BBLUROTUBE Products
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GEBRAUCHSANWEISUNG – GEBRAUCHSFERTIGE DIPSLIDE-MEDIEN DA-212115.03 Rev.: Aug 2005 BD BBL UROTUBE • BBL UROTUBE M • BBL UROTUBE E • BBL UROTUBE E. coli • BBL UROTUBE SXT VERWENDUNGSZWECK BBL UROTUBE-Produkte sind Dip-Slides (Eintauchobjektträger) zur Isolierung und Bestimmung der Koloniezahl von Mikroorganismen aus Urinproben. Die Oberfläche dieser Dip-Slides ist mit zwei oder drei verschiedenen Kulturmedien beschichtet. Alle BBL UROTUBE-Produkte enthalten CLED Agar zur quantitativen Bestimmung der Bakterien und/oder Hefen und MacConkey Agar zur Bestimmung gramnegativer Bakterien, z.B. Enterobacteriaceae. Das dritte Medium, sofern verfügbar, ist abhängig vom jeweiligen Produkt. GRUNDLAGEN UND ERLÄUTERUNG DES VERFAHRENS Mikrobiologische Methode. Dip-Slides werden heutzutage häufig als Screening-Methode zur Zählung und Isolierung von Mikroorganismen aus routinemäßig gewonnenen Urinproben verwendet.1-5 Nach dem Eintauchen des Dip-Slides in eine vorschriftsmäßig gewonnene frische Urinprobe wird der Objektträger inkubiert. Dann wird die Koloniezahl auf der Oberfläche des CLED Agar mit einem Referenzbild verglichen. CLED Agar wurde 1960 von Sandys zur Verhütung des Schwärmens von Proteus durch die Begrenzung der Elektrolyten im Kulturmedium entwickelt, welches später mehrfach für die Anwendung in Urinkulturen modifiziert wurde.6 Es wurde als elektrolytarmes Cystin-Lactose-Medium (CLED) bezeichnet und als ideal für Dip-Slide-Techniken und die Bakteriologie des Urins im Allgemeinen beschrieben.6,7 Die Nährstoffe in CLED Agar werden durch die Gelatine- und Casein-Peptone sowie durch Rindfleischextrakt geliefert. Lactose wird als Energiequelle für Organismen hinzugefügt, die die Fähigkeit besitzen, diese durch Fermentation zu nutzen. Bromthymolblau wird als pH-Indikator zur Differenzierung von Lactosefermentern und Nicht-Lactosefermentern verwendet. Lactosefermentierende Organismen verringern den pH-Wert, wodurch sich das grüne Medium gelb färbt. Das Cystin ermöglicht das Wachstum von „Zwergkolonien“ coliformer Bakterien.3 Die Elektrolytquellen werden zur Einschränkung des Schwärmens von Proteus-Spezies reduziert. Die Anzahl der Kolonien auf dem CLED Agar ist direkt proportional zur Anzahl der Bakterien per mL Urinprobe. CLED Agar ist auf allen BBL UROTUBE-Dip-Slide-Produkten als Medium 1 enthalten. Das zweite Medium ist MacConkey Agar. Es ist nur relativ schwach selektiv, da die Konzentration an Gallensalzen, die grampositive Mikroorganismen hemmt, im Vergleich zu anderen Agarmedien für enterale Bakterien niedrig ist. Dieses Medium wird zur Verwendung mit klinischen Proben empfohlen, welche voraussichtlich eine mikrobielle Mischflora enthalten, wie z.B. Urin, da es eine Vorgruppierung enteraler und einer Vielzahl anderer gramnegativer Bakterien in Lactose-fermentierende und nicht Lactose-fermentierende Bakterien erlaubt.8,9 In MacConkey Agar liefern Peptone die Nährstoffe. Kristallviolett hemmt grampositive Bakterien, besonders Enterokokken und Staphylokokken. Die Differenzierung von enteralen Mikroorganismen wird durch die Kombination von Lactose und Neutralrot als pH-Indikator erreicht. Farblose oder rosa bis rote Kolonien werden je nach Fähigkeit des Isolats, Kohlenhydrat zu fermentieren, gebildet. MacConkey Agar ist auf allen UROTUBE-Dip-Slide-Produkten als Medium 2 enthalten. Ein drittes Medium ist für den Nachweis charakteristischer bakterieller Gruppen oder Hefen vorhanden. Der Mediumtyp ist abhängig vom verwendeten Produkt: BBL UROTUBE enthält zusätzlich zu den oben aufgeführten Medien 1 und 2 