Qalitätsgesicherte Immunhistochemie
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Zellblöcke und feste Bestandteile: Lösung von Problemfällen in der Zytologie Sonja Urdl und Sigurd Lax Institut für Pathologie LKH Graz West [email protected]; [email protected] Gewinnungsarten - Zytologie Exfoliativzytologie: Bürstenabstriche oder Organabklatsche Ergüsse seröser Höhlen Liquor Spontangewinnung (Sputum, Harn) Lavagen (Bronchialsystem, Harnblase, ...) Punktionszytologie: FNA von soliden Organen (Schilddrüse, Speicheldrüse, Lymphknoten etc.) EBUS (= endoskopischer bronchialer Ultraschall) Methodenvergleich Zytologie Schonende Gewinnung Typisierung von Tumoren nur eingeschränkt möglich Begrenzte Möglichkeiten für weiterführende Analysen Histologie Genauere Aufarbeitung Morphologie oft aussagekräftiger Mehr Möglichkeiten für weiterführende Analysen (Fixierung, Einbettung,) Archivierung der Blöcke Ziel: Nützen der Vorteile beider Methoden Zytologisches Material Verarbeitung in zytologischer Präparation Verarbeitung als histologische Probe Zellblock Fester Bestandteil (z.B. Erguss) Gerinnsel aus einer FNA (z.B.: EBUS) Ergüsse Sind wechselnd zellreich (zellarm bis sehr zellreich) Werden primär zytologisch untersucht Können feste Bestandteile enthalten Zellblock für weiterführende Untersuchungen Zytologische Verarbeitung: Zytospin 100µl in Kammer pipettieren 3 min. bei 960 RPM zentrifugieren Aufsatz abnehmen Zytospin lufttrocknen oder fixieren Zytospin lufttrocknen oder fixieren Histologische Verarbeitung Einbetten eines festen Bestandteils in Paraffin, nach Formalinfixierung Anfertigen eines Zellblocks Herstellung eines Zellblocks Bereitstellen des Gegengewichts Auswahl der Probe Zentrifugieren für 5 min. bei 4000RPM Plasma und Thrombin auf Raumtemperatur bringen Herstellung eines Zellblocks Aussehen des Pellets Überstand abpipettieren und im Originalgefäß asservieren Pellet mit Öse quirlen Zugabe von 3gtt Plasma und 4gtt Thrombin Herstellung eines Zellblocks Gerinnsel mit Formalin überschichten Probe gerinnt Gerinnsel Von der Wand lösen Gerinnsel in Kapsel einbetten Durchführung: EBUS Nadel im Lymphknoten sichtbar Aufsetzen der Spritze Lockern der Nadelschraube Lockern der Nadelschraube Saugwirkung ein Aufsetzen der Spritze Saugwirkung aus Durchführung: EBUS Nadel Biopsiekanal mit Nadel Material aus der Nadel Material aus der Nadel Zytologische Verarbeitung Material wird auf OT ausgestrichen Ausstriche werden fixiert Histologische Verarbeitung Gerinnsel wird mit der Pinzette in Formalin überführt Gerinnsel in 4%igem Formalin Gerinnsel wird eingebettet Die Lösung……….. Exakte Diagnose: Schlüssel zur optimalen Therapie Metastasen bzw. Ergüsse können sich vor dem Primärtumor manifestieren Metastasen können erst nach Jahren auftreten Zweitmalignome auszuschließen Exakte Diagnose ist die Basis für die optimale Therapie Frage 1: Dignität Zytologie Benigne (A) Keine weitere Maßnahme Suspekt (B) Maligne (C) Zellblock + Immunhistochemie Fortsetzung Frage 