1. Symposium „Urologische Forschung der - DGU

Urologie aktuell
Urologe 2010 · [jvn]:[afp]–[alp]
DOI 10.1007/s00120-009-2165-3
© Springer Medizin Verlag 2010
1. Symposium
„Urologische Forschung der
Deutschen Gesellschaft für Urologie“
München, 12. bis 14. November 2009
Abstracts
Redaktion
Dr. rer. nat. Christoph Becker
Forschungskoordination, Deutsche Gesellschaft für Urologie e.V.,
Düsseldorf
Abstract Session 1
Moderation: Susanne Füssel, Bernd Wullich
V1. 1
3D-Sonographie und standardisierte Zellinokulation bei der
Etablierung eines orthotopen Prostatatumormodells an der
Nacktmaus
Saar M1, Jung V1, Kamradt J1, Körbel C2, Stöckle M1, Menger MD2,
Unteregger G1
1)Klinik für Urologie und Kinderurologie, Universitätsklinikum des
Saarlandes, DE
2)Institut für Klinisch-Experimentelle Chirurgie, Universitätsklinikum des
Saarlandes, DE
Orthotope Inokulationen von Tumorzellen in Nacktmäuse dienen in der onkologischen Forschung als ideales in-vivo Modell. Für das Prostatakarzinom
ist die Technik beschrieben, die Methodik ist jedoch nicht standardisiert. Des
Weiteren liegt bisher wenig Erfahrung zur nicht-invasiven Beurteilung des
Tumorwachstums vor. Nach Etablierung eines standardisierten Protokolls
zur Inokulation von Prostatakarzinomzellen und sonographischem Monitoring des Tumorwachstums haben wir uns mit dem Wachstumsverhalten
verschiedener Zelllinien im orthotopen Mausmodell beschäftigt.
30 Crl:CD1-Foxn1nu Mäuse wurden in 4 Gruppen unterteilt. Nach Laparotomie wurden standardisiert 10µl Zellsuspension der Tumorzelllinie DU 145
MN1 inoculiert. Die Gruppen variierten in der Zellzahl (5x105 vs. 5x104),
der Anzahl der intraprostatischen Punktionen (1 vs. 3) und durch die Zugabe von MatrigelTM. Komplikationen wie Rückfluss von Zellen über den
Punktionskanal oder Perforation der Prostatakapsel wurden dokumentiert.
Nach 4, 5 und 6 Wo. wurde das Tumorwachstum mittels 35MHz-Ultraschall
dokumentiert. Am gleichen Modell wurde unter Verwendung von Balb/cnu
Mäusen und ebenfalls successive reduzierter Zellzahl ein Wachstum von LnCaP-Tumoren induziert.
90% der Foxn1nu Mäuse zeigten ein orthotopes Tumorwachstum welches im
3D-Ultraschall über den gesamten Beobachtungszeitraum zuverlässig quantitativ dargestellt werden konnte. Es zeigte sich eine gute Korrelation zwischen Tumorvolumen und Zellzahl mit grösstem Tumorvolumen nach Inoculation von 5x105 Zellen unter die Kapsel eines einzelnen Prostatalappens
(260.7mm3 ± 50.4 mm3). Die simultane Injektion von Matrigel™ bewirkte
hier eine Reduktion des Tumorvolumens. Komplikationen wie Rückfluss der
Zellsuspension (6,8%) oder Kapselperforation (1,4%) waren selten. Nach Ein-
setzten der LnCaP-Zellinie zeigt sich mit Reduktion der Zellzahl eine Abnahme der initial 100%igen Take rate sowie des Tumorvolumens.
Eine standardisierte Inokulationstechnik erlaubt hohe, reproduzierbare Anwachsraten orthotoper Prostatatumore in der Maus. Hierbei spielen multiple
Variablen bei der erfolgreichen Induktion von Tumoren eine Rolle. Die Sonographie erlaubt ein repetitives, nicht invasives Monitoring des Wachstums
sowie eine Quantifizierung des Tumorvolumens. Die diesbezüglich gemachten Erfahrungen sollen den Autoren helfen, ein in-vivo Modell unter Nutzung humanen Primärmaterials zu etablieren, um zum einen das Gewebe
zu expandieren, zum anderen das biologische Wachstum, die Progression
und sowohl das invasive als auch das metastatische Potential der Tumoren
zu charakterisieren.
V1. 2
Optische Bildgebung zur genaueren Erfassung des klinischen
Tumorstadiums beim Prostatakarzinom
Eismann T1, Rinnab L1, Landfester K2, Hibst R3, Kienle A3, Mailänder V4,
Strauss WSL3, Hautmann R1, Kuefer R1
1) Universitätsklinik für Kinderurologie und Urologie, Universität Ulm, DE
2) Max Planck Institut für Polymerforschung, Mainz, DE
3) Institut für Lasertechnologie in der Medizin und Messtechnik, Universität
Ulm, DE
4) Abteilung für Transfusionsmedizin, Universitätsmedizin der Johannes
Guthenberg-Universität, Mainz, DE
Einleitung: Die Zuverlässigkeit der Bildgebung zur Erfassung eines exakten
klinischen T-Stadiums beim lokalisierten Prostatakarzinoms (PCA) ist
stark limitiert. Dies ist aber in Anbetracht der unterschiedlichen kurativen
Therapieoptionen und sogar unterschiedlicher Operationstechniken von
hoher klinischer Relevanz. Die Einschränkungen beruhen nicht nur auf
einer nicht ausreichenden Auflösung im Gewebe, sondern auch auf der
mangelnden Spezifität.
Material und Methoden: Ziel ist die Entwicklung neuartiger Polymerbasierter Sonden, die Peptidsequenzen beinhalten, die von gewebeständigen
Prostatakarzinom-spezifischen Enzymen gespalten werden können. Die Spal­
tung des Polymers führt zu einer Freisetzung von Fluorophoren, die dadurch
eine hochauflösende, karzinomspezifische Detektion mittels (Laser)Licht
einer definierten Wellenlänge erlauben.
Ergebnisse: Es wurde ein neuartiges Konzept der heterophasen Poly­me­
risierung entwickelt (K.L.). Auf diese Weise können Polymer-basierte Sonden
mit unterschiedlichen Eigenschaften generiert werden, die - bedingt durch
den Herstellungsprozess - eine geringe Größenvariabilität aufweisen und
zudem wasserlöslich sind. Es wurden Peptidsequenzen identifiziert (T.E.,
R.K.), die gezielt synthetisiert und in die Polymersequenz der Polymerkapseln
integriert werden können. Diese Peptide werden von Proteasen gespalten, die
spezifisch beim Prostatakarzinom hochreguliert sind. Durch diesen Prozess
werden Fluorophore aus den Polymerkapseln freigesetzt, die mit (Laser)Licht
zur Fluoreszenz angeregt werden können.
Der Urologe 1 · 2010 | Schlussfolgerung: Diese am Anfang ihrer Entwicklung stehende Technologie
erscheint revolutionär für eine karzinomspezifische, nicht-invasive Bild­ge­
bung.
V1. 3
PEG-biotinylated magnetoliposomes for cell labeling and MRand optical imaging
Hodenius MAJ1, Schmitz-Rode T1, Baumann M1, Ivanova G1, Wong JE2,
Hieronymus T3, Schwarz S3
1) Applied Medical Engineering, Helmholtz Institute, RWTH Aachen
University, DE
2) Department of Physical Chemistry, RWTH Aachen University, DE
3) Department of Cell Biology, University Hospital, RWTH Aachen, DE
Introduction: Magnetoliposomes (MLs) are superparamagnetic magnetite
nanoparticles with a biocompatible liposome coat, which enables their po­
tential in vivo application. In this work, the ML surface was modified with
functional PEG-biotin groups. The ML-biotin were evaluated for binding
capacity of streptavidin conjugates, MR relaxivities, and intracellular faith
using HeLa cancer cells as a model.
Materials and Methods: The ML-biotin were were prepared by dialyzing
aqueous, oleate stabilized ferrofluid with DMPE-PEG-biotin containing
liposomes. The ML-biotin’s MR relaxivities r1 and r2 were measured
with a 3 T MRI scanner. PEG-biotin was detected by binding streptavidin
alkaline phosphatase conjugate (SAP) and quantifying enzyme activity
spectrophotometrically. In a similar way, fluorescent streptavidin-FITC
was bound and in HeLa cells internalized ML-FITC were visualized with
fluorescence microscopy. Lysosomes were stained with LysoTrackerRed.
Results: The ML-biotin’s iron concentration was 0,47±0,02 mg Fe/mL and a
phospholipid concentration of 0,11±0,01 mmol/mL proved the presence of
the phospholipid coat. Concentration dependent MR relaxometry revealed
r1- and r2 values of 3,1±0,2 mM-1 s-1 and 465,1±8,8 mM-1 s-1 respectively,
typical for T2/T2* iron oxide based MRI contrast agents. To check for biotin
groups, increasing SAP amounts were added to 1,5 mL portions of ML-biotin.
After 2 h, SAP excess was removed and the hydrolysis velocity of colorless
p-Nitrophenylphosphat to yellow p-Nitrophenolate was followed. For each
experiment, binding of at least 70 % of the original SAP-amount bound to
ML-biotin was calculated. Similarly, streptavidin-FITC was bound to the
ML-biotin and HeLa cells were 24 h incubated with the resulting ML-FITC
conjugates. After removal of excess ML-FITC, green FITC- and red LysoTrackerRed-fluorescence were visualized separately within the HeLa cells
with fluorescence microscopy. Merging of both images gave abundantly
yellow stainings showing a colocalization of both ML-FITC and LysoTrackerRed in the lysosomes.
Conclusion and perspectives: The potential of ML-biotin for cell labeling and
tracking with MR- and optical imaging is shown. The modifiable liposome
coat offers the perspective for coupling PSMA antigen specific antibodies
or aptamers to the ML-surface. This enables specific ML accumulation in
prostata carcinoma cells and their subsequent imaging, either after previous
ex vivo cell labeling or in vivo after intravenous application of bare MLs.
V1. 4
Sec62 protects prostate cancer cells against thapsigargin treatment
Greiner M1, Kreutzer B2, Kopsch K1, Müller A1, Unteregger G2, Jung V2,
Wullich B3, Zimmermann R1
1) Institute for Medical Biochemistry und Molecular Biology, University of
Saarland, Homburg/Saar, DE
2) Department of Urology u. Paediatric Urology, University Hospital of
Saarland, Homburg/Saar, DE
3) Department of Urology, University Hospital, Erlangen, DE
In our previous studies we showed an amplification of the TLOC1/Sec62
Gene and an over expression of respective mRNA in prostate cancer cell lines.
We also reported that about half of a patient group we investigated showed a
higher Sec62 protein level in the tumor tissue compared to the corresponding
| Der Urologe 1 · 2010
normal tissue and that the overall protein level of Sec62 is higher in prostate cancer patients compared to non prostate cancer patients. This indicates,
that Sec62 protein overproduction is a wide spread phenomenon in prostate
cancer albeit not all patients show this phenotype. Now we investigated the
influence of Sec62 over production and Sec62 depletion by siRNA treatment
on the cellular response to ER-stress inducing drugs like thapsigargin or tunicamycin. In our first experiment we tested whether the thapsigargin induced
depletion of AR in LNCaP-cells results in a loss of the stimulating effect by
DHT on the growth of these cells in a real time cell monitoring approach.
Indeed the DHT stimulation of LNCaP growth was completely disabled after treatment with thapsigargin but not with tunicamycin. Silencing of Sec62
did not lead to a prevention of DHT stimulation, but thapsigargin induced
ER-stress lead to a complete growth inhibition in Sec62 silenced cells and
LNCaP-cells could not grow in the absence of DHT after Sec62 silencing. This
indicates an additive negative effect on cell growth of Sec62 silencing and the
deactivation of hormone stimulation either by removing DHT or by depleting
the AR. In the hormone independently growing cell lines PC3 and DU145 we
compared the induction of apoptosis after tunicamycin or thapsigargin treatment, because DU145 has been shown to overproduce Sec62 protein. These
experiments showed, that unhandled ER-stress after thapsigargin treatment
lead to an apoptosis induction below 30 % in DU145-cells compared to over
90 % in PC3-cells. Again control experiments with tunicamycin did not show
a reduced apoptosis induction of DU145-cells indicating that DU145-cells are
somehow protected only against thapsigargin but not tunicamycin induced
ER-stress. To also test what happens after Sec62 depletion we treated PC3cells with Sec62 siRNA and thapsigargin or tunicamycin and used a viability
assay and again the real time moitoring of cell growth as a read out. In this
set of experiments we found an additive negative effect of Sec62 silencing and
thapsigargin treatment on cell viability and on cell growth which again could
not be seen after tunicamycin treatment after Sec62 silencing.
Summarizing our results we found a protective effect of Sec62 in the analyzed
cell lines. This is of particular interest for prostate cancer because it may lead
to a reduced therapeutic success for prostate cancer patients medicated with
thapsigargin or similar acting substances if these patients belong to the group
that overproduce Sec62.
V1. 5
Einfluss von Sec62-Silencing auf das Invasionsverhalten
von Prostatakarzinomzellen
Jung V1, Kreutzer B1, Greiner M2, Kamradt J1, Unteregger G1, Stöckle M1,
Zimmermann R2, Wullich B3
1) Klinik für Urologie, Universitätsklinikum des Saarlandes, Homburg/Saar, DE
2) Institut für Medizinische Biochemie und Molekularbiologie, Universität
des Saarlandes, Homburg/Saar, DE
3) Klinik für Urologie, Universitätsklinikum, Erlangen, DE
Sec62 ist ein in der Membran des ER lokalisiertes Protein, welches mit dem
Sec61-Komplex (verantwortlich für die Proteintranslokation) assoziiert ist. In
früheren Studien konnten wir eine Amplifikation und Überexpression von
Sec62 in Prostatakarzinomen auf DNA, mRNA und Proteinebene nachweisen. Die pathophysiologische Funktion dieser veränderten Sec62 Expression
in der Pathogenese des Prostatakarzinoms ist noch völlig unklar. In dieser
Arbeit haben wir deshalb das Invasionsverhalten Sec62 depletierter PC3 Zellen untersucht und mit Hilfe von Microarrays differentiell exprimierte Gene
nach Sec62 Silencing gesucht.
In der Prostatakarzinomzelllinie PC3 wurde RNAi basiert das Sec62 Gen
depletiert. Unter Verwendung eines Matrigel Invasions Assays wurde das
invasive Wachstumsverhalten von PC3 Zellen nach Silencing von Sec62 mit
Kontroll-siRNA tranfizierten Zellen verglichen. In einem Parallelansatz wurde 48h nach Transfektion die mRNA aus den siRNA transfizierten PC3 Zellen
isoliert auf 35K Microarrays hybridisiert. Differentiell exprimierte Gene wurden mit einer GO-Analyse klassifiziert und einzelne Gene mittels qRT-PCR
validiert.
Im Invasionsassay konnte eine signifikante Hemmung des invasiven Wachstums (96%) durch das Sec62 Silencing in den PC3 Zellen beobachtet werden.
Die Mikroarrayuntersuchungen zeigten einige differentiell exprimierte Gene,
Urologie aktuell
die in der GO-Analyse vermehrt den Gruppen Migration und Zellbewegung
zugeordnet wurden. In der qRT-PCR konnten alle sechs untersuchten Gene,
die entweder aus den o.g. GO-Gruppen stammen (HMOX1, IGFBP3) oder
aber bereits als Karzinogenese assoziiert beschrieben wurden (TOB1, RELN,
CA9, REG4), validiert werden.