Cetrimid-Agar, ein häufig verwendetes Medium für die selektive Isolierung von Pseudomonas aeruginosa.10,11 DA-212115.03 Seite 1 von 11 Gelatinepepton und Casein liefern Nährstoffe. Kalium- und Magnesiumsalze verstärken die Pigmentbildung von P. aeruginosa. Glycerol ist eine Energie- und Kohlenstoffquelle. CetylTrimethyl-Ammonium-Bromid (= Cetrimid) ist ein Detergens, welches die meisten gramnegativen Stäbchen außer P. aeruginosa selektiv hemmt. BBL UROTUBE M enthält zusätzlich zu den oben aufgeführten Medien 1 und 2 Malzagar, ein partiell selektives Medium zur Isolierung von Sprosspilzen, z.B. Candida albicans. Malzextrakt und Milchsäure stellen die notwendigen Nährstoffe zu Verfügung und halten den pH-Wert niedrig, wodurch das Medium selektiv wird und viele Bakterienarten gehemmt werden.11 BBL UROTUBE E enthält zusätzlich zu den oben aufgeführten Medien 1 and 2 noch Enterokokkenagar, ein selektives Differenzierungsmedium für Enterococcus-Arten.11 Im Enterokokkenagar sind Casein und Hefeextrakt Nährstoffe. Natriumchlorid hält die osmotische Stabilität aufrecht. Die Kombination von Citrat, Azid, Kanamycin, Polymyxin B, Nalidixinsäure und Neomycin hemmt Bakterien außer den Enterokokken. Esculin ist ein Substrat für die betaglucosidase, das charakteristischerweise bei Enterococcus vorkommt. Eines der Produkte der enzymatischen Hydrolyse, Esculetin, reagiert mit dem im Medium vorhandenen Eisensalz, so dass im Medium um die Kolonien herum ein braunes bis schwarzes Präzipitat entsteht. BBL UROTUBE E. coli enthält zusätzlich zu den oben aufgeführten Medien 1 und 2 BetaGlucuronidase-Agar (=BGLU-Agar), ein Differenzierungsmedium für den spezifischen Nachweis der Spezies E. coli und Proteus. Das Medium enthält Nitrophenyl-ß-Glucuronid, ein chromogenes Substrat für den Nachweis von Beta-Glucuronidase-Aktivität, die typischerweise in Escherichia coli zu finden ist, wohingegen viele andere Bakterien, einschließlich Proteus, Providencia und Morganella, negativ sind.11,12 Bei Abbau des Substrats sammelt sich gelbes Nitrophenol im Medium und in den Kolonien, während Glucuronidase-negative Kolonien auf einem farblosen Medium farblos bis gräulich sind. Das gelbe Wachstum von diesem Medium kann einem Indoltest unterzogen werden, der, wenn er positiv ist, den Nachweis von E. coli bestätigt. Die Indolbildung auf diesem Medium wird durch die Zugabe des Indol-Präkursors Tryptophan verstärkt. Darüber hinaus stellt diese Aminosäure das Substrat für das Enzym Tryptophandeaminase (TDA) dar, welches typischerweise in Proteus-, Providencia- und Morganella-Spezies zu finden ist. Dieses Enzym lässt sich leicht mithilfe eines TDA-Tests mit Eisenchlorid nachweisen. Zur weiteren Bestätigung kann ein Indoltest mit farblosem Wachstum durchgeführt werden, der bei Proteus vulgaris, Providencia-Arten und Morganella morganii ebenfalls positiv ausfällt. BBL UROTUBE SXT enthält zusätzlich zu den oben aufgeführten Medien 1 und 2 antagonistenfreies Empfindlichkeitstest-Medium (PDM-Medium) mit Trimethoprim/Sulfamethoxazol (SXT) für den Nachweis der SXT-Resistenz oder Empfindlichkeit. Wachstum von Bakterien auf diesem Medium bedeutet Resistenz gegenüber SXT. Nach der Inokulation bzw. nach der Inokulation und Inkubation können die Dip-Slides auch als Transportmedien von der Arztpraxis zu den Analyselabors verwendet werden. Das Wachstum von den Medien auf den Dip-Slides kann zur Identifizierung und für Empfindlichkeitstests der Isolate verwendet werden. REAGENZIEN Zusammensetzungen* pro Liter destilliertem Wasser Medium 1 und 2 sind bei allen BBL UROTUBE-Dip-Slides gleich. DA-212115.03 Seite 2 von 11 Medium 1: CLED Agar