1: Dignität DD Benigne/ maligne Zellblock + Immunhistochemie Calretinin Reaktiv verändertes Mesothel Mesotheliom Ber-EpB4 Karzinom (Adeno-) Karzinom Ki-67 Frage 2: Herkunft der Tumorzellen (Primärtumor) DD Maligne Zellblock + Immunhistochemie Antikörper Herkunft CK7, CK20 Organsysteme Lunge (Schilddrüse) TTF1, Napsin Cdx2 NCAM (CD56) WT1 CK5/6, p63 Colon, Dünndarm neuroendokrin Ovar, Tube Plattenepithel, Myoepithelien ER, Mammaglobin, GCDFP 15 Mamma Zytokeratine (CK) Wesentliche Bestandteile des Zytoskelets Verschiedene Subtypen (1-20; Katalog nach R. Moll; nach Molekulargewicht) Organspezifische Verteilung: CK5/6: Basalzellen, Plattenepithel CK7: Drüsenepithel CK 8: Leber, Niere CK20: intestinal CK1,5,6,14: HMW; CK8,18: LMW Hilfreich bei Typisierung von Karzinomen Weitere Marker: Beispiele TTF1: Thyroid transcription factor 1 Cdx2: caudal type homöobox transcription factor Proteine in Mammaepithel- und Mammakarzinomzellen WT1: Wilms tumor 1 Neuroendocrine Tumoren (SCLC), Ewing, etc. GCDFP-15, Mammaglobin: Intestinale Tumoren (colorektal), Magenkarzinome NCAM (CD56): neural cell adhesion molecule Pneumozyten, Follikelepithel Schilddrüse; pulm. Adenokarzinome (>90%), foll.+pap. Schilddrüsenkarzinome Tubenepithel, Peritoneum, Pleura Seröse Adenoca (>Uterus); Mesotheliome Mart1 (Melan A): melanoma antigen recognized by T cells Nävuszellen, Maligne Melanome Maligner Pleuraerguß (Pleurakarzinose) Primäre Lungenkarzinome Karzinommetastasen Adenoca, Kleinzeller, Plattenepithelca Gastrointestinaltrakt Colon, Magen, Pankreas Ovarien, Mamma Maligne Lymphome Malignes Mesotheliom Malignes Melanom Fall 1: w, 91 J., einseitiger Pleuraerguss rechts, langsam progredient, makroskopisch hämorrhagisch Zytologie: Zellen eines Adenokarzinoms Diff-Quick Diff-Quick Zellblock für weiterführende Untersuchungen Immunhistochemie: CK7+/ TTF-1+/CK20-/cdx2Adenokarzinom der Lunge CK7 TTF-1 EGFR Testing aus Zellblock: Basis für targeted therapy Mutation L858R im Exon 21 (aktivierend) Fall 2: w, 83 J., St.p. lobuläres Mammakarzinom vor 4 J., ÖR+++/PR+, Her2 nicht amplifiziert, einseitiger Pleuraerguss links Zytologie: reichlich Karzinomzellen Diff-Quick Diff-Quick Fall 2: Zellblock für weiterführende Untersuchungen Zellblock H.E. Fall 2: Pleurakarzinose des Mammakarzinoms Immunhistochemie am Zellblock Calretinin GCDFP-15 Fall 2: Biomarker am Zellblock ÖR und PR negativ, Ki-67 10-20%, Her2 Score 2+, nicht amplifiziert Ki67 (MIB1) Her-2 neu Maligner Aszites (Peritonealkarzinose) Metastasen Gastrointestinaltrakt (Colon, Magen, Pankreas, Gallenwege) Weibliches Genitale (Ovar/Tube, Uterus) Mamma Primäres Peritonealkarzinom (≈Ovar) Malignes Mesotheliom Maligne Lymphome Fall 3: m, 57 J., Aszites unklarer Genese Zytologie: maligne Tumorzellen Diff-Quick Diff-Quick Fall 3: Siegelringzellkarzinom Zellblock: Bestätigung der Siegelringzellen HE Fall 3: Magenkarzinom, diffuser Typ nach Lauren Zellblock PAS BerEp4 Fall 4 w, 64 J. Dickdarmkarzinom (pT4G2N1M1) intraoperativ Aszites mit atypischen