Einfluss von Histamin Hi- und H4-Rezeptor

Aus dem Institut für Pharmakologie
der Medizinischen Hochschule Hannover (MHH)
im Rahmen der strukturierten Doktorandenausbildung
der Hannover Biomedical Research School
Einfluss von Histamin Hi- und
H4-Rezeptor-Antagonisten auf die Aktivierung
von CD4+ T-Lymphozyten im Rahmen der
allergischen Atemwegsentzündung der Maus
Dissertation
zur Erlangung des Doktorgrades der Medizin
in der Medizinischen Hochschule Hannover
Vorgelegt von
Robin Georg Kleine
aus Flensburg
Hannover 2015
http://d-nb.info/1081917660
Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis
I
Abkürzungsverzeichnis
V
Abbildungsverzeichnis
IX
1
Einleitung
1
1.1 Grundzüge des Immunsystems
1.1.1 Dendritische Zellen
3
1.1.2 T-Lymphozyten
6
1.1.3 Priming und die immunologische Synapse
10
1.2 Allergische Erkrankungen der Atemwege
13
1.3 Histaminrezeptoren
17
1.3.1 Histamin Hi-Rezeptor
18
1.3.2 Histamin H2-Rezeptor
18
1.3.3 Histamin H3-Rezeptor
19
1.3.4 Histamin H4-Rezeptor
19
1.4 Histaminrezeptor-Antagonisten
20
1.4.1 Mepyramin
20
1.4.2 JNJ7777120
20
1.5 Fragestellung
2
1
21
Material
22
2.1 Versuchstiere
22
2.2 Geräte, Arbeitsmaterialien und Programme
23
I
Inhaltsverzeichnis
3
2.3 Reagenzien, Medien und Zytokine
25
2.4 Puffer und Lösungen
28
2.5 Antikörper
29
2.6 Zellanreicherungs- und ELISA-Kits
30
Methoden
31
3.1 Zellaufbereitung
31
3.1.1 Isolierung von CD4+ T-Lymphozyten aus Lymphknoten der
Maus
31
3.1.2 Isolierung von CD11c+ dendritischen Zellen aus Milzen der
Maus
32
3.2 In vitro Proliferationsassay mit CD4+ T-Zellen
33
3.2.1 Versuchsaufbau des in vitro Proliferationsassay
33
3.2.2 In vitro T-Zell-Proliferation in Anwesenheit von HiR- und
HUR-Antagonisten
34
3.2.3 Durchflusszytometrische Analyse der T-Zell-Proliferation im
MACSQuant Analyzer
36
3.3 Zytokinexpression nach Kokultur von CD4+ T-Zellen mit
CD11c+ dendritischen Zellen
37
3.3.1 Versuchsaufbau
der
Zytokinbestimmung
Kokultur
und
quantitative
37
3.3.2 Kokultur in Anwesenheit von HiR- und HUR-Antagonisten
3.4 Expression von Aktivierungsmarkern auf T-Lymphozyten
und dendritischen Zellen in Anwesenheit von HiR- und
hUR-Antagonisten
39
40
3.4.1 Aktivierungsmarker auf T-Lymphozyten
40
3.4.2 Aktivierungsmarker auf dendritischen Zellen
40
3.4.3 Durchflusszytometrische Analyse der Aktivierungsmarker
41
3.5 In vivo Versuche
42
3.5.1 Akutes Asthmamodell in der Maus mit in vivo Blockade des
HiR und H4R während der Sensibilisierungsphase
II
42
Inhaltsverzeichnis
3.5.2 Proliferationsassay mit CD11c+ DC aus gegen OVA
sensibilisierten und mit Histaminrezeptorantagonisten
behandelten Mäusen
43
3.5.3 In vivo T-Zell-Proliferation
44
3.6 Statistische Analyse
4
45
Ergebnisse
46
4.1 Pilotstudie:
Etablierung
T-Zell-Proliferationsassay
des
in
vitro
46
4.1.1 Isolierung von T-Zellen und dendritischen Zellen
46
4.1.2 Aktivierung der T-Zellen durch dendritische Zellen
47
4.1.3 CFSE-Färbung
47
4.2 T-Zell-Proliferation in vitro
48
4.2.1 T-Zell-Proliferation nach Inkubation der T-Zellen mit HiRund HUR-Antagonisten
48
4.2.2 T-Zell-Proliferation nach Inkubation der dendritischen Zellen
mit HiR- und HUR-Antagonisten vor Beladung mit Ovalbumin
50
4.2.3 T-Zell-Proliferation
nach
Inkubation
OVA-beladener
dendritischer Zellen mit HiR- und HUR-Antagonisten
50
4.2.4 T-Zell-Proliferation nach Inkubation des gesamten
Versuchsansatzes mit HiR- und HUR-Antagonisten
51
4.3 In vitro T-Zell-Proliferationsassay mit in vivo behandelten
dendritischen Zellen
53
4.4 T-Zell-Proliferation in vivo
55
4.5 Zytokinexpression von CD4+ T-Zellen nach Kokultur mit
CD11c+ dendritischen Zellen in Anwesenheit von HiR- und
HUR-Antagonisten
56
4.5.1 Zytokinexpression nach Inkubation der T-Zellen mit HiRund HUR-Antagonisten
56
4.5.2 Zytokinexpression nach Inkubation der dendritischen Zellen
mit HiR- und HUR-Antagonisten vor Beladung mit OVA
57
4.5.3 Zytokinexpression
nach
Inkubation
OVA-beladener
dendritischer Zellen mit HiR- und HUR-Antagonisten
58
III
Inhaltsverzeichnis
4.5.4 Zytokinexpression nach Kokulturansatz von dendritischen
Zellen und T-Zellen in Anwesenheit von H-iR- und
hUR-Antagonisten
4.6 Aktivierungsmarker
59
60
4.6.1 Aktivierungsmarker auf T-Lymphozyten
60
4.6.2 Aktivierungsmarker auf dendritischen Zellen
62
5
Diskussion
64
6
Zusammenfassung
74
7
Literaturverzeichnis
75
8
Anhang
82
8.1 Danksagung
82
8.2 Lebenslauf
83
8.3 Eidesstattliche Erklärung
84
IV