Mit der vorliegende Studie konnten wir zeigen, dass die Hemmung eines ER
Membran Proteins das Invasionsverhalten von Prostatakarzinomzellen beeinflusst und ein verändertes Expressionsmuster Karzinogenese-relevanter
Gene bewirkt. Ob es sich hierbei um ein Prostatakarzinom spezifisches Phänomen oder um einen allgemeinen tumorassoziierten Mechanismus handelt,
ist Gegenstand laufender Untersuchungen.
Gefördert durch Deutsche Krebshilfe und Stiftung Europrofession
V1. 6
Dickkopf-3 supports proliferation and fibroblast-to-myofibroblast
transdifferentiation in the diseased prostatic stroma
Zenzmaier C, Sampson N, Berger P
Institute for Biomedical Aging Research, Austrian Academy of Sciences,
Innsbruck, A
Dickkopf-3 (Dkk-3), a secreted glycoprotein that unlike the other members
of the Dkk family does not modulate Wnt signaling, is expressed in normal
prostate epithelium, but expression is lost in benign prostatic hyperplasia
(BPH) and prostate carcinoma (PCa). This loss is counterbalanced by upre­
gulation of Dkk-3 expression in the blood vessels of the surrounding stroma.
To evaluate applicability of these expression changes as a marker for prostatic
diseases in body fluids monoclonal antibodies against Dkk-3 were generated
and a highly specific and sensitive indirect IEMA was developed. Subsequently Dkk-3 plasma and seminal plasma (SMP) levels in patients suffering
from BPH or PCa and age matched controls were analyzed. Dkk-3 plasma
levels were elevated in BPH (2.26 ± 0.08 nmol/l) and PCa (2.26 ± 0.09 nmol/
l) patients compared with control probands (1.88 ± 0.11 nmol/l). Additionally, determining Dkk-3 levels in SMP allowed discrimination of benign and
malignant prostatic conditions in patients with elevated serum PSA levels.
Patients with biopsy-confirmed PCa had a significantly higher level of Dkk-3
in SMP compared with men with negative biopsies (138 ± 35 pmol/g vs. 51 ±
12 pmol/g).
BPH and PCa are associated with stromal remodeling in particular hyperproliferation and fibroblast-to-myofibroblast transdifferentiation, which
promotes disease progression via elevated secretion of mitogenic cytokines
and growth factors. We investigated the influence of Dkk-3 on the stromal
compartment of the prostate in vitro by lentiviral overexpression and shRNA
mediated downregulation of DKK3 in primary prostate stromal fibroblasts
(PrSC). While overexpression did not significantly alter cell proliferation,
knockdown of DKK3 led to significantly reduced cellular growth as determined by BrdU incorporation and WST-1 assays. Concomitantly, expression of various CDK inhibitors was increased in DKK3 knockdown cells.
Moreover, DKK3 knockdown but not overexpression reduced the efficiency
of TGFβ1 to induce fibroblast-to-myofibroblast transdifferentiation. These
findings demonstrate that Dkk-3 supports hyperproliferation and transdifferentiation of PrSC, both hallmarks of stromal tissue remodeling in BPH
and PCa.
V1. 7
Prostate specific deletion of the mismatch repair (MMR) gene Mlh1 in
mice cause neoplastic alterations of the prostate
Kneitz , Reiß C, Adam P, Ströbel P, Spahn M, Riedmiller H
Department of Urology and Paediatric Urology, University Medical School,
Würzburg, DE
Defects in the mismatch repair system have been identified in prostate cancer. In addition a prognostic role for altered expression in mismatch repair
genes has been suggested in colorectal cancer as well as in prostate cancer. To
understand the molecular basis of prostate cancer (PCa) development, progression and metastasis caused by MMR defects we generated a mouse model
to disrupt Mlh1 by Cre/loxP mediated recombination exclusively in prostate
tissue. Pathways mediated by Pten are frequently altered in prostate carcinoma. To test in addition synergistic effects of Pten deficiency and defects of
the MMR system in prostate cancer development we inactivated both, Pten
and Mlh1, in the prostate epithelium of the mouse. We showed an efficient
and specific deletion of MLH1 in prostate epithelium of the Mlh1p-/- mouse.
Inactivation of Mlh1 in the Mlh1p-/- mouse leads to prostatic intraepithelial
neoplasia after 52 weeks of age. Thus our study demonstrate that loss of MMR
activity in the epithilial cells of mouse prostate causes early stages of prostate
cancer at late latencies. It was already shown that loss of Pten in mouse prostate epithelium leads to neoplastic transformation in prostate tissue. Inactivation of both Pten and Mlh1 in mice results in rapidly developing prostatic
intraepithelial neoplasia. We found initiation stages of prostate cancer with
intraephithelial neoplasia, followed by progression into invasive adenocarcinomas with defined kinetics.
Using this mouse lines we generated unique models to study PCa development caused by MMR defects. Our results demonstrate that loss of Mlh1 mediated MMR activity causes initiation of hyperproliferative prostate disease
followed by neoplastic alterations of the prostate with late latencies. In addition we found a synergy of Mlh1 and Pten deficiency for the development
of prostate cancer. This new mouse models should be valuable for providing new genetic and molecular insight in the pathogenesis of MMR defective
prostate cancer.
Abstract Session 2
Moderation: Roman Nawroth, Gerhard Unteregger
V2. 1
Einfluss der Gesamt-RNA-Integrität auf die Quantifizierung von
microRNAs
Schaefer A1,2,3, Jung M1, Steiner I1,2, Lein M1,2, Erbersdobler A4, Stephan C1,
Miller K1, Jung K1,2
1) Institut für Urologie, Charité.- Universitätsmedizin, Berlin, DE
2) Berliner Institut für Urologische Forschung, Berlin, DE
3) Fachbereich Biologie, Chemie und Pharmazie, Freie Universität, Berlin, DE
4) Institut für Pathologie, Charité - Universitätsmedizin, Berlin, DE
Ziel: Bei der Quantifizierung von Genexpressionen auf mRNA-Ebene stellt die
Integrität der Proben-RNA eine wichtige Einflussgröße dar. Trotz der wachsenden
Zahl von microRNA (miRNA) Studien, wurde dieses analytische Problem bei
der Quantifizierung von miRNAs bisher nicht systematisch bearbeitet. Wir
stellten uns deshalb die Frage, ob die Integrität der Gesamt-RNA auch auf die
Quantifizierung der microRNAs (miRNA) einen Einfluss hat.
Methoden: Isolierte Gesamt-RNA von LNCaP-Zellen und einem
Prostatagewebepool (Normal- und Tumorgewebe) wurde bei 80°C stufen­
weise bis zu 240 min. degradiert. Der Grad der RNA-Degradation wurde
über den RIN-Wert (RNA Integrity Number) am 2100 Bioanalyzer ermittelt.
Die Expression von 5 miRNAs (hsa-miR-96/-130b/-149/-205/-222) und 4
mRNAs (PSA, VEGFA, HIF1α und ALAS) wurde mittels qPCR in den RNAProben quantifiziert. Zudem wurde die Expression der HIF1α mRNA und
ALAS mRNA in zwei Gruppen unterschiedlich degradierter RNA-Proben
aus nicht-malignen Prostatageweben untersucht.
Ergebnisse: Die thermisch degradierten LNCaP-RNA-Proben hatten nach
240 min. Inkubation einen RIN von 2,1 (0 min = 9,7) und die Prostata-RNA
einen RIN von 2.0 (0 min. = 7,2). Alle 5 untersuchten miRNAs zeigten sowohl
in den LNCaP- als auch Prostataproben keine signifikante Änderung ihrer CpWerte über den gesamten RIN-Bereich. Dagegen wiesen alle 4 untersuchten
mRNA-Targetgene signifikante Anstiege in der Regressionsgeraden auf. HIF1α
mRNA und ALAS mRNA waren in den degradierten RNA-Gewebeproben
(RIN6 n=69) signifikant erniedrigt.
Schlussfolgerungen: MiRNAs weisen im Unterschied zur mRNA eine hohe
Stabilität unter den von uns angewendeten Quantifizierungsmethoden auf.
Ihre hohe Stabilität kann auf ihre generelle Nukleotidlänge von nur 20-25b,
sowie auf die kurze Amplikonlänge in der qPCR zurückzuführen sein. Damit
besteht die Möglichkeit, miRNA-Signaturen auch in degradierten RNADer Urologe 1 · 2010 | Proben (z.B. formalin-fixierten Geweben) zu ermitteln. Dies dürfte in der
Praxis eine hohe Bedeutung haben.
V2. 2
Stabile Referenzgene zur relativen Quantifizierung von miRNAExpressionen im Prostatakarzinom
Schaefer A1,2,3, Jung M1, Stephan C1, Miller K1, Lein M1,2, Kristiansen G4,
Erbersdobler A5, Jung K1,2
1) Klinik für Urologie, Charité - Universitätsmedizin, Berlin, DE
2) Berliner Institut für Urologische Forschung, Berlin, DE
3) Fachbereich Biologie, Chemie und Pharmazie Freie Universität, Berlin, DE
4) Institut für klinische Pathologie, Universitätsspital, Zürich, CH
5) Institut für Pathologie, Charité - Universitätsmedizin, Berlin, DE
Ziel: Real time quantitative PCR (qPCR) ist die Methode der Wahl für
miRNA-Expressionsstudien. Für die relative Quantifizierung der miRNAExpression ist die Auswahl eines passenden Referenzgens von herausragender
Bedeutung. Zum jetzigen Zeitpunkt ist kein Referenzgen für miRNA qPCR
im Prostatakarzinom ausreichend validiert. In dieser Studie wurde die
Stabilität der Expression von 4 potenziellen Referenzgenen (has-miR-16, hasmiR-130b, RNU6b, Z30) analysiert.
Methoden: Die Detektion von vier putativen Referenzgenen mittels qPCR
wurde in einem Tumorgewebepool und einem Normalgewebepool aus je 12
RNA Proben überprüft. Die Expression dreier putativer Referenzgene und
vier differentiell exprimierter miRNAs wurde in 76 Tumorgewebeproben
und dem angrenzendem Normalgewebe bestimmt.
Ergebnisse: Zwei der in Betracht gezogenen Referenzgene (hsa-miR-130b
und RNU6B) zeigten keine signifikant unterschiedliche Expression im
Prostatakarzinom-Gewebe im Vergleich zum Normalgewebe, jedoch war
nur hsa-miR-130b auch äquivalent in beiden Gewebegruppen exprimiert.
Die hsa-miR-16 war signifikant niedriger im Tumorgewebe exprimiert.
Die Computerprogramme für Referenzgenbewertungen, GeNorm und
Normfinder, identifizierten die hsa-miR-130b und das geometrische Mittel
der hsa-miR-130b und RNU6B Expression als die stabilsten Normalisatoren.
Die Normalisierung von vier differentiell exprimierten miRNAs auf die
hier analysierten Referenzgene zeigt, dass Normalisierung auf ungeeignete
Referenzgene zu verzerrten Ergebnissen führen kann.
Schlussfolgerungen: Die hsa-miR-130b und das geometrische Mittel der hsamiR-130b und RNU6B Expression wurden als die stabile Referenzgene im
Prostatakarzinom identifiziert. Sie werden zur Normalisierung der relativen
Expression von miRNAs im Prostatakarzinom für zukünftige Studien
empfohlen.
V2. 3
Transientes silencing von miRNAs:
Technische Möglichkeiten und Probleme
Wach S, Löprich E, Wullich B
Urologische Klinik mit Poliklinik, Universitätsklinikum, Erlangen, DE
MikroRNAs (miRNAs) haben sich als potenziell wertvolle diagnostische und
prognostische Biomarker für eine Reihe von Tumoren etabliert. Die Untersuchung von miRNA-Expressionsprofilen kann weiterhin Aufschluss über die
bei der Tumorenstehung beteiligten Signalwege geben.
Da miRNAs in der Lage sind, die Expression ihrer spezifischen Zielgene
auf einer post-transkriptionellen Ebene negativ zu regulieren, ist es von besonderem Interesse, welche funktionellen Konsequenzen eine differenzielle
Expression von miRNAs und ihrer spezifischen Zielgene für Tumorzellen
hat. Um diese Frage zu beantworten, existieren eine Reihe von kommerziell erhältlichen Systemen, um die Expression einzelner miRNAs transient zu
modulieren.
Wir benutzen anti-miRNA Oligonukleotide (antagomiRs, Ambion) um
die Expression von miRNAs, die im Prostatakarzinom als dereguliert identifiziert wurden, zu inhibieren. In permanenten Zelllinien des Prostatakarzinoms konnten wir eine initiale Transfektionseffizienz von bis zu 90% erreichen, die über den betrachteten Zeitraum von 72 Stunden stetig wieder
| Der Urologe 1 · 2010
abnahm. Für zellbiologische Untersuchungen erwies es sich als essenziell, die
Zielzellen über den gesamten Versuchszeitraum im Transfektionsmedium zu
belassen, da die verwendeten Oligonukleotide einem schnellen Abbauprozess unterlagen.
Die Überprüfung des spezifischen miRNA knock-down mittels real-time
PCR basierten Methoden ist in kompletten RNA Präparationen der Zielzellen möglich. Für die Messung der Expression des Zielgens mittels real-time
PCR basierten Methoden erwies es sich als vorteilhaft, bei der RNA Präparation eine Auftrennung in kleine (100 nt) durchzuführen.
Die spezifische Inhibition erreichte ihr Maximum innerhalb der ersten 24
Stunden nach Transfektion mit den anti-miRNA Oligonukleotiden und hielt
über einen Zeitraum von bis zu 72 Stunden an.
V2. 4
MicroRNAs als diagnostische und prognostische Indikatoren des
Prostatkarzinoms
Schaefer A1,2,3, Jung M1, Mollenkopf H-J4, Wagner I4, Stephan C1, Jentzmik F1,
Miller K1, Lein M1,2, Kristiansen G5, Jung K1,2
1) Klinik für Urologie, Charité - Universitätsmedizin, Berlin, DE
2) Berliner Institut für Urologische Forschung, Berlin, DE
3) Fachbereich Biologie, Chemie und Pharmazie, Freie Universität, Berlin, DE
4) Max Planck Institute für Infektionsbiologie, Berlin, DE
5) Institut für klinische Pathologie, Universitätsspital, Zürich, CH
Ziel: microRNAs sind nicht-kodierende RNAs, welche die Genexpression
posttranskriptionell steuern und wichtige Schritte der Kanzerogenese
regulieren. Ziel dieser Arbeit war die Identifikation differentiell regulierter
miRNAs im Prostatakarzinom, die Korrelation der miRNA-Expression mit
klinisch-pathologischen Parametern und die Evaluierung des Potentials der
regulierten miRNAs als diagnostische und prognostische Marker.
Methoden: Tumorgewebe und angrenzendes Normalgewebe wurde von
76 Patienten nach radikaler Prostatektomie gewonnen. Die Expression
von 470 humanen miRNAs wurde mit einem microRNA Microarray
in vierundzwanzig Gewebepaaren untersucht. Differentiell exprimierte
miRNAs wurden mittels TaqMan qPCR validiert. Der prognostische Wert
einer miRNA wurde an einer unabhängigen Kohorte von 79 Tumorproben
validiert.
Ergebnisse: Fünfzehn differentiell regulierte miRNAs wurden identifiziert.
Zehn miRNAs waren im Tumorgewebe geringer exprimiert (hsa-miR-16/31/-125b/-145/-149/-181b/-184/-205/-221/-222), während 5 miRNA signifikant
überexprimiert waren (hsa-miR-96/-182/-182*/-183/-375). Die Expression von
fünf miRNAs korrelierte mit dem Gleason Score oder dem Tumorstadium.
