Vorschau von „Microsoft Word

13/13
Liebe Kolleginnen und Kollegen
tollen Einblick in die Welt der Reproduktion von Rindern.
Treffpunkt der 26.EFA Tagung war das Hotel Grauer Bär
Interessanterweise ist die In Vitro Maturation hierbei
in Innsbruck. Das schöne Bergpanorama der Nordkette
Standardverfahren für die In Vitro Produktion von
zeigte sich zwar erst Samstag zu Mittag, dennoch lud der
Rinderembryonen. Wir haben auch erfahren dass der
Anblick ein, vom Gipfelsturm und dem schönen Ausblick
Mensch dem Rind viel mehr ähnelt als der Maus. Kerstin
von der Seegrube aus auf Innsbruck zu träumen. Nach
Dreier zeigte in Innsbruck gesammelte Daten zur
der
Veränderung
Jahreshauptversammlung
(Protokoll
schon
im
Spermiogramm
bei
zweimaliger
verschickt) stellte uns Alison Campbell aus Nottingham
Samenabgabe binnen einer Zeitspanne von 6h. Sehr
ihre Erfahrungen mit dem Embryoscope vor. Der
interessante Aspekte zu Stimulation und Follikelreifung
Vergleich von morphokinetischen Variablen in gewissen
untersuchten Barbara Wirleitner und ihre Gruppe aus
Zeitfenstern, möglich durch das Time-Lapse Video,
Bregenz. Uns stellt sich darüberhinaus noch eine Frage:
verbessert die Auswahl des Embryos mit der höchsten
welche Location wird es für die Frühjahrestagung im April
Implantationswahrscheinlichkeit, lässt aber auch das
werden, Linz oder Velden? Wir sind gespannt! Auf jeden
Aneuploidie Risiko abschätzen. Obmann Thomas Ebner
Fall hoffen wir wieder auf rege Teilnahme! Inzwischen
stellte sich zusammen mit weiteren Zentren in Österreich
wünschen wir euch frohes Schaffen, einen schönen
die Frage in wieweit eine
einem
Wachstumsarrest
Advent und einen guten Rutsch ins neue Jahr 2014!
Ca2+ -Ionophorenbehandlung
bzw.
einer-verzögerung
entgegenwirken kann. Thorir Hardarson aus Göteborg
An aneuploidy risk model in human embryos derived
wollte wissen welche Empfehlung man Patienten in
from time-lapse
Bezug auf die Qualität von Blastozysten vor allem beim
Alison Campbell, Nottingham
SET geben sollte wenn mehrere zur Auswahl stehen. Er
Vortrag gesponsert von MTG
zog seine Schlüsse retrospektiv aus Daten die in seinem
Alison Campbell ist Laborleiterin in einer Zweigstelle von
Labor zw. 2006 und 2010 gesammelt wurden.
CARE Fertility. 8 Embryoscope sind dort schon in
Danke Thomas! dass du bei Kongressen auch immer
Verwendung. Im Frühjahr 2012 wurde das erste
Kontakte mit potentiellen Vortragenden für das EFA-
“
Meeting knüpfst, und so wie wir im Vortrag von Thorir H.
Großbritannien geboren, Isabella Potter.
gesehen haben, auch die kulturellen Gepflogenheiten
Das Embryoscope ist ein Inkubator mit einem
des entsprechenden Landes ehrst;-). Ewka Nelissen aus
eingebauten Mikroskop und einer Kamera, welche es
Maastricht präsentierte ihre Studien zum Effekt von
ermöglicht max. 72 Embryonen bis zu 5 Tage lang zu
Kulturmedien auf die Embryonalentwicklung, in weiterer
filmen. Die Aufnahmen werden automatisch in regulierten
Folge auf die geborenen Kinder, wie auch auf den
Intervallen von meist 10 min geschossen und als Video
Methylierungszustand bestimmter Gene in der Plazenta.
gespeichert. Dies ergibt 1500 gespeicherte Bilder pro
Aus Gießen angereist gab uns Christine Wrenzycki einen
1
Embryoscope-Baby“
von
CARE
Fertility
in
Embryo.
Das
Video
kann
beliebig
angehalten,
Subfertilität
(Azoospermie,
Kryoptozoospermie,
zurückgespult und wieder angeschaut werden.
