ElecsysT Vitamin D total Testbeschreibung Elektro-Chemilumineszenz-Bindungsassay (ECLIA) für die In-vitro-Bestimmung des Gesamtgehalts an 25-Hydroxyvitamin D Indikation Vitamin D ist ein fettlöslicher Steroidhormon-Vorläufer, der hauptsächlich in der Haut als Folge von Lichteinflüssen produziert wird. Vitamin D ist biologisch inaktiv und muss Hydroxylierungsschritte durchlaufen, um aktiv zu werden.1 Der menschliche Körper kann nur Vitamin D3 produzieren. Vitamin D2 wird über angereicherte Nahrungsmittel aufgenommen oder mit Hilfe von Nahrungsergänzungsmitteln zugeführt. Physiologisch sind Vitamin D3 und D2 im Plasma an Vitamin D-bindendes Protein (VDBP) gebunden und werden zur Leber transportiert, wo sie zu 25-Hydroxyvitamin D (Vitamin D [25-OH]) umgewandelt werden. Da Vitamin D (25-OH) die wichtigste Speicherform darstellt, wird die Blutkonzentration dieser Form zur Bestimmung des Vitamin D-Status herangezogen. Mehr als 95 % des im Serum messbaren Vitamin D kommt als Vitamin D3 (25-OH) vor, wogegen Vitamin D2 (25-OH) nur bei Patienten messbar nachgewiesen werden kann, die Vitamin D2 als Nahrungsergänzungsmittel zu sich nehmen.1, 2, 3 Vitamin D ist von entscheidender Bedeutung für die Knochengesundheit. Bei Kindern führt ein ausgeprägter Mangel zu Rachitis. Bei älteren Menschen wird die Sturzgefahr einem Vitamin D-Mangel zugeschrieben, da dieser zu Muskelschwäche führt. Darüber hinaus werden niedrige Konzentrationen von Vitamin D (25OH) mit erniedrigter Knochenmineraldichte in Verbindung gebracht. Auch Diabetes, Krebs, kardiovaskuläre Erkrankungen und Autoimmunerkrankungen werden mit einem Vitamin D-Mangel im Zusammenhang gesehen.1 Beim ElecsysT Vitamin D total Assay wird VDBP zur Erfassung von 25-Hydroxyvitamin D3 und D2 eingesetzt. Der Assay wird für die quantitative Bestimmung von Vitamin D (25-OH) in Humanserum und -plasma im Rahmen der Beurteilung einer Vitamin D-Insuffizienz eingesetzt. Testprinzip: Kompetitiver Proteinbindungsassay Natürliches VDBP Denaturiertes VDBP Ru Ru Vorbehandlung Probe PT1, PT2, 9 Min. + ruthenyliertes VDBP R1, 9 Min. Ru +25(OH)D-Bi R2, Beads, 9 Min. Ru VDBP = Vitamin-D-bindendes Protein PT1, PT2 = Vorbehandlungskomponenten ruthenyliertes VDBP Bi Ru Ru Bi 25(OH)D-Bi = biotinyliertes Vitamin D (25-OH) Im ersten Schritt wird die Probe 9 Minuten lang mit einem Vorbehandlungsreagenz inkubiert. Dabei wird das natürliche VDBP in der Probe denaturiert, um das gebundene Vitamin D (25-OH) freizusetzen. Im zweiten Schritt wird die Probe mit einem rekombinanten Rutheniummarkierten VDBP inkubiert, wobei sich Komplexe aus Vitamin D (25-OH) und dem ruthenylierten VDBP bilden. Im dritten Schritt werden durch die Zugabe von biotinyliertem Vitamin D (25-OH) die noch freien Bindungsstellen des VDBP besetzt. Die entstehenden Komplexe aus dem Ruthenium-markierten VDBP und dem biotinylierten Vitamin D (25-OH) binden an die Festphase (Wechselwirkung zwischen Biotin und Streptavidin beschichteten Mikropartikeln, die auf der Oberfläche der Elektrode fixiert werden). Die ungebundenen Substanzen werden entfernt. Durch das Anlegen einer Spannung an die Elektrode wird die Chemilumineszenz-Reaktion gestartet und von einem Photomultiplier gemessen. Die Ergebnisse werden mit Hilfe einer gerätespezifischen Kalibrationskurve bestimmt, die von einer 2-Punkt-Kalibration und einer Kalibrator-Masterkurve über den Reagenzbarcode berechnet wird. Eigenschaften