•PAG-Bestimmung in Blut und Milch: Tierschutz durch eine
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PAG-Bestimmung in Blut und Milch: Tierschutz durch eine schonende Trächtigkeitsuntersuchung ! Marion Piechotta 08.05.2015 – 9. Stendaler Symposium: Tierseuchenbekämpfung, Tierschutz und Tierarzneimittel bei der Tierart Rind Inhalt • Tierschutz/ Tierwohl? • • • • • • • 21.05.2015 Tierschutzrechtlicher Aspekt: Schlachtung tragender Tiere durch u.a. Fehldiagnosen, aufgrund wirtschaftlicher Gründe … Trächtigkeitsdiagnostik mittels PAG – eine kurze Einführung Reduzierung von Stress Trächtigkeitsdiagnostik per Milchprobe: Wie sicher ist der Nachweis? Und was ist zu beachten? Verminderung haltungsbedingter Erkrankungen/Verluste Indirekter Indikator für Tierwohl ist Reproduktionsleistung Prognose/Diagnose embryonaler/fetaler Mortalität 2 Was sind PAG? Glykoproteine, die in mono- und binukleären Zellen des Trophoblasten von Klauentieren gebildet werden ab dem 21. Trächtigkeitstag (ca. Implantation des Embryos) im Blut nachweisbar: TRZ migrieren in maternales Epithel der Plazenta Synzytium zu dreikernigen fetomaternalen Hybridzellen Exozytose Granula (PAG) Abgabe in maternalen Blutkreislauf kommerziell erhältliche semiquantitative Testverfahren für Blut seit 1992 und für Milch seit 2012 mit Nachweis ab dem 28. Trächtigkeitstag (BioPryn®, IDEXX Pregnancy Test) 21.05.2015 3 Trächtigkeitsdiagnostik mittels PAG: eine kurze Einführung • ab Tag 28 nach Besamung mit hoher Sensitivität (bis zu 100%) und Spezifität (bis 95%) • semiquantitative Testverfahren • Präanalytik: Blut, Serum oder Plasma; Milch unbedingt mit Konservierungsmitteln (z.B. Proclean 150 Röhrchen) • Halbwertzeit bis zu 60 Tage (post partum) • bisher Fehlen kontrollierte Studien zur Halbwertzeit in der frühen Trächtigkeit Halbwertzeit von PAG in der frühen Trächtigkeit PAG OD (450 nm) 3 Kategorie II „Verdacht auf EM“ Kategorie III „Trächtig“ 2,5 Kategorie I „nicht trächtig“ Klinisch kein Embryo mehr nachweisbar 2 1,5 X 1 0,5 0 0 1 2 3 4 6 8 10 12 14 Tage Grafik 2: Darstellung der Pregnancy-associated Glycoprotein (PAG) optischen Dichte (OD) von Tag 0 (Tag 33 der Trächtigkeit) über 14 Tage 21.05.2015 5 Inhalt • Tierwohl? • • • • • • • 21.05.2015 Schlachtung tragender Tiere durch u.a. Fehldiagnosen, aufgrund wirtschaftlicher Gründe … Trächtigkeitsdiagnostik mittels PAG – eine kurze Einführung Reduzierung von Stress Trächtigkeitsdiagnostik per Milchprobe: Wie sicher ist der Nachweis? Und was ist zu beachten? Verminderung haltungsbedingter Erkrankungen/Verluste Indirekter Indikator für Tierwohl ist Reproduktionsleistung Prognose/Diagnose embryonaler/fetaler Mortalität 6 TRU vs. Milchprobenentnahme ? Bedeutung für das Tier Fixation im Separationsbereich/ Fressgittern im Stallbereich = lange Wartezeiten für Tiere 1. 2. 3. 4. kein Zugang zu Wasser ggf. kein Zugang zu Futter lange Stand-/Wartezeiten „Weniger Aussage“ als TRU TU mittels Milchprobe = Tierwohl ↑ … was ist zu beachten? Trächtigkeitsdiagnostik per Milchprobe: Wie sicher ist der Nachweis? Und was ist zu beachten? - Konservierung der Milch, keine Milch von Tieren mit Mastitis Halbwertzeit semiquantitatives Messverfahren Nicht geeignet bei momentanem Stand der Technik von Roboteranlagen Fehlerquellen? Fehlerquelle Nummer 1. Probenahme per Hand vs. Roboterbetriebe IMP on Goat Milk Samples, Wim Schielen ELDC BV Betrieb Mysegades Falsche und ungenaue Dokumentation – ist Fehlerquelle Nr. 1 – Kreuzkontamination DeLaval VMS, Bj. 2000 Roboterbetriebe - Shuttle wird vor Inbetriebnahme über das Reinigungssystem des Roboters gereinigt, zwischen den einzelnen Proben nur mit Druckluft - Während des Melkvorganges werden voll automatisch kontinuierlich kleine Milchmengen aus allen Vierteln ins Shuttle abgeleitet, ein kleiner Teil dessen wird als eigentliche Probe abgefüllt Shuttle Kreuzkontamination