Receiver operating characteristics (ROC) Analysen ergaben, dass schon
die Kombination zweier miRNAs bis zu 84% der malignen und benignen
Proben richtig klassifizieren konnte. Die Expression der hsa-miR-96 war in
der univariaten Kaplan-Meier-Analyse signifikant mit einem Wiederanstieg
des prostataspezifischen Antigens (biochemisches Rezidiv) assoziiert. Ein
multivariates Cox Regressionsmodell mit den beiden Kovariaten Gleason
Score und hsa-miR-96 wurde als starker Prädiktor eines biochemischen
Rezidivs identifiziert.
Schlussfolgerungen: Differentiell exprimierte miRNAs können als dia­
gnos­tische und prognostische Marker im Prostatakarzinom dienen. Die
vorgestellte Arbeit bietet eine solide Grundlage für weitere funktionelle
Untersuchungen der miRNA Regulation im Prostatakarzinom.
Urologie aktuell
V2. 5
Downregulation of miR-221 promotes cancer cell proliferation,
is related to the development of aggressive prostate cancer and
predicts clinical recurrence
Spahn, M1, Kneitz S2, Scholz C-J2, Stenger N1, Rüdiger T3, Ströbel P4, Riedmiller H1, Kneitz B1
1) Department of Urology and Paediatric Urology, University Medical
School, Würzburg, DE
2) Microarray Core Unit, IZKF (Interdisciplinary Center for Clinical Research),
University of Würzburg, DE
3) Institute of Pathology, Community Hospital, Karlsruhe, DE
4) Institute of Pathology, University Medical Center Mannheim, University
of Heidelberg, DE
MicroRNAs (miR) are non-coding, single-stranded RNAs that repress target
mRNA translation to control various biological processes, including cell differentiation, cell proliferation, apoptosis, stress resistance, and fat metabolism.
Emerging evidence suggests that altered miR expression contributes to tumorigenesis. miR expression profiles have been linked to the clinical features of
several cancers. We analysed the global expression of miRs in benign, hyperplastic prostate tissue (BPH), primary prostate carcinoma (PCa) of a high risk
group of PCa patients, and corresponding metastatic tissues by micro-array
analysis. Consistent with the proposal that some microRNAs are oncomirs,
we found aberrant expression of several miRs, including the down-regulation of miR-221, in prostate carcinoma metastasis. Relative low miR-221 expression was also found in several prostate carcinoma cell lines (e.g. LNCaP)
Restoring the expression of miR-221 in prostate carcinoma cell lines induced
apoptosis and decreased growth of these cells. We demonstrate that ectopic
overexpression of miR-221 results in p27Kip1 and c-kit downregulation in
LNCaP cells. Down-regulation of miR-221 was negatively correlated with the
expression of the proto-oncogen c-kit, but not with p27Kip1 in primary carcinoma. To investigate the potential of miR-221 as a biomarker for a high risk of
early clinical recurrence, we additionally analysed mir-221 expression a large
study cohort of high risk patients. MiR-221 was progressively down-regulated
in aggressive forms of prostate carcinoma. Down-regulation of miR-221 was
associated with clinicopathological parameters, including the Gleason score
and the clinical recurrence during follow up. Kaplan Meier estimates and
Cox proportional hazard models showed that miR-221 down-regulation was
linked to tumor progression and recurrence in a high risk prostate cancer
cohort. Our results showed that progressive miR-221 down-regulation hallmarks metastasis and presents a novel prognostic marker in high risk prostate
carcinoma. This suggests that miR-221 has potential as a diagnostic marker
and therapeutic target in prostate carcinoma.
V2. 6
Down-regulation of microRNAs in prostate cancer
Erdmann K1, Thomae C1, Tomasetti S1, Krämer K1, Füssel S1, Sergon M2, Wirth
MP1
1) Department of Urology, Technical University, Dresden, DE
2) Institute of Pathology, Technical University, Dresden, DE
Introduction: MicroRNAs (miR) are small non-coding RNAs that are
involved in a variety of oncogenic pathways, possibly relevant to prostate
cancer (PCa). Emerging evidence suggests that the PCa specific up-regulation
of certain genes could be associated with a deregulation of miR expression.
Therefore, we analyzed the expression levels of candidate miR in PCa and
evaluated their influence on the expression of selected genes that are known
to be over-expressed in PCa.
Materials and methods: Eight different web-based prediction programs
were used to search for miR being putative regulators of the PCa-associated
genes PSMA, AMACR, TrpM8, PSGR, and EZH2. Four selected miR (hsamiR-660, -26a, -374a, -410) were subsequently investigated by qPCR using
50 malignant (PCa) and matched non-malignant tissue samples from
prostatectomy explants as well as 30 samples originating from patients with
benign prostatic hyperplasia (BPH). Data for the marker gene expression
were used from a previous study using the same sample cohort.
Results: The expression of hsa-miR-660, -26a, -374a, and -410 in PCa tissue
samples compared to BPH samples measured was significantly decreased by
1.91 to 5.35-fold (median). Similar results were found when comparing miR
expression in PCa to the corresponding non-malignant samples with a median decrease ranging from 1.66 to not detectable miR expression levels (hsamiR-410). No significant associations between these differentially expressed
miR and tumor stage or Gleason score were found. Spearman analysis showed
that the up-regulation of the selected PCa-associated genes significantly correlated with the down-regulation of their predicted miR regulators with correlation coefficients ranging from 0.247 to 0.442.
Conclusion: Our findings indicate that specific miR are decreased in PCa
and that their expression levels correlate with the up-regulation of their
putative target genes that are over-expressed in PCa. This association could be
caused either by direct miR-mediated regulation of target genes or by indirect
effects on target genes. The data presented provide a solid basis for further
functional studies of miR in PCa.
V2. 7
Specific metastasis-associated miRNA expression patterns in clear
cell renal cell carcinoma (ccRCC)
Heinzelmann J1, Henning B1, Sanjmyatav J1, Posorski N1, Steiner T1, Wunderlich H1, Junker K1
1) Laboratory of Molecular Biology, Department of Urology, University
Hospitals, Jena, DE
2) Core Unit Chip Applications, University Hospitals, Jena, DE
Background: Recent studies have shown that microRNAs (miRNAs)
play important role as regulators of gene expression in tumourgenesis by
controlling many biological processes in growth, development, differentiation
and apoptosis. But their specific expression levels in several tumour types and
the influence on metastasis is almost unknown. It is the intention of this study
to identify specific miRNAs, which regulate metastasis of clear cell renal cell
carcinoma (RCC).
Material and Methods: The miRNAs were isolated and enriched from
primary tumour tissue by using MirVana miRNA Isolation kit (Ambion).
RNA concentrations were verified by measuring absorbance (A260) on
the NanoDrop Spectrophotometer ND-1000 (Nano-Drop) and total
RNA profiles were assessed on the Agilent 2100 bioanalyzer (Agilent
Technologies). MiRNA expression analysis was performed using miRXploreArrays (Miltenyi Biotec). Microarray images were analysed by using Genepix
Pro. To validate the results obtained by miRNA microarray and to quantify
expression, reverse transcription reaction was performed by using TaqMan
MicroRNA reverse transcription (Applied Biosystem) and real-time PCR was
carried out by using the TaqMan miRNA assay kit (Applied Biosystem).
Results: 18 human clear cell RCC including 10 non-metastatic tumours, 4 tumours with metastasis after 5 years and 4 tumours with primary metastasis
were analysed. The expression of specific miRNAs was significantly altered
in metastatic compared to non-metastatic tumours. Furthermore, we found
a highly significant difference in miRNA expression between very aggressive
early-metastatic tumours, which are known to be very agressive and having poor survival prognosis, and late-/non-metastatic tumours. We identified a group of miRNAs whose expressions are significantly downregulated
in early-metastatic tumours. For example, expression of the let 7 family and
miR-30 family as well as miR 125b, miR 126 3P and miR 26a is dramatically
decreased in tumour tissues from patients with early metastasis. Biostatistical analysis revealed a well defined specific miRNA expression profile in the
clinical subtypes of ccRCC with different metastatic potential. Moreover we
found significant correlations between the expression levels of miR-26a and
let-7c and survival of the patients.
Conclusion: Our findings indicate that specific miRNAs regulate metastasis
and have an impact on the progression of the clear cell RCC. Furthermore,
we identified specific miRNAs characterising very aggressive tumours with
early metastasis. In addition we determined miR-26a and let-7c as possible
markers for the survival of the patients. The presented results provide new
insights into the biology of metastasis of RCC.
Der Urologe 1 · 2010 | V2. 8
Circulating miRNAs are correlated with tumor progression in prostate
cancer
Brase JC1, Johannes M1, Schlomm T2, Fälth M1, Haese A2, Steuber T2, Beissbarth T1, Kuner R1, Sültmann H1
1)Division of Molecular Genome Analysis, German Cancer Research Center,
Heidelberg, DE
2) Martini-Clinic, Prostate Cancer Center, University Medical Center, Hamburg-Eppendorf, DE
3) Department Medical Statistics, University Medicine, Göttingen, DE
Circulating miRNAs have recently been indicated as practicable and promising biomarkers for non-invasive diagnosis in various tumor entities. However,
cell-free miRNAs have not been found to correlate with clinico-pathological
variables in epithelial carcinomas. In order to learn more about the potential
clinical relevance of circulating miRNAs in prostate cancer, we screened 667
miRNAs in serum samples from patients with metastatic (n=7) and localized
prostate cancer (n=14). Various miRNAs were highly abundant in the sera of
patients with metastatic disease. Five miRNAs were further analyzed in an
independent patient cohort (n=45). One of these turned out to be the most
pronounced serum marker associated with tumor progression, and its level
correlated with Gleason scores and lymph-node status of the patients´ tumors. Analysis of variance (ANOVA) indicated a benefit for the prediction of
different clinical parameters when the circulating miRNA was combined with
prostate specific antigen (PSA) measurements. In addition, the expression
level of this miRNA was found to be significantly higher in prostate tumor
compared to normal tissue samples. Overall, our observations suggest that
circulating miRNAs are associated with advanced prostate cancer disease.
V2. 9
Einfluss von Sorafenib und Sunitinib auf Prozesse der Metastasierung
beim Prostatakarzinom
Ploog S, Cieślikowski W, Jöckel M, Schneider E, Thüroff JW, Brenner W
Klinik für Urologie, Universitätsmedizin, Johannes Gutenberg-Universität,
Mainz, DE
Auf Grund der hohen Metastasierungsrate des Prostatakarzinoms steht
das Ziel, neue Therapieformen zu finden, im Zentrum der Forschung. Sogenannte Target-Therapien mit kleinmolekularen Tyrosin Kinase Inhibitoren (TKI´s) stellen eine vielversprechende Alternative für die Behandlung
des Prostatakarzinoms dar. Wir haben den Effekt der TKI´s Sorafenib und
Sunitinib auf Mechanismen der Metastaierung in Prostatakarzinom-Zellen
untersucht. In Tumorzellen anderer Entitäten zeigte sich ein synergistischer
Effekt zwischen Sorafenib und dem PKC-Inhibitor Rottlerin. Auf Grund dieser Ergebnisse wurde in unseren Analysen neben einer Einzelbehandlung
mit Sorafinib und Sunitinib ein möglicher additiver Effekt mit Rottlerin in
Prostatakarzinom-Zellen beurteilt. Die Prostatakarzinom-Zelllinien LNCaP
und PC-3 wurden mit Sorafenib oder Sunitinib allein in unterschiedlichen
Konzentrationen (1-20µM) oder in Kombination mit Rottlerin (10µM)
vorbehandelt. Die Zellen wurden daraufhin bezüglich Zelltoxizität (MTT),
Proliferation (BrdU-Inkorporation) und chemotaxischer Zellmigration mit
Fibronectin (10µM) als Chemotaxin (Boydenkammer) untersucht. Die Ergebnisse zeigten, dass in LNCaP-Zellen Sorafenib die geringste Zelltoxozität
auslöste, welche jedoch durch die Koapplikation von Rottlerin erhöht wurde.
Im Gegensatz dazu wurde die relativ hohe Zelltoxizität von Sorafenib durch
die zusätzliche Gabe von Rottlerin nicht beeinflusst. In den PC-3 Zellen
konnte kein additiver Effekt auf die Zelltoxizität nachgewiesen werden. Die
Proliferationshemmung dieser Zellen durch Sorafenib bzw. Sunitinib wurde
durch die zusätzliche Gabe von Rottlerin in keiner Weise beeinflusst. Sorafenib reduzierte die Zellmigration in LNCaP bzw. PC-3 Zellen auf 9% bzw. 12%;
Sunitinib zeigte eine Reduktion auf 18% bzw. 46%, bezogen auf die jeweiligen
Kontrollen. Die alleinige Gabe von Rottlerin reduzierte die Migration auf 55%
bzw. 37% der Kontrolle. Hier konnte in beiden Zelllinien kein additiver Effekt
nachgewiesen werden.
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass Sorafenib den stärksten inhibitorischen Effekt auf die Zellproliferation und –migration zeigte. Da sich kein
| Der Urologe 1 · 2010
additiver Effekt durch die zusätzliche Gabe von Rottlerin nachweisen ließ,
scheint im Prostatakarzinom zur Metastasen-Prävention eine Monotherapie
mit Sorafenib sinnvoll.
V2. 10
Wachstumshemmung von Prostatakarzinomzellen durch Docetaxel,
Ibandronat und Farnesol alleine und in Kombination
Epplen R1, Ohlmann C2, Pfister D1, Heidenreich A1
1) Klinik für Urologie, Universitätsklinikum der RWTH Aachen, DE
2) Klinik für Urologie, Universitätsklinikum des Saarlandes, Homburg/Saar, DE
Einleitung: Bisphosphonate stellen neben der Docetaxel-basierten
Chemotherapie den Standard in der Therapie des metastasierten Prostata­
karzinoms dar. Neben der Wirkung von Bisphosphonaten auf die Osteo­
blasten und Osteoklasten wurden direkte Wirkungen auf Tumorzellen
beschrieben. Die Wachstumshemmung von Inhibitoren der Farnesylierung
wie die der Bisphosphonate kann in vitro durch Addition von Farnesol
(FOH) aufgehoben werden. Jedoch wurden auch direkt zytotoxische Effekte
von FOH bei Tumorzellen beschrieben. Das Ziel unsere Studie war es, die
Effekte von Ibandronat, Docetaxel sowie FOH auf das Wachstum von
Prostatakarzinomzellen allein und in Kombination zu untersuchen.
Material und Methoden: Die PCA Zell-Linien PC3 und LNCaP wurden
mit Ibandronat (Iban), Farnesol (FOH) und Docetaxel (Doc) allein oder in
Kombination inkubiert. Nach 5 Tagen erfolgte die Bestimmung vitaler Zellen
mittels des MTT Assay.
Ergebnisse: Iban hemmt dosisabhängig das Wachstum von PC3 und
LNCaP Zellen. Die IC50 Werte liegen bei 6.6x10-5 µM bei PC3 und 9.0x106 µM bei LNCaP. Die Wachstumshemmung kann dabei vollständig durch
gleichzeitige Inkubation mit FOH aufgehoben werden. Doc zeigte keine
signifikante Wachstumshemmung bei einer Konzentration von 4 und 6 nM.
Im Gegensatz dazu zeigt sich ein additiver Effekt der Wachstumshemmung
von Doc (4 nM) in Kombination mit Iban 10-5 M. Hierbei zeigt sich eine
Wachstumsreduktion auf 10% (Iban/Doc) bei LNCaP und auf 76% (Iban/
Doc) bei PC3 im Vergleich zur Kontrolle. FOH inhibiert dosisabhängig das
Wachstum der Zell-Linien PC3 und LNCaP. Die IC50-Werte liegen bei 64 µM
bei PC3 und 108 µM bei LNCaP. In Kombination mit Doc finden sich additive
Effekte mit einer Wachstumsreduktion auf 0.4% bei PC3 und 21% bei LNCaP
im Vergleich zur Kontrolle.
