retino-tektale projektion

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RETINO-TEKTALE
PROJEKTION
Jacqueline Jonuschies
Entwicklung des Auges
Retino-tektale Projektion
Kontralaterale Projektion
a)
Lenkung der Axone
über große Entfernungen
b) Erkennung des visuellen
Kortex/ Tektum
c) genauere Zielerkennung
d) Kontakte mit Dendriten/
Neuronen
Genauigkeit der Projektion
Lenkungsmoleküle!
1. Kontaktvermittelt (Attraktion, Repulsion)
2. Chemovermittelt (Attraktion, Repulsion)
• Signale ins Zellinnere (Rezeptoren auf
Wachstumskegel)
• Umbau des Zytoskeletts
Hin-/Abwenden/ Kollaps
• Liganden-/Rezeptorkonzentration
entscheidend (Gradiententheorie, Sperry)
Ephrine
• Eph A, Eph B:
IG ähnliche Domäne
hoch konservierte Cysteinreiche Region
2 FNIII Domänen
Tyrosin Kinase Domäne
• In vielen entwicklungsbiologischen
Prozessen involviert :
topografische Karten
Vorder-/ Hinterhirn
Komissuren
kontaktvermittelte, repulsive Faktoren für retinale Axone
ephrine:
GPI-Anker
Eph-R:
Transmembrandomäne
Ephrine
• „Bidirectional signalling“
Phosphorylierung der Tyrosinreste bei
Rezeptor UND Ligand
Signaltransduktion via MAP-, src-, FAKKinasen, Integrine, Rho GTPasen
Gleiche Signalwege, andere Richtung!
Ephrin-Gradienten
Ephrin A Gradienten
• (Ephrin A5 bindet 10x stärker als ephrin A2)
• Temporale Axone mit hoher Rezeptorkonzentration werden schon bei niedriger
Ligandenkonzentration abgestoßen
nicht weiter zum posterioren Pol: Stopp
• Nasale Axone mit niedriger Rezeptorkonz.
nicht sensitiv genug gegenüber niedriger
Ligandenkonz. im Tektum
wachsen bis zum posterioren Pol
Knock-outs
Ephrin A5 -/-, Ephrin A2 -/- : zerstörte Karte
(besonders anterior-posterior)
ABER: noch korrekte temporale Fasern
weitere Lenkungsfaktoren! (ephrin A6)
RAGS
(Drescher et. al 1995)
= Repulsive Axon Guidance Signal
•
•
•
•
•
in Tektum gefunden
Ephrinen ähnlich, GPI verankert
25 kDa Glykoprotein (E6-E12)
Gradient im posterioren Tektum a p
Verursacht Kollaps des Wachstumskegels
(Kollaps-Assay)
Stripe-assay
• Streifen-Assay: (in vitro) temporale Axone
nur auf anterioren Membranstreifen
GPI-Molekül RAGS in posteriorer
Membran verursacht Kollaps
Stripe-assay
• In-situ Hybridisierung:
- RAGS mRNA in tieferen Zellschichten im
Tektum
- retinale Axone wachsen in oberen Schichten
des Tektums
- tiefe Schichten enthalten Radiale Gliazellen,
Endfüßchen zur Oberfläche, enger Kontakt mit
Axonen, RAGS zu Füßchen transportiert
Temporale Axone kollabieren bei Kontakt mit Radialen Glia!
- Gradient a
p
• Rekombinantes RAGS:
- RAGS-transfektierte Zellen: Kollaps von
nasalen und temporalen Axonen
- Verdünnung der Konzentration: kein
Unterschied zwischen nasalen und
temporalen Axonen
Lenkung durch Abstoßung, keine Diskriminierung
andere Faktoren müssen beim nasotemporalen
Lenkungsprozess mitwirken
Zusammenfassung
• RAGS = Homolog zu den Liganden für Eph
Rezeptoren
• Im Tektum als Gradient a p expremiert
• GPI verankert
• Verursacht Abstoßung/ Kollaps von RGC
Axonen
• Wichtige Rolle bei temporaler Axon-Lenkung
Astray/ robo 2 (Fricke et al. 2001)
• Roundabout Familie: wichtig für Axon
Lenkung, von RGC expremiert, wenn
Axone auswachsen
• Astray durch Mutationsanalyse in
Zebrafisch
In vivo Studie
• Zebrafisch: transparent, direkte
Beobachtung der retino-tektalen Projektion
• Isolierung des Schlüssel-Gens astray
• 4 Allelen:
ti272z
te378
rezessiv
tl231
te284
Phenotyp immer ähnlich
ast - Phenotyp
• ast/ast Embryos zeigen Misprojektionen
(ipsolateral, extratektale Ziele)
wildtype
te284
ti272z
ipsolateral
contralateral
Dor.
Lat.
weak
strong
ast - Funktion
• Für Axon-Lenkung, besonders bei Kreuzung
der Mittellinie wichtig
• Kreuzung von ast/+ x ast/+
3 starke Allele (ti272z, te378, tl231)
1 schwaches Allel (te284)
Phenotyp ähnlich
loss-of-function Mutation
ast Funktion im Auge wichtig, in RGC
Axonen
ast als robo2 Homolog
• Robo2 in RGCs expremiert
• Ast Phenotyp durch Mutation in robo2?
• Vergleich der beiden Gene auf ZebrafischKarte
Sequenzierung
• Homozygote Mutanten (ti272z):
Arg
Stopp (Nonsense)
• Homozygote Mutanten (te284):
Gly
Asp (Missense)
• Robo2 Mutation führt
zum ast-Phenotyp
• Rezeptorfunktion ist
gestört
Zusammenfassung
• robo2 mRNA in differenzierten RGCs
expremiert (zentral peripher), später aus
• robo2/ast = essentiell für retinotektale
Projektion
• Ast/Robo2 fungiert als Lenkungsrezeptor
für RGC Axone
• Ast/robo2-Mutation verhindert Kreuzung der
Mittellinie, Defaszikulation
• Hilft bei Bildung des optischen Chiasmus
Quellen: “In vitro guidance of RGC Axons by RAGS”
Drescher et al. 1995
“Astray, a zebrafish roundabout homolog required for retinal
axon guidance” Fricke et al. 2001
“Ephrin-As as receptors in topographic projections” Knöll et
al. 2002
“Molecules, maps and synapse specificity” Benson et al. 2001
http://biology.queensu.ca/~chinsang/,http://www.unituebingen.de/ub/elib/tobias.htm?http://w210.ub.unituebingen.de/dbt/frontdoor.php?source_opus=1031
http://www.bio2.rwthaachen.de/teaching/ws99/neurows9915.html
http://www.uth.tmc.edu/scriptorium/gallery/kelly/i9-4.html...
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