ECO-k10 E. coli/EHEC Test

ECO-K10
E. coli/EHEC Test
Einstufiger Schnelltest für den qualitativen Nachweis von Escherichia coli (E. coli) in
menschlichem Stuhl. Nur für die professionelle in vitro Diagnostik.
verwendung
Der E. coli-Test ist ein schneller chromatographischer Immunoassay für den qualitativen
Nachweis von E. coli O157-Antigenen in menschlichen Stuhlproben als Hilfsmittel bei
der Diagnose von E. coli-Infektionen.
zusammenfassung
E. coli O157:H7 ist einer von Hunderten Stämmen des Bakteriums Escherichia coli.
Während die meisten Stämme harmlos sind, produziert dieser Stamm ein starkes Gift,
das zu einer schweren Erkrankung führen kann. E. coli O157:H7 ist in den Därmen von
gesundem Rindern, Hirschen, Ziegen und Schafen gefunden worden.
E. coli O157:H7 wurde zuerst im Jahr 1982 während eines Ausbruchs von schweren blutigen Durchfällen als Krankheitsursache erkannt. Die Ausbruchsursache waren verseuchte Hamburger. Seitdem hat rohes Rinderhack weltweit mehr Infektionen hervorgerufen
als alle anderen Nahrungsmittel.
testprinzip
Der E. coli Test ist ein qualitativer Lateralfluss-Immunoassay zum Nachweis von Escherichia coli-Antigenen in menschlichen Stuhlproben. Er ist mit einer Membran ausgestattet,
die im Bereich der Testlinien mit monoklonalen Antikörpern gegen E. coli O157-Antigene beschichtet ist. Beim Test reagiert die Probe mit den Partikeln auf dem Teststreifen,
die mit angetrockneten anti-E. coli O157-Antikörpern beschichtet sind. Die Mischung
wandert aufgrund der Kapillarwirkung die Membran hinauf. Bei einem positiven Testergebnis findet eine Reaktion zwischen den spezifischen Antikörpern auf der Membran
und dem Mischkonjugat statt und eine farbige Linie erscheint. Es erscheint stets eine
grüne Kontrolllinie zur Bestätigung, dass die Probenmenge ausreichend und der nötige
Lateralfluss gegeben war, sowie zur internen Kontrolle der Reagenzien.
vorsichtsmassnahme
• Nur für die professionelle in vitro Diagnostik.
• Nicht nach Ablauf des Verfallsdatums verwenden.
• Die Testkassette sollte bis zum Gebrauch im versiegelten Beutel verbleiben.
• Nicht bei beschädigtem Beutel verwenden.
• Folgen Sie den Regeln guter Laborpraxis: Tragen Sie Schutzkleidung, verwenden Sie
Einweghandschuhe. Essen, trinken bzw. rauchen Sie nicht bei der Versuchsdurch führung.
• Alle Proben sollten als potentiell gefährlich eingestuft und als infektiös behandelt
werden.
• Der Test sollte nach der Verwendung in einem Abfallbehälter für biogefährden den
Müll entsorgt werden.
• Der Test ist innerhalb von 2 Stunden nach Öffnen des versiegelten Beutels durch zuführen.
lagerung und haltbarkeit
lieferumfang
•Testkassette
•Gebrauchsanweisung
•Probenröhrchen mit Pufferlösung
benötigte materialien, nicht im lieferumfang
•Probenaufnahmebehälter
•Einweghandschuhe
•Stoppuhr
probennahme und vorbereitung
Nehmen Sie eine ausreichend große Stuhlprobe (1-2 g bzw. ml für eine flüssige Probe).
Stuhlproben sollten in sauberen und trockenen Behältnissen gesammelt werden (ohne
Konservierungsstoffe oder Transportmedien). Die Proben können vor dem Test 1-2 Tage
im Kühlschrank gelagert werden (2-4 ºC/36-40 ºF). Für eine längere Lagerung muss die
Probe bei -20 °C/-4 °F eingefroren werden. In diesem Fall muss die Probe vor dem Test
komplett aufgetaut und auf Zimmertemperatur gebracht werden.
Um mit einer Anreicherungskultur zu testen, wird die Stuhlprobe in TSB-Medium über
Nacht angeimpft und auf einem Schüttler bei 37 °C inkubiert. Für den Test wird die
Anreicherungskultur als Stuhlprobe verwendet.
Umgang mit den gesammelten Stuhlproben
Verwenden Sie für jede Probe ein separates Teströhrchen.
Schrauben
und führen
Stuhlprobe
entnehmen
Sie die Spitze des Röhrchens ab
Sie das Stäbchen zweimal in die
ein, um eine üppige Menge zu
(200-300 mg).
Entnehmen Sie bei flüssigen Stuhlproben
die Probe mithilfe einer Pipette und geben
Sie 200-300 µl ins Teströhrchen mit der
Pufferlösung.
Verschließen Sie das Röhrchen, in dem sich
Pufferlösung und Stuhlprobe befinden.
Schütteln Sie das Teströhrchen, um
eine gute Vermischung der Probe zu
erreichen.
In der versiegelten Verpackung entweder gekühlt oder bei Zimmertemperatur lagern
(2-30 °C/36-86 °F). Der Test ist bis zum Verfallsdatum, das auf dem versiegelten Beutel
aufgedruckt ist, verwendbar. Die Testkassette muss bis zum Gebrauch im versiegelten
Beutel verbleiben. Nicht einfrieren.
Testdurchführung
Bringen Sie die Testkassetten, Stuhlproben und Pufferlösungen vor der Testdurchführung
auf Zimmertemperatur (15-30 ºC/59-86 ºF). Öffnen Sie die Beutel erst dann, wenn Sie
zur Testdurchführung bereit sind.