Diskussion: Ibandronat ist ein potenter Wachstumsinhibitor von
Prostatakarzinomzellen. Die Blockierung der Farnesylierung von Proteinen
scheint für die Wachstumshemmung verantwortlich zu sein. Darüber hinaus
zeigen sich additive Effekte von Iban in Kombination mit dem Taxan Doc.
FOH stellt ebenfalls einen Wachstumsinhibitor von Prostatakarzinomzellen
dar. Die Wachstumshemmung des Iban kann aufgehoben werden, in
Kombination mit Doc zeigen sich additive Effekte. Der zugrunde liegende
Mechanismus ist jedoch noch unbekannt. Dennoch scheint die Kombination
von FOH und Doc vielversprechend für die Therapie von Patienten mit
einem hormonrefraktären Prostatakarzinom zu sein.
Abstract Session 3
Moderation: Kerstin Junker, Jörn Kamradt
V3. 1
The potential role of G2- but not of G0-radiosensitivity for
predisposition of prostate cancer
Schlomm T1, Raabe A2, Dikomey E2, Borgmann K2
1) Martini-Klinik, Prostate Cancer Center, University Medical Center, Hamburg-Eppendorf, DE
2) Laboratory of Radiobiology & Experimental Radiooncology, University
Medical Center, Hamburg-Eppendorf, DE
Chromosomal radiosensitivity was compared in 81 prostate cancer patients
and 120 healthy controls using both G0 and G2 assay. Prostate cancer patients with a clinical stage of mostly pT2c or pT3a had a median age of 67
Urologie aktuell
years. For healthy controls we recruited 60 male monozygotic twin pairs with
a median age of 28 years. For G0-radiosensitivity, there was no difference
between prostate cancer patients and healthy controls since medians were
similar (Hodges-Lehmann estimate: -0.05, 95% CI: -0.18 – 0.08, p = 0.4167).
In contrast, a clear difference in medians was observed for G2-radiosensitvity
with prostate cancer patients showing a significantly higher sensitivity when
compared to healthy controls (Hodges-Lehmann estimate: -0.41, 95% CI: 0.53 – -0.30, p = 1.749-9). Using the 90% quantile of G2-radiosensitivity in
healthy controls as a threshold for discrimination, the fraction of prostate
cancer patients with elevated radiosensitivity increased to 49%. In conclusion,
in contrast to G0-radiosenstivity, G2-radiosensitvity is a promising marker
for predisposition of prostate cancer.
V3. 2
Mechanismen und Strategien CpG-DNA basierter Vakzinierung –
potentielle Anwendung beim Prostatakarzinom
Maurer T1, Thalgott M1, Horn T1, Aguilar-Pimentel JA2, Gschwend JE1,
Nawroth R1, Kübler H1
1) Urologische Klinik und Poliklinik, Klinikum r.d. Isar, TU München, DE
2) Klinik und Poliklinik für Dermatologie und Allergologie, Klinikum r.d. Isar,
TU München, DE
Bakterielle DNA wie auch synthetisch hergestellte einzelsträngige CpG-DNA
Oligonukleotide, die ein unmethyliertes CpG-Motiv besitzen, aktivieren das
Immunsystem von Säugetieren. Nach Bindung an Toll-like Rezeptor 9 löst
CpG-DNA eine potente Th1-gerichtete Immunantwort aus, die sich durch
Generierung von zytotoxischen T Lymphozyten (CTL), bestimmter Zytokine
sowie Antikörpersubklassen auszeichnet. CpG-DNA kann daher als potentes Adjuvanz zu Protein- und Peptid-basierten Immunisierungen verwendet
werden.
Neben Induktion kostimulatorischer Moleküle wie CD40 und CD86 konnten wir eine erhöhte Sekretion proinflammatorischer Th1-Zytokine wie Interleukin-6 und -12 sowie TNFα in murinen, aus Knochenmark gewonnenen
dendritischen Zellen (mBMDC) beobachten. Dabei kommt es zunächst zu
einer CpG-unabhängigen Aufnahme der Oligonukleotide bevor eine spezifische Aktivierung über Toll-like Rezeptor 9 erfolgt. Im Mausmodell kann
so durch Vakzinierung mit Modelantigenen wie auch mit Peptiden (z.B.
PSA-Peptid 65-73 (HCIRNKSVI) eine spezifische zelluläre T-Zell-Antwort
hervorgerufen werden. Neben einer Immunisierung als Mixture erscheint als
weitere Immunisierungsstrategie eine kovalente Kopplung von Antigen und
CpG-DNA Antigen vielversprechend. Hierdurch werden Antigen effizient in
intrazelluläre Kompartimente antigenpräsentierender Zellen dirigiert, was
zum einen zur Aktivierung, zum anderen aber auch zu erhöhter Cross-Präsentation von Antigenbruchstücken und daraus resultierend zur gesteigerten
Induktion von antigen-spezifischen CTL in vivo führt. Auf diese Weise erfüllt
gekoppelte CpG-DNA eine zweifache Aufgabe: Koordination der AntigenAufnahme sowie Vermittlung Antigen-spezifischer Aktivierung.
Die Forschung bezüglich CpG-DNA im Bereich der Immuntherapie des Prostatakarzinoms steht bisher noch völlig am Anfang. Wir können zeigen, dass
CpG-DNA als potentes Adjuvanz in einem PSA-Peptid-basierten Mausvakzinierungsmodell fungieren kann. Aufgrund dieser und anderer ermutigender
präklinischer Ergebnisse sollten jedoch weitere Untersuchungen hinsichtlich
des Potentials von CpG-DNA in der Immuntherapie des Prostatakarzinoms
beim Menschen folgen.
V3. 3
Prevalance of the human exogenous gammaretrovirus XMRV in
prostate cancer tissue
Fischer N1, Stieler K1, Schulz C1, Huland H2, Aepfelbacher M1, Schlomm T2
1) Institute of Microbiology and Virology, University Medical Center, Hamburg-Eppendorf, DE
2) Martini-Clinic, Prostate Cancer Center and Department of Urology,
University Medical Center, Hamburg-Eppendorf, DE
We have recently reported the first bonafide human infection with an exogenous gammaretrovirus, dubbed XMRV due to its sequence homology
to xenotropic murine leukemia viruses (X-MLV) (Urisman, Molinaro and
Fischer et al., 2006). The XMRV provirus is not endogenous to the human genome and there are no similarities to human endogenous retroviral sequences, suggesting that XMRV is transmitted by exogenous infection. XMRV was
preferentially found in patients with familial prostate cancer homozygous
for a mutation in RNASE L (R462Q). 40% (n=20) of R462Q mutants were
positive for XMRV, only 1% (n=160) of heterozygous or wild type RNASE
L showed evidence of XMRV infection. Mapping of integration sites (Dong
et al., 2007) and FISH analysis confirmed the presence of XMRV in human
prostatic tumor tissue. The virus resides preferentially in stromal fibroblasts;
approx. 1% of the cells were found to harbor XMRV. The role of XMRV in
prostate cancer tumorigenesis is unclear so far. The present study was initiated to elucidate the question whether XMRV can be also found in sporadic
PCA samples. 105 tissue samples from PCA patients in Northern Europe as
well as 70 control samples from men without evidence of PCA were analyzed
for the presence of XMRV specific sequences by nested RT-PCR. XMRV
XMRV was only detected in two samples. The two XMRV positive patients
were wild type or heterozygous for the R462Q mutation and thus carried at
least one fully functional RNase L allele (Fischer et al., 2008).
Interestingly, a recent study describes the expression of XMRV proteins in
23% of prostate cancer samples (54/334), the viral protein being expressed in
malignant epithelial cells which suggest a more direct role of XMRV in PCA
tumorigenesis.
Technical differences between these studies as well as interpretation of the
results with regard to the role of XMRV in prostate cancer development will
be discussed.
V3. 4
Lack of Evidence for Xenotropic Murine Leukemia Virus-related Virus
(XMRV) in German Prostate Cancer Patients
Krause H, Hohn O, Bannert N
Urologische Klinik, Charité - Universitätsmedizin, Robert Koch Institut,
Berlin, DE
Background: A novel gammaretrovirus named xenotropic murine leukemia
virus-related virus (XMRV) has been recently identified and found to have
a prevalence of 40% in prostate tumor samples from US American patients
carrying a homozygous R462Q mutation in the RNaseL gene. This mutation
impairs the function of the innate antiviral type I interferon pathway and is a
known susceptibility factor for prostate cancer. Here, we attempt to measure
the prevalence of XMRV in prostate cancer cases in Germany and determine
whether an analogous association with the R462Q polymorphism exists.
Results: 589 prostate tumor samples were genotyped by real-time PCR with
regard to the RNaseL mutation. Using a highly sensitive nested PCR and RTPCR approach, DNA and RNA samples from these patients were screened for
the presence of XMRV-specific gag sequences. Furthermore, 146 sera samples
from prostate tumor patients were tested for XMRV Gag and Env antibodies
using a newly developed ELISA assay. In agreement with earlier data, 12.9%
(76 samples) were shown to be of the QQ genotype. However, XMRV specific
sequences were detected at neither the DNA nor the RNA level. Consistent
with this result, none of the sera analysed from prostate cancer patients contained XMRV-specific antibodies.
Conclusion: Our results indicate a much lower prevalence (or even complete
absence) of XMRV in prostate tumor patients in Germany. One possible
Der Urologe 1 · 2010 | reason for this could be a geographically restricted incidence of XMRV
infections.
V3. 5
Invasiv wachsende Prostatakarzinomzellen zeigen einen
überwiegend basalen Phänotyp mit einigen Stammzelleigenschaften
Wendel C1, Jung V1, Kamradt J1, Saar M1, Kreutzer B1, Grobholz R2, Stöckle
M1, Unteregger G1
1) Klinik für Urologie, Universitätsklinikum des Saarlandes, Homburg/Saar, DE
2) Institut für allgemeine Pathologie, Universitätsklinikum des Saarlandes,
Homburg/Saar, DE
Zum Zeitpunkt der Operation finden sich im Prostatakarzinom unterschiedliche Zellpopulationen. Diese sind bisher hinsichtlich des klinischen Outcomes für den einzelnen Patienten nicht eindeutig identifizierbar. Mit unserem
3D-Invasionsmodell konnten aus Patientenproben invasiv wachsende Zellklone mit überwiegend einheitlichen genetischen Veränderungen (CGH)
selektioniert werden. Unklar war bisher, welchen Phänotyp diese Zellpopulation aufzeigt und ob es sich dabei auch um Tumorstammzellen handeln
könnte.
Die Zelllinien PC3, LNCaP und DU 145 und Gewebeproben von Patienten
nach radikaler Prostatektomie wurden im 3D-Invasionsmodell kultiviert.
Analysiert wurden dabei die invasiv wachsenden Zellklone sowie die Zellen,
welche auf der Oberseite der Invasionsmembran verblieben. Untersucht wurden die Luminalzellmarker CK8, CK18, AR und PSA sowie die Basalzellmarker CK5, p63 und CD44. Antikörper gegen CD44, CD 133 und α2-Integrin
dienten dem Nachweis von Stammzellen.
Die 3 untersuchten Zelllinien waren alle positiv für die Luminalzellmarker
und negativ für CD133; keine Unterschiede konnten im gesamten Expressionsmuster zwischen den invasiven und nicht-invasiven Zellklonen beobachtet werden. Bei den Patientenproben konnten wir innerhalb einzelner
Spheroide Zellen sowohl mit basalem als auch mit intermediärem Charakter
detektieren, luminale Zellen fehlten völlig. Alle Zellen aus diesem Material
waren ebenfalls negativ für CD133 und alle positiv für den Stammzellmarker
CD44 und p63; die invasiven zeigten zusätzlich eine Anfärbung von α2-Integrin.
Die Ergebnisse belegen einerseits die Vermutung, dass die Prostatakarzinomzelllinien wenige Gemeinsamkeiten mit den Zellpopulationen aufweisen, die
in der 3D-Kultur von Patientenproben auswachsen. Diese Primärkulturen
sind zwar phänotypisch heterogen; aber der basale Charakter in Verbindung
mit der Expression von Stammzellmarkern lässt darauf schließen, dass mit
der von uns entwickelten Technik aus Patientenmaterial nach radikaler Prostatektomie die Zellen aus heraus selektioniert werden können, die aufgrund
ihrer Hormonunabhängigkeit und des invasiven Wachstums möglicherweise
entscheidend für den individuellen Krankheitsverlauf des Patienten sind.
V3. 6
Beteiligung der Stresskinase p38 an der Aktivierung des
androgenresponsiven Probasinpromotors durch Interleukin 1β
(IL-1β) in humanen Prostatakarzinomzelllinien
Streicher W, Erb H, Spindler K-D, Hessenauer A
Institut für Allgemeine Zoologie und Endokrinologie, Universität Ulm, DE
Einleitung: Entzündliche Prozesse beeinflussen die Entstehung sowie den
Verlauf von Tumorerkrankungen. Das Vorkommen von Leukozyten in
Tumorgewebe ist seit langem bekannt. Ein wesentlicher Bestandteil dieses
Leukozyteninfiltrates sind Macrophagen. So konnte kürzlich im Rattenmodell
eine Akkumulation von Macrophagen und damit verbunden eine erhöhte
Expression von IL-1β in Prostatakarzinom(PCa)-Gewebe gezeigt werden.
Das pro-inflammatorische Zytokin IL-1β kann die Angiogenese- und
Invasionseigenschaften von Tumoren modulieren. Für IL-1β konnte in vitro
gezeigt werden, dass es die Expression von Matrixmetalloproteinasen in PCaZellen fördert und so zur Metastasierung beitragen kann. Während andere
Interleukine (IL-4, IL-6, IL-8) in der Lage sind den Androgenrezeptor (AR)
| Der Urologe 1 · 2010
ligandenunabhängig zu aktivieren, ist über einen direkten Einfluss von IL-1β
auf die androgene Signalkaskade bislang wenig bekannt.
Material und Methoden: Die Aktivierung des AR in unterschiedlichen
PCa-Zelllinien (LNCaP, 22Rv1, PC3, DU-145) durch IL-1β wurde mit
Hilfe eines dualen Luciferase-Reportergenassays untersucht. Um eine Be­
tei­ligung der durch IL-1β aktivierbaren Kinasen an der Aktivierung des
androgenabhängigen Probasinpromotors zu untersuchen, wurden p38- bzw.
Jun-Kinase-Inhibitoren eingesetzt. Die Lokalisation des AR wurde anhand
eines grün fluoreszierenden AR-Fusionsproteins (EosFP-AR) bestimmt.
Ergebnisse: IL-1β aktiviert den androgenresponsiven Probasinpromotor in
hormonsensitiven LNCaP-Zellen. Erste Cotransfektions-Ergebnisse deuten
darauf hin, dass eine Aktivierung des Probasinpromotors durch IL-1β in DU145-Zellen nur in Gegenwart eines AR stattfinden kann. Interessanterweise
wird die Aktivierung des Probasinpromotors nach Behandlung mit IL-1β
durch eine Inhibition der p38 MAP-Kinase verringert.
Schlussfolgerung: IL-1β aktiviert AR-abhängig den Probasinpromotor in LNCaP- und DU-145-Zellen. Diese Aktivierung geschieht unter Beteiligung der
p38 MAP-Kinase.
