Knochenmarktransplantation, Immunrekonstruktion GvL und GvHD
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Stammzelltransplantation Stammzelltransplantation, Immunrekonstitution, GvL und GvHD Ulrike Koehl Pädiatrische Hämatologie, Onkologie und Hämostaseologie Klinikum der Johann Wolfgang Goethe-Universität Frankfurt am Main Ein großer Teil der Leukämien und malignen Tumoren im Kindesalter kann durch konventionelle Therapie (Chemotherapie, Bestrahlung, Operation) geheilt werden. Verbesserung der Heilungsrate bei Hochrisikopatienten (z.B. Translokations-Leukämien, Prednisolon-Nonrisponder) und Patienten mit frühem Rezidiven durch Stammzelltransplantation und zelluläre Immuntherapien. Maligne Erkrankungen im Kindesalter Keimzelltumoren 3,1 % ¾ andere Diagnosen 4,2 % Knochentumoren 4,6 % Stammzelltransplantation akute Leukämien 34,5 % Weichteilsarkome 6,5 % autologe Stammzelltransplantationen ¾ allogene Stammzelltransplantationen ALL HLAHLA-identen Fremdspender Nierentumoren 6,5 % AML HLA-identen Familienspender Tumoren des sympathischen Nervensystems 8,6 % HLA- nonidenten Familienspender (haploidente SZT) Lymphome 12,8 % ZNS-Tumoren 19,4 % Stammzellquellen Knochenmark-Stammzellen KM-Entnahme ¾ Knochenmark ¾ Periphere Blutstammzellen • ohne Manipulation ¾ Periphere Blutstammzellen • • CD34/CD133 selektiert CD3/CD19 depletiert ¾ Nabelschnurblut ¾ Aus dem Beckenkamm ¾ 15 ml/kg Empfängergewicht ¾ Entnahme im OP dauert ca. 1 – 2 h 1 Periphere Blutstammzellen (PBSC) Aufreinigung peripherer Stammzellen Leukapherese Immunomagnetische Selektion von Stammzellen ¾ Leukapherese 3 – 4 h ¾ CD34 / CD133 Selektion 6 – 9 h unter GMP ¾ Leukapherese ¾ Entnahme dauert ca. 3 – 4 h) ¾ CD3/CD19 Depletion 7-12 h unter GMP CD34/CD133 Selektion CD34-Selektion: Leukapherisat: CD133-Selektion: n=156 n=11 CD34+ [%]: 97,2 (89,5–99,8) 96,3 (85,1-98,9) CD3+ [%]: 0,1% (0,02-0,3%) 0,2 (0,02-0,5) CD34+ [%]: 0,3 – 9,1 CD3+ [%]: 35-57% Nabelschnur - Stammzellen Koehl et al, BMT 2002 and Transpl Hematol Oncol 1999 Stammzellquelle www.google.de ¾ Cryokonservierung ohne Manipulation Stammzelltransplantation PBSC nicht manipuliert CD34-selektiertes PBSC (n=26) (n=25) (n=156) Nach SZT regeneriert sich ein neues Immunsystem aus den Stammzellen des Spenders Transplantation KM-Entnahme Leukapherese Immunomagnetische Selektion von CD34+Zellen Aufnahme von PD Dr. T. Tonn 1.51.5-15.1 × 106 CD34+/kg 3.33.3-9.5 × 106 CD34+/kg 3.63.6-38.2 × 106 CD34+/kg 0.30.3-4.5 × 107 CD3+/kg 0.50.5-17.1 × 108 CD3+/kg 4.04.0-31.0 × 103 CD3+/kg Koehl et al BMT 2002 Koehl Transpl Hematol 1999 ¾ Elimination residualer maligner Zellen: graft-versus-tumor graft-versus-leukemia (GvL) Effekt Ze ller ¾ Hämatopoetische Regeneration hol u ng Knochenmark Tag 0 (periphere Zellzahl nahezu 0) 2 “Key Players” in der Immunologie: zelluläre