des ElecsysT Vitamin D total-Assays Testdauer 27 min Testprinzip Kompetitiver Proteinbindungsassay Kalibration 2-Punkt Probenmaterial Serum und Plasma Probenvolumen 15 µl Nachweisgrenze 3,00 ng/mL (7,50 nmol/L) Funktionale Sensitivität 5 ng/mL Messbereich 3,00 – 70,0 ng/mL (7,50 – 175 nmol/L) Verdünnung 1:2 (wenn Probe 35,0 ng/mL oder 87,5 nmol/L ist) Rückverfolgbarkeit Standardisiert gegen LC-MS/MS, was wiederum auf NIST rückverfolgbar ist Wiederholbarkeit (Präzision in der Serie) LOQ – 15 ng/mL: SD 1 ng/mL; 15 ng/mL: 6,5 % Reproduzierbarkeit (Laborpräzision) LOQ – 15 ng/mL: SD 1,7 ng/mL; 15 ng/mL: 11,5 % Gesundheitsbezogene Referenzwerte (empfohlene Werte) Es gibt derzeit keine Standarddefinition für den optimalen Vitamin D (25-OH)-Status. Die meisten Experten geben für Vitamin D (25-OH) eine Konzentration von 30 ng/mL ( 75 nmol/L) als wünschenswerten Wert für einen optimalen Gesundheitszustand vor.4, 5, 6, 7 Konzentrationen von Vitamin D (25-OH) 20 ng/mL ( 50 nmol/L) werden als insuffizient (Mangel) betrachtet.5, 7, 8 Methodenvergleich 1. Vergleich ElecsysT Vitamin D total-Assays mit LC-MS/MS (x) 2. Vergleich ElecsysT Vitamin D total-Assays mit einem 100 80 60 40 20 0 0 20 40 60 80 LC-MS/MS [ng/mL] Anzahl der gemessenen Proben: 451 Passing/Bablok y = 1,07x + 0,683 Pearson r = 0,877 Die Probenkonzentrationen lagen zwischen ca. 5 ng/mL 100 (12,5 nmol/L) und 81 ng/mL (203 nmol/L). Elecsys Gesamt-Vitamin D [ng/mL] Elecsys Vitamin D total [ng/mL] handelsüblichen 25-Hydroxyvitamin-D-Immunassay 100 80 60 40 20 0 Anzahl der gemessenen Proben: 451 (gleicher Probensatz wie bei 1.) Passing/Bablok y = 1,29x + 1,71 Pearson r = 0,803 80 100 0 20 40 60 Handelsüblicher Vitamin D (25-OH)-Immunassay [ng/mL] Bestellinformationen ElecsysT Vitamin D total 100 Tests 05 894 913 190 CalSet Vitamin D total 4 × 1 mL 05 894 921 190 PreciControl Varia je 2 × 3 mL 05 618 860 190 Referenzen: 1. Holick, M.F. (2007). Vitamin D deficiency. N Engl J Med, 357:266-281. 2. Houghton, L.A., Vieth, R. (2006). The case against ergocalciferol (vitamin D2) as a vitamin supplement. Am J Clin Nutr, 84:694-697. 3. Hart, G.R., Furniss, J.L., Laurie, D., et al. (2006). Measurement of vitamin D Status: background, clinical use and methodologies. Clin Lab, 52(7-8):335-343 4. Bischoff-Ferrari, H,A,, Giovannucci, E., et al. (2006). Estimation of optimal serum concentrations of 25-hydroxyvitamin D for multiple health outcomes. Am J Clin Nutr, 84:18-28. 6. Vieth, R., Bischoff-Ferrari, H., et al. (2007). The urgent need to recommend an intake of vitamin D that is effective. Am J Clin Nutr, 85:649-650. 7. Saintonge, S., Bang, H., et al. (2009). Implications of a New definition of Vitamin D Deficiency in a Multiracial US Adolescent Population: The National Health and Nutrition Examination Survey. Pediatrics, 123:197-803. 8. Adams, J.S. and Hewison M. (2010). Update in Vitamin D. J Clin. Endocrinol. Metab, 95:471-478. 5. Dawson-Hughes, B., Heaney, R.P., et al. (2005). Estimates of optimal vitamin D status. Osteoporos Int, 16:713-716. Roche Diagnostics Deutschland GmbH Sandhofer Straße 116 68305 Mannheim www.roche.de COBAS, ELECSYS, LIFE NEEDS ANSWERS und MODULAR sind Marken von Roche. © 2011 Roche Diagnostics. Alle Rechte vorbehalten. 064430019901 ➀ 0511 - Roche Diagnostics (Schweiz) AG Industriestrasse 7 CH-6343 Rotkreuz, ZG www.roche.ch Roche Diagnostics GmbH Engelhorngasse 3 A-1210 Wien www.roche.at