Der EBV LINE - Sekisui Diagnostics
Werbung
Der EBV LINE Für eine klare Differenzierung mit Doppel-Cut-Off Mit * DCO tik nos Diag here durch ff ic S G * im Ig el-Cut-O p Dop Das Epstein Barr Virus (EBV) wurde 1964 in London von M.A. Epstein und Y.-M. Barr entdeckt. Es gehört zur Familie der Herpesviridae und ist weltweit verbreitet. Das Epstein Barr Virus ist der Erreger der Infektiösen Mononukleose und der seltenen chronisch aktiven EBV Infektion. Außerdem wird angenommen, daß EBV auch als Kofaktor an der Entstehung bösartiger Tumore wie dem BurkittLymphom in Afrika und dem Nasopharynx-Karzinom in Südchina beteiligt ist. Die Durchseuchungsrate liegt bei Erwachsenen zwischen 90 - 95%. Die Infektion mit EBV verläuft abhängig vom Alter des Patienten sehr unterschiedlich. Im frühen Kindesalter verläuft sie meistens inapparent, kann aber bei jungen Erwachsenen in bis zu 50% der Fälle das Krankheitsbild einer Infektiösen Mononukleose zeigen. Wichtig ist die EBV Serologie besonders in der differentialdiagnostischen Abgrenzung gegenüber Erkrankungen ähnlicher Symptomatik aber anderer Genese. Mit nur 2 Blicken erfassen Sie > 95% Ihrer Ergebnisse [Ak-Titer] Typische Ak-Kinetik nach EBV-Infektion VCA gp125 IgG EBNA 1 IgG VCA p18 IgG VCA IgM EA-D IgG Primärinfektion abgelaufene Infektion Zeit Primärinfektion: abgelaufene Infektion: VCA-IgM positiv EBNA1-IgG positiv In den klassischen Fällen (ca. 95%) der EBV Routine-Diagnostik lässt sich die Diagnose einfach stellen: EBNA1-IgG positiv => VCA-IgM positiv => abgelaufene Infektion Primärinfektion Auf der nebenstehenden Graphik ist ein typischer Titerverlauf einer EBV-Infektion dargestellt. Etwa zwei Wochen nach der Infektion beginnt die Produktion von anti-VCA IgM-, anti-VCA gp125-IgGund etwas später von anti-Early-IgG-Antikörpern. Nach circa drei Wochen sinken die VCA IgM Antikörper und später auch die anti-Early-IgG Antikörper wieder ab. Die Konzentration an VCA gp125-IgG Antikörpern erreicht nach circa sechs Wochen einen Maximalwert, und die Antikörper sind lebenslang nachweisbar. Mehr als einen Monat nach der Primärinfektion kommt es auch zur Bildung von anti-VCA p18-IgG-Antikörpern, die auch wie die VCA gp125-IgG-Antikörper in der Regel lebenslang nachweisbar sind. Die EBNA1-IgG-Antikörper werden meist erst nach mehr als zwei Monaten nach Infektionsbeginn gebildet und bleiben bei normalen Verläufen lebenslang erhalten. Bei immunsupprimierten Patienten kann es aber auch zu einem sekundären anti-EBNA1-Antikörper Verlust kommen. Die dargestellten Antikörperverläufe werden genutzt, um eine Einteilung der Patienten nach Primärinfektion und abgelaufene Infektion vorzunehmen, und dies vor allem im Rahmen der Differentialdiagnosen. In einigen Fällen ist jedoch die Differenzierung zwischen abgelaufener und Primärinfektion mit den herkömmlichen serologischen Testbestecken nicht sicher möglich. Hierfür haben wir im IgG einen Doppel-Cut-Off für die EBNA1-Beurteilung entwickelt und evaluiert (Studie bei Frau Dr. Gärtner, Homburg/Saar). Auf den folgenden Seiten wird die Doppel-Cut-Off Strategie anhand von Beispielen näher erläutert. F_WE102_110517-15 Der EBV LINE