Globozoospermie). Nimmt man gemeinhin an, dass es
Es wird in 5!l Tropfen im sauerstoffgesenkten Milieu
sich also um ein Problem des Spermiums handelt,
kultiviert, entweder mit Kulturmediumwechsel am Tag 3
mehren
oder aber auch mit ungestörter Kultur bis Tag 5 (globales
eizellbezogene Probleme (z.B. fehlende Kompetenz
Medium). Das Ziel jeder Time-Lapse Beobachtung, die
Kalzium
einen Vergleich von Variablen in einem bestimmten
Unterversorgung) durch einen Ionophoren behoben
Zeitfenster
werden können.
ermöglicht,
Implantationswahrscheinlichkeit
ist
der
zum
die
Transfer
sich
jedoch
die
auszuschütten,
Zeichen,
dass
auch
Inositol-3-Phosphatrezeptor-
Es ist bekannt, dass Kalzium in der Zelle viele
ausgewählten Embryonen zu erhöhen.
Funktionen hat, darunter auch bei der Zellproliferation.
Mittels Zeitanalysen kann aber auch das Aneuploidie
Andererseits kann eine Überladung mit Ca2+ zu einem
Risiko eines Embryos eingeschätzt werden. Diesen
verändertem
neuen Aspekt zeigten Alison Campbell und ihre Gruppe
Apoptose führen kann. Studien an C. elegans und X.
anhand der Dokumentation der Entwicklungsdynamik
laevis zeigen, dass Änderungen im intrazellulären
von 98 Embryonen und dem Vergleich mit dem
Kalziumhaushalt die Zellteilung initiieren und regulieren.
genetischen Ergebnis dieser.
Beim Menschen wurden kurz vor der Zellteilung Ca2+ -
Der Beginn der Blastulation war bei aneuploiden
Peaks nachgewiesen. Umgekehrt fanden sich diese Ca2+
Embryonen um mehr als 6h verzögert, das volle
-Oszillationen bei arretierten Embryonen nicht. Im
Blastozystenstadium wurde erst ca. 5h später erreicht.
Tiermodell blockieren Ca2+ -Chelatoren die Zellteilung
Somit stellt das System eine kostengünstigere und
und konnten mittels Kalziumionophor wieder in Gang
weniger invasive Alternative zur PGS dar, vor allem in
gesetzt werden.
Ländern in denen PGS gesetzlich untersagt ist. Natürlich
Es stellt sich also im Zuge dieser österreichweiten
ist dies eine Wahrscheinlichkeitsaussage und kann die
multizentrischen Studie die Frage, inwieweit eine
Genauigkeit einer genetischen Untersuchung nicht
Ionophorenbehandlung einem Wachstumsarrest bzw.
ersetzen. Man könnte auch zielsicherer diejenigen
einer-verzögerung entgegenwirken kann. Im Detail
Embryonen auszuwählen, die für eine PGS in Frage
wurden drei Indikationen näher untersucht: der totale
kommen.
Wachstumsarrest im Vorversuch (kein Transfer), weniger
Auf jeden Fall sollten Embryologen in Zukunft nicht mehr
als 15% Blastozystenbildung im Vorversuch (z.B. 1/7)
in Tagen sondern Stunden nach Insemination reden und
und
beurteilen.
Embryonen (zumind. 24h).
Patienten scheinen die Mehrkosten (ca.800EUR), die für
Insgesamt konnten 36 Patienten mit 40 frustranen
eine Embryoscope Beobachtung ihrer Embryonen
Vorversuchen
anfallen, nicht zu scheuen.
Vorversuchen (n=8), konnte in der Studie nur einmal kein
http://www.carefertility.com/care-fertility-sc0/time-lapse-
Embryotransfer durchgeführt werden. Zudem konnte die
embryo-imaging-sj31/
Rate an Blastozystentransfers von 20% auf 44%
Vortrag zusammengefasst von Lucy Steiner
angehoben werden. Ergo gab es eine signifikant höhere
eine
mitochondrialen
deutliche
Metabolismus
Wachstumsverzögerung
inkludiert.
Im
Gegensatz
zu
und
aller
den
Blastulationsrate (14% vs. 52%), was insignifikant
Ionophor und Wachstumsarrest
höheren Lebendgeburtraten resultierte (3% vs. 31%). Ein
Thomas Ebner, Linz
Stimulationswechsel
Bis dato sind die einzigen Indikationen, die die
Verbesserung. Wachstumsprobleme in vitro scheinen
Verwendung eines Ionophoren rechtfertigen, ja bedingen,
eine neue Indikation zur Ionophorenverwendung zu sein,
ein Befruchtungsversagen bzw. Befruchtungsprobleme
auch wenn man die physiologische Wirkweise noch
(<30%) nach ICSI sowie eine extreme männliche
2
ergründen wird müssen.
(15/36)
brachte
keinerlei
HCG:LH Superagonist (Progesteron Synthese)
Vortrag zusammengefasst von Thomas Ebner
und wichtig für die immunologische Toleranz.
Trophoectoderm
Morphology:
an
important
5)
TE –Zellen können ICM – Zellen herstellen!
parameter for predicting live birth
Wahrscheinlich wird es in Zukunft sogar noch mehr
Thorir Hardarson, Götheborg
Erklärungen/Hypothesen für die tragende Rolle des
Es gibt bis dato keine eindeutige Empfehlung, auch nicht
Trophoektoderms vor und nach der Implantationsphase
durch den Istanbul Consensus, bezüglich Gewichtung
geben.
der Qualität der ICM gegenüber der Qualität des TE bei
Vortrag zusammengefasst von Lucy Steiner
der Blastozystenbeurteilung. Deshalb stellte sich Thorir
Hardarson die Frage, welche Blastozyste nun die
IVF culture medium affects intrauterine growth and
bessere Chance auf eine Lebendgeburt hat, die 4AB
perinatal outcome
oder die 4BA? Er startete einen Rückblick auf die Jahre
Ewka C.Nelissen Maastricht
2006 – 2010 und untersuchte Blastozysten (n=1117)
Die dynamischen Veränderungen des Eileiters und des
hinsichtlich morphologischer Parameter, Expansion, ICM
Uterus, die auf den Metabolismus des sich entwickelnden
und TE , und stellte diese in Relation zur daraus
Embryos reagieren, kann man nicht so leicht in-vitro
resultierenden oder nicht resultierenden Lebendgeburt.
nachahmen. Welches ist das beste Medium für die in-
Die Geburtsrate war 39,3%.Der Transfer erfolgte am Tag
vitro Kultur von humanen Embryonen? Es gibt nicht viele
5 als SET. Zunächst ging man davon aus, dass die
Publikationen, die Untersuchung gestaltet sich schwierig
Qualität der ICM höher zu bewerten wäre als die des TE.
da große Fallzahlen notwendig, Menschen genetisch
Am Ende de Auswertung konnte aber festgestellt
unterschiedlich,
werden, dass die 4BA eine höhere Chance auf eine
multifaktoriell bedingt sind. Man kann den Einfluss der
Lebendgeburt hat als die 4AB, die 3AB ebenfalls bessere
Kulturmedien auf den Embryo und in weiterer Folge auf
Chancen als die 4AB.
das geborene Kind nicht als Grund isolieren. Trotzdem
Embryonen die eine gute TE Qualität aufwiesen zeigten
sollte man Kulturmedien miteinander vergleichen um
darüber hinaus eine höhere Auftau-Überlebensrate und
Risiken, vor allem aber ungünstige Langzeitfolgen für die
in weiterer Folge höhere Geburtenrate nach
geborenen Kinder zu minimieren.
Kryoembryotransfer.
Dr.Nelissen
Die Gründe dafür sind oder könnten sein:
randomisierten Studie fest, dass unterschiedliche IVF
1)
2)
3)
4)
und
und
ihre
diverse
Gruppe
Geschehnisse
stellten
in
oft
einer
Das TE könnte ein wichtiger Motor beim
Kulturmedien (Kultur bis d2 oder d3) einen Effekt auf das
Schlüpfen des Embryos sein. Dafür gibt es
Geburtsgewicht von IVF Einlingen, Zwillingen und
keine Beweise, die Hypothese erscheint aber
Neugeborenen nach Kryoembryotransfer haben. Das
logisch.
