Chemisch -physiologische Analysen Niedermolekulare organische Verbindungen Enzymakctivitäten Mineralstoffe Zucker Aminosäuren Organische Säuren Decarboxylasen (SIR, Bodenatmung) Invertasen Dehydrogenasen Protonen (pH) Na, K, Mg, Ca P, S, N, C Proteasen Ureasen Phosphatasen Microhabitate im Boden Lückenraumsystem: Bodenpartikel (Carbonate) Wasser Luft Schleime Rhizosphäre Staunässe (anaerobe Zonen) Definitionen 2 Bodenbiologische Methoden Bodenatmung, CO2 Bodenluft CO2- Entwicklung Bodenatmung (BR) Wurzelatmung Mikrobielle Atmung SIR Initial point of respiratory response Response RESP Response % Basalatmung Biomassezuwachs Biomasse-C Respiratorischer Quotient Im Bodenlückenraum befindliche Luft, u.a. CO2. Im Boden gebildetes biogenes und abiogenes CO2. Summe der biogenen CO2 Entwicklung, auch Grundatmung oder Basale Respiration. Von den Wuzeln abgegebene CO2 Menge. Von Mikroorganismen abgegebene CO2 Menge. Mit C und N Substraten induzierte Bodenatmung. Zeitpunkt des Überganges von Bodenluftmessung zu Respirationsmessung. Differenz von SIR – BR. RESP in Prozent der Basalatmung. Vergrößerung des RESP in mg CO2 pro kg Boden und Stunde im linearen Bereich. Nach Anderson /Domsch aus SIR berechnete Biomasse C- Menge. Gramm Biomasse-C pro g Basalatmungs-C. Methoden zur Bestimung “mikrobieller Biomasse” Infrarotspectroskopie IRGA Isermeyer Anderson/Domsch Fumigation/Extraktion Isoenzymaktivitäten Direktzählung Messung der IR Absorption (Absorptionsspektren) einer Substanz. Infrarot Gasanalyse ( URAS... Ultrarotabsorptionschreiber) der Bodenluft. CO2 Erfassung durch Laugenabsorption und Rücktitration. Biomasse -C Berechnung nach SIR. Extraktion des Biomasse-C oder N nach Chloroform Fumigation. Ermittlung des maximalen Substratumsatzes eines Bodens. Färbung und Auszählung im Mikroskop. Mikrobielle Aktivität und Biomasse inhibition pH N/C substrate supplement MiO enzyme original pool mass flow influence additional (RESP) CO basal (BR) stimulating or inhibiting effects: 2 enzyme activation / inhibition enzyme induction / repression abundance change diversification adaptations long term effects (succession) investigated system Rücktitration nach Isermeyer (1952) 1... Schott- Flask 2... Sealing 3... Nylon Thread 4... Small Bag from Nylon Mesh 5... Sodiumhydroxide 6... Soil 2 3 1 6 4 5 IRGA (Infra Rot Gas Analyse) PUMPE IRGA LUFT DRUCKREGLER WASCHFLASCHEN MIT 3N NaOH, 300 ml KLIMASCHRANK VERTEILER REFERENZ BODEN KÜVETTE FÜR IRGA alternative (zweiteilige) Scheibe zum eindichten von Sprossen hart PVC (Abflußrohr) hart PVC KÜVETTEN PROBEN 1-7 150 mm Butyl- Gummi (Schwarz) rostfreier Stahl KÄLTEFALLE Gewinde: M4 approx. Volumen: 200 ml FILTER 50 mm Küvette nach Bachmann, 1986 PROBENUMSCHALTER regelbare FLOWMETER: 6l/h STATIONSSCHALTER SCHREIBER- STEUERUNG SCHREIBER INFRAROTGASANALYSATOR FERNSTEUERUNG IR- QUELLE ANALYSENZELLE REFERENZZELLE ANZEIGE DETECTOR SCHREIBERSIGNAL Versuchsanordnung nach Bachmann und Baumgarten, 1986 Substrate activation, induction, resource limitation Asparagine induced Respiration (URAS) mg CO2 / kg FG *h 120 100 80 Maniok 60 40 Sugar Cane 20 0 0 90 180 270 360 450 540 630 720 810 900 990 Time (min) Maniok and Sugar Cane (BIOLOG-Test using Asparagine) µg TPF / mL 10000 8000 Maniok 6000 4000 Sugar Cane 2000 0 0 840 1200 1440 2400 Time (min) 2670 3000 4320 Mikroplattenphotometer, Enzymtests Kalibrationsreihen Reagenzienleerwerte Vollproben Blindproben Reines Lösungsmittel (A.demin.) V = konstant! Berechnungen in Excel Berechnungsbeispiel: Atomabsorptionsspektrometrie (AAS) Angaben Trockenmasse ist 20 % der Frischmasse 10 mL 4 % iger Urextrakt (Einwaage 0,4g) Verdünnung 1: 50 (1+ 49) Kalibrationsgerade der AAS: y = kx + d.... y = 8x + 0 MG von Ca (2-wertig): 40,078g Schritt Wert ( Zwischenergebnis) Beispiel 1 AAS Meßwert: Absorption des Analysates 0,49625 2 AAS Ergebnis: Konzentration des Analysates 3,97 3 Masse in einem L unverdünnten Extraktes 198,5 4 Masse in einem mL unverdünnten Extraktes 0,1985 5 Masse im unverdünnten Extrakt 1,985 6 Masse im Gramm Pflanzenpulver 4,9625 7 Eqivalentmenge im Gramm Pulver 0,24764 8 Eqivalentmenge im Gramm Pulver 247,642 Eqivalentmenge im mL Frischwasser 990,568 Abstraktion zu Formel(n): Einheit Operation Zweck Abs, E | * k + d Ausrechnung durch Einsetzen in Kalibrationsgerade mg L-1 | * 50 Rückrechnung auf 1 L unverdünnten Extrakt mg | / 1000 Rückrechnung auf 1 mL unverdünnten Extrakt mg | * 10 Rückrechnung auf Gesamtvolumen des Extraktes mg | / 0,4 Rückrechnung auf Einwaage mg g-1 | / 20,039 Umrechnung von Masse auf Equivalentmenge mVal g-1 | * 1000 Umrechnung von mVal auf µVal µVal g-1 | / 20 *80 Umrechnung von Bezugsgröße TM auf FW µVal mL-1 =+[Meßwert]*8*50/1000*10/[EW]/20,039*1000/[%TM]* [%FW] -----> Excel: Probe Testen, Plausibilitätscheck !!!!!! Meßwert EW [%TM]* [%FW] Ca µVal g-1 Ca µVal mL-1 1 Formel 1 Formel 2 2 3 Component 2 (20%) Main Component or Factor analysis Component 1 (80%) CO 2 h PFLANZE P articulate Organic M atter Rhizodeposition: Pflanzen geben organisches Material an den Boden ab. Freie Zucker: Rhizodeposition, Abbautätigkeit von Mikroorganismen. D issolved Organic M atter Mikroorganismen Steigerung der mikrobiellen Aktivität: Grundatmung. Karbonat Karbonat: aus Grundgestein oder aus CO2, das im Wasser Kohlensäure bildet. Water Fertilizer Shoot Litter Root H2O MiO SIR Remin NH4 WRC Ext Enz Urease Rice Soil System KI+_pH KEC