mit DCO Doppel-Cut-Off-Strategie Einsatz der Cut off Kontrolle: Banden deren Intensität schwächer als die Cut off Bande(n) der Cut off Kontrolle sind, werden nicht in die Bewertung einbezogen. Cut Off Kontrollen IgM Cut off EBVM 3-26-80 IgG Cut off EBVG 3-26-90 tik nos Diag ere durch h ic ff G *S im Ig el-Cut-O p Dop Generelle IgM Cut off Bande EBNA 1 gp125 p18 EA-D gp125 p18 EA-D EBNA1-Cut off bei neg. IgM-Serologie Doppel-Cut-Off für EBNA1 Anti-EBNA-1 VCA-IgM genereller Cut off bei neg. IgM-Serologie niedriger EBNA1Cut off Zeit Primärinfektion oder Abgelaufene Infektion ? Generelle IgG Cut off Bande auch für EBNA1 bei pos. IgM-Serologie Genereller Cut off für EBNA1: Bei positiver IgM-Serologie wird für die EBNA1-IgGBeurteilung der generelle Cut off (p18-Bande der Cut off Kontrolle) herangezogen. Somit wird eine gerade beginnende Spätphase (reaktive EBNA1-Bande, aber unterhalb des Cut off) mit noch reaktiver IgMSerologie nicht irrtümlicherweise als eine abgelaufene Infektion diagnostiziert, sondern als Primärinfektion. Unklare Fälle in der EBV-Diagnostik Ak-Titer Mit * DCO Niedriger Cut off für EBNA1: Bei negativer IgM-Serologie wird für die EBNA1-IgGBeurteilung der niedrige Cut-Off (EBNA1-Bande der Cut off Kontrolle) herangezogen. Somit wird am Ende des Primärstadiums eine eventuell schwache Reaktion des EBNA1 nicht übersehen und fälschlicherweise als negativ beurteilt, sondern als EBNA1 positiv und demnach als abgelaufene Infektion. Fallbeispiele: Ringversuchserum IgM positiv EBVM 3-26-80 IgG positiv EBVG 3-26-90 EBNA 1 gp125 p18 EA-D gp125 p18 EA-D Aufgrund der positiven IgM-Serologie (gp125, p18 und EA-D pos.) wird für die EBNA1-IgG-Beurteilung der generelle Cut off (p18) gewählt. Da die reaktive EBNA1-Bande unterhalb des Cut off liegt wird sie als negativ beurteilt und unterstützt somit den Befund: Primärinfektion. Nur mit der positiven IgG-Beurteilung von gp125 und EA-D (p18 negativ, da < Cut off) könnte keine klare Aussage getroffen werden. Kritisches Serum IgM negativ EBVM 3-26-80 IgG positiv EBVG 3-26-90 EBNA 1 gp125 p18 EA-D gp125 p18 EA-D Aufgrund der negativen IgM-Serologie wird für die EBNA1-IgG-Beurteilung der niedrige Cut off (EBNA1) gewählt. Da die reaktive EBNA1-Bande > der Cut off Bande liegt wird sie als positiv bewertet und stellt somit den alleinigen Marker für den Befund dar: abgelaufene Infektion. Die p18 Bande ist zwar schon reaktiv, aber da sie unterhalb des Cut off liegt wird sie als negativ bewertet. Fallbeispiele: Serum 1 Klinisch charakterisiertes Serum des Primärstadiums (Konsiliarlabor Dr. Gärtner, Homburg/Saar) IgM positiv EBVM 3-26-80 IgG positiv EBVG 3-26-90 EBNA 1 gp125 p18 EA-D gp125 p18 EA-D Aufgrund der positiven IgM-Serologie (gp125, p18 und EA-D pos.) wird für die EBNA1-IgG-Beurteilung der generelle Cut off (p18) gewählt. Da die reaktive EBNA1-Bande unterhalb des Cut off liegt wird sie als negativ beurteilt und unterstützt somit den Befund: Primärinfektion. Nur mit der positiven IgG-Beurteilung von gp125 und EA-D (p18 negativ, da < Cut off) könnte keine klare Aussage getroffen werden. Serum 2 Klinisch charakterisiertes Serum einer abgelaufenen