Gestationsalter wurde nicht vom Medium beeinflusst.
In den ersten Tagen nach erfolgreicher
Von 294 im Zeitraum zwischen 2003 bis 2006 geborenen
Implantation des Embryos teilen und
Kindern war das Geburtsgewicht der Kinder aus der
differenzieren sich die TE-Zellen in einer sehr
Vitrolife Kultur tendenziell höher als bei Cook ( ca.112g).
hohen Rate. Die TE-Zellen sind sozusagen die
Dieser Unterschied zeigt sich schon früh in der
Vorreiter, sie ebnen den Weg für die
Entwicklung (ab 12 Woche), theoretisch sogar schon bei
Durchblutung des ICM. Die ICM teilt sich zwar
der Zellzahl in der Blastocyste.
auch, aber sehr viel langsamer.
Weitere Studien sind notwendig um dies zu bestätigen
Genexpressionsprofile: TE-Zellen aktivieren
und um der Frage nachzugehen ob es sich um
Gene welche die Zelladhesion und
epigenetische Veränderungen von geprägten (imprinted)
Kommunikation unterstützen;
Genen in fetalem oder plazentarem Gewebe handelt.
HCG – Produktion: TE-Zellen sezernieren
3
Eine gut funktionierende Plazenta ist unabdingbar für das
Metabolismus,
normale
intrauterine
Apoptose,
die
fetale
Ultrastruktur und die epigenetische Reprogrammierung in
evtl.
zu
Kultur durch Genexpressionsanalysen. Golden Standard
Wachstumsretadierung, Abortus, Präeklampsie etc. Die
ist dabei das Expressionsmuster der Gentranskripte von
epigenetischen Regulationsmechanismen stellen einen
in vivo gereiften Embryonen. Das Genom ist komplett
signifikanten Faktor in der Plazentaentwicklung dar.
sequenziert.
Dr.Nelissen und ihre Gruppe fanden in bestimmten
Die korrekte Umsetzung des genetischen Programms
Genregionen von Plazenten aus IVF-Schwangerschaften
des Embryos beruht auf einem geeigneten Umfeld.
eine reduzierte DNA Methylierung und eine erhöhte RNA
Inadäquate
Expression verglichen mit Plazenten aus spontanen
nachteilig, daher konnte auch ein Einfluss auf die
Schwangerschaften.
Transkription entwicklungsrelevanter Gene während der
Vortrag zusammengefasst von Lucy Steiner
gesamten in vitro Kultur für verschiedenste in vitro
Störungen
und
und
die
Entwicklung.
Wachstum
Kryotoleranz
führen
Kulturbedingungen
beeinflussen
diese
Manipulationstechniken nachgewiesen werden. In einer
Assistierte Reproduktion in der Veterinärmedizin
weiteren Studie wurde Progesteron als Zugabe zum
Christine Wrenzycki, Gießen
Kulturmedium untersucht.
Vortrag gesponsert von Gynemed
Der Mensch gleicht dem Rind eher als der Maus. Es
Prof.Dr.med.vet Christine Wrenzycki ist molekulare
ähneln sich unter anderem der Metabolismus des
Reproduktionsmedizinerin für Groß – und Kleintiere an
Embryos, die Follikeldynamik, die ovarielle Reserve, der
der Klinik für Geburtshilfe,Gynäkologie und Andrologie
Eizelldurchmesser, die frühe Embryonalentwicklung, wie
der Justus-Liebig-Universität Gießen.
auch die Schwangerschaftsdauer von ca.280 Tagen.
Vor Einführung der IVP (In vitro Produktion von
Daher stellen Untersuchungen am Rinderembryo auch
Embryonen) war die Superovulation der Kühe durch
ein gutes Modell für den Menschen dar.
Hormongaben die gängige Methode um Embryonen für
Fazit: trotz der hohen Plastizität von Embryonen sollte
die Zucht zu gewinnen. Nach der oft zweimaligen
weiter an der Zusammensetzung der Kulturmedien gefeilt
Insemination mit frischem oder Kryosperma (evtl. nach
werden.
sexing) von Zuchtbullen wurde am Tag 7 ein „embryo
Vortrag zusammengefasst von Lucy Steiner
flushing“ durchgeführt,bei dem im Schnitt bis zu 6
Blastozysten zur Kryokonservierung und nachfolgendem
Kann
KET gewonnen werden können. Die Anwendung dieser
Samenabgabe die Qualität der Spermien verbessern?
