Werner Ringtest
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Zur Diagnose der Klassischen Geflügelpest und der Newcastle Disease - Ringtest ND/AI 2003 • Ortrud Werner Friedrich-Loeffler-Institut Insel Riems Ringtest ND/AI 2003, AVID 2004 O. Werner, FLI Insel Riems Zielstellung • • Kontrolle der Fähigkeit der regionalen Laboratorien zur Diagnostik der anzeigepflichtigen Geflügelseuchen • Erkennen von Schwachstellen, die verbessert werden können/müssen Ringtest ND/AI 2003, AVID 2004 O. Werner, FLI Insel Riems 1 Newcastle Disease • Virulentes (mesogenes oder velogenes) aviäres PMV-1 - ICPI über 0,7 - basische AS an Spaltstelle des F0 • Nicht: PMV-2 bis PMV-9 • Nicht: lentogenes PMV-1 Ringtest ND/AI 2003, AVID 2004 O. Werner, FLI Insel Riems Klassische Geflügelpest • Hochpathogenes aviäres Influenzavirus H5 oder H7 • (Gering pathogenes AIV H5 oder H7) • Nicht: AIV anderer H-Subtypen • Seuchenverdacht bei AIV H5 oder H7 Ringtest ND/AI 2003, AVID 2004 O. Werner, FLI Insel Riems 2 Beteiligung • 24 Teilnehmer insgesamt 18 LUA 3 Hochschulen 3 Privatlabors Ringtest ND/AI 2003, AVID 2004 O. Werner, FLI Insel Riems Untersuchungsmaterial 4 Virocult-Tupfer • A B C D gering pathogenes AIV H7N7 PMV-1 vom Taubentyp lentogenes PMV-1, Typ La Sota Physiolog. Salzlösung Tupfer nach 48 h Lagerung bei Zimmertemperatur mit 2 ml aufgefüllt und verimpft. Probe A, B, C jeweils über 10 3,5 EID 50/0,2 ml Ringtest ND/AI 2003, AVID 2004 O. Werner, FLI Insel Riems 3 Probe A A/duck/Potsdam/15/80 (H7N7) • 12 / 24 korrekt identifiziert als AIV H7 11 / 24 akzeptables Ergebnis: AIV bei 3 davon HAH-Test mit H7-Serum positiv 1 / 24 falsches Ergebnis: AIV H5 O. Werner, FLI Insel Riems Ringtest ND/AI 2003, AVID 2004 Probe B PPMV-1/pigeon/Germany/R151/94 • 20 / 24 korrekt identifiziert als PMV-1 2 / 24 nicht ausreichend identifiziert: PMV 1x Elmi, 1x HAH ND-Serum positiv 2 / 24 falsches Ergebnis: - kein Virus nachweisbar - Influenzavirus Ringtest ND/AI 2003, AVID 2004 O. Werner, FLI Insel Riems 4 Probe C PMV-1/La Sota • 22 / 24 korrekt identifiziert als PMV-1 2 / 24 nicht ausreichend identifiziert: PMV 1x Elmi, 1x HAH ND-Serum positiv O. Werner, FLI Insel Riems Ringtest ND/AI 2003, AVID 2004 Probe D Negative Kontrolle • 22 / 24 korrekt identifiziert als negativ 2 / 24 falsches Ergebnis: - NDV - PMV (2. Eip.) Ringtest ND/AI 2003, AVID 2004 O. Werner, FLI Insel Riems 5 Zusammenfassung der Ergebnisse 11/24 alle Proben voll identifiziert 8/24 akzeptable Ergebnisse 5/24 je 1 falsches Ergebnis Ringtest 1999 12/23 alles richtig 4/23 akzeptabel 3/23 ein falsches Ergebnis 4/23 zwei falsche Ergebnisse Ringtest ND/AI 2003, AVID 2004 O. Werner, FLI Insel Riems Angewandte Methoden 22/24 15/24 Eikultur Zellkultur (2 