V3. 7
Changes in proteomic and epigenetic expression patterns in tumour
associated fibroblasts (TAF) by interaction with urinary bladder
carcinoma cells
Enkelmann A1, Heinzelmann J1, Escher N2, Walter M1, Weidig M3, Wunderlich
H1, Junker K1
1) Department of Urology, University Hospitals, Jena, DE
2) Core Unit Chip Application, University Hospitals, Jena, DE
3) Department of Pathology, University Hospitals, Jena, DE
Background: Tumour development and progression is strongly affected
by interaction of tumour cells and tumour stroma. For different tumour
models (e.g. breast cancer) a supportive effect of TAF on the tumour
genesis was demonstrated. Purpose of the present work is the isolation and
characterisation of TAF from primary urinary bladder tumour specimen.
A further part of this study will deal with the influence of urinary bladder
carcinoma cell lines on protein expression of TAF.
Material and Methods: TAF were isolated from cultured urinary bladder
tumour specimen. Therefore, primary tumour material was treated with
EDTA followed by differential trypsinisation. Non-tumour fibroblasts were
isolated from foreskin and normal urinary bladder tissue. Analyses of protein
patterns were carried out on cultivated fibroblasts by SELDI-TOF-MS. TAF
and foreskin fibroblasts were co-cultivated with urinary bladder cancer cell
lines in separated cell culture compartments followed by SELDI-TOF-MS
analyses. Furthermore total RNA was isolated from TAF and non-tumour
fibroblasts to analyse the miRNA expression profile by miRNA Microarray.
Results: By optimizing cell culture routines it was possible to isolate and subsequently cultivate TAF from primary tumour material of the urinary bladder.
SELDI-TOF-MS measurements reveal differences in the proteomic patterns
of TAF and non-tumour fibroblasts. Microarray analyses indicate different
expression levels of several miRNAs in TAF and non-tumour fibroblasts.
Co-cultivation of urinary bladder carcinoma cells and TAF or non-tumour
fibroblasts induces modified protein patterns in the different cell types.
Conclusion: TAF can be isolated and cultivated separately from primary
tumour material. TAF are characterised by the expression of a specific protein
pattern and miRNA profile in comparison to non-tumour fibroblasts. Cocultivation with tumour cells revealed the induction of a modified expression
profile in fibroblasts and vice versa. The present results will provide a more
detailed understanding of the function of TAF in the tumour development of
urinary bladder carcinoma.
Urologie aktuell
Abstract Session 4
Moderation: Thorsten Schlomm, Maximilian Burger
V4. 1
Der Tumorsuppressor RECK beim Prostatakarzinom
Rabien A1, Ergün B1, Jung M1, Stephan C1, Jung K1, Kristiansen G2,
Erbersdobler A3
1) Klinik für Urologie, Charité - Universitätsmedizin, Berlin, DE
2) Institut für klinische Pathologie, UniversitätsSpital, Zürich, CH
3) Institut für Pathologie, Charité - Universitätsmedizin, Berlin, DE
Im Rahmen unserer Studien zur Bedeutung von Matrix-Metalloproteinasen
(MMPs) beim Prostatakarzinom wurde eine Dysbalance zwischen den Tumor-fördernden MMPs und ihren Inhibitoren in entarteten Prostatazellen
entdeckt. Ein MMP-Inhibitor, dessen Rolle erst in jüngerer Zeit bei verschiedenen Tumoren bestimmt wird, ist der Tumorsuppressor RECK (reversioninducing cysteine-rich protein with Kazal motifs). In einer retrospektiven
Studie an Prostatakarzinomen von radikalen Prostatektomien konnten wir
RECK als geeigneten Biomarker für das Prostatakarzinom klassifizieren
(Rabien et al., 2007). Sowohl RECK mRNA als auch das Genprodukt wurden im Karzinom verglichen mit umliegendem Normalgewebe vermindert
exprimiert, wie quantitative RT-PCR- und immunhistochemische Untersuchungen zeigten. Adenomektomien wiesen sogar ein höheres RECKExpressionsniveau auf als Karzinom-nahes benignes Gewebe. Die verminderte Expression des RECK im Prostatakarzinom war mit einem höheren
Tumorstadium (pT) und Gleason (≥7) assoziiert und konnte für Fälle mit
Gleason ≥7 im Vergleich zu den gängigen Parametern Alter bei Operation,
präoperativer PSA-Wert und pT als unabhängiger Faktor für das Risiko eines
PSA-Wiederanstiegs identifiziert werden. Zur Zeit wird die RECK-Expression mittels Tissue Microarrays in speziellen Tumorentitäten und –arealen des
Prostatakarzinoms bestimmt, um die Bedeutung für zufällig entdeckte (inzidente) Fälle und den invasiven Rand des Tumors abzuklären. Im Rahmen
funktioneller Untersuchungen zu RECK zeigte sich bei Prostatakarzinomzellen mit stabiler RECK-Überexpression (DU-145/pCMV6-Neo RECK) eine
Reduktion der Invasivität um 80% im Vergleich zu Kontroll-transfizierten
Zellen, die vermuten lässt, dass RECK für das Prostatakarzinom nicht nur
als Tumormarker, sondern auch als Zielstruktur für therapeutische Ansätze
dienen kann.
Lit.: Rabien A, Burkhardt M, Jung M, Fritzsche F, Ohl F, Ringsdorf M, Schicktanz H, Loening SA, Kristiansen, G, Jung K. Decreased RECK Expression Indicating Proteolytic Imbalance in Prostate Cancer Is Associated With Higher
Tumor Agressiveness and Risk of Prostate-Specific Antigen Relapse after
Radical Prostatectomy. Eur Urol 2007; 51(5):1259-66.
V4. 2
Lacking rationale for routine assessment of focal neuroendocrine
differentiation in prostate cancer
Köllermann J1, Sauter G1, Simon R1, Schlomm T2
1) Institute of Pathology, University Medical Center, Hamburg-Eppendorf, DE
2) Martini-Clinic, Prostate Cancer Center, University Medical Center, Hamburg-Eppendorf, DE
Focal neuroendocrine differentiation in prostate cancer is supposed to be
closely related to an increased malignant phenotype and to tumor progression. However, the clinical significance of focal neuroendocrine differentiation is a matter of an ongoing debate, because results from previous studies
are mainly based on small cohorts of patients.
In order to learn more on the prevalence and clinical significance of focal
neuroendocrine differentiation, a tissue microarray (TMA) containing 3261
primary prostate cancers with sufficient clinical follow up data treated by radical prostatectomy was analyzed by immunohistochemistry for the expression of the neuroendocrine markers chromogranin A and synaptophysin.
Detectable expression for chromogranin A was found in 18.3% (407 / 2222)
and for synaptophysin in 12.8% (279/2182) evaluable cancers. If both param-
eters were combined, 508/2237 cancers (22.7%) showed NE marker expression with 49 patients (2.1%) of them displaying a strong positivity for at least
one marker. Neuroendocrine differentiation was significantly associated with
advanced tumor stage (p < 0.0001) and high Gleason grade (p=0.0005). In
univariate analysis only a strong positivity for NE differentiation was significantly associated with an increased risk for PSA recurrence (p=0.006). However in multivariate analysis NE differentiation failed to be an independent
predictor of prognosis (RR: 1.1 (1.39), p= 0.4 (0.2).
It is concluded that if at all only a strong focal neuroendocrine differentiation
is of prognostic relevance. Due to the rarity of this finding and the associated
lack of predictive accuracy testing there is no convincing rationale to introduce NE staining into routine histological assessment.
V4. 3
Low level Her2 overexpression is associated with rapid tumor cell
proliferation and poor prognosis in prostate cancer
Schlomm T1, Sauter G2, Köllermann J2, Minner S2
1) Martini-Clinic, Prostate Cancer Center, University Medical Center, Hamburg-Eppendorf, DE
2) Institute of Pathology, University Medical Center, Hamburg-Eppendorf, DE
Purpose: The HER2-oncogene is involved in the biology of many different
tumor types and serves as a prognostic marker and a therapeutic target
in breast cancer. In contrast to breast cancer, the significance of Her2
overexpression and gene amplification in prostate cancer remains highly
controversial. The purpose of this study was to learn more on the prevalence
and clinical significance of HER2 amplification and overexpression in
prostate cancer.
Experimental design: A tissue-microarray (TMA) containing more than 2000
prostate cancers with follow-up data was used. TMA sections were analyzed
on protein and DNA level using two different antibodies (HercepTest, DAKO;
Novocastra NCL-CB11) and Fluorescence in situ Hybridization (FISH).
Results: Immunohistochemical analyses showed highly similar results for
both antibodies. Detectable Her2 immunostaining was observed in 17.2%
for the HercepTest and in 22.5% for the Novocastra antibody with the vast
majority of cases showing 1+ or 2+ staining. For both antibodies (HercepTest/
Novocastra) significant associations were found between positive staining
and high Gleason-grade (p<0.0001, both), advanced pT-stage (p<0.0001/
p=0.0015), rapid tumor cell proliferation (p=0.0004/p=0.0071) and tumor
recurrence (p<0.0001, both). HER2 amplification was only found in 1 of 2525
analyzable cases (0.04%).
Conclusions: Low level Her2 overexpression occurs at relevant frequency
in prostate cancer and in the absence of gene amplification. Increased Her2
expression may potentially lead to an aggressive behaviour of tumor cells
through stimulation of tumor cell proliferation since Her2 staining was shown
to be significantly associated with Ki67 Labeling Index (LI). These data argue
for reconsidering anti Her2 therapy possibly with modified approaches.
V4. 4
Chromosome 8p deletions and 8q gains are associated with tumor
progression and poor prognosis in prostate cancer
Burkardt L1, El Gammal A2, Brüchmann M1, Sauter G1, Simon R1, Schlomm T2
1) Institute of Pathology, University Medical Center, Hamburg-Eppendorf, DE
2) Martini-Clinic, Prostate Cancer Center, University Medical Center, Hamburg-Eppendorf, DE
Purpose: Deletions of 8p and gains of 8q belong to the most frequent
cytogenetic alterations in prostate cancer. The target genes of these alterations
and their biological significance are unknown.
Experimental Design: To determine the relationship between chromosome
8 changes and prostate cancer phenotype and prognosis a set of 1.954 fully
annotated prostate cancers were analyzed in a tissue microarray format by
fluorescence in situ hybridization.
Results: Both, 8p deletions and 8q gains increased in number during different
stages of prostate cancer progression. 8p deletions/8q gains were found in
Der Urologe 1 · 2010 | 26.1%/4.8% of 1239 pT2-cancers, 38.5%/9.8% of 379 pT3a-cancers, 43.5%/8.9%
of 237 pT3b-cancers, 40.7%/14.8% of 27 pT4-cancers, 39.1%/34.8% of 23
nodal metastases, 51.9%/33,3% of 27 bone metastases, and 45.5%/59.9% of 22
hormone-refractory cancers.
Conclusions: 8p deletions and 8q gains are relatively rare in early stage
prostate cancer but often develop during tumor progression. The prognostic
impact does not appear to be strong enough to warrant clinical application.
V4. 5
No evidence for mutational activation of FGFR3 in prostate
carcinogenesis.
Koufou S1, Lunz J-C1, Borchardt A1, Keck B2, Kneitz B3, Gaisa N4, Hafner C5,
Giedl C6, Rau T7, Hartmann A7, Stoehr R7
1) Department of Urology, University of Regensburg, DE
2) Department of Urology, University Hospital, Erlangen, DE
3) Department of Urology, University of Würzburg, DE
4) Institute of Pathology, RWTH Aachen University, Aachen, DE
5) Department of Dermatology, University of Regensburg, DE
6) Institute of Pathology, University of Regensburg, DE
7) Institute of Pathology, University Hospital, Erlangen, DE
Aim: FGF receptors are transmembrane receptor tyrosine kinases which
undergo dimerisation and transphosphorylation at the intracellular kinase
domain after ligand binding. In human prostate cancer, the FGF system has
already been well studied, but the role of FGFR3 is still unknown. Mutational
constitutive activation of FGFR3 is known from several malignancies (e.g.
urinary bladder and cervix carcinoma). To date, only limited data of FGFR3
mutations in prostate cancer are available. Most recently, activating FGFR3
mutations were described to be associated with low-grade prostate tumors.
Therefore the aim of this study was the investigation of the FGFR3 mutation
status in a comprehensive series of prostate tumors.
Material and Methods: Overall, 102 archival formalin-fixed, paraffinembedded prostate tumors achieved by radical prostatectomy and 29
incidental prostate tumors (low grade tumors (Gleason score ≤6): n=22)
obtained by TUR-P were investigated. After microdissection and DNA
isolation, all FGFR3 mutation hotspots known from human malignancies
were analyzed using SNaPshot or RFLP assay.
Results: All cases could successfully be analyzed by SNaPshot, 80 cases were
investigated using RFLP. No mutation in FGFR3 could be detected in any of
the analyzed cases. There were also no mutations in patients with concomitant
bladder tumors as reported previously.
Conclusion: The analysis of our representative cohort of prostate tumors
indicates that mutational activation of FGFR3 plays no important role in
prostate carcinogenesis, and our data are in accordance with previously
published studies. The most recently reported FGFR3 mutations in low-grade
prostate tumors could not be verified in our series.
V4. 6
Global analysis of CTCF regulated genes in early stages of prostate
cancer
Küffer S1, Belharazem D1, Sauer CG1, Sticht C2, Galjart N3, H. Riedmiller H4,
Michel MS5, Marx A1, Ströbel P1
1) Institute of Pathology, University Medicine Mannheim, University of
Heidelberg, DE
2) ZMF, University Medicine Mannheim, DE
3) Department of Cell Biology & Genetics, Erasmus MC, Rotterdam, NL
4) Department of Urology and Paediatric Urology, University Medical
School, Würzburg, DE
5) Department of Urology, University Medicine Mannheim, University of
Heidelberg, DE
Aims: Age is the most important factor in the development of prostate cancer
(PCA) and epigenetic silencing of genes is one of the earliest molecular
alterations commonly found in prostate neoplasia. It was recently shown
that loss of imprinting (LOI) of IGF2 occurs in the normal ageing prostate.
10 | Der Urologe 1 · 2010
The resulting increased IGF2 levels are believed to contribute to prostate
carcinogenesis and may also account for the strong association with older
age. LOI of IGF2 is due to altered regulation by the enhancer-blocking
element CCCTC-binding factor (CTCF). CTCF is a chromatin insulator that
is required for repression of the maternal imprinting at the imprint control
region (ICR) and influences the activation and inhibition of thousends of
genes in the genome. Using IGF2 as an indicator of altered epigenetic CTCF
control, we identified potential CTCF target genes by specific CTCF knock
down in PCA cell lines. The expression of these genes was further analyzed
in non-neoplastic and neoplastic prostate tissues with and without LOI of
IGF2.
Methods: Gene expression profiles were performed on prostate cancer cells
(PC3) with a specific CTCF knock down 48h after transfection. Custom
arrays containing potential CTCF target genes were performed on 7 normal
morphologically healthy prostate tissues tested for IGF2 LOI and ROI status
and on 12 PCA tissues of radical prostatectomy. The most significant genes
were tested in 24 normal prostate tissues with LOI and ROI.
Results: Microarray analyses of specific knock down of CTCF in the prostate cancer cell line PC3 resulted in ~ 500 significantly regulated genes 48h
after siRNA transfection. 390 genes were differentially expressed in histologically non-neoplastic prostate tissue with and without LOI (taken from radical prostatectomy specimens resected for PCA). Of these, 111 genes were also
significantly regulated in PCA compared to non-neoplastic prostate and 104
were significant when comparing different gleason grades (Gleason 6 vs 8). 50
genes were commonly deregulated in all comparisons.
Conclusions: Our data suggest an important role of the insulator and
transcription factor CTCF in very early stages of PCA, potentially by global
relaxation of the imprinting of a large array of CTCF target genes. In vitro
and in vivo analyses using CTCF knock out animals are underway to further
define the exact mechanisms of this process.
