Escherichia coli- agglutinierende Seren

Escherichia coliagglutinierende Seren
ZA01/R30954901..................................... 2 ml
ZA02/R30955001..................................... 2 ml
ZA03/R30955101..................................... 2 ml
DE
1. VERWENDUNGSZWECK
Escherichia coli-agglutinierende Seren sind für die Verwendung
in Agglutinationstests zur vorläufigen Identifikation der E. coli
Serotypen bestimmt. Diese E. coli Serotypen werden gewöhnlich
mit einer infantilen Gastroenteritis assoziiert.
Da die Enterobacteriaceae jedoch weitgehend dieselben
antigenen Komponenten besitzen, ist es wichtig, bei der
serologischen Identifizierung durch biochemische Tests zu
bestätigen, dass der Organismus der Spezies E. coli angehört.
2. ZUSAMMENFASSUNG UND ERLÄUTERUNG DES TESTS
Die meisten pathogenen Escherichia coli-Stämme bei einer
infantilen Gastroenteritis weisen die klassischen biochemischen
fäkalen Reaktionen auf (siehe Tabelle 1)1,2. (Es können einige
E. coli-Stämme auftreten, die keine Laktose fermentieren,
anaerogen oder Indol-negativ sind; diese Stämme sollten nicht
von der serologischen Analyse ausgeschlossen werden.)
Objektträger- als auch für den Röhrchenagglutinationstest. Eine
positive Reaktion auf dem Objektträger mit einer lebenden
Kultur kann auf das Vorliegen von K-Antigen auf der Oberfläche
des Organismus zurückzuführen sein, und die O-Antigene sollten
durch einen Röhrchenagglutinationstest mit einer O-Suspension
bestätigt werden, die durch 1-stündiges Erhitzen einer Suspension
der lebenden Kultur bei 100°C hergestellt wurde.
4. REAGENZIEN
INHALT DES KITS
E. coli-agglutinierende Seren
ZA01/R30954901 E. coli Polyvalent 2
O26:K60 (B6), O55:K59 (B5), O111:K58
(B4), O119:K69 (B14), O126:K71 (B16)
1 Tropffläschchen (2 ml)
ZA02/R30955001 E. coli Polyvalent 3
O86:K61 (B7), O114:K90 (B), O125:K70
(B15), O127:K63 (B8), O128:K67 (B12)
ZA03/R30955101 E. coli Polyvalent
4 O44:K74 (L), O112:K66 (B11),
O124:K72 (B17), O142:K86 (B)
BESCHREIBUNG,
VORBEREITUNG
LAGERUNGSBEDINGUNGEN
UND
EMPFOHLENE
Siehe auch Vorsichtsmaßnahmen
Tabelle 1
Glukose
+
Laktose
+
Mannitol
+
Inositol
–
Indol
H2S
Urease
+
–
–
Inulin
–
SimmonsCitrat
–
Adonitol Cellobiose
–
–
Methylrot
+
VogesProskauer
–
Die Differenzierung innerhalb der Spezies erfolgt auf serologischer
Basis, und die als Krankheitserreger identifizierten Stämme
fallen in eine begrenzte Anzahl an Serotypen. Sie werden auf
der Basis von zwei Antigentypen unterschieden, dem O-Antigen
(somatisch) und dem K-Antigen (Oberflächenantigen).
Die K-Antigene der meisten enteropathogenen E. coliStämme gehören der Untergruppe B an. Sie kommen auf der
Ummantelung und auf den Kapseln vor und werden durch
1-stündiges Erhitzen bei 100°C inaktiviert. Bei dieser Behandlung
bleiben die hitzebeständigen O-Antigene intakt. Escherichia
coli-agglutinierende Seren enthalten Agglutinine sowohl für
die O- als auch für die K-Antigene. Sie wurden absorbiert, um
Kreuzreaktionen mit anderen häufig vorkommenden E. coli
Serotypen auszuschließen.
3. GRUNDLAGEN DES VERFAHRENS
Serologische Tests basieren auf der Tatsache, dass Antikörper im
Serum, die sich als Reaktion auf Exposition gegenüber bakteriellen
Antigenen gebildet haben, mit Bakterien agglutinieren, die Träger
homologer Antigene sind.