Infektion (Konsiliarlabor Dr. Gärtner, Homburg/Saar) IgM negativ EBVM 3-26-80 IgG positiv EBVG 3-26-90 EBNA 1 gp125 p18 EA-D gp125 p18 EA-D Aufgrund der negativen IgM-Serologie wird für die EBNA1-IgG-Beurteilung der niedrige Cut off (EBNA1) gewählt. Da die reaktive EBNA1-Bande > der Cut off Bande liegt wird sie als positiv bewertet und sichert zusammen mit der positiven p18 im IgG den Befund ab: abgelaufene Infektion. Die positive gp125 gibt generell den Hinweis auf eine EBV-Infektion. Serum 3 Klinisch charakterisiertes Rheuma-Serum (Konsiliarlabor Dr. Gärtner, Homburg/Saar) IgM negativ EBVM 3-26-80 IgG positiv EBVG 3-26-90 EBNA 1 gp125 p18 EA-D gp125 p18 EA-D Aufgrund der negativen IgM-Serologie wird für die EBNA1-IgG-Beurteilung der niedrige Cut off (EBNA1) gewählt. Da die reaktive EBNA1-Bande > der Cut off Bande liegt wird sie als positiv bewertet und sichert zusammen mit der positiven p18 im IgG den Befund ab: abgelaufene Infektion. Serum 4 Klinisch charakterisiertes CMV-IgM positives Serum mit unspezifischem EBV-IFT-Befund: VCA-IgG positiv und EBNA1 negativ/grenzwertig (Konsiliarlabor Dr. Gärtner, Homburg/Saar) IgM negativ EBVM 3-26-80 IgG positiv EBVG 3-26-90 EBNA 1 gp125 p18 EA-D gp125 p18 EA-D Aufgrund der negativen IgM-Serologie wird für die EBNA1-IgG-Beurteilung der niedrige Cut off (EBNA1) gewählt. Da die reaktive EBNA1-Bande > der Cut off Bande liegt wird sie als positiv bewertet und sichert zusammen mit der positiven p18 im IgG den Befund ab: abgelaufene Infektion. Die positive gp125 gibt generell den Hinweis auf eine EBV-Infektion. Serum 5 Kritisches Routineserum mit positiver IgG- und IgM-Serologie. IgM positiv EBVM 3-26-80 IgG positiv EBVG 3-26-90 EBNA 1 gp125 p18 EA-D gp125 p18 EA-D Aufgrund der positiven IgM-Serologie (gp125 und p18 pos.) wird für die EBNA1-IgG-Beurteilung der generelle Cut off (p18) gewählt. Da die reaktive EBNA1-Bande > der Cut off Bande liegt wird sie als positiv beurteilt und sichert mit der positiven p18 im IgG den Befund ab: abgelaufene Infektion. Ohne die positive EBNA1- IgG-Beurteilung wäre die Befundung unklar. Die positive gp125 gibt generell den Hinweis auf eine EBV-Infektion. Der EBV LINE Mi t * DCO tik nos Diag ere durch h c i * S m IgG ut-Off i C pelDop S1 EBV G-521-010 im einheitlichen Linesystem Markierungslinie Serumkontrolle IgG Konjugatkontrolle IgM Konjugatkontrolle Vorteile: Hohe Sensitivität & Spezifität durch den Einsatz synthetischer Peptide Klare Differenzierung zwischen Primär- und Past-Infektion durch Doppel-Cut-Off Strategie EBNA 1 Einfaches & sicheres Handling: gp125 Sortierte Streifen im Heftchen Eindeutige Streifennumerierung Qualitätskontrolle auf jedem Streifen Einheitliche Inkubationszeiten (30’/30’/10’) Testergebnis nach ca. 100 Minuten Parameterübergreifende Komponenten Cut off Kontrolle im Kit Positive und negative Kontrollen erhältlich p18 EA-D Best. Nr.: WE102G32 oder WE102G96, 32 oder 96 Bestimmungen WE102M32 oder WE102M96, 32 oder 96 Bestimmungen Sekisui Virotech GmbH Loewenplatz 5 65428 Ruesselsheim Germany Tel.: +49 (0) 61 42 / 69 09 - 0 Fax: +49 (0) 61 42 / 96 66 13 E-mail: [email protected] www.sekisuivirotech.com
