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ÖNORM EN ISO 9308-1 Ausgabe: 2001-06-01 Normengruppen C, M und U2 Ident (IDT) mit ISO 9308-1:2000 (Übersetzung) Ident (IDT) mit EN ISO 9308-1:2000 ICS 13.060.30; 13.060.70 Wasserbeschaffenheit Nachweis und Zählung von Escherichia coli und coliformen Bakterien Teil 1: Membranfiltrationsverfahren (ISO 9308-1:2000) Water quality - Detection and enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria Part 1: Membrane filtration method (ISO 9308-1:2000) Qualité de l'eau - Recherche et dénombrement des Escherichia coli et des bactéries coliformes - Partie 1: Méthode par filtration sur membrane (ISO 9308-1:2000) AS+ Shop 18.05.2017 Zurückziehung: 2009 06 01. Aktuelles Dokument im Austrian Standards Webshop anzeigen Die Europäische Norm EN ISO 9308-1 hat den Status einer Österreichischen Norm. Die ÖNORM EN ISO 9308-1 besteht aus • diesem nationalen Deckblatt sowie • der offiziellen deutschsprachigen Fassung der EN ISO 9308-1:2000. Fortsetzung EN ISO 9308-1 Seiten 1 bis 13 Medieninhaber und Hersteller: Österreichisches Normungsinstitut, A-1021 Wien Copyright © ON - 2001. Alle Rechte vorbehalten; Nachdruck oder Vervielfältigung, Aufnahme auf oder in sonstige Medien oder Datenträger nur mit Zustimmung des ON gestattet! Verkauf von in- und ausländischen Normen und technischen Regelwerken durch: ON Österreichisches Normungsinstitut, Heinestraße 38, Postfach 130, A-1021 Wien Tel.: (+43 1) 213 00-805, Fax: (+43 1) 213 00-818, E-Mail: [email protected], Internet: http://www.on-norm.at Fachnormenausschuss 140 Wassergüte und -aufbereitung Preisgruppe 14 AS+ Shop 18.05.2017 Zurückziehung: 2009 06 01. Aktuelles Dokument im Austrian Standards Webshop anzeigen EUROPÄISCHE NORM EN ISO 9308-1 EUROPEAN STANDARD NORME EUROPÉENNE September 2000 ICS 13.060.30 Deutsche Fassung Wasserbeschaffenheit - Nachweis und Zählung von Escherichia coli und coliformen Bakterien - Teil 1: Membranfiltrationsverfahren (ISO 9308-1:2000) Water quality - Detection and enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria - Part 1: Membrane filtration method (ISO 9308-1:2000) Qualité de l'eau - Recherche et dénombrement des Escherichia coli et des bactéries coliformes - Partie 1: Méthode par filtration sur membrane (ISO 9308-1:2000) Diese Europäische Norm wurde vom CEN am 15.September 2000 angenommen. Die CEN-Mitglieder sind gehalten, die CEN/CENELEC-Geschäftsordnung zu erfüllen, in der die Bedingungen festgelegt sind, unter denen dieser Europäischen Norm ohne jede Änderung der Status einer nationalen Norm zu geben ist. Auf dem letzen Stand befindliche Listen dieser nationalen Normen mit ihren bibliographischen Angaben sind beim Management-Zentrum oder bei jedem CEN-Mitglied auf Anfrage erhältlich. Diese Europäische Norm besteht in drei offiziellen Fassungen (Deutsch, Englisch, Französisch). Eine Fassung in einer anderen Sprache, die von einem CEN-Mitglied in eigener Verantwortung durch Übersetzung in seine Landessprache gemacht und dem ManagementZentrum mitgeteilt worden ist, hat den gleichen Status wie die offiziellen Fassungen. AS+ Shop 18.05.2017 Zurückziehung: 2009 06 01. Aktuelles Dokument im Austrian Standards Webshop anzeigen CEN-Mitglieder sind die nationalen Normungsinstitute von Belgien, Dänemark, Deutschland, Finnland, Frankreich, Griechenland, Irland, Island, Italien, Luxemburg, Niederlande, Norwegen, Österreich, Portugal, Schweden, Schweiz, Spanien, der Tschechischen Republik und dem Vereinigten Königreich. EUROPÄISCHES KOMITEE FÜR NORMUNG EUROPEAN COMMITTEE FOR STANDARDIZATION COMITÉ EUROPÉEN DE NORMALISATION Management-Zentrum: rue de Stassart, 36 © 2000 CEN Alle Rechte der Verwertung, gleich in welcher Form und in welchem Verfahren, sind weltweit den nationalen Mitgliedern von CEN vorbehalten. B-1050 Brüssel Ref. Nr. EN ISO 9308-1:2000 D Seite 2 EN ISO 9308-1:2000 Inhalt Vorwort . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 1 Anwendungsbereich . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4 2 Normative Verweisungen . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4 3 Begriffe . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4 4 Grundlage des Verfahrens . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 5 Geräte und Glasgefäße . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 6 Kulturmedien und Reagenzien . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6 7 Probenahme . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6 8 Durchführung . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6 9 Angabe der Ergebnisse . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7 10 Analysenbericht . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7 11 Qualitätssicherung . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7 Anhang A (informativ) Weitere mikrobiologische Informationen zu coliformen Bakterien . . . . . . . . . . . 8 Anhang B (normativ) Kulturmedien und Reagenzien . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9 Literaturhinweise . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12 AS+ Shop 18.05.2017 Zurückziehung: 2009 06 01. Aktuelles Dokument im Austrian Standards Webshop anzeigen Anhang ZA (normativ) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13 Seite 3 EN ISO 9308-1:2000 CORRECTED 2001-03-28 Vorwort Der Text der Internationalen Norm ISO 9308-1:2000 wurde vom Technischen Komitee ISO/TC 147 "Water quality" in Zusammenarbeit mit dem Technischen Komitee CEN/TC 230 "Wasseranalytik" erarbeitet, dessen Sekretariat vom DIN gehalten wird. Diese Europäische Norm muß den Status einer nationalen Norm erhalten, entweder durch Veröffentlichung eines identischen Textes oder durch Anerkennung bis März 2001, und etwaige entgegenstehende nationale Normen müssen bis März 2001 zurückgezogen werden. Entsprechend der CEN/CENELEC-Geschäftsordnung sind die nationalen Normungsinstitute der folgenden Länder gehalten, diese Europäische Norm zu übernehmen: Belgien, Dänemark, Deutschland, Finnland, Frankreich, Griechenland, Irland, Island, Italien, Luxemburg, Niederlande, Norwegen, Österreich, Portugal, Schweden, Schweiz, Spanien, die Tschechische Republik und das Vereinigte Königreich. Anerkennungsnotiz Der Text der Internationalen Norm ISO 9308-1:2000 wurde von CEN als Europäische Norm ohne irgendeine Abänderung genehmigt. AS+ Shop 18.05.2017 Zurückziehung: 2009 06 01. Aktuelles Dokument im Austrian Standards Webshop anzeigen ANMERKUNG: Die normativen Verweisungen auf Internationale Normen sind im Anhang ZA (normativ) aufgeführt. Seite 4 EN ISO 9308-1:2000 Einleitung Vorkommen und Ausmaß fäkaler Verunreinigung sind wichtige Faktoren bei der Einschätzung der Wasserqualität und des Risikos einer Infektion für den Menschen. Eine Untersuchung von Wasserproben auf Escherichia coli, die üblicherweise im menschlichen Darm und im Darm von Warmblütern vorkommen, gibt einen Hinweis auf eine solche Verschmutzung. Eine Untersuchung auf coliforme Bakterien kann schwieriger zu interpretieren sein, da einige coliforme Bakterien im Boden und im Oberflächenwasser leben und nicht ausschließlich im Darm. Deshalb kann das Vorkommen von coliformen Bakterien, auch wenn es kein Beweis für eine fäkale Verunreinigung ist, ein Hinweis auf Fehler in der Wasseraufbereitung und -verteilung sein. Die Identifizierung der isolierten Stämme kann manchmal einen Hinweis auf ihren Ursprung liefern. 