Es wird empfohlen, die Kulturen zunächst mit polyvalenten Seren
zu testen, die zur Verwendung in Objektträgeragglutinationstests
bestimmt sind. Es sollten sowohl das zusammenfließende
Wachstum als auch ausgewählte Kolonien der Primärplatte
untersucht werden. Liefert die Verwendung von polyvalenten
Seren einen Hinweis auf das Vorliegen von pathogenen Typen,
kann mit den monovalenten Seren eine weitere Identifizierung
vorgenommen werden. Diese eignen sich sowohl für den
Die Seren müssen bei 2 - 8°C gelagert werden. Unter diesen
Lagerungsbedingungen bleibt ihre Wirkung mindestens bis dem
Fläschchenetikett angegebenen Datum erhalten.
E. coli-agglutinierende Seren
Escherichia coli-agglutinierende Seren
werden aus Kaninchen gewonnen und mit
0,5% Phenol konserviert. Die Seren für
die folgenden enteropathogenen Typen
werden in Fläschchen mit Sauger und Tropfer
geliefert. Jedes Fläschchen enthält 2 ml
Flüssigkeit und wird gebrauchsfertig geliefert.
Während der Lagerung können Seren
leicht trüb werden. Dies weist nicht
unbedingt auf einen Zerfall des Reagenzes
hin und beeinträchtigt die Ergebnisse in
der Regel nicht, die Seren sollten jedoch
vor dem Gebrauch durch Zentrifugieren
oder Membranfiltration (0,45 µm) geklärt
werden. Eine starke Trübung weist auf eine
Kontamination hin. Solche Seren sollten
verworfen werden.
5. VORSICHTSMASSNAHMEN
In-vitro-Diagnostikum.
Nur zur Verwendung durch Fachpersonal.
Hinweise auf potenziell gesundheitsgefährdende Substanzen
entnehmen Sie bitte den Material-Sicherheitsdatenblättern und
Produktetiketten.
SICHERHEITSVORKEHRUNGEN
TESTDURCHFÜHRUNG
1.
Agglutinationstest auf dem Objektträger
Schritt 1. 2 separate Tropfen (je 40 µl) Kochsalzlösung
auf einen Glasobjektträger geben. Teile der zu
testenden Kultur mit einer Impföse in jedem
Tropfen Kochsalzlösung emulgieren, um eine
homogene dichte Suspension zu erhalten.
Schritt 2.
Zu der einen Suspension als Kontrolle 1 Tropfen
(40 µl) Kochsalzlösung geben und mischen. Zu der
anderen Suspension 1 Tropfen (40 µl) unverdünntes
Antiserum geben und mischen.
Schritt 3.
Den Objektträger 1 Minute lang schwenken und
beobachten, ob es zu einer Agglutination kommt.
Diese ist leichter erkennbar, wenn der Objektträger
vor einem dunklen Hintergrund mit indirekter
Beleuchtung betrachtet wird. Den gebrauchten
Objektträger sicher desinfizieren und entsorgen.
Alle Bakterien gemäß den geltenden gesetzlichen
Bestimmungen handhaben.
2.
Wiederverwendbare Geräte müssen nach Gebrauch durch
geeignete Verfahren sterilisiert werden, vorzugsweise durch
Autoklavieren bei 121°C, mindestens 15 Minuten lang.
Einwegmaterialien müssen autoklaviert oder verbrannt
werden.
3.
Verschüttetes oder verspritztes potenziell infektiöses
Material muss sofort mit saugfähigen Papiertüchern entfernt
und die kontaminierten Flächen mit einem herkömmlichen
bakterien-abtötenden Desinfektionsmittel oder 70%igem
Alkohol gereinigt werden. Das zum Entfernen von Spritzern
verwendete Material (auch Handschuhe) muss als potenziell
infektiöser Abfall entsorgt werden.
4.
Nicht mit dem Mund pipettieren. Beim Umgang mit Proben
und während der Testdurchführung Einweghandschuhe und
Schutzbrille tragen. Nach Beendigung des Verfahrens die
Hände gründlich waschen.
5.
Diese Reagenzien enthalten Phenol. Trotz der niedrigen
Phenol-Konzentration ist die Substanz bei Verschlucken und
Berührung mit der Haut giftig. Verschlucken der Reagenzien
vermeiden. Kommen die Augen oder die Haut mit einem
dieser Reagenzien in Berührung, sofort gründlich mit viel
Wasser abspülen.
6.
In Übereinstimmung mit den GLP-Richtlinien gelten alle
Proben und Reagenzien als potenziell infektiös und müssen
mit äußerster Vorsicht gehandhabt werden.