1
Entnehmen Sie die E. Coli-Testkassette dem Folienbeutel und verwenden Sie
diesen umgehend.
2
Schütteln Sie das Probenröhrchen, um eine
gute Vermischung der Probe zu erreichen.
Brechen Sie die Spitze des Probenröhrchens ab.
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3
Verwenden Sie für jede Probe einen separaten Test.
zu erwartende vorfälle
Escherichia coli O157:H7 ist eine der Hauptursachen für Lebensmittelerkrankungen.
Nach einer Schätzung aus dem Jahr 1999 kommt es in den USA jährlich zu 73.000
Infektionen und 61 Todesfällen.
Geben Sie genau 4 Tropfen bzw. 100 µl
in die Probenöffnung (S). Starten Sie die
Stoppuhr.
Leistungsmerkmale
4
Lesen Sie das Ergebnis 10 Minuten nach Zugabe der Probe ab.
12
3
9
Sensitivität
Der Nachweis von E. coli O157:H7 zeigte eine 100-prozentige Übereinstimmung bei
der Empfindlichkeit.
6
Interpretation der Ergebnisse
negativ
Es erscheint lediglich eine grüne Linie im Kontrollbereich „C“ (Kontrolllinie).
positiv
Im
Ergebnisfenster
erscheinen
zwei Linien, eine im Ergebnisbereich
(rote Testlinie bei „T“) und eine im Kontrollbereich (grüne Testlinie bei „C“).
ungültig
Es erscheint keine grüne Kontrolllinie ungeachtet der Anzeige einer
roten Testlinie.
Spezifität
Der Nachweis von E. coli O157:H7 zeigte eine 85-prozentige Übereinstimmung bei
der Spezifizität.
PPV lag bei 70 %, NPV bei 100 %.
Genauigkeit
Der Nachweis von E. coli O157:H7 zeigte eine 94-prozentige Übereinstimmung bei
der Genauigkeit.
Kreuzreaktivität
Es wurde eine Evaluierung zur Bestimmung der Kreuzreaktivität der E. coli-Testkassette
durchgeführt. Es besteht keine Kreuzreaktivität mit üblichen Magen-Darm-Erregern oder
anderen Organismen und Substanzen, die gelegentlich im Stuhl zu finden sind:
- Rotavirus
- Adenovirus
- Campylobacter
- Giardia lamblia
literaturhinweise
1.Rangel, J. M., Sparling, P. H., Crowe, C., Griffin, P. M. & Swerdlow, D. L.
2005 Epidemiology of Escherichia coli O157:H7 outbreaks, United States,
1982–2002. Emerg. Infect. Dis. 11, 603–609.
2.Griffin, P.M. “The Epidemiology of infections caused by Escherichia coli
O157:H7, other enterohemorrhagic E. coli, and the associated haemolytic
uremic syndrome”. Epidemiol. Rev , 1991, 13:60-98.
Hinweis: Unzureichendes Probenvolumen, unkorrekte Testdurchführung oder Verfall der
Reagenzien sind die Hauptgründe für ein Ausbleiben der grünen Linie. Überprüfen Sie
die Testdurchführung und wiederholen Sie den Test mit einer neuen Testkassette. Wenn
das Problem fortbesteht, setzen Sie den Test nicht mehr ein und wenden Sie sich zunächst
an Ihren Händler vor Ort.
Hinweis zur Ergebnisauswertung
Die Intensität der roten Linie im Ergebnisbereich (T) variiert in Abhängigkeit von der
Antigen-Konzentration in der Probe. Mit diesem qualitativen Test kann jedoch weder der
quantitative Wert, noch die Zunahme der Antigene bestimmt werden.
qualitätskontrolle
Der Test ist mit einer internen Verfahrenskontrolle ausgestattet:
• Das Erscheinen einer grünen Linie im Kontrollbereich (C). Hiermit werden die
ausreichende Probenmenge und die korrekte Durchführung bestätigt.
einschränkungen
1.Der E. coli Test zeigt lediglich das Vorhandensein von Escherichia coli in der
Probe an (qualitativer Nachweis) und ist ausschließlich für den Nachweis von
E. coli O157-Antigenen in Stuhlproben bestimmt. Mit diesem Test kann jedoch
weder der quantitative Wert, noch die Zunahme der E. coli Antigen-Konzentration
bestimmt werden.
2.Ein zu großes Probenvolumen kann zu falschen Ergebnissen führen (braune
Linien erscheinen). Verdünnen Sie die Probe und wiederholen Sie den Test.
3.Einige Stuhlproben können die Intensität der Kontrolllinie mindern.
4.Wenn die klinischen Symptome bei negativem Testergebnis fortbestehen, sind
zusätzliche Teste mit anderen klinischen Methoden empfohlen. Ein negatives
Testergebnis schließt zu keiner Zeit die Möglichkeit einer vorliegenden Infektion
mit E. coli aus.
5.Dieser Test deutet auf die Infektion mit E. coli hin. Alle Ergebnisse müssen
zusammen mit anderen dem behandelnden Arzt vorliegenden klinischen Daten
und Laborbefunden interpretiert werden.
Symbolerläuterungen
n
Inhalt ausreichend für <n> Teste
Nur für in-Vitro-diagnostische Zwecke
Chargenbezeichnung
Nur einmal verwenden
Verwendbar bis
Gebrauchsanweisung beachten
Lagertemperatur
Rev.: 01.09.2012 (JM) ersetzt 08.05.2012 (JM)
Hersteller
Diagnostik Nord GmbH
Mecklenburgstraße 97
19053 Schwerin
Germany
Telefon:
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