ZytogenetikderNHLdesKindes
Werbung
Zytogenetik der Non-Hodgkin-Lymphome des Kindes- und Jugendalters Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen Chromosomale Aberrationen bei ALL pre-pre-B common pre-B pro-B common prä-B B-ALL B-ALL T-ALL T-ALL AUL AUL mixed mixed t(9;22) -- 31 5 -- 1 1 2 11q23 3 3 2 -- 3 -- 1 t(1;19) 1 10 11 -- -- -- -- t(4;11) 31 1 -- -- -- -- 3 t(8;14) -- -- 1 13 -- -- -- 14q11 -- -- -- -- 17 -- -- t(11;19) 1 1 -- -- -- -- -- >50 1 244 34 1 2 -- -- Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen Chromosomale Aberrationen bei B-NHL/B-ALL t(8;14)(q24;q32) t(2;8)(p11;q24) t(8;22)(q24;q11) c-MYC IgH, Ig, Ig Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen Chromosomale Aberrationen bei ALCL 5 2 Bruchpunkte der Partnerchromosomen bei varianten 2p23-Translokationen t(2;5)(p23;q35) Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen Aberrationen in T-Zell-Lymphomen 14q11 TCRa t(1;14)(p32;q11) Partnergene TAL1 1p32 HOX11 10q24 t(10;14)(q24;q11) RHOM2 11p13 TCL1 14q32 MYC 8q24 LMO1 11p15 t(11;14)(p13;q11) inv(14)(q11q32) Weitere Translokationen t(8;14)(q24;q11) t(11;14)(p15;q11) Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen Aberrationen in T-Zell-Lymphomen 7q35 TCRß Aberration t(1;7)(p34;q35) t(7;10)(q35;q24) t(7;19)(q35;p13) Partnergen LCK HOX11 LYL1 Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen Genetische Diagnostik klassische Zytogenetik G-, R-, Q-, C-Bandenfärbung Molekulare Zytogenetik Fluoreszenz in situ Hybridisierung (FISH) Chromosomen-Painting (WCP) Zentromer-Sonden YAC and Cosmid-Sonden 24-Farben-FISH (SKY/M-FISH) Comparative genomic hybridization (CGH) CGH auf Chromosomen Array CGH Molekulargenetik Long distance (LD-) PCR reverse transcriptase (RT-) PCR real time quantitative (RQ-) RT-PCR Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen Zytogenetik Versand Zellgewinnung 24 Std.-Kultur Zugabe von Colchizin Herstellung der Präparate Hypotone Phase Fixieren in Alkohol:Eisessig 3:1 Auftropfen Färbung G-Banden-Färbung Auswertung Computergesteuerte Bildverarbeitung Voraussetzung: genügend vitale Zellen Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen Nachweis von 8q24-Aberrationen mit break-apart-Sonde MYC-Translokation MYC normal Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen 24-Farben-FISH 43~45,X,-Y,der(1)t(1;5)(q10;?p10),+der(1)t(1;5)(q10;?p10),del(6)(q15),der(8)t(8;13)(p?; q?)t(8;22)(q24;q11),-10,-15,del(16)(q13),der(22)t(8;22)(q24;q11),+mar,inc[cp4]/43~45, idem,-der(22)t(8;22)(q24;q11),+mar,inc[cp3]/46,XY[2] Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen Comparative Genomic Hybridization (CGH) DNA-Verlust zB Monosomie, Deletion Referenz-DNA Nachweis der Aberration durch Fluoreszenz-Markierung normaler Chromosomen Tumor-DNA DNA-Zugewinn zB Trisomie, Duplikation Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen Polymerase Kettenreaktion Polymerase Chain Reaction (PCR) 94°C 72°C 60°C Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen Alternative Methoden zum Nachweis Lymphom-spezifischer Aberrationen Interphase-FISH am Ausstrich/Tupfpräparat oder nach Kultur mit break-apart-Sonde Nachweis einer MYC- oder ALK-Translokation Metaphase-FISH nach Kultur mit break-apart-Sonde Nachweis einer MYC- oder ALK-Translokation (und des Partnerchromosoms) 24-Farben-FISH nach Kultur Nachweis der 8q- oder 2p-Translokation und des Partnerchromosoms zusätzlich weitere Aberrationen (außer inv, kleinen del oder ins) Comparative genomic hybridization (CGH) Nachweis eines Zugewinns oder Verlustes von Chromosomenstücken oder einzelnen Genen Polymerase-Kettenreaktion (LD-PCR, RT-PCR) Nachweis des MYC- oder ALK-Rearrangements und des