WICHTIGE HINWEISE ZUR HANDHABUNG
8. ERGEBNISSE
Agglutination auf dem Objektträger
Die Agglutination sollte stark und innerhalb einer Minute deutlich
sichtbar sein. In der Kontrollsuspension sollte es zu keiner
sichtbaren Agglutination kommen. Sollte in der Kontrolle eine
Agglutination erkennbar sein, ist die Suspension nicht für die
Analyse nach diesem Verfahren geeignet.
QUALITÄTSKONTROLLE
Es wird empfohlen, das Produkt während seiner gesamten
Anwendung mit bekannten positiven und negativen Kulturen zu
testen.
Die Antiseren nicht über das angegebene Verfallsdatum
hinaus verwenden. Eine mikrobiologische Kontamination
der Antiseren ist unbedingt zu vermeiden, da dies zu falschen
Ergebnissen führen und die Haltbarkeit des Produkts
verringern kann.
2.
Halten Sie sich bitte genau an das Testverfahren sowie an
die Inkubationszeit und -temperaturen.
3.
Nach dem Gebrauch die Seren wieder bei der empfohlenen
Temperatur (2 - 8°C) lagern.
4.
Die polyvalenten Antiseren eignen sich nur für die Analyse
mit Objektträgeragglutinationstests.
6. PROBENENTNAHME, TRANSPORT UND LAGERUNG
Detaillierte Informationen zur Entnahme und Vorbereitung der
Proben entnehmen Sie bitte einem Standard-Lehrbuch. Die
Verwendung frischer Kulturen auf nicht selektiven Nährböden, z.
B. Nähragar, wird empfohlen.
Für positive Kontrollorganismen sollten homologe Kulturen
verwendet werden. Für eine negative Kontrollkultur Hafnia
alvei verwenden. Die Kulturen können von anerkannten
Stammsammlungen wie NCTC oder ATCC bezogen werden.
7. TESTVERFAHREN
MITGELIEFERTE MATERIALIEN
10. ERWARTETE ERGEBNISSE
Deutliche Agglutination bei vorhandenen homologen Kulturen.
Siehe Inhalt des Kits.
11. SPEZIFISCHE LEISTUNGSDATEN
Siehe Interpretation der Ergebnisse
1.
BENÖTIGTE, JEDOCH NICHT MITGELIEFERTE MATERIALIEN
1.
2.
3.
4.
5.
6.
0,85%ige Kochsalzlösung.
Glasobjektträger.
Impföse und Bunsenbrenner.
Lichtquelle vor dunklem Hintergrund.
Uhr.
Pipetten.
INTERPRETATION DER ERGEBNISSE
Agglutination auf dem Objektträger
Bei dem Objektträgerverfahren kann es insbesondere mit
Bakterien von selektiven Medien zu einer nicht spezifischen
Agglutination kommen, die sich optisch von einer spezifischen
Agglutination unterscheidet. Diese Agglutination ist in der Regel
fein und tritt langsam ein.
9. GRENZEN DES VERFAHRENS
Die Seren sind für andere, häufig vorkommende E. coli Serotypen
spezifisch. Da die Enterobacteriaceae jedoch weitgehend
dieselben antigenen Komponenten besitzen, ist es wichtig, jedes
Isolat sowohl biochemisch als auch serologisch zu bestätigen.
12. LITERATUR
1.
International Enterobacteriaceae Subcommittee Reports (1958), Int.
Bull. bact. Nomencl. Taxon., 8, 25.
2.
E dwards, P.R. and Ewing, W.H. (1972). Identification
Enterobacteriaceae, 3rd Ed. Minneapolis, Burgess Publishing Co.
of
13. VERPACKUNG
ZA01/R30954901..................................... 2 ml
ZA02/R30955001..................................... 2 ml
ZA03/R30955101..................................... 2 ml
14. Legende
Katalognummer
In-vitro-Diagnostikum
In der Packungsbeilage (IFU) nachlesen
Temperatureinschränkungen (Lagertemperatur)
N
Ausreichend für "n" Ansätze
Enthält Naturgummi latex
Chargencode (Lotnummer)
Verwendbar bis“ (Verfallsdatum)
Hergestellt von
IFU X7814B überarbeitet November 2015
Remel Europe Ltd.
Clipper Boulevard West, Crossways
Dartford, Kent, DA2 6PT
UK
Bei technischen Fragen wenden Sie sich bitte an Ihren
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