Peptisch abgebautes Casein Ausgewählte Peptone Fleischextrakt Lactose Cystin Bromthymolblau Agar pH 7,3 ± 0,2 4,0 g 4,0 3,0 10,0 0,128 0,02 15,0 Medium 2:Medium 2: MacConkey AgarMacConkey Agar Peptisch abgebautes Casein 17,0 g Fleischpepton 3,0 Lactose 10,0 Natriumchlorid 5,0 Gallensalzmischung 1,5 Neutralrot 0,03 Kristallviolett 0,001 Agar 13,5 pH 7,1 ± 0,2 Medium 3: Die Art des Mediums 3 (sofern vorhanden) ist abhängig vom verwendeten Produkt (siehe GRUNDLAGEN UND ERLÄUTERUNG DES VERFAHRENS). BBL UROTUBE enthält zusätzlich zu den oben aufgeführten Medien 1 und 2 Cetrimid-Agar: Peptisch abgebaute Gelatine Caseinhydrolysat Kaliumsulfat Magnesiumchlorid 16,0 g 10,0 10,0 1,4 Glyzerin Cetyl-Trimethyl-Ammonium-Bromid Agar pH 7,1 ± 0,2 8,0 g 0,3 13,0 BBL UROTUBE M enthält zusätzlich zu den oben aufgeführten Medien 1 und 2 Malzagar: Malzextrakt Milchsäure 30,0 g 6,3 Agar pH 4,0 ± 0,4 18,0 g BBL UROTUBE E. enthält zusätzlich zu den oben aufgeführten Medien 1 und 2 Enterokokken- Agar: Peptisch abgebautes Casein Hefeextrakt Natriumchlorid Citrat Natriumazid Äskulin Ammoniumeisen (III)-Citrat 20,0 g 5,0 5,0 1,5 0,15 1,0 0,5 Kanamycin Polymyxin B Nalidixinsäure Neomycin Agar pH 7,1 ± 0,2 0,02 g 0,002 0,0075 0,002 15,0 BBL UROTUBE E. coli enthält zusätzlich zu den oben aufgeführten Medien 1 und 2 Beta- Glucuronidase-Agar (=BGLU-Agar): Pepton Nitrophenyl-ß-Glucuronid Tryptophan 10,0 g 0,1 0,3 Natriumchlorid Agar pH 7,2 ± 0,2 5,0 g 15,0 BBL UROTUBE SXT enthält zusätzlich zu den oben aufgeführten Medien 1 und 2 antagonistenfreies Medium (PDM-Medium) mit Trimethoprim/Sulfamethoxazol (SXT). PDM-Medium Sulfamethoxazol 32,3 g 0,04 Trimethoprim pH 7,3 ± 0,3 0,003 g *Die Rezepturen sind bei Bedarf auf die jeweiligen Leistungskriterien abgestimmt und/oder ergänzt. VORSICHTSMASSNAHMEN . Nur für den professionellen Gebrauch. Dip-Slides bei Anzeichen von mikrobieller Kontamination, Verfärbung, Austrocknung, Rissen oder sonstigen Anzeichen von Produktverfall nicht verwenden. DA-212115.03 Seite 3 von 11 Während des gesamten Verfahrens aseptische Arbeitsmaßnahmen beachten und Schutzmaßnahmen gegen biologische Gefahren treffen. Schutzhandschuhe beim Entnehmen von und im Umgang mit Proben und positiven Objektträgern mit infektiösen Stoffen tragen. Hinweise zu Verfahren zur Einhaltung aseptischer Arbeitsweise, Biogefährdung und Entsorgung des gebrauchten Produkts sind der ALLGEMEINEN GEBRAUCHSANLEITUNG zu entnehmen. Bei der Verwendung dieser Produkte als Transportmedium von der Arztpraxis zum Diagnoselabor die lokalen Bestimmungen für den Transport infektiöser Proben beachten. LAGERUNG UND HALTBARKEIT Nach Erhalt BBL UROTUBE-Produkte bis unmittelbar vor dem Gebrauch im Dunkeln bei 15 – 20 °C in der Originalverpackung lagern. Einfrieren, Überhitzen, Austrocknen und Temperaturschwankungen vermeiden. Die Objektträger können bis zum Verfallsdatum (s. Kennzeichnung auf der Verpackung) inokuliert und entsprechend den empfohlenen Inkubationszeiten inkubiert werden. Ungeöffnete Objektträger aus geöffneten Packungen können bei Lagerung in einem sauberen Bereich bei 15 – 20 °C bis zum Verfallsdatum verwendet werden. Wenn die Objektträger geöffnet wurden, müssen sie umgehend verwendet werden. QUALITÄTSSICHERUNG DURCH DEN ANWENDER Suspensionen der weiter unten aufgeführten Teststämme in physiologischer Kochsalzlösung herstellen, die dem McFarland-Standard von 0,5 (ca. 5 x 107 koloniebildende Einheiten (KBE) /mL) entsprechen. Die Suspensionen bis auf 104 bis 105 KBE pro mL verdünnen. Objektträger in diese Verdünnung eintauchen, die überschüssige Suspension abtropfen lassen und die Objektträger wieder in die entsprechenden Röhrchen stecken. 