V4. 7
Evidence for an association of a polymorphism in LGALS3 with
prostate cancer risk
Imkamp F1, Dubrowinskaja N1, Dörk T2, Meyer A3, Serth J1, Kuczyk T1,
Merseburger A1
1) Clinics of Urology and Urologic Oncology, Medical School, Hannover, DE
2) Clinics of Obstetrics and Gynaecology, Medical School, Hannover, DE
3) Department of Radiation Therapy, Medical School, Hannover, DE
Background: Galectin-3 is a carbohydrate-binding protein involved in cell-cell
and cell-matrix interactions and cancer progression. Modulation of galectin3 expression in cancer cells has been reported as a diagnostic/prognostic
marker for specific cancer types, such as thyroid, stomach and prostate. A
functional polymorphism in the LGALS3 gene (rs4644) substituting proline
with histidine (p.P64H) results in susceptibility to matrix metalloproteinase
cleavage and acquisition of resistance to apoptosis.
Methods: We assessed the frequency of rs4644 in a hospital-based casecontrol study. 482 prostate cancer patients who were treated with brachy­
therapy at Hannover Medical School, and 488 control individuals matched
by ethnicity and gender were genotyped using allele-specific discrimination
with fluorescent probe 5´- exonuclease assays (TaqMan). Allele and genotype
frequencies were compared by chi-square and Cochran Armitage trend
tests.
Results: The rare allele of rs4644 was found on 362 chromosomes in the patient
series (37.6 %) and 401 chromosomes among controls (41.1 %, allelic OR 0.86,
95% CI 0.72; 1.03). A trend towards a higher incidence of the histidine variant
among controls was observed (ptrend= 0.1). In total, carriers of the rare allele
were less prevalent among patients than among controls (carrier OR 0.75,
95% CI 0.58; 0.98, p=0.03).
Conclusion: The p.P64H variant of galectin-3 may constitute or may be
associated with a protective factor in prostate cancer etiology. Larger studies
will be required to confirm these observations.
Urologie aktuell
V4. 8
Quantitative Detektion zirkulierender Tumorzellen (CTC) beim
Prostatakarzinom
Thalgott MK1, Nawroth R1, Rack B2, Schindlbeck G2, Maurer T1, Heck M1,
Kübler H1, Gschwend JE1, Retz M1
1) Urologische Klinik und Poliklinik, Technischen Universität, Klinikum r.d.
Isar, München, DE
2) Klinik für Frauenheilkunde und Geburtshilfe, Klinikum Innenstadt der
Ludwig-Maximilians-Universität, München, DE
Einleitung: Das Vorhandensein zirkulierender Tumorzellen (CTC) scheint
prognostisch relevant und zur Therapieüberwachung des Prostatakarzinoms
geeignet. Ziel des vorliegenden Projektes war die Etablierung des semi­
automatisierten CellSearch®-Systems. Untersucht wurde die Zahl zirku­
lierender Tumorzellen im peripheren Blut von Patienten mit einem lokal
fortgeschrittenen Prostatakarzinom (PC) oder einem hormonrefraktären
metastasierten Prostatakarzinom (HRPC).
Material und Methoden: Patienten mit einem PC (≥cT3N0M0, Gleason
Score 7-9; n=15) oder einem HRPC (n=11) wurde je ca. 20 ml venöses
Blut entnommen und mit dem CellSearch®-System untersucht. Gesunde
Probanden dienten als Kontrollgruppe (n=13). Die quantitative CTCBestimmung erfolgte durch immunomagnetische Isolation über einen
anti-EpCAM-Antikörper und eine automatisierte immuncytochemische
Fluoreszenzfärbung. Die automatisiert selektionierten Tumorzellkandidaten
wurden abschließend benutzerdefiniert verifiziert. Die Tumorzellen sind
positiv für die Nukleinsäurefärbung DAPI und negativ für CD-45.
Ergebnisse: In der Gruppe mit einem PC und einem medianen PSA-Wert von
23,54 ng/ml [6,92-79,64] konnten nur bei zwei Patienten CTC nachgewiesen
werden [1-3]. Es fand sich kein Zusammenhang zwischen der CTC-Zahl und
den histopathologischen Ergebnissen. Hingegen zeigten HRPC-Patienten bei
einem medianen PSA-Wert von 162,45 ng/ml [4,45-318,7] eine mediane CTCZahl von 50 [2-6500]. Bei alleiniger lymphogener Metastasierung betrug die
mediane CTC-Zahl 3 und lag somit signifikant unter der medianen CTCZahl von 86 bei Patienten mit ossärer Metastasierung. In der Kontrollgruppe
(n=13) wurden keine CTC detektiert.
Schlussfolgerungen: Die höchste CTC-Zahl konnte bei ossär metastasierten
HRPC-Patienten nachgewiesen werden. Hingegen zeigte sich bei einem lokal
fortgeschrittenen PC, unabhängig von der Histopathologie und dem GleasonScore, keine CTC-Erhöhung. Das CellSearch®-System scheint insbesondere
zur Überwachung der Chemotherapie von ossär metastasierten HRPCPatienten geeignet. Für die klinische Anwendung sollte die CTC-Detektion
mit dem CellSearch®-System weiter validiert werden.
V4. 9
Sarcosine: A key metabolite in non-invasive prostate cancer
detection?
Jentzmik F1, Stephan C1, Miller K1, Schrader M1, Lein M1,2, Jung K1,2
1) Department of Urology, Charité – University Medicine, Berlin, DE
2) Berlin Institute for Urologic Research, Berlin, DE
Background: Sarcosine (N-methylglycine) was recently identified as a key
metabolite in post digital-rectal-exam (DRE) urine for prostate cancer (PCa)
detection.
Objektive: To evaluate the potential of sarcosine as a biomarker for early
disease detection and aggressivity prediction.
Methods: We analyzed sarcosine in archived urine supernatants collected
after standardized DRE from 139 Caucasian men with PSA concentrations of
0-20 ng/ml by gas chromatography-mass spectrometry and normalized it to
urinary creatinine. One hundred and six had PCa (mean age: 64.3 years) and
33 were NEM patients (66.6 years). All patients underwent prostate biopsy
and from 91 patients the prostatectomy specimens were available after radical
prostatectomy.
Results: The sarcosine to creatinine ratio showed significantly lower values
for PCa compared with NEM (median: 806 vs. 929 nmol/mmol; MannWhitney test, P=0.0248). Receiver-operating characteristics (ROC) analyses
of total PSA, %fPSA, and sarcosine clearly proved that %fPSA performed
significantly better than sarcosine in delineating PCa from NEM ([AUC]
0.81 vs. 0.63, P=0.012), while PSA performed equal with sarcosine (AUC:
0.64 vs. 0.63, P=0.933). When the statistical analysis was restricted to patients
with the total PSA range of 0-10 ng/ml (n=99; 71 PCa and 28 NEM), %fPSA
performed again better than sarcosine and PSA (AUC: 0.79 vs. 0.67 and 0.59),
respectively. In addition, no associations of sarcosine to the conventional
pathological prognostic indicators tumor stage and Gleason score were
evident. The sarcosine ratio did not differ between patients with pT2 and pT3
stage (779 [n=62] vs 838 nmol/mmol [n=30]; P=0.632) as well as in patients
with Gleason score <7 and ≥7 (779 [n=26] vs 803 nmol/mmol [n=65];
P=0.632). Sarcosine was not correlated to age of patients (rs=0.081, P=0.343)
and to the PSA concentrations (rs=0.0009, P=0.992).
Conclusion: In summary, our data in a well defined cohort demonstrate that
measurement of sarcosine in urine after DRE is hardly suitable to improve
the diagnostic performance in comparison with the routine markers like
%fPSA. Although cancer-related metabolites in urine combined with other
markers are expected to become promising tools, the data of sarcosine should
be interpreted with caution.
Abstract Session 5
Moderation: Edgar Dahl, Patrick J. Bastian
V5. 1
ERG rearrangement is specific for prostate cancer and does not occur
in any other common epithelial malignancy
Scheble V1, Braun M1, Ruiz C2, Petersen K1, Fend F1, Bubendorf L2 und Perner S1
1) Institute of Pathology, University Hospital, Tübingen, DE
2) Institute of Pathology, University Hospital, Basel, CH
The rearrangement of ERG, most commonly resulting in fusion with the androgene-regulated gene TMPRSS2, is the most frequent gene rearrangement
in prostate carcinomas. Since its initial discovery in 2005, a lot progress was
already made in the understanding of prostate cancer with this alteration.
However, until today there is no evidence that the ERG rearrangement specifically occurs in prostate carcinomas but no other common epithelial malignancy. Aim of our study was to assess ERG rearrangement for its specificity
for prostate cancers.
Materials and methods: We designed a multitumor-tissue-microarray
containing representative samples of approx. 150 oropharyngeal, 150 he­
patopancreatic, 160 gastrointestinal, 180 urogenital, 100 gynaecological, 120
lung and 180 breast carcinomas. The ERG rearrangement status was assessed
by an ERG break-apart FISH assay as earlier described.
Results: We could not find an ERG gene rearrangement in any of the multiple
epithelial cancer samples but prostate cancer.
Conclusion: Since there was no evidence of ERG rearrangement in any
other common epithelial cancer, it appears that the ERG rearrangement is
a pathognomonic genetic alteration for prostate carcinomas. The detection
of this alteration in metastasis of unknown primary would be an evidence
of prostate cancer and thus provides a specific marker for prostate cancer.
Further research must show whether specific therapeutic approaches can
target prostate cancers with ERG rearrangements.
Der Urologe 1 · 2010 | 11
V5. 2
ERG rearrangement as a marker to differentiate between small cell
lung cancer and small cell prostate cancer
Scheble VJ1*, Braun M1*, Wilbertz T1, Stiedl A-C1, Petersen K1, Schilling D2,
Seitz G4, Fend F1, Kristiansen G3, Perner S1
* These authors contributed equally to this work
1) Institute of Pathology, Comprehensive Cancer Center, University Hospital, Tuebingen, DE
2) Department of Urology; Comprehensive Cancer Center, University
Hospital, Tuebingen, DE
3) Institute of Surgical Pathology; University Hospital, Zurich, CH
4) Department of Pathology; Klinikum of the Sozialstiftung, Bamberg, DE
Background: Small cell prostate cancer is a rare but aggressive disease, tending
to early metastasis and poor outcome. Still, its histogenetic background is
unclear and diagnosis, especially in distinction from metastatic small cell
lung cancer is challenging. The aim of our study was to determine whether
the ERG rearrangement commonly observed in acinar prostate cancer can
distinguish small cell prostate cancer from small cell lung cancer samples.
Material and Methods: We assessed 15 small cell prostate cancers and 22
small cell lung cancers for ERG rearrangement using FISH. Commonly used
and novel immunohistochemical markers (i.e. AR, CANT1, GOLPH2, PSA,
PSMA, CD56, EMA, TTF1, Chromogranin A, Synaptophysin and Ki-67)
were further studied.
Results: ERG rearrangement occurred in 86% of small cell prostate cancer
samples but none of the small cell lung cancer samples. The prostate targeting
markers AR, CANT1, PSA, and PSMA were positive in a minority of small
cell prostate cancer samples but none of the small cell lung cancer samples
whereas GOLPH2 was positive in the majority of both entities. CD56, EMA,
and TTF1 were negative in most small cell prostate cancer samples and
positive in the majority of small cell lung cancer samples.
Discussion: The ERG rearrangement is very common in small cell prostate
cancer, supporting the hypothesis that ERG rearrangement occurs in prostate
cancer with clinically adverse outcome. Furthermore, the ERG rearrangement
is the most significant marker to differentiate between small cell prostate
cancer and small cell lung cancer.
V5. 3
Global levels of histone H3K27me1 predict prostate cancer
recurrence
Rogenhofer S1, Ellinger J1, Kahl P2, von der GathenJ1, Heukamp LC2, Walter
B3, Hofstädter F4, Büttner R2, Müller SC1, Bastian PJ5, von Rücker A2
1) Department of Urology, University Hospital, Bonn, DE
2) Institute of Pathology, University Hospital, Bonn, DE
3) Department of Urology, University Hospital, Erlangen, DE
4) Institute of Pathology, University Hospital, Regensburg, DE
5) Department of Urology, University Hospital, Großhadern, LMU München, DE
Objective: Epigenetic alterations such as DNA methylation and histone
modifications play important roles in carcinogenesis. It was reported that
global histone modification patterns are predictors of cancer recurrence in
various tumor entities. Our study was performed to evaluate histone lysine
(HxKy) methylation in prostate cancer (PCA).
Material and Methods: A tissue microarray with 113 clinically localized
PCA and 34 hormone-refractory PCA (HRPC) and 30 metastatic, hormonedependent PCA (HDPC) was stained with antibodies against H3K27me1,
H3K27me2, H3K27me3, H4K20me1, H4K20me2 and H4K20me3. Sections
were scored according the staining intensity and the proportion of epithelial
cells showing nuclear staining.
Results: Histone lysine methylation marks were inversely correlated
with clinical-pathological parameters [all p≤0.05: pT-stage (H3K27me1,
H4K20me1), lymph node metastasis (H3K27me1, H4K20me2, H4K20me3),
capsular penetration (H3K27me1), seminal vesicle infiltration (H3K27me1),
Gleason Score (H3K27me1, H3K27me2, H3K27me3, H4K20me1, H4K20me2,
H4K20me3)]. In addition, low levels of H3K27me1 were significantly
predicting PSA recurrence following radical prostatectomy (Kaplan Meier
12 | Der Urologe 1 · 2010
estimates, p=0.005). H4k20me1 and H4K20me2 levels were decreased in
HDPC and HRPC, whereas H3K27me1 and H3K27me3 levels were increased
in HDPC and HRPC (p Conclusion: Global histone modification levels may
help to identify patients localized PCA with adverse prognosis. Furthermore,
targeting histone modifications may be a potential target for the future
therapy of PCA.
V5. 4
Untersuchungen zur Gen-Promotormethylierung im
Prostatakarzinom und benignem, prostatischen Gewebe
Steiner I1,2, Jung K1,3, Schatz P4, Wittschieber D2, Lein M3, Dietel M2,
Erbersdobler A2
1) Berliner Forschungsinstitut für Urologie (BFIU), Berlin, DE
2) Institut für Pathologie, Charité - Universitätsmedizin, Berlin, DE
3) Klinik für Urologie, Charité - Universitätsmedizin, Berlin, DE
4) Epigenomics AG, Berlin, DE
Einleitung: Die Detektion des Prostatakarzinoms stellt für den Urologen
heutzutage noch immer eine große Herausforderung dar, da – abgesehen
von einem stanzbioptisch nachgewiesenen Karzinom – nach wie vor
kein Marker identifiziert ist, der sicher erkennen lässt, ob ein Tumor
vorhanden ist. Untersuchungen auf DNA-Ebene haben ergeben, dass
Gen-Promotor-Hypermethylierungen häufig bei speziellen Genen in der
frühen Krebsentwicklung auftreten. Somit könnte die Messung dieser
DNA-Modifikation eine sensitive Methode zum Prostatakrebs-Screening,
möglicherweise sogar in histologisch noch tumorfrei erscheinendem Gewebe,
darstellen. Wir untersuchten daher die Aussagekraft der Promotorhypermeth
ylierung von vier Genen (GSTP1, RARβ2, APC und PITX2) im prostatischen
Tumor und benignem Gewebe.
Methoden: Das jeweils größte Tumorareal von 25 Formalin-fixierten,
Paraffin-eingebetteten Prostatektomie-Gewebeproben wurde genauestens
lokalisiert. Aus Tumor und nicht-neoplastischem Gewebe unterschiedlicher
Entfernungen zum Tumor wurden Gewebeproben (1 mm Durchmesser)
zur DNA-Isolierung gewonnen. Die Methylierungsraten wurden mittels
verschiedener Assay-Technologien ermittelt.
