Bekämpfung der Campylobacter Besiedelung bei Broilerküken Wael Abdelrahman Technischer Berater, Geflügel-Probiotika Bekämpfung der Campylobacter Besiedelung bei Broilerküken Abbildung 1. Campylobacter jejuni ist ein gramnegatives, mikroaerophiles, nicht sporenbildendes Bakterium und weltweit eine der häufigsten Ursachen der Gastroenteritis beim Menschen. 2 Science & Solutions Wael Abdelrahman Technischer Berater, Geflügel-Probiotika In den vergangenen 20 Jahren hat sich die Campylobacter-Infektion weltweit zu der am häufigsten angegebenen Ursache bakterieller Gastroenteritis beim Menschen entwickelt. Die Betroffenen weisen die klinischen Anzeichen einer akuten Diarrhö oder schwererer Krankheitsformen auf, einschließlich dem Guillain-Barré-Syndrom und der Arthritis. Die dem öffentlichen Gesundheitswesen entstehenden Kosten der Campylobakteriose sowie die Kosten für Produktionsverluste in der EU werden von der Europäischen Behörde für Lebensmittelsicherheit (EFSA) auf etwa 2,4 Milliarden EUR pro Jahr geschätzt. D ie Rolle des Geflügels im Zusammenhang mit Campylobakteriose beim Menschen wird generell als bedeutend angesehen, wobei der Verzehr von oder der falsche Umgang mit rohem oder nicht durch­ gegartem Geflügelfleisch oder die Konta­ mination von verzehrfertigen Nahrungsmit­ teln durch Kontakt mit rohem Geflügelfleisch als ­häufigste Infektionsquelle angesehen wer­ den. Da der Verzehr und die falsche Behand­ lung von rohem oder nicht durchgegartem Ge­flügelfleisch die Hauptursache der Campylobacter-Übertragung beim Menschen ist, könnte die Reduzierung der Besiedelung der Hühner durch dieses Bakterium die Inzidenz von Infektionen beim Menschen verringern. Eine der Herausforderungen im Zusam­ menhang mit der Bekämpfung von Campylo­ bakteriose ist die Tatsache, dass Campy­lobacter in gesundem Geflügel als kommensaler Mikroorganismus vorkommt und keine kli­ nischen Erkrankungen hervorruft. Er be­ wohnt die Schleimhaut des Blinddarms, je­ doch ohne in die Darmzellen einzudringen. Zur Bekämpfung enterischer Pathogene bei Geflügel stehen verschiedene Hilfsmittel zur Verfügung. Strategien der „kompetiti­ ven Verdrängung“ und der Einsatz spezi­ fischer Probiotika und Synbiotika haben sich als wirkungsvolle Mittel erwiesen, die Zusammensetzung der Mikrobenpopula­ tion im Verdauungstrakt von Geflügel zu beeinflussen oder zu managen und so die Geflügelherden vor pathogenen Keimen zu schützen. Abbildung 2. Antimikrobielle Aktivität probiotischer Bakterienstämme (Enterococcus faecium, Pediococcus acidilactici, Lactobacillus salivarius und Lactobacillus reuteri und deren Kombination mit Bifidobacterium animalis) aus dem Verdauungstrakt von Hühnern gegen Campylobacter jejuni in Co-Kultivierung auf Agarplatten, dargestellt als Hemmungsindex (Durchmesser der Hemmungszone [cm]/Durchmesser des Teststamms [cm]. 2,00 1,80 Hemmungsindex 1,60 1,40 1,20 1,00 0,80 Photo: Shutterstock-Sebastian Kaulitzki 0,60 Ein Magazin von BIOMIN 0,40 0,20 0,00 Enterococcus faecium Pediococcus Lactobacillus Lactobacillus acidilactici salivarius reuteri PoultryStar® Quelle: Ghareeb et al., 2012 3 Wael Abdelrahman Technischer Berater, Geflügel-Probiotika Zur Bekämpfung enterischer Pathogene verwendet die Geflügelindustrie verschiedene Management-Tools, z. B. Antibiotika, Impfstoffe, Ansäuerungsmittel, phytogene Substanzen sowie Prä- und Probiotika. Immer mehr Länder außerhalb Europas verbieten den Einsatz antibiotischer Wachstumsförderer (AGPs) in Futtermitteln für Tiere. Im Hinblick auf die zunehmenden Bedenken der Verbraucher bezüglich eines unüberlegten Antibiotikaeinsatzes wird es für die Geflügelindustrie daher immer attraktiver, Alternativen zum Antibiotikaeinsatz in Betracht zu ziehen. Tabelle 1, Versuch 1, Tag 8 und 15, Gehalt von Campylobacter im Blinddarm (Log KBE/g) nach Infektion mit 105 KBE/ml eines Feldstammes von Campylobacter jejuni an Tag 1, Positivkontrolle Tier/Alter 1 PoultryStar® 2 mg/Tier/Tag Positivkontrolle Tag 8 PoultryStar® 2 mg/Tier/Tag Tag 15 7,92 <3 >8 3,59 2 7,74 3,00 >8 3,72 3 3,90 <3 >8 4,10 4 6,45 4,38 >8 3,30 5 4,85 <3 >8 <2 6 7,53 <3 >8 2,78 7 6,79 <3 >8 <2 8 7,86 <3 >8 <2 9 7,51 <3 >8 4,18 10 5,18 <3 >8 <2 11 >8 <3 >8 <2 12 <3 <3 >8 <2 Durchschnitt 6,67a 4,10b >8a 3,82b a,b Mittelwerte innerhalb einer Reihe mit unterschiedlichen Indizes unterscheiden sich signifikant (P=0,001) Quelle: Ghareeb et al., 2012 Probiotika für Geflügel Ein multinationales, von der EU finan­ ziertes Projekt vereinte fünf Partner aus der Industrie und drei Partner aus dem Bereich der Forschung zum Zweck der Entwick­ lung eines wohl definierten und sicheren Mehrstamm­Probiotikums für Geflügel. Zahlreiche Darmbakterien wurden aus dem Darm von mehreren gesunden Hüh­ nern isoliert und mittels einer Kombination PoultryStar® und die Bekämpfung von Campylobacter bei Broilerküken Die im CESAG (Centre de Sanitat Avícola de Catalunya i Aragó) erzielten Forschungsergebnisse zeigten auf, dass die prophylaktische Fütterung von Broilern mit dem geflügelspezifischen Mehrstamm-Probiotikum PoultryStar® bei zwei unabhängigen Infektionsversuchen mit experimentell infizierten Broilern zu einem signifikanten Rückgang der Besiedelung des Blinddarms mit Campylobacter jejuni führte. Eintags-Broilerküken mit Ursprungs- und Gesundheitszertifikat (Ross 308, männlich und weiblich) wurden aus einer kommerziellen Brüterei bezogen. Von 10 nach dem Zufallsprinzip ausgewählten Küken wurde jeweils der Blinddarm entfernt und auf das Vorhandensein von Bakterien der Spezies Campylobacter untersucht, um sicherzustellen, dass die im Versuch verwendeten Tiere Campylobacter-negativ waren. Die verbleibenden Tiere wurden am Flügel markiert und in Einzelboxen mit Einstreu aus frischen Sägespänen gesetzt. Futter und Wasser wurden ad libitum angeboten. Die Tiere erhielten ein wirkstofffreies auf Mais/Soja basierendes Standardfutter. Die Einstellung von Temperatur, Heizung und Lüftung erfolgte anhand der kommerziellen Empfehlungen. Methode Zur Bewertung der Wirksamkeit von PoultryStar® gegen eine Besiedelung mit Campylobacter jejuni bei Broilern wurden zwei Versuche durchgeführt. Versuch 1: An Tag 1 erhielten alle Tiere oral (per Gavage) 0,1 ml einer Lösung, die 105 KBE/ml eines Feldstammes von Campylobacter jejuni enthielt. 44 Eintagsküken wurden nach dem Zufallsprinzip zwei Gruppen zugeordnet, einer mit Campylobacter infizierten positiven Kon- 4 trollgruppe und einer mit Campylobacter infizierten Gruppe, in der jedes Tier täglich 2 mg PoultryStar® via Trinkwasser erhielt. Versuch 2: Bei allen Tieren erfolgte an Tag 1 eine Infektion mit Campylobacter jejuni durch 4 experimentell infizierte Tiere (seeder birds), die oral (per Gavage) 0,1 ml einer Lösung mit 105 KBE/ml eines Feldstammes von Campylobacter jejuni erhalten hatten. 78 Eintagsküken wurden nach dem Zufallsprinzip drei Gruppen zugeordnet: einer mit Campylobacter infizierten positiven Kontrollgruppe; einer mit Campylobacter infizierten Gruppe, in der jedes Tier täglich zusätzlich 2 mg PoultryStar® via Trinkwasser erhielt, und einer mit Campylobacter infizierten Gruppe, in der jedes Tier täglich zusätzlich 20 mg PoultryStar® via Trinkwasser erhielt. An den Tagen 8 und 15 wurden in beiden Experimenten jeweils 10 Tiere einer Gruppe euthanasiert, danach erfolgte die Entnahme des Blinddarms für eine individuelle quantitative CampylobacterKultur. Ergebnisse Versuch 1: Die Gabe von 2 mg/Tier/Tag Poultry-Star® mit dem Trinkwasser führte zu einer signifikanten Verminderung (P=0,001) der Blinddarmbesiedelung mit Campylobacter jejuni. Science & Solutions Bekämpfung der Campylobacter-Besiedelung bei Broilerküken morphologischer, physiologischer und ge­ notypischer Methoden vollständig charakte­ risiert. Es folgte eine Bewertung der vielver­ sprechendsten Stämme hinsichtlich wichtiger probiotischer Kriterien, z. B. die Hemmung pathogener Bakterien. Auf der Grundlage dieser Ergebnisse wur­ de aus Stämmen vom Genus Enterococcus, Pediococcus, Lactobacillus und Bifidobacterium ein probiotisches Mehrstamm- Produkt (PoultryStar®, BIOMIN GmbH) konzipiert. Da die probiotischen Stämme in vitro eine Hemmung von Campylobacter jejuni (Haupt­ ursache der Campylobakteriose beim Men­ schen) bewirken konnten, wurde die Wirk­ samkeit von PoultryStar® auf Campylobacter jejuni in zwei Infektionsversuchen mit expe­ rimentell infizierten Broilern geprüft. Verbesserung der Immunität Die Ergebnisse dieser Studien zeigten, dass die Verwendung von Probiotika helfen kann, die natürliche Abwehr der Tiere ge­ gen enterische Bakterien zu verbessern. Als wirkungs­volle Alternative zum Einsatz von Antibiotika bei Nutztieren, kann das Probio­ tikum dazu dienen bakterielle Kontaminatio­ Tabelle 2a. Versuch 2, Tag 8. Gehalt von Campylobacter im Blinddarm (Log KBE/g) nach Infektion mit 105 KBE/ml eines Feldstammes von Campylobacter jejuni an Tag 1. Tier/Alter Positivkontrolle PoultryStar® 2 mg/Tier/Tag PoultryStar® 20 mg/Tier/Tag 1 8,52 <2 <2 2 7,78 <2 <2 3 8,15 <2 <2 4 6,48 <2 <2 5 6,30 <2 <2 6 9,02 <2 <2 7 7,60 <2 <2 8 9,60 <2 <2 9 8,38 <2 <2 10 6,30 <2 <2 Durchschnitt 7,81a <2b <2b Tabelle 2b. Versuch 2, Tag 15. Gehalt von Campylobacter im Blinddarm (Log KBE/g) nach Infektion mit 105 KBE/ml eines Feldstammes von Campylobacter jejuni an Tag 1. Tag 8: 10 von 12 Tieren der PoultryStar®-Gruppe wiesen Campylobacter-Werte von <3 Log KBE/g auf, was signifikant unter dem mittleren Log Wert der Positivkontrolle von 6,67 Log KBE/g (P=0,001) lag. Tag 15: Alle Tiere der Positivkontrolle hatten Werte über 8 Log KBE/g. In der PoultryStar®-Gruppe war der Höchstwert jedoch signifikant auf 4,10 Log KBE/g reduziert (P=0,001), und die Hälfte der Tiere wies Werte < 2 Log KBE/g auf (Tabelle 1). Versuch 2: Die Gabe von 2 mg/Tier/Tag sowie von 20 mg/Tier/Tag Poultry-Star® mit dem Trinkwasser führte zu einer signifikanten Verminderung (P=0,001) der Blinddarmbesiedelung mit Campylobacter jejuni. Tag 8 und 15: Die Campylobacter-Werte im Blinddarminhalt der PoultryStar®-Gruppe betrugen <2 Log KBE/g, wogegen die mittleren Log-Werte in der positiven Kontrollgruppe 7,81 Log KBE/g an Tag 8 bzw. 7,85 Log KBE/g an Tag 15 (P=0,001) betrugen (Tabellen 2a und 2b). Im Vergleich zu den Kontrollgruppen zeigten die Poultry-Star®-Gruppen eine Verminderung der Blinddarmbesiedelung mit Campylobacter jejunium um 6 Log. Auch die niedrigere Dosis von Poultry-Star® war zur Reduzierung der Campylo­bacter-Werte wirksam. Ein Magazin von BIOMIN Tier/Alter Positivkontrolle PoultryStar® 2 mg/Tier/Tag PoultryStar® 20 mg/Tier/Tag 1 8,00 <2 <2 2 7,78 <2 <2 3 7,85 <2 <2 4 7,00 <2 <2 5 7,48 <2 <2 6 8,77 <2 <2 7 7,30 <2 <2 8 8,11 <2 <2 9 8,20 <2 <2 10 8,00 <2 <2 Durchschnitt 7,85a <2b <2b a, b Mittelwerte innerhalb einer Reihe mit unterschiedlichen Indizes unterscheiden sich signifikant (P=0,001) Quelle: Ghareeb et al., 2012 nen von ­rohem Geflügelfleisch zu reduzieren. Die Fütterung des Mehrstamm-Synbiotikums PoultryStar® in dem Versuch reduzierte, durch seine antimikrobielle Aktivität, signifikant die Besiedelung des Blinddarms durch Campylobacter jejuni bei Broilern. Dies zeigt die positive Wirkung von PoultryStar® bei der Reduzierung der Prä­ valenz von Campylobacter in Geflügel und dadurch die Verminderung der Inzidenz von Campylobakteriose beim Menschen. Literaturnachweise auf Anfrage erhältlich 5 ©2015 BIOMIN Holding GmbH ART_No34_PS_DE_0115_WAB_#7 BIOMIN Holding GmbH Industriestrasse 21, A-3130 Herzogenburg, AUSTRIA Tel: +43 2782 803 0, Fax: +43 2782 803 11308, e-Mail: [email protected], www.biomin.net