Zellen Diff-Quick Fall 4: atypische Zellen im Aszites Zellblock HE Fall 4: Colonkarzinomzellen im Aszites Immunhistochemie am Zellblock BerEp4 CK20 Fall 5 m, 74 J. dialysepflichtige Niereninsuffizienz einseitiger Pleuraerguss Zytologie Giemsa Fall 5: Zytologisch atypische lymphoide Zellen Zellblock Diagnose mittels Immunhistochemie: Diffuses großzelliges B-Zell Lymphom CD20 Bcl-2 Ki-67 c-myc Tumoren in mediastinalen Lymphknoten (EBUS Material) Karzinommetastasen Lunge Gastrointestinaltrakt Genitale (Ovarien, Uterus, Prostata) HNO Bereich, Schilddrüse Harntrakt Maligne Lymphome Lymphknotenmetastasen aus der Lunge (EBUS Material) Adenokarzinome Kleinzellige Karzinome Plattenepithelkarzinome Großzellige Karzinome Hochdifferenzierte neuroendokrine Karzinome (Karzinoid/atypisches Karzinoid) Fall 1: Zytologie EBUS w, 72 J. Verdacht auf zentrales Bronchuskarzinom rechts Lymphknotenbulk Eingang zum Mittellappenbronchus PAP Fall 1: Fester Bestandteil Lungenmetastase eines Mammakarzinoms (OP vor 10 J.) ÖR Mammaglobin Fall 2: Zytologie w, 74 J., St. p. Melanom-OP Expansion im Oberlappen der rechten Lunge Bronchoskopisch- bioptisch: Adenokarzinom, G2 Vergrößerte Lymphknoten Fall 2: Fester Bestandteil Metastase des bekannten Adenokarzinoms der Lunge Fall 3 Zytologie w, 71J., Expansion im Oberlappen rechts vergrößerte Lymphknoten rechts hilär klin. susp. N. bronchi Durchführung eines EBUS PAP Fall 3: Fester Bestandteil Fall 3: Fester Bestandteil EBUS Metastase eines Adenokarzinoms der Lunge TTF-1 Diagnostische Hilfe durch Immunhistochemie Adenokarzinom Lunge CK7+, CK20-(+), TTF1+ Kleinzelliges Karzinom NCAM+, CK dot-like Plattenepithelkarzinom CK5/6+, p63+ Mesotheliom Calretinin+, BerEpB4-, WT1+, D2-40+, CK5/6+ Metastase Colonca CK7-, CK20+, cdx2+ Metastase Magenca CK7+, CK20+(-), cdx2+/- Metastase Mammaca CK7+, CK20-, ER+(-), Mammaglobin+(-), GCDFP15+(-) Metastase Ovarialca CK7+, CK20-(+), WT1+, ER+(-) Metastase Melanom Melan A+, HMB45+, S100+, CK- Cave: Immunhistochemie ist kein Schwarz-Weiss Muster! Es gibt Ausnahmen……… Immunhistochemie für die DD der Lungenkarzinome: Tumortyp CK7 TTF-1, Napsin CK5/6 P63 NCAM Adeno + + - - Chromo Synapto - Plattenepithel - - + + - Kleinzeller (+) + - - (+) Großzeller -/+ - - -/+ - Karzinoid + - - + + Molekulare Diagnostik am FB/ Zellblock: Prädiktiv für Therapie Her2/neu ISH (FISH, CISH, SISH) K-RAS Kolorektales Karzinom EGFR Mammakarzinom, Magenkarzinom nicht-kleinzelliges Lungenca Diverse Translokationen (FISH) Lymphome Sarkome Pathologie LKH Graz West: Zunehmende Bedeutung des Zellblocks („emerging market“) Diagramm Zellblock Entwicklung Take Home Message Untersuchung aller festen Bestandteile Zellblock hilft bei der Lösung von Problemfällen in Zytologie (Ergänzung) Zellblock ermöglicht weiterführende Untersuchungen (IHC, Molekularpatho) IHC am Zellblock und festen Bestandteil ist wichtige diagnostische Hilfe Molekularpatho am Zellblock und FB: Basis für zielgerichtete Tumortherapie Danke für Ihre Aufmerksamkeit!
