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Inhaltsverzeichnis
1. Einleitung.................................................................................................1
1.1 ÜberblicküberdasImmunsystem...............................................................................1
1.2 DZ-LizensierungundklassischesCross-Priming............................................................3
1.2.1 AlternativesCross-Priming..........................................................................................4
1.2.2 CCR4undCCL17...........................................................................................................6
1.3 NatürlicheKillerTZellen.............................................................................................8
1.3.1 AktivierungvonNatürlichenKillerTZellen..................................................................9
1.3.2 NatürlicheKillerTZelleninInteraktionmitanderenImmunzellen............................11
1.3.3 MikrobiotaundNatürlicheKillerTZellen..................................................................13
1.4 InfektionmitListeriamonocytogenesundNatürlicheKillerTZellen..........................14
1.4.1 InnateImmunantworteinerListerien-Infektion........................................................15
1.4.2 AdaptiveImmunantworteinerListerien-Infektion.....................................................17
1.4.3 NatürlicheKillerTZelleninderListerien-Infektion....................................................18
1.5 ZielsetzungderArbeit...............................................................................................19
2. MaterialundMethoden.........................................................................20
2.1 Material....................................................................................................................20
2.1.1 Geräte........................................................................................................................20
2.1.2 Verbrauchsmaterialien..............................................................................................22
2.1.3 ChemikalienundReagenzien.....................................................................................23
2.1.4 Puffer,MedienundLösungen....................................................................................25
2.1.5 AntikörperundFluorochrome....................................................................................26
2.1.6 PrimerSequenzen......................................................................................................27
2.1.7 Software....................................................................................................................27
2.1.8 Kit-Systeme................................................................................................................27
2.2 Methoden.................................................................................................................28
2.2.1 TierexperimentelleMethoden...................................................................................28
2.3 ZellbiologischeMethoden..........................................................................................30
2.3.1 IsolationprimärerZellen............................................................................................30
2.3.2 invitroTZell-Aktivierung...........................................................................................32
2.3.3 Transwell-Assay.........................................................................................................32
2.3.4 Magnetisch-aktivierteZellsortierung(MACS)............................................................33
2.3.5 Durchflusszytometrie.................................................................................................33
2.3.6 CFSEProliferations-Assay..........................................................................................35
2.3.7 LuminexAnalyse........................................................................................................36
2.3.8 Fluoreszenz-aktivierteZellsortierung.........................................................................36
2.4 MolekularbiologischeMethoden..............................................................................36
2.4.1 RNAIsolation.............................................................................................................36
2.4.2 ReverseTranskription................................................................................................36
2.4.3 Real-Time-PCR...........................................................................................................37
2.5 ImmunologischeMethoden......................................................................................37
2.5.1 Serumpräparation.....................................................................................................37
2.5.2 ELISA(EnzymelinkedimmunosorbentAssay)............................................................37
2.5.3 ImmunhistochemischeFärbung.................................................................................38
2.6 Statistik....................................................................................................................38
3. Ergebnisse..............................................................................................40
3.1 NKTZell-vermitteltesCross-PriminginderListerien-Infektion...................................40
3.1.1 InfektionmitListeriamonocytogenesinduziertdieProduktionvonCCL17...............40
3.1.2 CCL17-produzierendeDZzeigeneinenerhöhtenAktivierungsstatus.........................42
3.1.3 CCL17-produzierendeDZkönnenOT-1Zellenstärkeraktivieren...............................43
3.1.4 DieZTLGenerierunginAbwesenheitvonalternativemCross-Primingistnacheiner
Listerien-Infektionnichtvermindert...........................................................................44
3.1.5 DiegleichzeitigeAbwesenheitvonCCL17undderKreuzpräsentationskapazitätvon
DZvermindertnichtdieZTLGenerierung..................................................................46
3.1.6 TZellGedächtnisantworteninderAbwesenheitvonalternativemCross-Primingsind
nichtvermindert........................................................................................................47
3.1.7 CCR4-defizienteMäusezeigeneineerhöhtebakterielleLast....................................49
3.1.8 CD8+TZellenzeigennachListerien-InfektionkeineCCR4-Expression.......................50
3.2 NKTZellenundihreFunktioninderAbwehreinerListerien-Infektion........................52
3.2.1 NKTZellenwerdenimRahmeneinerListerien-Infektionaktiviert.............................52
3.2.2 DerEinflussvoniNKToderNKTZellDefizienzaufdiebakterielleLastunddie
EtablierungvonZTLAntwortennachListerien-Infektion...........................................53
3.2.3 NKZellensindinAbwesenheitvonNKTZellenstärkeraktiviert................................55
3.2.4 IFNγwirdinderAbwesenheitvonCD1dinderMilzvermehrtsezerniert................58
3.2.5 DendritischeZellenzeigeneineverstärkteAktivierunginderAbwesenheitvonNKT
Zellen.........................................................................................................................59
3.2.6 InAbwesenheitvoniNKTZellenzeigenMakrophageneineverminderteAktivierung...
...................................................................................................................................61
3.2.7 ImmunologischeRegulatorenwerdennichtvonderAbwesenheitvoniNKTZellen
beeinflusst..................................................................................................................63
3.2.8 Co-HousingvermindertdieIFNγProduktionvonNKZelleninCD1d-defizienten
Mäusen......................................................................................................................65
4. Diskussion..............................................................................................68
4.1 CCL17wirdvonDendritischenZellenineinerListerien-Infektionsekretiert..............69
4.2 CCL17+DendritischeZellensindstärkeraktiviertalsCCL17-DZ..................................71
4.3 AlternativesCross-PrimingbesitztkeinensignifikantenEinflussaufdieGenerierung
einerZTLAntwortwährendeinerListerien-Infektion................................................72
4.4 DieAbwesenheitvonCCR4verstärkteineGedächtnisantwortgegenListeria
monocytogenes.........................................................................................................74
4.5 NKTZellenspieleneinewichtigeRolleinderListerien-Infektion................................75
4.6 NKZellenproduziereninAbwesenheitvonCD1dmehrIFNγ alsinAnwesenheitvon
TypIINKTZellen........................................................................................................77
4.7 InAbwesenheitvonCD1dsindDZundMakrophagenstärkeraktiviert......................79
4.8 Co-HousingverhindertdenerhöhtenAktivierungsstatusinCD1d-/--Mäusen.............80
5. Zusammenfassung.................................................................................82
6. Literaturverzeichnis................................................................................83
7. Abkürzungsverzeichnis...........................................................................98