BD Brilliant Green Agar

GEBRAUCHSANWEISUNG
– GEBRAUCHSFERTIGE
PLATTENMEDIEN
PA-212097.07
Rev.: Oct 2013
BD Brilliant Green Agar
VERWENDUNGSZWECK
BD Brilliant Green Agar (Brillantgrün-Agar) ist ein hochselektives Medium zur Isolierung von
Salmonellen, mit Ausnahme von S. typhi, aus Fäzes und anderen klinischen Proben.
GRUNDLAGEN UND ERLÄUTERUNG DES VERFAHRENS
Mikrobiologische Methode.
Die Verwendung von Brillantgrün-Agar zur Isolierung von Salmonellen wurde erstmals von
Kristensen et al. beschrieben. 1 Später wurde das Medium von Kauffmann modifiziert.2 Das
Medium ermöglicht nachweislich die Inokulation starker Inokulate in der klinischen und nichtklinischen Anwendung. Es ist im Arzneimittelbuch der USA (United States Pharmacopeia, USP)
bei den mikrobiologischen Verfahren für die Abwesenheit angegebener Mikroorganismen in
Nahrungsergänzungsmitteln (Microbiological procedures for absence of specified
microorganisms—nutritional and dietary supplements) aufgeführt und wird für die Untersuchung
von Milchprodukten verwendet. Außerdem wird es in klinischen Mikrobiologie-Handbüchern
erwähnt.3-8
Hefeextrakt und zwei Peptone liefern die Nährstoffe in BD Brilliant Green Agar; Lactose und
Saccharose bilden gemeinsam mit Phenolrot ein Differenzierungssystem zum Ausschluss von
Lactose- und/oder Saccharosefermentern (z.B. E. coli), da Salmonellen keine Säure aus diesen
Zuckern produzieren. Brillantgrün ist der selektive Stoff zur Hemmung des Wachstums der
begleitenden Flora.
REAGENZIEN
Zusammensetzung* pro Liter destilliertem Wasser
BD Brilliant Green Agar
Hefeextrakt
3,0 g
Bacto Proteose-Pepton
10,0
Lactose
10,0
Saccharose
10,0
Natriumchlorid
5,0
Phenolrot
0,08
Agar
20,0
Brillantgrün
12,5 mg
pH 6,9 ± 0,2
*Nach Bedarf abgestimmt und/oder ergänzt auf die geforderten Testkriterien.
VORSICHTSMASSNAHMEN
. Nur für den professionellen Gebrauch.
Agarplatten bei Anzeichen von mikrobieller Kontamination, Verfärbung, Austrocknung, Rissen
oder sonstigen Anzeichen von Produktverfall nicht verwenden.
Hinweise zur aseptischen Arbeitsweise, Biogefährdung und Entsorgung des Produkts sind der
ALLGEMEINEN GEBRAUCHSANLEITUNG zu entnehmen.
AUFBEWAHRUNG UND HALTBARKEIT
Nach Erhalt Platten bis unmittelbar vor dem Gebrauch im Dunkeln bei 2 – 8 °C in der
Originalverpackung lagern. Einfrieren und Überhitzen vermeiden. Die Platten können bis zum
Verfallsdatum (s. Kennzeichnung auf der Verpackung) inokuliert und entsprechend den
empfohlenen Inkubationszeiten inkubiert werden.
Platten aus bereits geöffneten Stapeln mit jeweils 10 Platten können bei Lagerung in einem
sauberen Bereich bei 2 – 8 °C bis zu einer Woche verwendet werden.
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QUALITÄTSSICHERUNG DURCH DEN ANWENDER
Repräsentative Proben mit den nachfolgend aufgeführten Stämmen inokulieren (detaillierte
Informationen siehe ALLGEMEINE GEBRAUCHSANLEITUNG). Platten bei 35 – 37 °C 18 – 48
Stunden lang aerob inkubieren.
Stämme
Escherichia coli
ATCC 25922
Enterococcus faecalis
ATCC 29212
Salmonella Abony DSM 4224
Salmonella Typhimurium
ATCC 14028
Nicht inokuliert
Wachstum
Kein bis mittleres Wachstum; gelbe bis grün-gelbe Kolonien,
gelbe Höfe
Kein bis geringes Wachstum; gelbliche Kolonien mit oder
ohne gelbe Höfe
10 bis 100 Kolonien; weißliche Kolonien, rote Höfe
Gutes bis sehr gutes Wachstum; weißliche Kolonien, rote
Höfe
Bräunlich bis Olivgrün
VERFAHREN
Mitgeliefertes Arbeitsmaterial
BD Brilliant Green Agar (90 mm Stacker-Platten). Mikrobiologisch kontrolliert.