Immunabwehr Monitoring der Immunkompetenz in der Transplantation Immunologische Reaktionen zwischen Spender- und Empfängerzellen kindly provided by A. Aicher Stammzelltransplantation Prinzip Stammzelltransplantation Prinzip II HLA Mismatch Rejection = HvG Empfänger Rezidiv Zwilling Spender Graft versus Leukaemia Reaktion? Verwandter Spender = geno-identisch Unverwandter Spender = pheno-identisch Graft versus Host Reaction Stammzelltransplantation Prinzip III T-Zellen GvHD + Rejection GvHD / Rejection Eltern = haplo-identisch Einfluß auf die Immunrekonstitution ¾ Stammzellquelle, Anteil TT-Zellen im Transplantat, HLAHLAKompatibilitä ä t zwischen Spender/Empfä ä nger Kompatibilit Spender/Empf T-Depletion ¾ Zusä Zusätzliche zellulä zelluläre Immuntherapie nach Transplantation: • Spender NKNK-ZellZell-Therapie T Replete • Donor Lymphozyten Infusion (DLI, TT-Zellen) 3 Lymphozytensubpopulationen bezogen auf Altersperzentilen Monitoring der Immunkompetenz 5. Perzentile der Lymphozytensubpopulationen 5.Perzentile der Lymphozytensubpopulationen Blut ¾ Hämatopoetische Immunrekonstitution (Immunstatus) in verschiedenen Lebensaltern CD19+ CD8+ CD4+ CD3+ Lymphozyten peripheres Zellzahl/µl Na Zellen/ µl, peripheres Blut be lsc Nab hn elsch 2nu u 3 M 2-3r r on Mon 4a 8 M a4 te te 923 ona -8 Mona M 12 te te on -23 M at ona 2e te 5 6- Jah 2-5 17 r Jah Ja e re h Er r7e-17 Ja wa hre ch E se rwach ne sen 4500 4000 3500 ¾ Antigenspezifische TT-Zellen 3000 2500 ¾ ZellfunktionsZellfunktions-Assays 2000 1500 1000 ¾ Immunglobuline und Zytokinspiegel Normalwerte Lymphozyten CD3+ CD4+CD3+ CD8+CD3+ CD19+ Lymphozyten 500 ComansComans-Bitter et al. J Pediatr 1997 n= 429 Kinder CD3+ 0 CD4+ CD8+ e CD19+ T Helfer Subpopulationen CD3+ CD4+ CD8+ CD56+ CD3+CD56+ CD19+ CD14+ 6000 Zellen/µl 5000 4000 3000 2000 1000 0 0 100 200 300 400 500 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 Lymphozyten [%] 7000 0 100 Alter [Monate] 300 400 Alter [Monate] Erwachsene Kinder 200 Kinder Erwachsene 500 Subpopulationen der THelfer CD3+CD4+ Lymphozyten [%] Kinder [n=80], Erwachsene [n=20] CD4+69+ CD4+HLA-DR+ CD4+45RA+ CD4+45RO+ CD4+CD25+ 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 0 • Differenz in der Zellzahl [absolut/µl], nicht jedoch prozentual Monitoring des Immunstatus 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 Individuen aufgetragen nach Alter Zelluläre Immunrekonstitution der Subtypen nach SZT 4-und 5-Farb-durchflußzytometrische Bestimmung Coulter Epics XL/ FC 500 T-Zellen: CD 45/4/8/3 zusätzl.: CD45RA,RO,4,25,28,69,HLA-DR;CCR7 B-, NK-Zellen: CD 45/56/19/3 zusätzl.: 158a,158b, CD20 800 700 CD 45/14 CD 45/14/16/33/123/85k(ILT-3) Fluoreszenzfarbstoffe: FITC/PE/ECD/PC5/PC7 Zellen x 106 / L Monozyten: DCs nach Transplantation 600 500 400 CD3+ CD4+CD3+ CD8+CD3+ CD8+CD3+CD45RA+ CD8+CD3+CD45RO+ CD8+CD3+HLA-DR+ CD8+CD3+CD38+ CD8+CD3+CD69+ CD56+CD3CD19+ 300 200 100 1.