Fusionspartners Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen Probleme bei der zytogenetischen Auswertung von Lymphomen oft normaler Karyotyp oder kein Ergebnis mögliche Ursachen: keine Proben eingesandt inadäquate Versandbedingungen nicht genügend Lymphomzellen Knochenmark ohne Befall kein Tumormaterial eingesandt eingesandtes Material kein Tumor (V.a. Lymphom) Lymphomzellen gehen schnell in Apoptose inadäquate Kulturbedingungen (Medium/Zeit) kryptische Aberrationen Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen Häufigkeit unterschiedlicher Karyotypen bei B-NHL 963 Patienten aus mehreren BFM-NHL Studien 199 vollständige Karyotypen 199 Patienten mit vollständigem Karyotyp 101 Karyotyp normal 50,7 % 98 aberrant 49,3 % mit 8q24-Aberration n = 82 del(8)(q24) n=2 t(2;8) n=2 t(8;22) n=4 ohne 8q24-Aberration n = 16 t(8;14 n = 74 Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen Warum Zytogenetik? spezifische Aberrationen kann man auch mit anderen Methoden nachweisen Herstellung von Metaphasepräparaten schwierig (Kultur etc.) Ergebnis fraglich (z.B. normaler Karyotyp) Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen Häufigkeit von Sekundäraberrationen 199 Patienten mit vollständigem Karyotyp 98 aberrant 49,3 % 101 Karyotyp normal 50,7 % ohne 8q24-Aberration n = 16 mit 8q24-Aberration n = 82 del(8)(q24) n=2 t(2;8) n=2 t(8;22) n=4 nur 8q24-Aberrationen n = 36 43,9 % mit Sekundäraberrationen n = 46 56,1 % Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen t(8;14 n = 74 Häufigkeit sekundärer Aberrationen bei Burkitt-NHL % aberration 20 43.5 1q+ 1 6.2 der(3q) 3 6.5 der(3q) 1 6.2 6q- 5 10.9 6q- 5 31.3 +7/7q+ 7 15.2 +7/7q+ 1 6.2 9p- 3 6.5 9p- 0 0 11q23 4 8.7 11q23 5 31.3 +12/12q+ 2 4.3 +12/12q+ 2 12.5 13q- 8 17.4 13q- 1 6.2 del(17p) 2 4.3 del(17p) 0 0 complex 18 39.1 complex 4 24.8 others 23 50.0 others 13 75.0 aberration 1q+ abs sekundäre Aberrationen mit 8q24 abs % Aberrationen ohne 8q24 Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen Häufigkeit von 2p23-Aberrationen bei ALCL 47 Patienten mit vollständigem Karyotyp 28 Karyotyp normal 59,6 % 19 aberrant 40,4 % mit 2p23-Aberration n = 15 mit 2p-Aberrationen n=1 t(2;5) n = 14 t(1;2) n=1 nur 2p23-Aberrationen n=3 mit Sekundäraberrationen n = 12 ohne 2p23-Aberration n=3 Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen Sekundäraberrationen bei NHL im Kindesalter prognostische Bedeutung noch unklar möglicherweise schlechtere Prognose für einige Aberrationen Bedeutung für Lymphomentstehung Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen Problemlösung für ein gutes Ergebnis ausreichend Material verschicken gutes Material möglichst Tumorgewebe Gewebe nicht austrocknen lassen vitale Zellen adäquate Versandbedingungen möglichst sofort versenden innerhalb von 24 Std. im Labor Kurierdienst (Ankunft bis 10.00 Uhr) Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen NHL-BFM-Materialversand KM-Befall und/oder Pleuraerguss und/oder Aszites nur Tumor Punktion Biopsie Diagnosestellung NHL immunologisch und zytomorphologisch Diagnosestellung NHL histologisch und immunhistochemisch • flüssiges Material heparinisiert • Zytospinpräparate bzw. Ausstriche • flüssiges Material heparinisiert • Zytospinpräparate bzw. Ausstriche • Liquor, KM, Blut, Serum • Tumormaterial in Medium • Tumortupfpräparate • Liquor, KM, Blut, Serum Immunologie Zytomorphologie / Genetik / Zellbank Immunologisches Zellmarkerlabor, Berlin Onkogenetisches Labor und NHL-BFM-Studienzentrale Gießen • Tumormaterial formalinfixiert Histologie / Immunhistochemie LK-Register, Kiel oder ein anderes referenzpathologisches Institut der NHL-BFM-Studie Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen
