E.coli

Transformation von
chemisch kompetenten
E.coli
Vorbereitung
 kompetente Zellen kurz vor dem Verbrauch auf Eis auftauen
Transformation
 Plasmid-DNA in einem Eppi vorlegen und jeweils 80-100 µl kompetente
Zellen hinzufügen
 Inkubation auf Eis für 10 min
 30 s Inkubation im Wasserbad oder Heizblock bei 42°C
 250 µl LB-Medium oder SOC-Medium hinzufügen
 Inkubation bei 37°C für 30-60 min
 Ausstreichen auf einer Agarplatte mit dem entsprechenden Antibiotikum
 Inkubation über Nacht bei 37°C
Transformation.doc
Nicht vortexen!
Die Inkubation auf Eis ist
optional, verbessert aber die
Transformationseffizienz
dem Medium kein Antibiotikum
zusetzen! Diese Inkubation
dient der „Erholung“ der
Bakterien und der Synthese
von Resistenzfaktoren
Rainer Strotmann, 14.09.2010