Roboterbetriebe - Shuttle Kreuzkontamination Milchleitung Kreuzkontamination Probe OD Bewertung Probe OD Bewertung Probe A -0,025 Nicht tragend Probe A 0,713 3,521 Tragend tragend Probe 1 -0,021 Nicht tragend Probe 1 0,728 3,265 Tragend tragend Probe B 0,012 0,256 Nicht tragend fraglich Probe 2 0,038 0,216 Nicht tragend fraglich Probe B 0,711 Tragend Probe 2 0,8 Tragend Inhalt • Tierwohl? • • • • • • • 21.05.2015 Schlachtung tragender Tiere durch u.a. Fehldiagnosen, aufgrund wirtschaftlicher Gründe … Trächtigkeitsdiagnostik mittels PAG – eine kurze Einführung Reduzierung von Stress Trächtigkeitsdiagnostik per Milchprobe: Wie sicher ist der Nachweis? Und was ist zu beachten? Verminderung haltungsbedingter Erkrankungen/Verluste Indirekter Indikator für Tierwohl ist Reproduktionsleistung Prognose/Diagnose embryonaler/fetaler Mortalität 14 Embryonale und fetale Mortalität Einfluss auf die Trächtigkeitsbestimmung mittels PAG? PAG haben lange Halbwertzeit Veränderung der Halbwertzeit über die Trächtigkeitsdauer (Ursache: Unterschiedliche Glykolysierungsmuster beeinflusst Spezifität des Trächtigkeitsnachweises mit PAG 21.05.2015 15 Problematik Embryonale/fetale Mortalität EM: Absterben eines Embryos nach Definition bis Tag 42 nach Konzeption vor allem zwischen dem Übergang vom Morula (1) zum Blastula (2) Stadium (Tag 6./7. nach der Konzeption) und dem Stadium der maternalen Erkennung Tag 12-16. der Trächtigkeit 70-80% aller Embryoverluste entfallen auf die frühe EM Keine klinischen Symptome, Zykluslänge nicht verändert Späte EM nach Tag ~ 20ig Verlängerter Zyklus, labordiagnostisch nachweisbar???? FM: Absterben eines Embryos nach Definition >Tag 42 nach Konzeption Resorption, Mumifikation, Mazeration …. labordiagnostisch nachweisbar? Prognose und Diagnose EM – bei gleichzeitigem transrektalen US PROGNOSE Blutentnahme Befruchtung Trächtigkeit PAG-Bestimmung Embryonale Mortalität bis Tag <42 Blutentnahme DIAGNOSE PAG-Bestimmung Falsch positive und falsch negative Positiv (PAG) Positive (US) Negativ (US) total 188 10 198 Negativ (PAG) 7 138 total 148 195 343 7 “falsch negative” 10 “falsch positive” 21.05.2015 18 Diagnose/Prognose embryonaler/fetaler Mortalität Tabelle 31 Zusammenstellung der Ergebnisse von falsch positiven und falsch negativen Proben Fall TT Milch PAG- Blut PAG- TRU Nach- Kombiniertes ELISA ELISA untersuchung Ergebnis 1 53 negativ negativ positiv negativ EM 2 39 negativ negativ positiv negativ EM 3 37 negativ negativ positiv negativ EM 4 30 negativ negativ positiv negativ EM 5 32 negativ negativ positiv negativ EM 6 53 positiv negativ negativ negativ Messfehler 7 30 positiv positiv negativ negativ EM 8 30 positiv positiv negativ negativ EM 9 33 positiv positiv negativ negativ EM 10 39 positiv positiv negativ negativ EM 11 43 positiv positiv negativ negativ EM 12 29 positiv positiv negativ negativ EM 13 36 positiv positiv negativ negativ EM 14 41 positiv positiv negativ negativ EM Nachuntersuchungen der 5 “falsch negativen” 8 “falsch positiven” = embryonale/fetale Mortalität Engelke et al. BMTW (accepted) 21.05.2015 19 Zusammenfassung - Trächtigkeitsdiagnostik mittels PAG bietet sensitive Methode zur Trächtigkeitsbestimmung, geringere Spezifität bedingt durch frühe embryonale/fetale Verluste - aus Milchproben „schonende“ Trächtigkeitsuntersuchung keine zusätzlichen Untersuchungen/Fixationen etc. erforderlich aber „Bewusstsein“ über Vor- und Nachteile, Limitationen - „Nachteil der geringeren Sensitivität“ Vorteil Diagnostik/Prognostik embryonaler/fetaler Mortalität d.h. TU mittels PAG (in Blut) bietet u.U. zusätzlichen Informationsgehalt - Ihre Antwort: PAG-Bestimmung in Blut und Milch: Tierschutz durch eine schonende Trächtigkeitsuntersuchung ??? Abhängig von der Fragestellung, Einsatz und Interpretation Thanks to…. http://elib.tiho-hannover.de/ dissertations/engelkej_ss14.html