-3. Monat 1x/Woche 3.-6. Monat 2x/Monat 6.-12.Monat 1x/Monat 2.-4.Jahr 1x/3 Monate 0 0 20 40 60 80 100 120 140 Zeit [Tage] 4 Zelluläre Immunrekonstitution Einfluß der Stammzellquelle auf die Immunrekonstitution PERZENTILE ERREICHT? 75 CD8+ CD3+ CD19+ + CD3 50 CD4+ CD3+ 25 0 0 10 20 30 40 Wochen nach Transplantation 50 T-Helfer-Zellen PBSC PBSC KM 100 + - CD56 CD3 75 CD8+ CD3+ CD3+ + CD19 50 CD4+CD3+ 25 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 CD4 Take 5te Perzentile [% der Patienten] CD56+ CD3- CD8 Take 5te Perzentile [% der Patienten] 100 Zytotoxische T-Tellen 50. Perzentile Patienten mit 50tem Perzentilen Take [%] Patienten mit 5tem Pezentilen-Take [%] 5. Perzentile CD34sel 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 CD34sel KM 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 W ochen nach Transplantation Wochen nach Transplantation 0 0 25 50 75 100 Wochen nach Transplantation signifikant signifikant auß außer KM vs CD34sel --- NK-, --- B-, --- zytotoxische T-,--- Helfer-T-, --- T-Zellen B-, NKNK-Zellen: nicht signifikant Diskriminanzanalyse für zytotoxische T-Zellen in Bezug auf das Überleben B A 100 80 60 40 20 0 0 100 200 1000 750 500 250 0 0 Wochen nach SZT 5. Perzentile signifikant (p<0,001) n=32 Todesursache bei Patienten mit langsamer Immunrekonstitution 300 CD8+CD3+ Zellen/µl CD8+CD3+ T-Zellen: Im ersten Jahr nach SZT altersgematchten Wert erreicht ? Erreichen der altersgematchten Absolutzahl für CD8+CD3+ Patienten mit 5th Perzentilen Take der CD8+CD3+ Überleben [%] Zusammenhang zwischen der Immunrekonstitution und dem Überleben der Patienten? 10 20 30 40 50 Wochen nach SZT Anstieg der CD3+CD8+ über 200/µ 200/µl nach 66-10 Wochen Take home message: ¾ Allogene Stammzelltransplantation: ¾ Rezidiv der Erkrankung ¾ Infektion (Pilze, virale Erreger) ¾ Graft versus Host Disease aufgrund von DonorDonor-LymphozytenLymphozyten-Infusionen bei Auftreten eines Rezidivs HLAHLA-idente FamilienFamilien- oder Fremdspender HLAHLA-nonidenter Familienspender (mismatch) ¾ Stammzellquelle: KM, PBSC oder selektionierte Stammzellen unterscheiden sich im Anteil an TT-Zellen ¾ Patienten mit langsamer hä hämatopoetischer Regeneration, insbesondere der zytotoxischen TTZellen haben ein schlechteres Überleben 5 Infektionen nach SZT Monitoring der Immunkompetenz ¾ PHASE I < 30 DAYS Neutropenia Mucositis Hämatopoetische Immunrekonstitution (Immunstatus) PHASE II 30-100 DAYS Impaired cellular immunity PHASE III 100-360 DAYS Impaired cellular and humoral immunity Herpes s. virus Cytomegalovirus ¾ Antigenspezifische T-Zellen Varicella-zoster virus Gram neg. bacilli ¾ Zellfunktions-Assays ¾ Immunglobuline und Zytokinspiegel Staphylococcus epidermidis Candida species Aspergillus species