Allg.Gen.11_Ãœbung_WS 13_14

Allg. Genetik_WS 2013/14_Übung 11
1) Wahr (W) oder falsch (F)?
a) Die Substratinduktion des Lac-Operons entspricht mechanistisch der Aufhebung
einer Transkriptionsinhibition.
b) Die Katabolitrepression des Lac-Operons entspricht mechanistisch der Aufhebung
einer Transkriptionsaktivierung.
c) Das die Katabolitrepression vermittelnde CAP inhibiert die Expression des LacOperons, wenn Glukose verfügbar ist.
d) Der λ-Repressor und das Cro-Protein sind Antagonisten.
e) Während der λ-Repressor die Transkription stets inhibiert, ist Cro ein reiner
Transkriptionsaktivator.
f) Attenuation ist ein bei Hefepilzen wie S. cerevisiae verbreiteter Mechanismus der
Transkriptionsregulation durch gleichzeitig stattfindende Translation.
2) Sie wollen die Transkriptionsaktivierungsdomäne von Gal4 an ihrem N-Terminus
mit der DNA-Bindedomäne von Mcm1 fusionieren und die entstehende Chimäre
induzierbar
in
E.
Expressionsplasmid!
coli
exprimieren.
Zeichnen
Sie
das
entsprechende
3) Welche Auswirkungen werden folgende Mutationen jeweils auf die Gal1Transkription haben, wenn die entsprechenden Hefen in Galaktose-haltigem
(Glukose-freiem) Nährmedium kultiviert werden?
a) Deletion einer Gal4-bindenden UAS
b) Deletion aller 4 UAS-Elemente
c) Deletion der GAL4-Aktivierungsdomäne
d) Deletion des GAL80 Gens
e) Deletion des GAL1 Promoters
f) Deletion des GAL3 Gens
4) Mit einem Ein-Hybrid-Test (1-hybrid assay) können Sie testen, ob ein Protein an
eine bestimmte DNA-Sequenz bindet.
a) Das Prinzip eines Zwei-Hybrid-Tests kennen Sie aus der Vorlesung. Wie, glauben
Sie, funktioniert demnach der 1-hybrid assay? Fertigen Sie zur Verdeutlichung eine
Skizze an!
b) Aufgrund Ihrer Vor-Experimente wissen Sie, dass ein Ihnen noch unbekanntes
Hefeprotein an eine Ihnen bereits bekannte DNA-Sequenz binden muss.
Beschreiben Sie die Arbeitsschritte eines 1-hybrid screens zur Identifikation des
entsprechenden Proteins aus S. cerevisiae.