Nicht mitgeliefertes Arbeitsmaterial
Zusätzliche Kulturmedien, Reagenzien und Laborgeräte nach Bedarf.
Probenarten
Stuhl- oder Rektalabstriche von Patienten mit Verdacht auf Infektion mit Salmonella-Spezies
außer S. typhi (siehe auch LEISTUNGSMERKMALE UND
VERFAHRENSBESCHRÄNKUNGEN). Das Medium wird auch für tierische oder
Nahrungsmittelmaterialien verwendet.
Testverfahren
Probe direkt ausstreichen oder das Medium mit einer geringen Menge Wachstums aus einem
flüssigen Anreicherungsmedium (z.B. Tetrathionat-Bouillon) inokulieren. Ein oder zwei weniger
selektive Medien sollten ebenfalls inokuliert werden, insbesondere wenn das Material eine
niedrige Population aufweist. Probe zur Verdünnung ausstreichen und Platten bei 35 – 37 °C
42 – 48 Stunden lang aerob inkubieren. Platten nach 18 – 24 sowie nach 42 – 48 Stunden
ablesen.
Ergebnisse
Typischerweise weisen die Organismen auf BD Brilliant Green Agar folgendes
Erscheinungsbild auf:
Organismus
Ergebnisse
Salmonella (außer S. Typhi und Weiße bis rote Kolonien, umgeben von roten Zonen
S. Paratyphi)
S. Typhi und S. Paratyphi
Kein Wachstum bis Spuren von Wachstum
Shigella spp.
Kein Wachstum bis Spuren von Wachstum
Escherichia coli, Klebsiella und Gelbe bis grünliche Kolonien, umgeben von gelb-grünen Zon
Enterobacter
Pseudomonas
Kein Wachstum bis Spuren von Wachstum
grampositive Bakterien
Kein Wachstum bis Spuren von Wachstum
LEISTUNGSMERKMALE UND VERFAHRENSBESCHRÄNKUNGEN
BD Brilliant Green Agar ist ein hoch selektives Medium zur Isolierung von Salmonellen und
ermöglicht die Isolierung dieser Organismen selbst aus stark kontaminierten Materialien,
einschließlich Fäzes.4-8
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Weniger selektive Medien zur Isolierung von Salmonellen sowie eine MacConkey II-Agar-Platte
sollten mit der Probe bzw. dem Material inokuliert werden. Proteus kann pathogenen
Darmbakterien ähneln, da weiße bis rote Kolonien mit roten umgebenden Zonen produziert
werden.
Obwohl das Wachstum bestimmter Stämme möglich ist, eignet sich BD Brilliant Green Agar
nicht für die Isolierung von Salmonella typhi und S. paratyphi.
Obwohl bestimmte diagnostische Tests direkt auf diesem Medium durchgeführt werden
können, sind für eine vollständige Identifizierung biochemische und serologische Tests unter
Verwendung von Reinkulturen erforderlich.
LITERATUR
1. Kristensen, M., V. Lester, and A Jurgens. 1925. On the use of trypsinized casein, brom
thymol blue, brom cresol purple, phenol red and brilliant green for bacteriological nutrient
media. Brit. J. Exp. Pathol. 6: 291.
2. Kauffmann, F. 1935. Weitere Erfahrungen mit den kombinierten Anreicherungsverfahren für
Salmonellabacillen. Z. Hyg. Infektionskr. 117: 26.
3. The United States Pharmacopeial Convention. The United States Pharmacopeia-National
formulary, current edition. U.S. Pharmacopeial Convention, Inc., Rockville, Md.
4. Flowers, R.S., W. Andrews, C.W. Donelly, and E. Koenig. 1993. Pathogens in milk and milk
products, p. 103-212. In: R.T. Marshall (ed.). Standard methods for the examination of dairy
5. products, 16th ed. American Public Health Association, Washington DC, USA.
6. Osborn, W.W., and J.L. Stokes. 1955. The determination of Salmonellae in foods. Food and
Drug Laboratories, Ottawa, Canada.
7. MacFaddin, J. 1985. Media for the isolation-cultivation- identification-maintenance of medical
bacteria. Williams and Wilkins, Baltimore, USA.
8. Bopp, C. A., F. W. Brenner, P. I. Fields, J. G. Wells, and N. A. Stockbrine. 2003.
Escherichia, Shigella, and Salmonella. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A.
Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for
Microbiology, Washington, D.C.
LIEFERBARE PRODUKTE
BD Brilliant Green Agar
Best.-Nr. 212097
Gebrauchsfertige Plattenmedien, 20 Platten
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