Pneumocystis carinii American Society for Blood and Marrow Transplantation, 2000 CMV Erkrankungen nach SZT Cytomegalovirusinfektion Das Risiko einer CMV-Reaktivierung ist hoch für immunsuppremierte, transplantierte Patienten • CMV-Virus: gehört zu den Herpes-Viren • CMV-Infektionen: 60-80% aller Erwachsenen weltweit (latent, asymptomatisch) • In gesunden Individuen wird die latente CMVInfektion durch zytotoxische CMV-spezifische T-Zellen kontrolliert • • • • • • Interstitielle Pneumonie Gastrointestinaltrakt (z.B.Enterocolitis) Hepatitis Entzündung des ZNS Chorioretinitis Disseminierte Entzündung Nach SZT erhöhte Mortalitätsrate Virostatika bei CMV Infektionen Abwehr von viralen Infektionen und GvL: Zytotoxische T-Zellen Antivirale Substanzen gegen CMV: Ganciclovir, Foscarnet, Cidofovir ¾ Mit mäßiger Effizienz; Resistenzen möglich Virale Infektion Synthese viraler Proteine Bindung viraler Peptide an MHC-I Moleküle ¾ Mit hoher Rate an Nebenwirkungen • Neutropenie (Gefahr für sekundäre Infektionen) • Nierenfunktionsstörungen CD8+ T-Zelle MHC -I / Peptid • Prophylaxe hemmt Immunrekonstitution → Gefahr des sehr späten Auftretens einer CMV Erkrankung nach SZT • Gefahr der Resistenzentwicklung (insbes. bei Langzeitgabe) TCR Perforine: Perforine: bilden bilden Poren Poren Granzyme: Granzyme: gehen gehen durch durch Poren Poren und und aktivieren aktivieren Caspasen Caspasen Präsentation virales Peptid (Peptide maligner Zellen) bereitgestellt von A. Aicher 6 Monitoring CMV-spezifischer T-Zellen Fallbeispiel: Mädchen, 8 Jahre, Morbus Hodgkin 14.09.03 Messung der CMV- 1. Rezidiv Progreß der Erkrankung vor Bestrahlungsbeginn streptavidin spezifischen MHCpeptide CD8+CD3+ T-Zellen Label TCR Verbesserung des Patientenmanagement durch individuelle Steuerung von Prophylaxe und Therapie (Virostatika, Immuntherapie mit antigenspezifischen T-Zellen) 02.04.04 Autologe Stammzelltransplantation 25.07.04 2. Rezidiv 15.12.04 Haploidentische Stammzelltransplantation CD8+ Immuntherapie mit hochangericherten NK-Zellen T cell Kond.: Fludarabine, Thiotepa, Melphalan Rezidivierende CMV-Infektionen Fallbeispiel: CMV Assay Panel 2 Fallbeispiel: CMV Assay Panel 1 CD3+CD4+ = 65.6% CD3+CD8+ CD8-FITC Beads FS Time CD3-PC5 CMV-spezifische T-Zellen und CMV-DNA-Kopienzahl nach SZT CD8-FITC CD8-FITC g tin Ga T 3+ CD 8+ D fC au e ell -Z n CD3-PC5 CMV-Spez. CD8+ = 1,2% CMV-Spez. CD8+ = 11/µl CD8-FITC Take home message: ¾ In gesunden Individuen wird die latente CMV- 700 500 300 400 300 200 200 100 100 20 10 0 0 0 10 20 30 40 50 60 70 T age nach SZT CMV-spez. CD8 CMV-DNA CD8 CMV-DNA (Kopienzahl/ml) 400 600 Zellen/µl SS = 29,2% CD3+CD8+ = 223/µl CD3-PC5 FS SS CD3-PC5 Tetramer A0201-PE auf CDFS 3+ T-Z elle n TET NEG-PE Ga ting SS CD3-PC5 CD4-PE SS CD3-PC5 CD3+CD4+ = 504/µl Infektion durch zytotoxische CMV-spezifische