Differenzierung neonataler naiver T

Inhaltsverzeichnis
1
EINLEITUNG
10
1.1
T-Zellen
1.1.1
Einteilung der T-Zellen
1.1.2
T-Helferzellen
1.1.3
Effekte von Th1- und Th2-Zellen
1.1.4
Nachweis der T-Zell-Differenzierung
10
12
13
14
15
1.2
Antigenpräsentierende Zellen
1.2.1
Dendritische Zellen
1.2.2
Anzucht dendritischer Zellen aus Stammzellen
16
16
18
1.3
Gemischte Leukozytenreaktion mit allogenen oder autologen
Zellen und primäre Immunantwort
18
1.4
Besonderheiten des neonatalen Immunsystems
19
1.5
Staphylokokkentoxine wirken als Superantigene
20
1.6
Fragestellung
23
2
PROBANDEN, MATERIAL UND METHODEN
24
2.1
Probanden
24
2.2
Magnetische Zellseparation (MACS)
24
2.3
Isolierung hämatopoetischer Stammzellen
26
2.4
Anzucht dendritischer Zellen
27
2.5
Isolierung CD45RA-positiver Zellen
28
2.6
Isolierung naiver T – Zellen
29
2.7
Kokultur der T-Zellen mit dendritischen Zellen
29
2.8
Durchflußzytometrie
30
2.9
Messung der intrazellulären Zytokinproduktion
34
2.10
Herstellernachweis
35
3
3.1
3.2
ERGEBNISSE
38
Das Überleben von T-Zellen in Kokultur mit autologen
dendritischen Zellen erfordert zusätzliche Stimuli
38
T-Zellen zeigen nach Stimulation mit IL-2 oder IL-7 eine Th2Differenzierung
39
5
3.3
3.4
3.5
Die Fraktion der CD45RA-positiven Zellen enthält neben naiven TZellen auch HLA-DR-positive antigenpräsentierende Zellen
41
Th1-Antwort und Th2-Antwort erreichen ihr Maximum zu
verschiedenen Zeitpunkten
43
Das Ausmaß der IFN-γγ-Produktion ist abhängig von der TSSTKonzentration
45
3.6
TSST stimuliert Vβ
β2-positive Zellen stärker als Vβ
β2-negative Zellen
zur Bildung von IFN-γγ
45
3.7
Die Expression von Vβ
β2 nach Stimulation mit TSST ist abhängig
von der eingesetzten TSST-Dosis
46
3.8
LPS ist ein wichtiger Stimulus für die Bildung von IFN-γγ
47
3.9
Restimulationen mit TSST erhöhen die Anzahl IFN-γγ-produzierender
Zellen nur gering
48
3.10 Nachstimulationen mit PMA und Ionomycin stimulieren die
Produktion von IFN-γγ und unterdrücken die Produktion von IL-4
49
4
52
4.1
DISKUSSION
Das Überleben von T-Zellen in der autologen Kokultur mit
dendritischen Zellen erfordert zusätzliche Stimuli
53
4.2
Die Th2-Differenzierung ist ein „Grundzustand“ neonataler T-Zellen,
aber eine Th1-Antwort ist auslösbar
54
4.3
Die Differenzierung zu Th1-Zellen ist abhängig von der Anwesenheit
dendritischer Zellen. Th2-Zellen lassen sich auch ohne dendritische
Zellen erzeugen.
56
4.4
Effekte von LPS auf die Differenzierung zu Th1- und Th2-Zellen
59
4.5
NK-Zellen und zytotoxische T-Zellen können über sezernierte
Zytokine die Differenzierung naiver T-Helferzellen beeinflussen
61
Abhängigkeit der T-Zell-Differenzierung von der
Superantigen-Dosis
63
4.7
Abhängigkeit der T-Zell-Differenzierung von der Dauer der Kultur
65
4.8
Unterschiede zwischen Vβ
β2-positiven und Vβ
β2-negativen T-Zellen
67
4.9
Einfluss von Nachstimulationen mit dendritischen Zellen, LPS und
TSST
69
4.10
Effekte von Nachstimulationen mit PMA und Ionomycin
71
4.11
Weitere Einflussfaktoren
73
4.6
6
4.12
Perspektiven / Klinische Aspekte
73
5
ZUSAMMENFASSUNG
75
6
LITERATURVERZEICHNIS
76
7
DANKSAGUNG
8
LEBENSLAUF
7