Methode ist rückläufig seitdem die IVP (erstes Kalb aus
Kerstin Dreier, Innsbruck
IVP 1981) als praxisreife biotechnische Methode das
Das Sperma besteht aus der Samenflüssigkeit (=
Interesse der Züchter geweckt hatte. Für die IVP werden
Samenplasma),
unreife Eizellen entweder durch die ultraschallgeleitete
Epithelzellen der Hodenkanälchen. Die Samenflüssigkeit
Follikelpunktion - OPU (Ovum Pick Up) – bei
wiederum setzt sich aus dem Sekret der Samenbläschen
unstimulierten Tieren gewonnen, oder durch das Slicing
(45-80%),
von Ovarien aus dem Schlachthaus. Nach der IVM (In
Drüsen (Präejakulat mit 2-5%) und den Hoden und
vitro Maturation) wird meist eine IVF durchgeführt, da die
Nebenhoden (5%) zusammen.
ICSI bei Pferd und Rind weniger gute Ergebnisse bringt.
Ejakulates stammt aus den Samenbläschen und hat
Nach der IVC (In Vitro Kultur) zum Blastozystenstadium
einen basischen pH-Wert (7-8), wohingegen das Sekret
erfolgt der ET, die Kryokonservierung oder die
aus der Prostata leicht sauer ist (pH-Wert 6,4). Die
Verwendung
zur
Spermatozytogenese und Spermiogenese finden im
Entwicklungskapazität von in vivo vs. in vitro gereiften
Hoden statt und dauern ca. 64 Tage. Danach werden die
Embryonen. Analysiert werden u.a. die Morphologie, der
reifen Spermien im Nebenhoden gelagert und sind dort
in
Vergleichsstudien
4
eine
unmittelbar
den
reifen
aufeinanderfolgende
Spermien
und
den
der Prostata (10-30%), den Cowperschen
Der Hauptanteil des
ca. 1 Monat lebensfähig. In der privaten Kinderwunsch-
Anzahl und Qualität der gewonnenen Eizellen hängt
Clinic Dr. Josef Zech in Innsbruck, wurde eine Studie mit
direkt vom Erfolg der Stimulation ab. Ein sehr wichtiger
56 Männern durchgeführt, die binnen 6 Stunden zwei
Punkt dabei ist der Zeitpunkt der hCG-Gabe. Eine
Samenspenden abgaben (range 8 bis 360 Minuten). Ziel
generelle
der Studie war es herauszufinden, ob sich die Qualität
durchzuführen, wenn die drei führenden Follikel eine
der Spermien in der zweiten Samenspende vs. Erster
Größe von >20mm erreichen. Wie aber sieht die optimale
veränderte.
Wachstumskurve des gesamten Follikelpools aus? Wie
Beide Ejakulate wurden nach den WHO-Kriterien 2010
groß sollte ein Follikel mindestens sein,um eine reife
auf
folgende
Richtlinie
ist,
die
hCG-Administration
Parameter
untersucht:
Eizelle auszubilden? Ist es sinnvoll, auch den kleinen
(Mio/ml),
Spermienkonzentration
Progressive
Follikelpool abzupunktieren? Um diese Fragen zu
Beweglichkeit (%), Volumen (ml), Morphologie Normale
beantworten, haben wir in 67 IVF-Zyklen, in denen mit
(%), pH-Wert, Rundzellen (Mio/ml), Vakuolen (%) und
dem
DNA-Strangbrüche (Halo %).
Follikelwachstum mit einem 3-D Ultraschall Gerät
Die Ergebnisse sahen wie folgt aus: Das Volumen der
verfolgt.
zweiten
signifikant
einzeln abpunktiert und das Volumen, sowie die Größe
(p<0,001.) Weiters erhöhte sich der pH-Wert der zweiten
der Follikel gemessen. Die Anzahl und Reife der daraus
Samenspende
somit
gewonnenen Eizellen wurden evaluiert. Nach der
basischer, blieb aber im physiologischer Normalbereich.