ausschließlich) 22/24 7/24 18/24 HAH mit NDV-Serum HAH mit AIV H5-Serum HAH mit AIV H7-Serum 12/24 7/24 PCR auf AIV PCR auf NDV 7/24 4/24 5/24 IFT AGPT Elmi Ringtest ND/AI 2003, AVID 2004 O. Werner, FLI Insel Riems 6 Ursachen für unzureichende Ergebnisse • Unzureichendes Methodenspektrum – HAH nicht eingesetzt • Methoden werden nicht beherrscht oder sind nicht optimiert und liefern falsche Ergebnisse – HAH, NDV-PCR • Kontamination oder Verwechslungen bei der Probenbearbeitung Ringtest ND/AI 2003, AVID 2004 O. Werner, FLI Insel Riems Labordiagnostik der ND und AI im regionalen Untersuchungsamt (1) Methode Virusisolierung Brutei Virusisolierung Zellkultur HAH mit NDV-Serum HAH mit AIV H5 und H7 Serum Influenza-M-PCR NDV-PCR Elmi IFT mit NDV- oder Infl.konjugat Ringtest ND/AI 2003, AVID 2004 + HA-Agens HA-Agens PMV1 AIV H5 oder H7 Infl-A-Virus (alle H-Subtypen) PMV-1 PMV oder Influenzavirus PMV-1 oder Influenzavirus O. Werner, FLI Insel Riems 7 Labordiagnostik der ND und AI im regionalen Untersuchungsamt (2) PMV-1 Andere PMV AIV H5 AIV H7 Andere AIV EDSVirus Ei HA+ + + + + + + HAH NDV + - - - - - HAH H5 - - + - - - HAH H7 - - - + - - AIV-PCR (M) - - + + + - NDV-PCR + - - - - - Elmi PMV PMV Orthomyxo Orthomyxo Orthomyxo Adeno Ringtest ND/AI 2003, AVID 2004 O. Werner, FLI Insel Riems Danke für Ihre Aufmerksamkeit! Ringtest ND/AI 2003, AVID 2004 O. Werner, FLI Insel Riems 8 Seit 1995 im NRL charakterisierte aviäre Influenzavirus-Isolate aus Wirtschaftsgeflügel Jahr Anzahl Subtyp Tierart 1995 5 H9N2 Pute, Huhn 1996 6 H9N2 Pute 1997 0 1998 4 H9N2, H6N5 Huhn, Pute 1999 4 H6N2, H6N1 Pute 2000 0 2001 1 H7N7 Pute 2002 15 H6N2 Pute 2003 2 H7N7, H6N Huhn, Ente 2004 1 H6N Ente Ringtest ND/AI 2003, AVID 2004 O. Werner, FLI Insel Riems Labordiagnose der Geflügelpest - Nationales Referenzlabor • Anzucht/Vermehrung im Brutei • HAH mit NDV-Serum • HAH mit Seren gegen H1 bis H13 • Intravenöser Pathogenitätsindex • M-PCR • NDV-PCR • Subtypspezifische H7- und H5PCR • Sequenzierung der Spaltstelle des HAo • Neuraminidase-Subtypisierung (N1 bis N9) • weitere Charakterisierung → Hochpathogenes AIV vom Subtyp H5 oder H7 → Geflügelpest Ringtest ND/AI 2003, AVID 2004 O. Werner, FLI Insel Riems 9 Definition der Klassischen Geflügelpest gemäß Richtlinie 92/40/EWG Die Geflügelpest ist eine Infektionskrankheit, verursacht durch ein Influenza-A-Virus mit einem intravenösen Pathogenitätsindex in sechs Wochen alten Hühnern von 1.2 oder mehr oder eine Infektion mit einem Influenza-A-Virus der Subtypen H5 oder H7, bei dem im Rahmen einer Nukleotid-Sequenzanalyse multiple basische Aminosäuren im Spaltbereich des Hämagglutinins nachgewiesen wurden. Ringtest ND/AI 2003, AVID 2004 O. Werner, FLI Insel Riems 10