18 – 24 h bei 35 – 37 °C inkubieren. Wie beschrieben kontrollieren. Die erwarteten Ergebnisse sind in der Tabelle aufgeführt: Produkt und Medium Farbe des unbeimpften Mediums BBL UROTUBE • Medium 1 gelblich bis gelbgrün Escherichia coli ATCC 25922 Proteus mirabilis ATCC 12453 Enterococcus faecalis ATCC 29212 +; gelbe +; farblose +; gelbe Kolonien; Kolonien; Kolonien; gelbes Medium gelbgrünes bis gelbes Medium grünes Medium +; blasse bis blaugrüne Kolonien; blaugrünes Medium +; blasse bis blaugrüne Kolonien mit oder ohne Fluoreszenz +; gelbliche bis blaugrüne Kolonien • Medium 2 rosa +; rosa Kolonien; rotes bis rosa Medium +; farblose bis beige Kolonien; orangebraunes Medium - • Medium 3 Farblos bis hell bernsteinfarben. - - - BBL UROTUBE M gelblich bis • Medium 1 gelbgrün • Medium 2 • Medium 3 Produkt und Medium rosa +; gelbe +; farblose +; gelbe Kolonien; Kolonien; Kolonien; gelbes Medium gelbgrünes bis gelbes Medium grünes Medium +; blasse bis blaugrüne Kolonien; blaugrünes Medium +; rosa Kolonien; rotes bis rosa Medium +; blasse bis blaugrüne Kolonien mit oder ohne Fluoreszenz - Farblos bis hell bernsteinfarben. Escherichia coli Farbe des ATCC 25922 unbeimpften DA-212115.03 Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 +; farblose bis beige Kolonien; orangebraunes Medium - - - Proteus mirabilis ATCC 12453 Enterococcus faecalis ATCC 29212 Seite 4 von 11 Candida albicans ATCC 10231 +; kleine, weißliche Kolonien; gelbliches bis blaugrünes Medium - - +; kleine, weißliche Kolonien; gelbliches bis blaugrünes Medium - +; weißliche Kolonien Pseudomonas Candida aeruginosa albicans ATCC 27853 ATCC 10231 Mediums BBL UROTUBE E gelblich bis • Medium 1 gelbgrün +; gelbe +; farblose +; gelbe Kolonien; Kolonien; Kolonien; gelbes Medium gelbgrünes bis gelbes Medium grünes Medium +; blasse bis blaugrüne Kolonien; blaugrünes Medium +; blasse bis blaugrüne Kolonien mit oder ohne Fluoreszenz - • Medium 2 rosa +; rosa Kolonien; rotes bis rosa Medium +; farblose bis beige Kolonien; orangebraunes Medium • Medium 3 hell bernsteinfarben - - BBL UROTUBE E. coli gelblich bis • Medium 1 gelbgrün • Medium 2 • Medium 3 rosa BBL UROTUBE SXT gelblich bis • Medium 1 gelbgrün +; braune bis schwarze Kolonien; braunes bis schwarzes Medium +; gelbe +; farblose +; gelbe Kolonien; Kolonien; Kolonien; gelbes Medium gelbgrünes bis gelbes Medium grünes Medium +; rosa Kolonien; rotes bis rosa Medium +; farblose bis beige Kolonien; orangebraunes Medium Farblos bis hell +; Medium und +; farblose bernsteinfarben. Kolonien gelb Kolonien IndolTüpfeltesta TDAb - +; blasse bis blaugrüne Kolonien; blaugrünes Medium - +; blasse bis blaugrüne Kolonien mit oder ohne Fluoreszenz +; Medium und Kolonien gelb +; kleine, weißliche Kolonien; gelbliches bis blaugrünes Medium - (+)/- +; kleine, weißliche Kolonien; gelbliches bis blaugrünes Medium - (+) + - - - - - + - - - +; gelbe +; farblose +; gelbe Kolonien; Kolonien; Kolonien; gelbes Medium gelbgrünes bis gelbes Medium grünes Medium +; blasse bis blaugrüne Kolonien; blaugrünes Medium +; blasse bis blaugrüne Kolonien mit oder ohne Fluoreszenz + • Medium 2 rosa +; rosa Kolonien; rotes bis rosa Medium +; farblose bis beige Kolonien; orangebraunes Medium - • Medium 3 farblos bis hell bernsteinfarben. - - - +; kleine, weißliche Kolonien; gelbliches bis blaugrünes Medium - + Fußnoten zur Tabelle: - = kein Wachstum bis Spuren von Wachstum; (+) = schwaches Wachstum; + = gutes bis hervorragendes Wachstum a, b Diese Zusatztests mit Wachstum von Medium 3 durchführen. Für die Verfügbarkeit der Reagenzien siehe Nicht mitgeliefertes Arbeitsmaterial VERFAHREN Mitgeliefertes Arbeitsmaterial BBL UROTUBE, BBL UROTUBE M, BBL UROTUBE E, BBL UROTUBE E. coli oder BBL UROTUBE SXT. Mikrobiologisch kontrolliert. Nicht mitgeliefertes Arbeitsmaterial Zusätzliche Kulturmedien, Reagenzien und Laborgeräte nach Bedarf. DA-212115.03 Seite 5 von 11 Für Indol- und TDA-Tests auf Medium 3 von BBL UROTUBE E. coli: Indole Dropper Reagent (Best.