1 Anwendungsbereich Dieser Teil von ISO 9308 legt ein Referenzverfahren (Standardtest) für den Nachweis und die Zählung von Escherichia coli und coliformen Bakterien in Wasser für den menschlichen Gebrauch fest. Der Standardtest basiert auf Membranfiltration, einer anschließenden Subkultur auf einem Selektivagar und der Berechnung der Anzahl der gesuchten Organismen in der Probe. Der Standardtest hat eine geringe Selektivität und erlaubt den Nachweis geschädigter Bakterien. Aufgrund der geringen Selektivität kann sich Begleitwachstum störend auf die verlässliche Auszählung von coliformen Bakterien und E.coli auswirken, wie in einigen Trinkwässern, z. B. aus Flachbrunnen, die nicht desinfiziert wurden und ein hohes Begleitwachstum zeigen. Das Verfahren ist daher besonders für desinfiziertes Wasser und andere Trinkwässer mit niedrigen Bakterienzahlen geeignet. Dieser Teil von ISO 9308 beinhaltet ein schnelles Verfahren (Schnelltest) für den Nachweis ausschließlich von E.coli innerhalb von 24 h. Dies kann in speziellen Fällen nützlich sein, wenn eine kurzfristige Information benötigt wird. Der Schnelltest basiert auf der Membranfiltration, einer Subkultur unter selektiven Bedingungen und der Berechnung der Anzahl von E.coli in der Probe. Die in diesem Teil der ISO 9308 beschriebenen Standard- und Schnelltests können auch bei anderen Wässern angewandt werden, vorausgesetzt, dass supendierte Stoffe oder Begleitflora die Filtration, die Kultur und das Zählen nicht stören. AS+ Shop 18.05.2017 Zurückziehung: 2009 06 01. Aktuelles Dokument im Austrian Standards Webshop anzeigen 2 Normative Verweisungen Die folgenden normativen Dokumente enthalten Festlegungen, die durch Bezugnahme in diesem Text Bestandteil der vorliegenden Internationalen Norm sind. Zum Zeitpunkt der Veröffentlichung dieser Internationalen Norm waren die angegebenen Ausgaben gültig. Alle normativen Dokumente unterliegen der Überarbeitung. Vertragspartner, deren Vereinbarungen auf dieser Internationalen Norm basieren, werden gebeten, die Möglichkeit zu prüfen, ob die jeweils neuesten Ausgaben der im folgenden genannten Normen angewendet werden können. Die Mitglieder von IEC und ISO führen Verzeichnisse der gegenwärtig gültigen Internationalen Normen. ISO/IEC Guide 2, Standardization and related activities – General vocabulary. ISO 3696 : 1987, Water for analytical laboratory use – Specification and test methods. ISO 5667-1 : 1980, Water quality – Sampling – Part 1: Guidance on the design of sampling programmes. ISO 5667-2 : 1991, Water quality – Sampling – Part 2: Guidance on sampling techniques. ISO 5667-3 : 1994, Water quality – Sampling – Part 3: Guidance on the preservation and handling of samples. ISO 6887-1 : 1999, Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination – Part 1: General rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions. ISO 8199 : 1988, Water Quality – General guide to the enumeration of micro-organisms by culture. 