ (HHS Publication
Number [CDC] 93-8395) beschrieben. Weitere Sicherheitshinweise
zur Lagerung und Handhabung dieses Produkts sind dem
Sicherheitsdatenblatt des Produkts zu entnehmen. Sicherheitsdatenblätter sind bei unserer Kundendienstabteilung unter der
Rufnummer +1 858-455-4768 erhältlich.
Assay-Schema mit dem automatisierten Analyzer für die
Klinische Chemie
Qualitätskontrolle
Im Rahmen der Guten Laborpraxis wird die Verwendung von
Kontrollmaterialien empfohlen. Bei der Durchführung externer
Qualitätskontrollen sind die jeweiligen nationalen und regionalen
Richtlinien einzuhalten. Positiv- und Negativkontrollen für Lithium
von Diazyme sind separat erhältlich. Die Bestellnummer lautet
DZ 116B-CON.
Zur Gewährleistung einer funktionalen Qualitätskontrolle sollten
Positiv- und Negativkontrollen mit bekannten Werten wie
unbekannte Proben gemessen werden.
Ergebnisse
Die Ergebnisse werden in der Einheit mmol/L ausgegeben.
Hinweis: Proben, deren Ergebniswerte 3,0 mmol/L
überschreiten, sind mit einem gleichen Teil 0,9 %-iger
Kochsalzlösung (1:1) zu verdünnen und erneut zu analysieren.
Die Ergebnisse sind mit 2 zu multiplizieren.
Referenzbereich 2, 3, 4
Der 12 Stunden nach der Verabreichung erwartete Talspiegel liegt
bei 1,0-1,2 mM. Lithiumspiegel, die 12 Stunden nach der
Verabreichung bei über 1,5 mM liegen, weisen auf ein hohes
Vergiftungsrisiko hin. Die angegebenen Werte sind nur als
Richtwerte zu verstehen. Jedes Labor sollte nach Möglichkeit einen
eigenen Referenzbereich für die jeweilige Population ermitteln bzw.
ableiten.
Einschränkungen
1. Der Assay ist ausschließlich für die Verwendung mit Humanserumproben ausgelegt.
2. Es besteht die Möglichkeit, dass technische Fehler oder
Verfahrensfehler sowie andere, hier nicht aufgeführte
Substanzen oder Faktoren den Test beeinträchtigen und zu
falschen Ergebnissen führen.
Leistungsmerkmale
Alle Leistungsstudien wurden mit dem automatisierten Hitachi 717
Analyzer für die Klinische Chemie durchgeführt.
Richtigkeit
R1: 180 μL
Probe: 5 μL
R2: 90
μL
37 °C
0
550 nm
5
8
A1
10 Min.
A2
Applikationsdatenblätter (Parameter) zur Verwendung des Liquid
Stable Lithium Assays von Diazyme auf automatisierten Analyzern
für die Klinische Chemie sind auf Anfrage erhältlich. Rufen Sie uns
an unter +1 858-455-4768 oder senden Sie uns eine E-Mail an
[email protected].
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N
r2
Steigung
yAchsenabschnitt
Diazyme Laboratories
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Liquid Stable von
Diazyme im Vergleich zu
Lyophilized von Diazyme
(Hitachi 717 Analyzer)
62
0,987
0,932
0,088
Liquid Stable von
Diazyme
im Vergleich zur ISE
62
0,99
1,03
-0,04
Gültig ab: 02/01/12
Präzision
Innerhalb einer Messreihe
1,0 mM Li+
(10 Tage, n=4)
Mittelwert
0,97 mM
VK%
4,3 %
2,5 mM Li+
(10 Tage, n=4)
2,50 mM
1,2 %
Insgesamt
Mittelwert
VK%
1,0 mM Li+
(10 Tage, n=4)
0,97 mM
4,8 %
2,5 mM Li+
(10 Tage, n=4)
2,50 mM
1,3 %
Linearität
Der Messbereich des Assays liegt zwischen 0,19 mmol/L und
3,0 mmol/L.
Nachweisgrenzen
Beim Testen nach den EP 17-A Richtlinien wurden folgende
Werte ermittelt: eine Leerwertgrenze (LOB) von 0,02 mM
Lithium; eine Nachweisgrenze (LOD) von 0,051 mM Lithium und
eine Quantifizierungsgrenze (LOQ) von 0,19 mM Lithium.
Störeinflüsse
Der Assay wird von den folgenden Substanzen bei den
angegebenen Konzentrationen nicht beeinflusst: Na+ bei 200 mM,
NH 4 + bei 0,5 mM, Ca2+ bei 4,0 mM, Mg2+ bei 2,0 mM,
Ascorbinsäure bei 5,0 mM, Zn2+ bei 0,25 mM, Fe3+ bei 0,25 mM,
Cu2+ bei 0,25 mM, K+ bei 10 mM, Triglyceride bei 1000 mg/dL,
direktes Bilirubin bei 20 mg/dL und indirektes Bilirubin bei
45 mg/dL sowie Hämoglobin bei 500 mg/dL.
Literatur
1.
J.R. Murguia, J.M. Belles and R. Serrano A salt-sensitive
3'(2'),5'-bisphosphate nucleotidase involved in sulfate
activation (1995), Science 267: 232-234
2. T.P. Moyer and C.E. Pippenger, Therapeutic Drug
Monitoring, Tietz Textbook of Clinical Chemistry. CA
C.A. Burtis and E.R. Ashwood eds, (Second ed.) W.B.
Saunders Company.
3. A. Amdisen, Serum Lithium Determinations for Clinical
Use (1967), Scand. J. Clin. Lab Invest. 20:104-108.
4. M.S. Wachtel et al., Creation and Verification of
Reference Intervals (1995), Laboratory Medicine 26: 593597.
MDSS
Schiffgraben 41
30175 Hannover,
Deutschland
12889 Gregg Court
Poway, CA 92064, USA
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Fax: (858) 455-3701
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