-Nr. 261185) oder Indole DMACA Dropper Reagent (Best.-Nr. 261187). Ferric Chloride Dropper Reagent (Best.-Nr. 261190). Für Oxidasetests auf Medium 3 von BBL UROTUBE: Oxidase Dropper Reagent (Best.-Nr. 261181). Probenarten Diese Produkte sind geeignet für die Isolierung und Zählung von Bakterien und Pilzen aus Urin (Mittelstrahl oder Katheterurin, oder durch suprapubische Blasenpunktion gewonnener Urin. Siehe LEISTUNGSMERKMALE UND VERFAHRENSBESCHRÄNKUNGEN. Probengewinnung und -präparation Bei der Gewinnung von Proben die entsprechenden aseptischen Maßnahmen beachten. Zur Probengewinnung Standardverfahren verwenden.1,13 Der Urin muss frisch oder nicht älter als 2 h sein. Alternativ können die Urinproben auch gekühlt aufbewahrt werden (nicht länger als 24 h), um ein Überwachsen der Erreger oder von Kontaminanten vor der Inokulation zu vermeiden.13 Testverfahren 1. Die Agaroberflächen bei geschlossenem Röhrchen kontrollieren. Dip-Slides, welche Anzeichen von Austrocknung, Kontamination oder anderem Verfall zeigen, dürfen nicht verwendet werden. 2. Das Röhrchen mit dem Patientennamen, der Probennummer und dem Inokulationsdatum beschriften. 3. Deckel aufschrauben und den Objektträger ohne die Agaroberflächen zu berühren aus dem Kunststoffröhrchen entnehmen (Abb. 1). Mit den BBL UROTUBE-Behälterröhrchen keine Urinproben entnehmen! 4. Den Objektträger drei Mal kurz so in den Urin tauchen, dass die Agaroberflächen vollständig eingetaucht sind (Abb. 2). Den Objektträger nicht länger als 10 Sekunden in der Flüssigkeit lassen, da dies die Bestandteile aus den Medien auswaschen und/oder das Gel vom Kunststoffträger lösen kann. Wenn nicht genügend Urin zum Eintauchen vorhanden ist, kann der Urin auch vorsichtig über die Agaroberflächen gegossen werden. 5. Überschüssigen Urin abtropfen lassen. Hierzu den Objektträger mit der Spitze an den Innenrand des Röhrchens halten (Abb.3). Die letzten Tropfen können mit einem Papiertuch von der Objektträgerspitze entfernt werden (Abb. 4). 6. Den Objektträger vorsichtig wieder in sein Kunststoffröhrchen stecken und fest verschließen. 7. Das Röhrchen 18 bis 24 h bei 35 bis 37 °C inkubieren (Abb. 5) oder zur weiteren Verarbeitung an ein bakteriologisches Labor senden. Darauf achten, dass inokulierte Röhrchen innerhalb von 24 h zum Labor transportiert werden müssen. Erhöhte Temperaturen und Einfrieren der Objektträger während des Transports vermeiden. DA-212115.03 Seite 6 von 11 Ergebnisse und Interpretation Nach der Inkubation den Objektträger zur Interpretation aus dem Röhrchen nehmen. Für die quantitative Schätzung der Anzahl lebensfähiger Mikroorganismen das Wachstum auf dem CLED Agar mit den Referenzbildern weiter unten vergleichen; die Interpretation bei guten Lichtverhältnissen vornehmen (Abb. 6). Konfluierendes Wachstum, verursacht durch eine Keimzahl von ≥ 106/mL, ist möglicherweise nur schwer erkennbar, da es die gesamte Agaroberfläche gleichmäßig bedecken kann. Das Berühren der Oberfläche mit einer Öse oder einem Tupfer kann in diesem Fall hilfreich sein. Wachstum auf MacConkey Agar (Medium 2) zeigt das Vorhandensein gramnegativer Stäbchen an. Wachstum auf Medium 3 zeigt das Vorhandensein der entsprechenden Mikroorganismusgruppen an, je nach Medium und verwendetem