GRAM für Bakterien 04 - 100802
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Technisches Datenblatt 100802 GRAM für Bakterien 04 - 100802 IVD In-vitro-Diagnostikum CND-Code: W0104010801 Anzahl der Bestimmungen Verfahrenszeit Haltbarkeit des Produkts Lagertemperatur Transporttemperatur Ergänzende Ausrüstung 100 40 Minuten 2 Jahre 15-25 °C Raumtemperatur 3 senkrechte Histologie-Färbetroge aus Glas, Trichter, Filter, Ofen Verwendungszweck Präparat zur Vorbereitung histologischer Proben für die optische Mikroskopie. Anwendung Methode zur Differenzierung grampositiver und gramnegativer Bakterien auf histologischen Schnitten, Abstrichen und Gewebeappositionen. Prinzip Die Gram-Färbung ist die wichtigste Methode zur differentiellen Färbung für den Nachweis von Bakterienspezies. Bei der Methode werden hintereinander zwei Farbstoffe verwendet: Kristallviolett und Floxin. Zu Beginn wird das Kristallviolett durch Oxidation mit einer Iodlösung ausgefällt. Der resultierende Komplex bindet mit unterschiedlich starken und gearteten Bindungen an die bakterielle Zellwand. Die differenzierende Lösung eliminiert den Kristallviolett-Iod-Komplex von der Hülle mancher Bakterien, während auf anderen, den grampositiven Bakterien, keine Reaktion erfolgt und die Färbung erhalten bleibt. Die entfärbten, gramnegativen Bakterien werden anschließend mit einem roten Farbstoff nachgewiesen. Die Eigenschaft der grampositiven Bakterien, den Farbstoff-Iod-Komplex beizubehalten ist auf die Bindung zwischen dem Komplex und einem nur bei grampositiven Bakterien vorkommenden Molekül, Magnesium-Ribonucleat, zurückzuführen. Methode 1) 2) 3) 4) 5) 6) 7) 8) 9) Schnitt in destilliertes Wasser geben. Den Inhalt des Fläschchens A in einen senkrechten Histologie-Färbetrog schütten, den Objektträger hineinlegen und 15 Minuten bei 56-58 °C inkubieren; die Lösung mithilfe von Filterpapier zurück in das Fläschchen A filtern. In destilliertem Wasser spülen. 10 Tropfen des Reagens B auf den Schnitt geben; 3 Minuten einwirken lassen. Den Objektträger abtropfen lassen und 10 Tropfen der Lösung C auf den Schnitt geben; 3 Minuten einwirken lassen. In destilliertem Wasser spülen und Objektträger zuerst mit Filterpapier und anschließend 10 Minuten an der Luft trocknen. Den Inhalt des Fläschchens D in einen senkrechten Histologie-Färbetrog schütten, den Objektträger darin 1 Minuten lang schütteln; die Lösung mithilfe von Filterpapier zurück in das Fläschchen D filtern. Schritt 7 mit dem Reagens E wiederholen. Xylol und Fixiermittel. Ergebnisse Grampositive Bakterien ........................................................................................................................ blau Gramnegative Bakterien .......................................................................................................................... rot Kerne ....................................................................................................................................................... rot Reagenzien A) B) C) D) E) Floxin B Lösung ........................................................................................................................ 100 ml Kristallviolettlösung ..................................................................................................................... 30 ml Iodlösung nach Gram ................................................................................................................. 30 ml Aceton - Limonen...................................................................................................................... 100 ml Aceton - Limonen...................................................................................................................... 100 ml Herstellerfirma: Bio-Optica Milano s.p.a. Seite 1 / 2 Bio Optica Milano s.p.a. via San Faustino 58 • I - 20134 Milano tel. +39 02212713.1 • fax +39 022153000 www.bio-optica.it Technisches Datenblatt 100802 Warnhinweise und Vorsichtsmaßnahmen Das Produkt ist für den Gebrauch durch spezialisiertes Fachpersonal bestimmt. Das Produkt ist als gefährlich eingestuft. Lesen Sie aufmerksam die Informationen auf dem Etikett (Gefahrensymbole, Risiko- und Sicherheitssätze). Beachten Sie stets das Sicherheitsdatenblatt, das Informationen zu den vom Präparat ausgehenden Risiken, den während des Gebrauchs anzuwendenden Vorsichtsmaßnahmen und den Erste-Hilfe-Maßnahmen enthält. Sicherheitsdatenblatt-Nr.:100802 Lagerung Präparat bei Raumtemperatur lagern. Behälter dicht geschlossen halten. Haltbarkeit Nach dem ersten Öffnen ist das Reagens bei ordnungsgemäßer Lagerung bis zum angegebenen Verfallsdatum haltbar. Entsorgungshinweise Gefährlicher Abfall; durch ein spezialisiertes und zugelassenes Unternehmen gemäß den geltenden Vorschriften entsorgen. Bibliographie • • Bartholomew JW. Variable influence results and the precise definition of steps in Gram staining as a means of standardizing the results obtained Stain Technol 1962 37: 139-155. Gram C. Über die isolierte Färbung der Schizomyceten in Schnitt- und Trockenpräparaten, Fortschritte der Medizin 1946; 2: 185-189; 133:391-406. Ausgabedatum: Januar 2013 Herstellerfirma: Bio-Optica Milano s.p.a. Seite 2 / 2 Bio Optica Milano s.p.a. via San Faustino 58 • I - 20134 Milano tel. +39 02212713.1 • fax +39 022153000 www.bio-optica.it
