1 Speicherung, Übertragung und Expression genetischer

1 Speicherung, Übertragung und Expression genetischer Informationen
5.Merke!
1.10.4 Plasmide
–– Als DNA-Polymerase wird die hitzestabile taqPolymerase (Thermus aquaticus aus heißen
Meeresquellen) benutzt.
–– Eine RT-PCR ist eine PCR, die RNA als Ausgangsmaterial nutzt und erst cDNA synthetisiert.
1
DNA-Polymerase
(z. B. taq: von Thermus aquaticus)
dATP
dGTP
dCTP
dTTP
Primer 1
Primer 2
Merke!
5’
3’
3’
5’
DNATemplate
1
3’
5’
3’
2
Annealing bei 55 °C
3’
3’
5’
20 – 30 Zyklen
3’
5’
5’
3’
3
Elongation bei 72 °C
5’
1.10.5 Gelelektrophorese
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5’
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Abb. 43: PCR
Übrigens …
Bakterielle Plasmide können auch Antibiotika-Resistenz-Gene enthalten, die
für Antibiotika-spaltende Enzyme kodieren. Ein Beispiel ist das Enzym Lactamase, welches das Antibiotikum Penicillin G (Benzylpenicillin) aufspaltet.
Die Bakterien sind damit gegen dieses
Penicillin resistent. Sie überleben und
die Infektion breitet sich weiter aus.
3’
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Eine Abfolge einzelner Schnittstellen für Restriktionsendonukleasen wird auch als Polyklonierungsstelle (multiple cloning site) eines Plasmidvektors bezeichnet.
Denaturierung bei 95 °C
5’
5’
Plasmide sind ringförmige doppelsträngige
DNA-Abschnitte in Bakterien. Sie können z. B.
Gene für eine Antibiotika-Resistenz besitzen
und zwischen Bakterien ausgetauscht werden.
Für ihre Verdoppelung benötigen sie einen eigenen Replikationsursprung (origin). Auch die
Gentechnologie nutzt die Plasmide als Vektoren (Transporter) für DNA-Sequenzen. Über
diese Technologie ist es möglich, menschliche Proteine – z. B. Peptidhormone – von Bakterien produzieren zu lassen.
x-mal
5’
medi-learn.de/6-bc4-43­
Die Methode der Gelelektrophorese bietet die
Möglichkeit, Proteine, DNA und RNA durch das
Anlegen eines elektrischen Feldes entsprechend ihrer Größe und Ladung aufzutrennen.
Nachweismöglichkeiten:
–– Proteine werden im Western Blot nachgewiesen,
–– RNA wird im Northern Blot nachgewiesen
und
–– DNA wird im Southern Blot nachgewiesen.