Produkt. Eine detaillierte Beschreibung des Wachstums auf den Medien ist weiter unten aufgeführt. Auf Medium 2 und 3 sollte keine Keimzahlbestimmung durchgeführt werden, da die in diesen Medien enthaltenen selektiven Wirkstoffe das Wachstum beeinflussen können! Nach dem Anlegen einer Subkultur auf einem entsprechenden Plattenmedium kann Wachstum von jedem Medium dieser Eintauchobjektträger für weitere biochemische Tests oder Empfindlichkeitstests verwendet werden. • CLED Agar (Medium 1 auf allen BBL UROTUBE-Produkten): Auf CLED Agar wachsen sowohl grampositive als auch gramnegative Bakterien und Hefen. Eine gelbe Verfärbung des Mediums zeigt eine Lactosefermentation an, wohingegen ein gelbgrünes oder grünes Medium auf Nicht-Lactose-Fermenter hindeutet. Die folgenden Hinweise und der Leitfaden zur Interpretierung (Abbildungen) am Ende dieses Dokuments können für die Interpretation der Keimzahl auf CLED Agar verwendet werden: DA-212115.03 Seite 7 von 11 Lebensfähige Anzahl Weniger als 10.000 Bakterien pro mL Klinische Interpretation 10.000 bis 100.000 Bakterien pro mL Mittelstrahl-Urin: Zweifelhaft. Es wird empfohlen, den Test zu wiederholen, da diese Keimzahlen bei chronischen Infektionen der Harnwege vorkommen, jedoch auch als Kontaminanten im Mittelstrahl-Urin vorkommen können. Diese Zahlen können bei vorbehandelten Patienten oder bei Patienten mit chronischen Infektionen signifikant sein. Urin, der durch Katheterung oder Blasenpunktion gewonnen wurde: In diesem Fall können weniger als 10.000 Bakterien pro mL bereits eine Infektion anzeigen. Diese hohen Keimzahlen zeigen das Vorhandensein einer Infektion in allen Urintypen (einschließlich dem Mittelstrahl-Urin) an. In diesem Fall kann die Diagnose durch das Vorhandensein hoher Leukozytenzahlen im Harnsediment bestätigt werden. Bei Frauen kann eine hohe Anzahl bakterieller Kolonien als Ergebnis einer äußeren Kontamination (Leukorrhea, Vaginitis) vorkommen; diese Diagnose wird durch das Vorhandensein einer erhöhten Zahl Plattenepithelien ohne Anstieg der Leukozytenzahl im Harnsediment bestätigt. Mehr als 100.000 Bakterien pro mL Mittelstrahl-Urin: Kontamination. Eine geringe Keimzahl kann bei vorbehandelten Patienten oder bei Patienten mit chronischen Infektionen signifikant sein. Urin, der durch Katheterung oder Blasenpunktion gewonnen wurde: In diesem Fall können weniger als 10.000 Bakterien pro mL bereits eine Infektion anzeigen. • MacConkey Agar (Medium 2 auf allen BBL UROTUBE-Produkten): Auf diesem Medium wachsen alle Enterobacteriaceae und bestimmte Nonfermenter (z.B. Pseudomonas aeruginosa). Eine rosa bis rote Verfärbung zeigt eine Lactosefermentation an, z.B. durch E. coli, während farblose, beige oder bernsteinfarbene Kolonien auf einem orangebraunen Medium Nicht-Lactose-Fermenter anzeigen. • Interpretation des Wachstums auf dem entsprechenden dritten Medium (Medium 3) Wie oben ausgeführt ist das dritte Medium abhängig vom verwendeten Objektträgertyp: BBL UROTUBE: Wachstum auf Cetrimid-Agar ist wie folgt zu interpretieren: Grüne bis gelbe, fluoreszierende Kolonien zeigen das Vorhandensein von Pseudomonas aeruginosa an. Die Diagnose kann durch einen positiven Oxidasetest bestätigt werden (siehe Nicht mitgeliefertes Arbeitsmaterial). Nicht-fluoreszierendes Wachstum auf diesem Medium muss zur vollständigen Identifizierung weiter getestet werden. BBL UROTUBE M: Wachstum auf Malzagar zeigt das Vorhandensein von Hefen (Sprosspilzen) an, z.B. Candida albicans oder anderen Pilzen. Zu beachten ist, dass bestimmte Hefestämme 42 bis 48 h bis zur vollen Entwicklung von Wachstum auf den Medien benötigen. In seltenen Fällen