T-Zellen kontrolliert ¾ Nach SZT besteht eine erhö erhöhte Mortalitä Mortalitätsrate durch frische CMVCMV-Infektionen und CMVCMV-Reaktivierungen ¾ Die Immunrekonstitution CMVCMV-spezifischer TT-Zellen ist entscheidend fü für die spezifische Abwehr gegen CMV CD4 7 Graft-versus-Leukämie-Effekt und Graft-versus-Host Disease Transplantation Ze ller hol u ng ¾ Immunkompetente Zellen, die für den GvL-Effekt und die GvHD von Bedeutung sind ¾ Einfluß von adaptiver Immuntherapie auf das Überleben der Patienten Graft-versus-Leukämie Effekt ¾ Reaktion immunkompetenter Zellen aus dem Graft, Graft, die zur Zerstö Zerstörung von malignem Empfä Empfängergewebe fü führt (Leukä (Leukämie und Tumorzellen) ¾ Bei nachgewiesenem GvLGvL-Effekt treten weniger Rezidive auf (insbesondere: CML; geringer: AML, kaum nachgewiesen: ALL) Tag 0 (periphere Zellzahl nahezu 0) Verlauf residualer Leukämieoder Tumorzellen 1012 continuous remission after cht relapse after cht continuous remission after Tx relapse after Tx 109 GvL 106 allogeneic transplantation detection limit for residual leukaemia 103 100 Akute GvHD der Haut (grad I-II) Graft-versus-Host Disease ¾ Lymphozyten des Spenders, die den Empfä Empfänger bzw. dessen Gewebe als fremd erkennen und angreifen ¾ Akute Form (aGvHD (aGvHD)) tritt innerhalb der ersten 3 Monate nach SZT auf mit Klinik / OrganmanifeOrganmanifestation: station: Haut, GI, Leber ¾ Chronische Form (cGvHD (cGvHD)) > 100 Tage nach SZT mit Klinik / Organmanifestation: Haut, GI, Leber, Lunge Schwere akute GvHD der Haut (grad IV) (zur Verfügung gestellt durch Dr. J. Gratama) 8 aGvHD Akute GvHD ¾ Prophylaxe: 1. CsA 2. MTX 3. Prednisolon ¾ Therapie: 1. Prednisolon 2. AK gegen T-Zellen (z.B. OKT3) 3. Antilymphozytenserum Stammzelltransplantation Prinzip V Stammzelltransplantation Prinzip VI GvHD ? GvHD ? Infektionen ? Graft versus Host Effekt Graft versus Leukämie Effekt Diarrhöe ¾ Immunsuppression => Infektion ¾ Klinisch anfä anfänglich oft ein ähnliches Bild ¾ GCV bei CMV => Stammzelltoxizitä Stammzelltoxizität => Immunrekonstitution ¾ DLI ¾ Immunologisch oft Anstieg an CD8+ HLAHLA-DR+ => GvHD Differenzierung in TH1 und TH2 Zellen Stammzelltransplantation Prinzip VI 0 ?Infektion Infektion ? 30 90 Tage TH2 TNFa , IFNy 2 , IL-1 TH1 GvHD : Endotoxine von Bakterien TH1-Shift IL-2 TNF-alpha Interferon-gamma GvHD : G-CSF TH2-Shift IL-10 IL-4 IL-5 GvHD erhöht GvHD vermindert (zur Verfügung gestellt durch Dr. A. Aicher) 9 Zytokinscreening und Zellsubpopulationen Multivariate Analysen ¾ Versuch eine beginnende GvHD von einer Infektion zu trennen ¾ Trennung des Effektes von TT- ZellZell- und NKNKZelltherapien hinsichtlich des Auftretens von GvHD Zytokin-Screening mittels Bead-basierter Flowzytometrie ¾ Sandwich Immunoassay ¾ Beads konjugierte Antikö Antikörper = ¾ binden an lö lösliche