3 Begriffe Für die Anwendung dieses Teils von ISO 9308 gelten die Begriffe nach ISO/IEC Guide 2 und die folgenden: 3.1 Lactose-positive Bakterien im Standardverfahren Bakterien, die unter aeroben Bedingungen auf einem selektiven und differentialdiagnostischen Lactose-Kulturmedium innerhalb von (21 ± 3) h bei (36 ± 2) °C unter Bildung von Säure Kolonien bilden. Seite 5 EN ISO 9308-1:2000 3.2 Coliforme Bakterien im Standardverfahren Lactose-positive Bakterien wie in 3.1 beschrieben, die Oxidase-negativ sind. 3.3 Escherichia coli im Standardverfahren Coliforme Bakterien wie in 3.2 beschrieben, die zusätzlich innerhalb von (21 ± 3) h bei (44 ± 0,5) °C Indol aus Tryptophan bilden. 3.4 Escherichia coli im Schnellverfahren Galleresistente Bakterien, die in der Lage sind, in (21 ± 3) h bei (44 ± 0,5) °C Indol aus Tryptophan zu bilden. 4 Grundlage des Verfahrens 4.1 Allgemeine Beschreibung des Verfahrens Das Verfahren basiert auf der Membranfiltration und besteht aus zwei Teilen, dem Standardtest als Referenzverfahren und dem optionalen Schnelltest, die parallel durchgeführt werden können. Der Standardtest beinhaltet die Bebrütung der Membran auf einem selektiven Medium mit nachfolgender weiterer biochemischer Charakterisierung der typischen Kolonien und führt zum Nachweis und zur Zählung coliformer Bakterien und E.coli innerhalb von 2 d bis 3 d. Der Schnelltest besteht aus zwei Bebrütungsschritten und erlaubt den Nachweis und die Zählung von E.coli innerhalb von (21 ± 3) h. Wenn beide Verfahren parallel durchgeführt werden, ist das Endergebnis für E.coli das höhere der beiden. 4.2 Filtration und Bebrütung Die zu prüfenden Probenvolumina durch Membranen filtrieren, die die Bakterien zurückhalten. Eine Membran anschließend auf ein selektives Lactose-Agar-Medium legen, das bei (36 ± 2) °C für (21 ± 3) h bebrütet wird (Standardtest) und eine weitere Membran für den Schnelltest auf ein casein (tryptisch verdaut)-haltiges Agarmedium legen, bei (36 ± 2) °C 4 h bis 5 h bebrüten und anschließend auf einem casein (tryptisch verdaut)- und gallensalzhaltigen Agarmedium bei (44 ± 0,5) °C weitere 19 h bis 20 h bebrüten. 4.3 Auswertung und Bestätigung, Standardtest AS+ Shop 18.05.2017 Zurückziehung: 2009 06 01. Aktuelles Dokument im Austrian Standards Webshop anzeigen Die typischen Kolonien auf der Membran als Lactose-positive Bakterien zählen. Von repräsentativen Kolonien coliformer Bakterien und E. coli eine Subkultur für die Bestätigungstests: Oxidase- und Indolbildung anlegen. Die Anzahl der Lactose-positiven coliformen Bakterien und E. coli, die wahrscheinlich in 100 ml der Probe enthalten ist, berechnen. 4.4 Auswertung und Bestätigung, Schnelltest Die Kolonien auf der Membran, die in der Lage sind, Indol aus Tryptophan zu bilden, das im Agar-Medium enthalten ist, als E. coli zählen,. Die Anzahl der E.coli, die wahrscheinlich in 100 ml der Probe vorhanden ist, berechnen. 5 Geräte und Glasgefäße Übliche Ausrüstung für mikrobiologische Laboratorien und besonders: 5.1 Gerät zur Sterilisation mit Dampf (Autoklav) Nicht steril gelieferte Geräte und Glasgefäße müssen nach ISO 8199 sterilisiert werden. 5.2 Wasserbad und/oder Brutschrank, auf (36 ± 2) °C thermostatisierbar. 5.3 Wasserbad und/oder Brutschrank, auf (44 ± 0,5) °C thermostatisierbar. ANMERKUNGFür den Schnelltest darf anstelle der Brutschränke nach 5.2 und 5.3 ein auf zwei Temperaturen (36 ± 2) °C und (44 ± 0,5) °C programmierbarer Brutschrank benutzt werden. 5.4 pH-Messgerät, mit einer Fehlergrenze von ± 0,1. 5.5 Ausrüstung für Membranfiltration, nach ISO 8199. 5.6 Membranfilter, bestehend aus Zelluloseestern, üblicherweise etwa 47 mm oder 50 mm im Durchmesser, mit Filtrationscharakteristiken entsprechend einem mittleren nominalen Porendurchmesser von 0,45 µm und vorzugsweise mit Gittern.
