Infektion von dendritischen Zellen und Epithelzellen durch RSV
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Inhaltsverzeichnis 1. Einleitung ............................................................................................................ 6 1.1 Das Respiratory Syncytial Virus..................................................................... 6 1.1.1 Epidemiologie der Bronchiolitis ............................................................... 6 1.1.β Verlauf der Infektion ................................................................................ 6 1.1.γ Therapie und Prophylaxe ........................................................................ 8 1.1.4 Eigenschaften ....................................................................................... 10 1.1.5 Geschichte des RSV ............................................................................. 11 1.1.6 RS-Virusstämme ................................................................................... 1β 1.1.6.1 Long Strain ..................................................................................... 1β 1.1.6.β Aβ ................................................................................................... 1γ 1.1.7 Zytokinfreisetzung während der Infektion .............................................. 1γ 1.1.8 Impfstoffentwicklung.............................................................................. 14 1.β Zell-Linien .................................................................................................... 18 1.β.1 HeLa-Zellen .......................................................................................... 18 1.β.γ Vero-Zellen ............................................................................................ β0 1.β.4 A 549-Zellen .......................................................................................... β0 1.γ Dendritsche Zellen ....................................................................................... β1 1.γ.1 Eigenschaften und Funktionen .............................................................. β1 1.γ.β DC-Subtypen ........................................................................................ ββ 1.γ.β.1 Plasmocytoide DCs ........................................................................ ββ 1.γ.β.β Myeloide DCs ................................................................................. βγ 1.γ.β.γ Thymus-DCs................................................................................... βγ 1.γ.γ Migration und Reifung ........................................................................... β4 1.4 T-Zellen ....................................................................................................... β6 1.4.1 Eigenschaften und Funktionen .............................................................. β6 1 1.4.β T-Zell-Subtypen..................................................................................... β6 1.4.β.1 CD8-positive T-Zellen ..................................................................... β6 1.4.β.β CD4-positive T-Zellen ..................................................................... β7 1.4.β.γ Regulatorische T-Zellen ................................................................. β8 1.5 Dendritische Zellen, RSV und T-Zellen........................................................ β9 β. Fragestellung ................................................................................................. γβ γ. Probanden, Material und Methoden .............................................................. γ4 γ.1 Gewinnung und Anzucht dendritischer Zellen .......................................... γ4 γ.β Zellseparation mit MiniMacs ..................................................................... γ6 γ.γ Weiterbehandlung der gewonnenen Zellen .............................................. γ8 γ.4 Gewinnung der T-Zellen........................................................................... γ9 γ.5 Virusgewinnung und Anzucht ................................................................... γ9 γ.6 Virustitration zur Bestimmung der MOI .................................................... 40 γ.7 Ausverdünnung - Limiting Dilution ............................................................ 41 γ.8 Experimente ............................................................................................. 4β γ.8.1 Infektion der dendritischen Zellen ...................................................... 4β γ.8.β Infektion der Feederzellen ................................................................. 4β γ.8.γ Nachweis der Infektion durch F-Protein-ELISA ................................. 4β γ.8.4 Schachbrett-Titration ......................................................................... 4γ γ.8.5 Ko-Kultur DC + T-Zellen .................................................................... 44 γ.8.5.1 Messung der Proliferation ............................................................... 44 γ.8.5.β Messung von IFN- ........................................................................ 44 γ.9 Material ........................................................................................................ 46 4. Ergebnisse..................................................................................................... 50 4.1 Infektion der Feederzellen im Vergleich ................................................... 50 2 4.1.1. Infektion der HEpβ-Zellen ................................................................. 50 4.1.β Infektion der Vero-Zellen ................................................................... 51 4.1.γ Infektion der A549-Zellen................................................................... 5β 4.1.4 Infektion von Vero-Zellen mit verschiedenen Wildtyp-Stämmen ........ 5β 4.1.5 Effekte der Infektion auf Zellkulturen ................................................. 54 4.1.6 Zytopathischer Effekt und Syncytienbildung ...................................... 54 4.β Produktion des F-Proteins auf DC und HEpβ........................................... 56 4.γ Proliferation von T-Zellen bei Stimulation durch infizierte DC .................. 59 4.4 IFN- Produktion in Ko-Kulturen .............................................................. 59 5. Diskussion ..................................................................................................... 61 5.1 Problematik der Virusanzucht im Labor ................................................... 61 5.β Defekte interferierende Partikel stören die Virusreplikation ...................... 6γ 5.γ Wildtyp-RSV-infizierte Kulturen exprimieren mehr F-Protein als durch Laborstämme infizierte Kulturen .................................................................... 64 5.4 Long und Aβ haben im Vergleich zu Wildtyp-RSV eine veränderte Infektiosität ..................................................................................................... 65 5.5 Virusproteine beeinflussen die Infektiosität und Virusausbreitung ........... 65 5.6 Laborstämme infizieren Vero-Zellen effektiver als Wildtyp-RSV .............. 67 5.7 Wild-Typ-Viren verursachen einen größeren cytopathischen Effekt ......... 67 5.8 Auch Wildtyp-RSV beeinflusst die Zell-Funktion von Abwehrzellen ......... 68 6. Zusammenfassung ........................................................................................ 71 7. Literaturverzeichnis........................................................................................ 7γ 3