Antigene ELISA Methode CBA-Array Clustering Parameter Reporter Parameter T-Zellen Natürliche Killer -Zellen CD3+ CD56+ CD3- GvL GvHD FremdspenderTransplantation ¾ Immunintervention nach allogener Stammzelltransplantation mit zellulären Therapien: Spender T- und NK-Zellen Fallbeispiele: GvHD: T- oder NK Zellen ? Fall 1: ¾ Mädchen, 10 J., ALL ¾ Frü Frührezidiv 8 Monate nach initialer ALL ? Haploidente StammzellTransplantation T- und NK-Zellen unterscheiden sich entscheidend ¾ Haploidente SZT und NKNKZellZell-Immuntherapie > 50 x 103 CD3+ / kgKG ¾ Remission ¾ Schwere GvHD 4 Monate nach SZT Fall 2: ¾ Mädchen, 8 J., Morbus Hodgkin ¾ TherapieTherapie-resistente Erkrankung ¾ Haploidente SZT und NKNKZellZell-Immuntherapie < 25 x 103 CD3+ / kgKG ¾ Remission ¾ Keine GvHD in der Art der Zielzellerkennung 10 „Key Players“ in der Immunologie Fallbeispiele: Zytokinspiegel Adaptive Immunabwehr = erworbene Immunabwehr Angeborene Immunabwehr Fall 1: Fall 2: Mädchen, 12 J, ALL T-Zellen Mädchen, 10 J, ALL NK-Zellen 2048 2048 IFN-g IL-2 1024 TNF-a Phagozytäre Zellen (z.B. Makrophagen) 512 pg/ml 512 pg/ml 1024 256 256 IFN-g IL-2 TNF-a 128 128 8 4 2 1 0.5 0.25 0.125 64 8 0.125 1 2 4 88 1024 2048 0.5 4096 Antikörper Antigenpräsentierende Zellen, z.B. Dendritische Zellen B-Zellen Komplement System 1 2 4 8 16 32 64 128 256 512 1024 2048 4096 Stunden Stunden schwere GvHD bereitgestellt von A. Aicher Die T-Zellantwort Aufnahme HL II A- CD4 TCR T-Helfer Zelle exogen endogen TH1 (IL-2, IFNγ) TH2 (IL-4, IL-10) I AHL TCR zytotoxische T-Zelle CD8 Antigen-präsentierende Zelle Zytotoxische TT-Cells ¾ Wichtig für die Elimination von virus-infizierten Zellen und leukämischen Zellen ¾ exprimieren MHC Klasse I ¾ Erkennung von Peptid/ MHC Klasse I via TCR stabilisiert durch CD8 Lyse Helfer T-Zellen Immuntherapie nach Chimärismusanalysen ALL Patienten mit steigendem autologen Zellanteil nach SZT 0,9 0,8 ¾ Direkter inflammatorischer und Antikörper Response 0,7 ¾ Erkennen fremde Peptide via MHC Klasse II; TCR Erkennung stabilisiert via CD4 0,4 ¾ Nur “Antigen präsentierende Zellen” exprimieren MHC Klasse II (z.B. Makrophagen, DC, B Zellen) 0,6 Immuntherapie n=31 pEFS 0.39 SE 0.09 0,5 Keine Immuntherapie n=15 pEFS 0.0 0,3 0,2 Prozent Spenderzellen [%] 1,0 ¾ Orchester der Immunantwort 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 T-Zell-Application 0 25 50 75 100 125 150 175 Tage nach SZT log-rank 0.0009 0,1 0,0 0 1 2 Zeit [Jahre] 3 Bader P et al. J Clin Oncol 2004 4 Chimerismus Analysen, wöchentlich PB (Leukozyten Subsets) Koehl U et al. Leukemia 2003 + Eur J Hematol 2006 11 T-Zelldosis zur DLI High dose che mo therapy alloge ne ic stem ce lll transplantatio n >2 x 10 6 CD34+ cells/kg T-ZellZellT-ce ll Applikation application chimerism analysis6 2x10 minimal residual> disease C D34sele cti on