Ergebnisse: Erhöhte Methylierung zeigte sich in den Tumorproben beim
Vergleich mit Prostatakarzinom-freiem Zystektomie-Kontrollgewebe in
allen untersuchten Genpromotoren (GSTP1: 21/25, 84%, RARβ2: 24/25,
96%, APC: 21/25, 84%, PITX2: 20/25, 80%). In prostatischer intraepithelialer
Neoplasie (PIN)-Fällen wurden erhöhte Methylierungsraten für GSTP1,
APC, PITX2 (jeweils 2/3) und RARβ2 (3/3) gefunden. Einige Proben zeigten
auch im Tumor-angrenzenden, benignen Gewebe erhöhte RARβ2- und
APC-Methylierung. Des Weiteren assoziierte die GSTP1-, RARβ2- und APCMethylierung signifikant positiv mit primärem Gleason-Grad. Die GSTP1Methylierung assoziierte zusätzlich mit dem pT-Stadium.
Fazit: Erhöhte GSTP1-, RARβ2-, APC- bzw. PITX2-Promotormethylierung
stellt ein häufig auftretendes Ereignis im Prostatakarzinom dar, was diese
Gene zu sensitiven Werkzeugen für die Detektion von neoplastischen
Läsionen in der Prostata macht. RARβ2-Hypermethylierung zeigte sich
auch in einigen histologisch tumorfrei-erscheinenden Proben, so dass
über die Promotormethylierung dieses Gens hilfreiche Informationen zur
frühzeitigen Prostatakrebsidentifizierung gewonnen werden könnten. Die
GSTP1-, RARβ2- und APC-Methylierung scheint zusätzlich Potential zur
Vorhersage von Tumoraggressivität und –ausdehnung zu haben.
V5. 5
Epigenetische Regulation des Myopodingens während der Genese
des Prostatakarzinoms
Dansranjavin T, Wagenlehner F, Bogumil A, Altinkilic B, Weidner W, Steger K,
Paradowska A
Klinik und Poliklinik für Urologie, Kinderurologie und Andrologie, JustusLiebig-Universität, Giessen, DE
Einleitung: Myopodin ist ein potentielles Tumorsupressorgen, dessen
Expressionsverlust mit einer perineuralen Invasion und Metastasierung in
Urologie aktuell
Prostatakarzinomen (PCa) assoziiert ist. In dieser Studie wurde die Rolle der
tumorassoziierten epigenetischen Promotorinaktivierung des Myopodingens
in Prostatakarzinomzelllinien und primären Prostatatumoren untersucht.
Material und Methoden: Die Zelllinien Du145, LnCaP und 22RV1, sowie
PCa-Proben von 37 Patienten (18 T2, 14 T3, 5 T4) und zusätzlich 21 Proben der
daran angrenzenden benignen Prostatahyperplasie (BPH), wurden auf die
Methylierung des Myopodinpromotors mittels COBRA (Combined BisulfiteRestriction-Analysis) und Bisulfitsequenzierung untersucht. Zusätzlich
wurde der Effekt von 5-Azacytidin (5-AZA) und/ oder Trichostatin A (TSA)
einzeln und in Kombination auf die mRNA-Expression des Myopodingens
untersucht.
Ergebnisse: Alle untersuchten PCa-Zelllinien zeigten eine partielle
Methy­lierung des Myopodingens, die mit einer schwachen (LnCAP) bzw.
fehlenden (DU145, 22RV1) Myopodinexpression assoziiert war. Eine starke
Reexpression des Gens wurde mittels TSA-Behandlung erzielt. Dieser
Effekt wurde bei DU145 und LnCAP zusätzlich durch die kombinierte
5-AZA/TSA-Behandlung verstärkt. 62% (23/37) der PCa-Proben wiesen
eine partielle Methylierung des Myopodingens auf. Die Korrelation der
Methylierungsrate mit tumorbiologischen Parametern zeigte bei T3-PCa
eine Methylierungsabnahme mit zunehmender Dedifferenzierung (80%
in G2 zu 44% in G3). Die vergleichende Analyse der PCa-Proben mit den
korrespondierenden BPH-Arealen ergab ein identisches Methylierungsmuster
in 20 von 21 Fällen.
Schlussfolgerung: Die Reexpressionsexperimente deuten darauf hin, dass
Histonacetylierung eine zentrale Rolle bei der Regulation des Myopodingens
in PCa spielt. Die DNA-Methylierung hat einen zusätzlichen Effekt auf die
Myopodinexpression. Eine Demethylierung des Myopodingens könnte einen
Marker für die Dedifferenzierung der PCa in fortgeschrittenen Tumorstadien
darstellen.
V5. 6
Novel DNA methylation biomarkers for early detection and
prediction of progression in bladder cancer
Rose M, Gaisa NT, Alkaya S, Antony P, Knüchel R and Dahl E
Molecular Oncology Group, Institute of Pathology, RWTH Aachen
University, Aachen, DE
Background: While the genetics of bladder cancer development has been
studied intensively in recent years the knowledge on epigenetic modifications
and especially DNA methylation changes in this tumor entity is still limited.
Thus, the aim of the current project is the identification and molecular
characterization of novel DNA methylation markers potentially useful for
early cancer detection or treatment stratification of bladder cancer patients.
Methods: cDNA array based expression profiling identified 24 candidate
genes showing significant downregulation in different types of bladder cancer
and harbouring a CpG island in their promoter region. Methylation frequency
of these genes in bladder cell lines, cancer tissues and urine samples is being
analyzed by methylation-specific PCR (MSP) and pyrosequencing. In order
to further proof epigenetic silencing, in vitro demethylation is carried out
by azacytidine / trichostatin A treatment. Methylation based multi-marker
panels will be optimised using receiver operator characteristics (ROC) curve
analysis. Furthermore, selected candidate genes will be functionally analyzed
in cell line models.
Results: Both MSP and pyrosequencing analysis revealed that eight of the
24 candidate genes exhibited promoter methylation in bladder cancer cell
lines (n=5) in clear association with loss of mRNA expression, the latter being
restored in vitro by demethylation. In bladder cancer, two candidate genes
showed frequent methylation in non-invasive (n=30) and invasive bladder
carcinomas (n=30) compared with a set of normal urothelial samples (n=15).
Interestingly, we characterized one candidate gene specifically exhibiting
promoter methylation in progressive disease, i.e. invasive bladder cancer
(69% methylation frequency), whereas non-invasive tumours presented
an unmethylated promoter, indicating a suppressive function in tumor
invasion.
Conclusions: This project started just twelve months ago but has already
defined several interesting novel genes that are epigenetically silenced in
various types of bladder cancer. Subsequent evaluation of these genes as
DNA methylation markers as well as their functional analysis in vitro should
reveal signalling pathways in bladder cancer affected by aberrant DNA
methylation.
V5. 7
Epigenetische Veränderungen im Prostatakarzinom und ihre
mögliche Beeinflussung durch den Einsatz von Inhibitoren der DNAMethylierung und Histonmodifikationen
Hauptstock V1, Kuriakose S1, Ellinger J2, von Rücker A1
1) Institut für Pathologie, Universitätsklinikum, Bonn, DE
2) Klinik für Urologie, Universitätsklinikum, Bonn, DE
Epigenetische Veränderungen wie DNA- Methylierung und Histonmodifikationen spielen eine wichtige Rolle in der Tumorgenese des Prostatakarzinoms, indem sie Aktivierung und Inaktivierung relevanter Gene steuern.
EZH2, eine Komponente des Polycombkomplex 2, ist in Prostatakarzinomzellen überexprimiert und mit GSTP-1 Hypermethylierung assoziiert. EZH2
wirkt als Histon- Lysin- Methyltransferase und führt zur Trimethylierung
von H3K27 (Histon3 Lysin27). EZH2 verursacht eine Rekrutierung von
DNA- Methyltransferasen, die eine DNA- de novo Methylierung vornehmen, daraus folgt eine Geninkativierung. Dieser Einfluss macht sowohl die
DNA- Methylierung als auch die Histonveränderungen zu einem wichtigen
Angriffsziel in der Tumortherapie.
In dieser Studie untersuchen wir epigenetische Veränderung in verschiedenen Zelllinien (BPH-1, LNCAP und PC-3) unter den Einfluss von
–5-aza-2´Deoxycytidine (5-aza-dC), ein DNA- MethyltransferaseInhibitor,
–Depsipeptide, ein Histondeacetylase- Inhibitor und
–3-Deazaneplanocin A (DZNep), ein S-Adenosylhomocystein- Inhibitor
mit hemmender Wirkung auf EZH2.
Wir analysieren die epigenetischen Veränderungen am Promotor von
GSTP-1, APC und PTGS2, die wie wir in frühere Studien zeigen, durch de
novo“CpG Inseln“ Hypermethylierung inaktiviert werden wie auch den Einfluss von genrepremierende Methylierungsmarkierungen wie H3K27me,
H3K9me und H4K20me, und die genaktivierende Markierungen H3K4me
und H3K18ac auf die drei Promotoren.
Der Effekt durch die EZH2- Überexpression im Prostatakarzinom ist noch
wenig verstanden. Wir untersuchen den möglichen Einfluss von EZH2 auf
die Inaktivierung der Promotoren von GSTP1, APC und PTGS2. Die ersten
Ergebnisse zeigen, dass die Behandlung mit Depsipetide wie auch mit 5-azadC zu einer dosis- und zeitanhängige Reexprimierung von GSTP-1 in LNCAP und PC-3 Zelllinien führt, dies kann jedoch nicht mit DZNep erreicht
werden. Unter Einfluss von Depsipeptide kam es zu einer Abnahme von
H3K27tri am APC- Promotor.
Die Ergebnisse deuten an, dass die Beeinflussung von epigenetischen Veränderungen in Tumoren ein erfolgsversprechender Ansatz für die Therapie des
Prostatakarzinoms ist.
V5. 8
Eine qRT- PCR Gensignatur zur Prädiktion des Lymphknotenstatus
bei Patienten mit high risk Prostatakarzinom
Karl A1, Davies B2, Tritschler S1, Stief C1, Waldman F2
1) Urologische Abteilung, Ludwig-Maximilians-Universtiät, München, DE
2) Department of Urology, UCSF, San Francisco, CA, USA
Introduction and objective: The ability to predict the lymph node status
of high risk prostate cancer patients at the time of diagnosis would be of
great clinical utility in determining an appropriate treatment plan. A set
of 48 candidate genes previously reported in the literature to be associated
with aggressive tumor biology was selected for this investigation. The gene
expression of the 48 candidate genes was compared between high risk tumors
with and without positive lymph nodes.
Methods: All patients with positive lymph nodes determined at the time
of radical prostatectomy were included in this investigation (n=19). Node
Der Urologe 1 · 2010 | 13
negative patients, who had their surgery during the same time period, were
biochemically disease free for at least 2 years and received no other treatment
for their disease (n=19). All patients in this analysis received no treatment
prior to surgery. The gene expression profile of each tumor using SYBR Green
qRT-PCR for the 48 candidate genes was done on RNA extracted from paraffin
sections. qRT-PCR was validated by agreement between matched samples in
frozen and paraffin prostate tissue. Gene expression was quantitated relative
to 3 housekeeping genes.
Results: Eight of the 48 genes significantly predicted lymph node status
(Mann-Whitney test: p <0.05). Assuming a logistic model and using a
forward step-wise approach, ANGPT2, EVI1, and ZNF217 genes from this
highly correlated subset of 8 genes were significant independent predictors
of lymph node status at the 0.10 level (likelihood ratio test: p = 0.0001, 0.089,
0.046, respectively). The area under the receiver operating characteristic
curve was 0.92. The model s sensitivity was 95% and the specificity was 80%.
Only 4 patients were not classified correctly by our model.
Conclusions: It appears that a 3 gene signature (ANGPT2, EVI1, and ZNF217)
independently predicts lymph nodes status with a high degree of specificity
and sensitivity. Validation studies of these genes are necessary to confirm
these findings.
Abstract Session 6
Moderation: Lutz Trojan, Michael Seitz
V6. 1
DKC1 overexpression is associated with prostate cancer progression
and necessary for continued growth of prostate cancer cell lines
Sieron P, Schulz WA
Department of Urology, University Hospital, Düsseldorf, DE
Inherited mutations inactivating the DKC1 gene cause dyskeratosis congenita, a syndrome characterized by hematopoiesis failure, skin defects and
cancer development. The product of the gene, Dyskerin (Cbf5), is essential
for formation of pseudouridine in various RNAs and of the telomerase RNA
subunit hTR and has been proposed to protect against apoptosis. Surprisingly, increased expression of DKC1 as well has been linked to the development
of various cancers in adults, especially breast cancers.
We have studied DKC1 mRNA expression in 47 primary M0 prostate cancer
tissues compared to 13 benign tissues by quantitative RT-PCR, and its correlation to hTR and the proliferation marker MKI67.
DKC1 was significantly overexpressed in cancer tissues, especially in highstage and recurrent cases and expression correlated moderately well with hTR
and MKI67. Enhanced DKC1 expression was not caused by increased copy
numbers of the gene at Xq28 measured by quantitative PCR. The function of
Dyskerin overexpression was studied by siRNA-mediated knockdown in the
prostate cancer cell lines Du145 and 22Rv1. Short-term Dyskerin knockdown
diminished cell proliferation, but did not promote spontaneous or enhance
drug-induced apoptosis. Sustained knockdown prevented proliferation by
inducing a “diminuitive” phenotype and cell detachment, consistent with a
failure of RNA biosynthesis, but did not induce senescence.
We conclude that DKC1 upregulation is common during progression of prostate cancers. Overexpression of Dyskerin seems to be most crucially required
to meet the enhanced requirement for RNA synthesis during tumor growth,
but should also support telomerase activation. Our findings confirm the
hypothesis that both lack and overexpression of Dyskerin can contribute to
cancer development.
14 | Der Urologe 1 · 2010
V6. 2
Bedeutung von Schlüsselenzymen der cAMP-abhängigen
Signaltransduktion in humanem Prostatagewebe
Waldkirch E1, Sigl K2, Stief CG3, Kuczyk M1, Ückert S1 und Hedlund P4,5
1) Klinik und Poliklinik für Urologie und Urologische Onkologie,
Medizinische Hochschule, Hannover, DE
2) morphosys AG, Martinsried, DE
3) Urologische Klinik und Poliklinik, Universitätsklinikum Großhadern, LMU
München, DE
4) Department of Clinical & Experimental Pharmacology, University Hospital,
Lund, SE
5) Department of Clinical Pharmacology, University Hospital, Linköping, SE
Einleitung: Die Expression der Phosphodiesterase 4 (PDE4) im Bereich des
fibromuskulären Stroma der Prostata sowie die relaxierende Wirkung von
Forskolin (Adenylatzyklase-Aktivator) und Rolipram (PDE4-Inhibitor) auf
Detrusormuskulatur und Prostata lässt auf eine besondere Bedeutung der
cAMP-abhängigen Signaltransduktion in der Tonusregulation von Blase und
Prostata schliessen. Ziel der Studie waren die Darstellung der Expression von
Isoformen des Schlüsselenzyms Proteinkinase A (cAK) in Relation zu alphaActin und zu Isoformen der PDE4, sowie Untersuchungen zur funktionellen
Bedeutung der cAK in der Tonusregulation der Prostata.