wachsen bestimmte Bakterien, wie beispielsweise Laktobazillen, auf diesem Medium. Deshalb kann sich eine Gramfärbung mit Wachstums von disem Medium als hilfreich erweisen. Für eine vollständige Identifizierung sind weitere Tests erforderlich. BBL UROTUBE E: Braune bis schwarze Kolonien auf Enterokokkenagar zeigen das Vorhandensein von Enterococcus-Spezies an, z.B. von Enterococcus faecalis. Das Wachstum von farblosen bis grauen Kolonien kann auf das Vorhandensein von Streptokokken hindeuten, eine Bestätigung ist jedoch erforderlich. BBL UROTUBE E. coli: Wenn das BGLU-Medium gelb wird, sind Escherichia coli oder andere Beta-Glucuronidase-positive Bakterien vorhanden. Einen Indoltest mit dem gelben Wachstum dieses Mediums durchführen. Eine positive Indolreaktion zeigt das Vorhandensein von E. coli an. Bei Vorliegen von farblosem bis beigefarbenem Wachstum auf diesem Medium einen TDA-Test durchführen. Ein positiver TDA-Test zeigt das Vorhandensein von Organismen aus der Proteus-Morganella-Providencia-Gruppe an. Für die Verfügbarkeit von Indol und TDA-Reagenzien siehe Nicht mitgeliefertes Arbeitsmaterial. Bei der Durchführung der Zusatztests die mit den Reagenzien gelieferten Anweisungen befolgen. BBL UROTUBE SXT: Dieses Medium wird zur Feststellung der Empfindlichkeit (oder Resistenz) der isolierten Bakterien gegenüber Trimethoprim/Sulfamethoxazol (SXT) DA-212115.03 Seite 8 von 11 verwendet. Kein Wachstum auf diesem Medium zeigt Empfindlichkeit an; starkes Wachstum hingegen zeigt Resistenz gegenüber SXT an. Ein schwächeres Wachstum auf diesem Medium im Vergleich zu CLED Agar (Medium 1) kann auf das Vorhandensein einer Mischkultur mit wenigstens einem Organismus hindeuten, der gegenüber SXT resistent ist. Nach dem Gebrauch und vor der Entsorgung müssen alle verwendeten Röhrchen und alles andere kontaminierte Material autoklaviert oder verbrannt werden. Für nähere Einzelheiten siehe ALLGEMEINE GEBRAUCHSANLEITUNG. LEISTUNGSMERKMALE UND VERFAHRENSBESCHRÄNKUNGEN BBL UROTUBE, BBL UROTUBE M, BBL UROTUBE E, BBL UROTUBE E. coli und BBL UROTUBE SXT sind für die Diagnose allgemeiner Infektionen der Harnwege anhand von Urinproben geeignet. Die Dip-Slide-Methode mit CLED und MacConkey Agar hat sich als effektives und einfaches Verfahren zur quantitativen Bestimmung häufig vorkommender Bakterien (z.B. Enterobacteriaceae), anderer gramnegativer Stäbchen (wie beispielsweise Pseudomonas), Enterokokken, Staphylokokken usw. aus Urin erwiesen.1-8 Die Verwendung eines dritten Mediums (sofern vorhanden) zusätzlich zu diesen Standardmedien ist hilfreich, wenn vermutet wird, dass bestimmte Gruppen von Mikroorganismen als Infektionserreger vorhanden sind.9-12 Es ist unbedingt notwendig, dass die mit diesen oder anderen Systemen und Medien verwendeten Urinproben aseptisch gewonnen wurden und frisch (nicht älter als 2 h) sind bzw. gekühlt (nicht länger als 24 h) gelagert wurden.1,13 Eine unsachgemäße Gewinnung des Urins, Lagerung der Proben über die oben genannten Zeiträume hinaus, lange Transportzeiten vor der Verarbeitung der inokulierten Objektträger und die Einwirkung extremer Temperaturen auf die inokulerten Objektträger können zu einer Fehldiagnose führen oder eine Diagnose sogar unmöglich machen.1,13 Die genaueste Diagnose von Infektionen der Harnwege wird erhalten, wenn durch eine Blasenpunktion gewonnener Urin verwendet wird, da die in der normalen Harnröhrenflora vorhandenen Mikroorganismen den mit anderen Entnahmeverfahren gewonnenen Urin kontaminieren können. Anspruchsvolle Bakterien, wie beispielsweise Mycoplasmen, Chlamydien, Neisseria gonorrhoeae, Mycobakterien oder Gardnerella