Suizid-Strategie matched related donor 1x106 CD3+/kg matched unrelated donor without manipulation 1x105 CD3+/kg allogeneic T-cells transduction ex vivo matched unrelated donor CD34 selected graft 5x104 CD3+/kg selection infusion lysis of leukemic cells GvL-effect mismatched donor 2.5x104 CD3+/kg GVHD CAVE: Gefahr für lebensbedrohende GvHD durch DLI Application of a suicide inductor Immunotherapie mit NK-Zellen nach haploidenter SZT Alloreaktive NK-Zellen Lysis of allogeneic malignant cells GvL NK Engraftment lysis of patients´s normal tissue Study design: NK cells >1x107 CD56+CD3- and < 5x104 CD3+ cells/kg donor -10 -9 NK cell selection Lysis of (lympho-) hematopoietic recipient cells 0 3 stimulation and expansion 1000 U/ml IL-2 Ø GvHD Passweg J, Koehl U et al. Best Pract Res Clin Hematol 2006 Take home message: ¾ T-ZellZell-Therapien (DLI) nach SZT auf der Basis von Chimä Chimärismusrismus-Analysen helfen einer Transplantatabstoß Transplantatabstoßung entgegen zu wirken ¾ DLI ist weniger effektiv beim Rezidiv „Problem der Dosis“ Dosis“ – Relation zur GvHDGvHD-Entwicklung ¾ Verringerung der GvHDGvHD-Risikos durch manipulierte T-Zellen (allodepletiert allodepletiert, , suizid( suizid-gentransduziert, gentransduziert, TH2TH2-spezifische …) ¾ NKNK-Zellen sind effektive Trä Träger des GvLGvL-Effektes und scheinen keine/ geringe GvHD zu verursachen conditioning regimen recipient [days] 100 CD34 selection / CD3/19 depletion cryopreservation Lysis of dendritic cells (DCs) of the host 40 NK NK NK IL-2 1x106 U/m2 every second day 0 3 40 100 Bi-Nationale Studie: Frankfurt-Basel - Approval of the local ethic board: No. 262/03 Koehl Blood Cell Mol Dis 2004 + Klin Päd 2005; Passweg Leukemia 2004 + BMT 2005 Zusammenfassung I ¾ Nach SZT regeneriert sich ein neues Immunsystem aus den Stammzellen des Spenders ¾ Die Immunrekonstitution wird beeinflusst von der Stammzellquelle (KM, PBSC, selektierte SZ mit unterschiedlichem TT-ZellZell-Anteil) und der HLAHLAKompartibilitä Kompartibilität zwischen Spender und Empfä Empfänger ¾ GvL ist ein wichtiger Mechanismus der allogenen SZT – Durch GvL können residuale Leukä Leukämie / Tumorzellen mit Hilfe immunkompetenter Zellen eliminiert werden 12 Zusammenfassung II ¾ SpenderSpender-Lymphozyten als Trä Träger der GvL können auch zur lebensbedrohlichen GvHD führen (Haploidente SZT – unverwandte idente SZT – verwandte idente SZT – Zwillings SZT) ¾ Monitoring der Erholung eines immunkompetenten Immunsystems: Immunstati, Immunstati, Antigenspezifische TTZellen, ZellfunktionsZellfunktions-Assay, Assay, Zytokinspiegel ¾ Multivariate Analysen der verschiedenen Parameter zur frü frühzeitigen Immunintervention Killer cell immunglobuline likeRezeptoren auf NK-Zellen HLA-A A3,A11 KIR3DL2 HLA-B Bw4 KIR3DL1 HLA-C Cw3 Cw4 KIR2DL2/3 KIR2DL1 Farag et al Blood 2002 13