Befruchtung wurde der weitere Kulturverlauf beobachtet,
Wenn auch keine weiteren signifikanten Unterschiede
um das Potential der Eizellen in Relation zur
aufgezeigt werden konnten, so gab es dennoch
Follikelgröße zu untersuchen.
Auffälligkeiten bezüglich Spermienkonzentration (Mio/ml),
Etwa 1/4 der Follikel hatten am Tag der Punktion ein
Progressiver Beweglichkeit (%) und DNA-Strangbrüchen
Volumen von über 6 ml erreicht, 2/4 lagen im Bereich
(% HALO). So erhöhte sich bei einigen Patienten die
zwischen 2-6 ml und das letzte Viertel wies maximal 1.5
Spermienkonzentration
zweiten
ml Volumen auf. Obwohl die Eizellen aus dem „kleinen“
Samenspende um 10 Mio/ml bis zu 100 Mio/ml, und/oder
Follikelpool etwas schwerer zu gewinnen waren und der
verbesserte sich die progressive Beweglichkeit um mehr
Prozentsatz
als 10%. Des Weiteren wurde gezeigt, dass bei manchen
verglichen mit dem „mittleren“ und „großen“
Patienten die DNA-Strangbrüche in der zweiten
konnten
Samenspende teilweise um mehr als 5% abnahmen. Die
Fertilisierungsraten nach ICSI zwischen den Gruppen
Studie zeigte jedoch auch viele Fälle, in denen es keine
feststellen. Auch im Verlauf der Embryokultur wurde
Veränderungen bzw. Verschlechterungen der zweiten
keine
Samenspende
Teilungsrate
Samenprobe
verringerte
signifikant
pro
bezüglich
sich
(p<0,001),
Milliliter
wurde
der
Spermienkonzentration,
Long-Protocol
stimuliert
wurde,
das
Bei der Eizellentnahme wurden die Follikel
an
wir
MII-Oozyten
keinen
signifikant
leicht
Unterschied
verlangsamte
beobachtet.
geringer
oder
Überraschend
in
war
Pool,
den
verminderte
war
die
progressiver Beweglichkeit, morphologisch Normaler und
Beobachtung, dass reife Eizellen, die aus dem „kleinen“
DNA-Strangbrüchen
Pool gewonnen wurden, kein vermindertes Potential zur
gab.
Es
sollte
dennoch
hervorgehoben werden, dass 55% der Patienten von der
Blastozystenentwicklung hatten.
Samenqualität der zweiten Samenspende profitierten,
Unsere Daten zeigen, dass auch Eizellen aus sehr
wenn auch statistisch nicht signifikant.
kleinen Follikeln die nötige Reife und Kompetenz für eine
Vortrag zusammengefasst von Kerstin Dreier
gute frühe Embryonalentwicklung aufweisen können.
Daher sollte bei der Eizellentnahme auch der „kleine“
Follikelgröße und Eizellkompetenz
Follikelpool abpunktiert werden. Mit dieser Strategie kann
Barbara Wirleitner, Bregenz
sowohl die Anzahl an reifen Eizellen, als auch an
Die hormonelle Stimulation des Follikelwachstums ist die
Embryonen erhöht werden.
Grundlage einer erfolgreichen IVF-Behandlung. Die
5
Vortrag zusammengefasst von Barbara Wirleitner
ANKÜNDIGUNGEN
Wir danken Merck-Serono für die
großzügige Unterstützung!
ESHRE Zertifizierung kostet ab
jetzt 50EUR!
Anmeldung für 2014/München schon gestartet
4.EFA Mitglieder rannten beim
Fertility Run in London für einen
guten Zweck:
Lukas Ebner, Sarah Lucy Steiner,
Christine Huber, Norbert Loacker
27. EFA-Treffen
Themenvorschläge bitte an den
Vorstand richten
Genaue Informationen über
Fortbildungen und Anmeldefristen
finden sich auf unsere Homepage
www.embryologenforum.at
HERZLICHEN GLÜCKWUNSCH
liebe Thekla Kern MSc
zu deiner Hochzeit!
IMPRESSUM
Herausgeber: EFA-Vorstand
Redaktion & Layout: Lucy Steiner
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