Methoden: Die Darstellung der Expression von alpha-Actin, Isoformen der
PDE4 und der cAK erfolgte mit immunohistochemischen Methoden und
der Western Blot Analyse. Im Rahmen der in vitro Organbadversuchen
wurde das Prostatagewebe zunächst mit dem cAK-Inhibitor Rp-8-CPTcAMPS präinkubiert und anschliessend mit Norepinephrin kontrahiert. Es
erfolgte die kumulative Gabe von Forskolin, SNP, Rolipram und Tadalafil in
Endkonzentrationen von 10-8 bis 10-5 mol/l.
Ergebnisse: Immunreaktionen gegen die cAK I alpha, II alpha und beta,
nicht jedoch gegen die Isoform I beta konnten nachgewiesen werden.
Doppelfärbungen zeigten eine Colokalisation von Isoformen der cAK und
der PDE4 in glattmuskulären und glandulären Anteilen der Prostata. Die
Western Blot Analyse bestätigte die Ergebnisse der Immunhistochemie. Die
in vitro Organbadexperimente zeigten eine signifikante Abschwächung der
relaxierenden Wirkung von Forskolin, SNP, Rolipram und Tadalafil durch
den cAK-Inhibitor Rp-8-CPT-cAMPS.
Zusammenfassung: Unsere Ergebnisse zeigen erstmalig die Expression
verschiedener Isoformen des Schlüsselenzyms cAK in Colokalisation mit
der PDE4A und B in der glatten Muskulatur des fibromuskulären Stromas.
Darüberhinaus belegen die durchgeführten Organbadversuche eine
funktionelle Rolle der cAK sowohl in der cAMP-, aber auch in der cGMPabhängigen Signaltransduktion zur Tonusregulation der glatten Muskulatur
der Prostata. In Verbindung mit kürzlich veröffentlichten Daten zur Rolle
von PDE4 Inhibitoren in der Tonusregulation der Detrusormuskulatur lässt
sich schliessen, dass cAMP-abhängige Mechanismen eine zentrale Rolle in
der Therapie von LUTS/BPH spielen könnten.
V6. 3
Berührungsfreie endoskopische Messung der Harnblasenperfusion
Firek P, Heidenreich A
Klinik für Urologie, Universitätsklinikum, RWTH Aachen, DE
Einleitung: Die Pathophysiologie von Funktionsstörungen der Harn­­
blase bei Patienten mit benigner Prostatahyperplasie ist bisher un­klar.
Interessanterweise berichten nur max. 80% der Männer nach Prosta­
taadenomektomie wegen Prostatahyperplasie über eine Besserung ihrer
Symptomatik. Diese Beobachtungen legen die Vermutung nahe, dass durch
die Blasenauslassobstruktion Sekundärveränderungen im Bereich der
Blase verursacht werden, die für die Symptome verantwortlich sind. Nach
Ergebnissen tierexperimenteller Untersuchungen finden eine Vielzahl
von morphologischen, physiologischen und molekularbiologischen Ver­
änderungen im Detrusor statt, die vermutlich auf eine verminderte Perfusion
der Blase mit konsekutiver Hypoxie zurückzuführen sind. Einen direkten
Zugriff auf die in der Blasenwand ablaufenden Vorgänge erlauben die in der
urologischen Diagnostik eingesetzten Methoden bisher kaum.
Urologie aktuell
Methoden: Ziel dieser Arbeit war die Entwicklung eines Verfahrens,
mit dessen Hilfe lokal und nichtinvasiv die Sauerstoffsättigung der Harn­
blasenwand gemessen werden kann. Dazu wurde ein Gerät entwickelt,
welches endoskopische Methoden mit faseroptisch basierter berührungsloser
Remissionsspektroskopie kombiniert.
Ergebnisse: Nach Entwicklung der faseroptisch basierten spektroskopischen
Messeinheit wurde diese zunächst in vitro an einem etablierten hämo­
rheologischen Modell validiert. Nach Überprüfung auf Konstanz und Repro­
duzierbarkeit der Ergebnisse wurde das System an zehn Patienten mit benigner
Prostatahyperplasie im Rahmen der TUR-P klinisch erprobt. Es konnte ein
Abfall der Sauerstoffsättigung mit zunehmendem Harnblasenvolumen in
allen Messpositionen demonstriert werden. Ferner konnte ein deutlicher
Perfusionsunterschied zwischen Harnblasenboden und Harnblasendach
unabhängig vom Füllvolumen gezeigt werden. Der Blasenboden ist mit einer
durchschnittlichen Sauerstoffsättigung von 97% ± 1,56% und einem Abfall
von 5,2% sO2 bis zu einer Füllmenge von 300 ml der am besten durchblutete
Bereich der Harnblase.
Schlussfolgerung: Mit der berührungslosen Remissionsspektroskopie wurde
eine Methode zur endoskopischen Bestimmung der Sauerstoffsättigung von
Hohlorganen entwickelt. Dieses Verfahren kann somit als Grundlage zur
Früherkennung von Blasenfunktionsstörungen dienen. Für die Zukunft ist die
Korrelation der Messergebnisse mit dem funktionellen Operationsergebnis
geplant.
V6. 4
Modellierung einer virtuellen Prostata zur Optimierung des
magnetischen Pharmakatargetings
Röth AA1, Baumann M2, Conze J1, Klinge U1,2, Schumpelick V1, Schmitz-Rode T2
1) Chirurgische Klinik, Universitätsklinikum der RWTH Aachen, DE
2) Lehrstuhl für Angewandte Medizintechnik, Helmholtz-Institut für
Biomedizinische Technik, Aachen, DE
Einleitung: Magnetische Nanopartikel (MNP) können dazu verwendet
werden, die zahlreichen Nebenwirkungen einer systemischen Chemotherapie
zu reduzieren, indem die Wirkstoffe lokal im Tumor appliziert werden. Sie
werden intravenös verabreicht und dann mit Magnetfeldfallen im Tumor
gefangen. Die Anlage eines magnetischen Wechselfeldes bewirkt die Frei­
setzung des Pharmakons. Anhand eines virtuellen Prostatamodells sollte die
Zusammensetzung und der Aufbau der idealen Magnetfeldfalle bestimmt
werden.
Material und Methoden: Es wurden verschiedene Konfigurationen von
magnetischen Spulen in einem virtuellen Prostatamodell designend, gebaut
und getestet. Um ein genaues mathematisches Modell der Prostata und
ihrer Umgebung zu bilden, wurden pathologische Gutachten ausgewertet,
die Prostata histologisch untersucht sowie die magnetischen Eigenschaften
des Gewebes bestimmt. Hierauf wurden virtuell Spulenanordnungen in der
Urethra und im Rektum platziert, das resultierende Magnetfeld berechnet
und entsprechend einer fuzzy-Logik optimiert.
Ergebnisse: Der Vergleich mit bekannten Magnetfeldern verschiedener
Spulenanordnungen zeigte, dass unsere Analyse einen relativen Fehler von
10-3 % aufwies. Die Optimierung zeigte, dass sich eine Anordnung von
magnetischen Spulen lediglich in der Urethra und nicht im Rektum am
besten für das Pharmakatargeting eignet.
Schlussfolgerung: Magnetische Nanopartikel bieten eine hervorragende
Möglichkeit, Chemotherapeutika gezielt an einen Tumor zu bringen und
dort freizusetzen. Mit Hilfe unseres virtuellen Prostatamodells konnte
eine optimierte Spulenanordnung mit einer hohen Targeting-Effektivität
gefunden werden. Durch Übertragung ins Tiermodell sollte die Korrektheit
des virtuellen Prostatamodells bestätigt werden.
V6. 5
Alterations in the gene expression pattern of testicular germ cell
tumors after treatment with a novel antiangiogenic compound
Nitzsche B1, Gloesenkamp C1, Schrader M2, Lein M3, Höpfner M1
1) Department of Physiology (CBF), Charité – University Medicine, Berlin, DE
2) Department of Urology (CCM), Charité – University Medicine, Berlin, DE
3) Berlin Institute for Urologic Research (CCM), Charité – University Medicine, Berlin, DE
Testicular germ cell cancer is the most common disease of young men at
the age of 20 to 40 years. Because of the generally good response to cisplatin based chemotherapy, new molecular treatment approaches have not been
well developed. However, patients with cisplatin-refractory tumors have a
very poor prognosis and at present, no standard chemotherapy exists for this
particular subgroup of patients.
As angiogenesis, driven by several growth factor receptors is known to be
essential for tumor growth and metastasis we hypothesized that targeting angiogenic growth factor receptor signaling pathways may be a promising approach for innovative treatment of testicular germ cell tumors. Using a novel
tyrosine kinase inhibitor with antiangiogenic and antipoliferative potency
identified by in silico screening in a previous study, we performed cDNAMicroarrays to further characterize the molecular events induced by the
novel inhibitor HP-14. The expression of genes involved in angiogenesis and
cancer relevant pathways like transformation and tumorigenesis was analyzed in primary endothelial cells (HUVEC) and in the testicular germ cell
tumor cell line Tera-1. In HUVEC cells HP-14 modulated the expression of
several important proangiogenic and antiangiogenic genes, such as VEGFR2, endostatin, EGF, PDGFB and AKT1. In Tera-1 cells HP-14 also modulated
angiogenic genes, but additionally a marked alteration of proteins involved in
cell cycle regulation (e.g. CDK2, CDC25A, CDKN1A) was observed, suggesting an arrest of Tera-1 cells in the G1/GO-phase.
Taken together our data show that HP-14 is an exciting new inhibitor which
merits further evaluation for targeted treatment of testicular germ cell cancer.
V6. 6
Zuverlässige Früherkennung von Prostatakarzinomen im Screening
durch 3D-FCDS-TRUS
Merkle W
Deutsche Klinik für Diagnostik (DKD), Wiesbaden, DE
Die Früherkennung von Prostatakarzinomen durch bildgebende Systeme ist
schwierig.
Die vorgestellte Technik hat sich jedoch im Screening bei normalen und erhöhten PSA-Werten über 10 Jahre hin bewährt.
Mittels der 3D-FCDS-Transrektalsonographie lassen sich mit einer Sensitivität von 0,82, einer Spezifität von 0,91 sowie einer geringen Falschnegativrate von 1,7% Tumore zuverlässig darstellen und benigne Veränderungen mit
einer Sicherheit von 95,6% trotz PSA-Erhöhung sonographisch korrekt vorhersagen, wie in einer histologisch kontrollierten, prospektiven Studie belegt
wurde (Merkle W.: UIJ 2009, April, 2(2)).
V6. 7
Erhöhte Inzidenz des Prostatakarzinoms nach Nierentransplantation
Apel H1, Walschburger-Zorn K1*, Pressmar K2, Engehausen DG1, Wullich B1
1) Urologische Klinik mit Poliklinik, Universitätsklinikum, Erlangen, DE
2) Medizinische Klinik IV, Nephrologie und Hypertensiologie,
Universitätsklinikum, Erlangen, DE
Einleitung: Die allogene Nierentransplantation ist bei dialysepflichtigen
Patienten im Stadium der terminalen Niereninsuffizienz die optimale Nie­
ren­ersatztherapie. Trotz Verbesserung der Lebensqualität und allgemeinen
Lebenserwartung im Vergleich zu Dialysepatienten ist die postoperative
Entwicklung von malignen Tumoren hierbei ein bekanntes Problem.
Der Urologe 1 · 2010 | 15
Methodik: Retrospektive Analyse anhand des eigenen Patientenkollektivs von
1882 durchgeführten Nierentransplantationen am Transplantationszentrum
Erlangen-Nürnberg hinsichtlich Inzidenz und Art von Tumorentwicklung
postoperativ im Zeitraum von 1966 bis 2005.
Ergebnisse: Von 1882 transplantierten Patienten konnte in 221 Fällen (11,7 %)
eine Karzinomentstehung nachgewiesen werden. Bei 150 Patienten handelte
es sich dabei um Nicht-Hauttumore. Unter diesen waren die urologischen
Karzinome mit 32,1 % am häufigsten, wobei das Prostatakarzinom mit
13,5 % hinter dem Nierenzellkarzinom und dem Harnblasenkarzinom bei
Männern an dritter Stelle rangiert. Danach folgten mit 31 % Malignome des
Gastrointestinaltraktes, mit 14 % gynäkologische Tumore und 10 % Tumore
des Respirationstraktes.
Schlußfolgerung: Das Risiko einer Tumorentwicklung nach Nieren­trans­
plantation ist im Vergleich zur Normalbevölkerung insgesamt 12,5-fach
erhöht. Ein erhöhtes Risiko finden wir in Übereinstimmung mit dem United
States Renal Data System (USRDS) auch für das Prostatakarzinom. Dieses
liegt bei männlichen Transplantierten 4-fach höher als bei der männlichen
Gesamtbevölkerung. Damit können immunsupprimierte Patienten als eine
Hochrisikogruppe gelten, die einer intensivierten Prostatakarzinomfrüherke
nnungsuntersuchung zugeführt werden sollten.
V6. 8
Hat die neoadjuvante Hormontherapie einen Einfluss auf die
Risikobeurteilung anhand der Prostatastanzen?
Micka B, Engehausen D, Krot D, Herzing W, Wullich B, Goebell PJ
Urologische Universitätsklinik, FAU Erlangen-Nürnberg, DE
Einleitung: Der Wert der neoadjuvanten Hormontherapie vor radi­
ka­ler Prostatektomie (RRP) wurde in zahlreichen randomisierten
Stu­­dien untersucht. Sie wird mit dem Ziel eingesetzt, die Frequenz
positiver Absetzungsränder zu erniedrigen und ein down-staging des
Ausgangsbefundes zu erreichen. Klare Daten, die eine bessere lokale Tumor­
kontrolle oder eine Senkung der Komplikationsrate belegen, fehlen jedoch.
Dass die neoadjuvante Hormontherapie zu einem down-staging des Tumors
und damit zu einer Änderung des angenommenen Risikoprofils führt, wird
immer wieder diskutiert.
Ziel war es, den Einfluss der neoadjuvanten Hormontherapie auf den staging
error anhand des Erlanger Patientenkollektivs retrospektiv zu untersuchen.
Material und Methode: In die Analyse wurden 412 Patienten nach Pro­
statektomie (1998 bis 2005) eingeschlossen: 304 Patienten erhielten prä­
operativ eine Hormontherapie. Das histopathologische Ergebnis der Stanz­
biopsie wurde mit der endgültigen Beurteilung nach RRP verglichen. Anhand
von PSA, Gleason-Score (GS) und Differenzierungsgrad (DG) wurden die
Patienten drei Risikogruppen zugeordnet (low, intermediate, high).
Ergebnisse: Eine Änderung des gradings war bei 36,2% (GS) bzw. 31% (DG)
in der neoadjuvanten Gruppe zu beobachten; in der Kontrollgruppe war bei
eine Änderung bei 17,6% (GS) bzw. 34,3% (DG) dokumentiert. Ein niedrigerer
Gleason war bei 6,9% und ein niedrigerer Differenzierungsgrad bei 5% in der
neoadjuvanten Gruppe zu beobachten; in der Kontrollgruppe war bei 6,5%
ein niedrigerer Gleason und ein niedrigerer Differenzierungsgrad bei 8,3%
eine Änderung dokumentiert. Die Zuordnung zu den Risikogruppen jedoch
führte in beiden Gruppen (neoadjuvant vs. Kontrolle) gleichermaßen zu
einer Erhöhung des prozentualen Anteils der Hochrisiko-Gruppe (27,0 auf
46,4 vs. 15,7 auf 30,6).
Schlussfolgerung: Die präoperative Zuordnung in Risikogruppen (risk
assessment) allein anhand der Prostatastanze scheint unzureichend und die
Einbeziehung weiterer Prognoseparameter für eine robustere Einschätzung
notwendig. Die neoadjuvante Hormontherapie hat daher keinen signifikanten
Einfluss auf den „risk assessment error“.
16 | Der Urologe 1 · 2010