vaginalis wachsen nicht auf den Medien dieser Eintauchobjektträger. Wenn vermutet wird, dass diese Organismen an einer Infektion der Harnwege beteiligt sind, sind die entsprechenden Verfahren zu ihrem Nachweis anzuwenden.1,13 Bestimmte Streptokokkenstämme, besonders von Streptococcus agalactiae (Gruppe B), wachsen nicht in ausreichendem Maß auf Medium 1 (CLED Agar). Wenn vermutet wird, dass diese Stämme an einer Infektion der Harnwege beteiligt sind, wird eine Kultivierung des Urins auf einer Blutagarplatte (z.B. auf BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood) empfohlen. Medien auf Eintauchobjektträgern dürfen nicht für Empfindlichkeitstests mittels Blättchendiffusionsmethode verwendet werden. Obwohl bestimmte diagnostische Tests direkt auf den Medien durchgeführt werden können, sind für eine vollständige Identifizierung biochemische und, falls indiziert, immunologische Tests unter Verwendung von Reinkulturen notwendig. Ausnahmen sind E. coli und die ProteusMorganella-Providencia-Gruppen, die auf dem Medium 3 (BGLU Agar) von BBL UROTUBE E. coli nachgewiesen werden können, wenn die empfohlenen Zusatztests (Indol, TDA) durchgeführt wurden. Darüber hinaus lässt sich Pseudomonas aeruginosa direkt auf dem Medium 3 (Cetrimid-Agar) von BBL UROTUBE nachweisen, wenn grünliche, fluoreszierende Kolonien gefunden werden, die eine positive Oxidasereaktion liefern. Für eine entsprechende Therapie sind möglicherweise Empfindlichkeitstests der isolierten Organismen erforderlich. Wachstum von Bakterien auf dem Medium 3 (PDM-Medium mit Trimethoprim/Sulfamethoxazol) von BBL UROTUBE SXT muss als Resistenz der Organismen gegenüber diesem antimikrobiellen Wirkstoff (SXT) gewertet werden. DA-212115.03 Seite 9 von 11 LITERATUR 1. Gallien, R.1988. Mikrobiologische Diagnostik in der ärztlichen Praxis, G. Fischer Verlag , Stuttgart. 2. Ellner, P.D., and M.S. Papachristos. 1975. Detection of bacteriuria by dip-slide. Am. J. Clin. Pathol. 63: 516-521. 3. Guttmann, D. 1967. Dip-slide: an aid to quantitative urine culture in general practice. Br. Med. J. 3: 343-345. 4. McAllister, T.A., et al. 1973. Assessment of plane dipslide quantitation of bacteriuria. Nephron 11: 111-122. 5. Van Dorsten, J.P., and E.R. Bannister. 1986. Office diagnosis of asymptomatic bacteriuria in pregnant women. Am. J. Obstet. Gynecol. 155: 777-780. 6. Sandys, G.H. 1960. A new method of preventing swarming of Proteus sp. with a description of a new medium suitable for use in routine laboratory practice. J. Med. Lab. Technol. 17:224-233. 7. Mackey, J.P., and G.H. Sandys. 1965. Laboratory diagnosis of infection of the urinary tract in general practice by means of a dip-inoculum transport medium. Br. Med. 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Becton Dickinson GmbH BD Diagnostic Systems Tullastrasse 8 – 12 D-69126 Heidelberg/Germany Phone: +49-62 21-30 50, Fax: +49-62 21-30 52 16 [email protected] BD Diagnostic Systems Europe Becton Dickinson France SA 11 rue Aristide Bergès 38800 Le Pont de Claix/France Tel: +33-476 68 3636 Fax: +33-476 68 3292 DA-212115.03 Seite 10 von 11 http://www.bd.com BD, BD logo and BBL are trademarks of Becton, Dickinson and Company. Urotube is a trademark of Becton Dickinson GmbH. ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection © 2003 Becton, Dickinson and Company LEITFADEN ZUR INTERPRETATION (CLED Agar, nur Medium 1!) 1 000 (=103)/mL 10.000 (=104)/mL Kontamination: 1 000 – 10.000 (=103 -104) CFU/mL DA-212115.03 100.000 (=<105)/mL Zweifelhaft: >10 000 - <100.000 (=104-105) CFU/mL Seite 11 von 11 1.000.000 (=106)/mL Infektion: 100.000 – 1.000.000 (=105-106) CFU/mL
