Rev. 0.1 v1 6600 Sierra College Blvd. • Rocklin, CA 95677 USA • 800-665-7284 CMC36311001 PAX-8 (polyclonal) Zur Verwendung In Der In Vitro Diagnostik (IVD) Deutsch: Anwendungsvorschriften Präsentation Anti-PAX-8 ist polyklonaler antiköper, gereinigte immunglobulin-faktion aus kaninchen-antiserum in trisgepufferter Kochsalzlösung (pH 7.3-7.7), mit eiweiß kern und konserviert mit natriumazid. Einsatzgebiete Dieses Protein gehört zu den Paired-Box (PAX) Transkriptionsfaktoren. Mitglieder dieser Genfamilie codieren normalerweise Proteine, die eine Paired-BoxDomäne und eine gepaarte Homeodomäne enthalten. Dieses Kernprotein ist bei der follikulären Zellentwicklung in der Schilddrüse und der Expression von schilddrüsenspezifischen Genen beteiligt. Mutationen dieses Gens werden mit Schilddrüsendysgenesie, follikulären Schilddrüsenkarzinomen und atypischen Schilddrüsenadenomen in Verbindung gebracht. PAX-8 ist in den thyroiden (und verbundenen Karzinomen), nicht-ciliierten Schleimhautzellen der Eileiter und einfachen Eierstockeinschlüsse exprimiert, nicht aber in den normalen Epithelzellen der Eierstockoberfläche. PAX-8 ist in einem hohen Prozentsatz der flüssigen ovarialen, endometrioiden und klarzelligen Karzinomen exprimiert, aber nur selten in den primären ovarialen Schleimhaut-Adenokarzinomen. Studien haben auch die Expression von PAX-8 in den Nierentubuli sowie Nierenkarzinomen, Nephroblastomen und Seminomen belegt. Eine vor kurzem veröffentlichte Studie von Tond, et al. zeigte, dass 98% der klarzelligen Nierenkarzinome, 90% der papillären Nierenkarzinome und 95% der Onkozystome positiv auf PAX-8 reagierten, Häufigkeiten, die ähnlich oder besser sind als für PAX-2. Aus diesem Grund kann PAX-8 als zusätzlicher immunohistochemischer Marker für Nierenepitheltumore verwendet werde. Normale Lungen und Lungenkarzinome exprimieren kein PAX-8. Ähnlich deutet das Fehlen von PAX-8 bei Brust- und anderen nicht-GYN-Karzinomen außer den für die Schilddrüse primären, darauf hin, dass PAX-8 ein wichtiger neuer Marker für Eierstockkrebs und ein nützlicher Marker für die Differenzialdiagnose bei Lungen- und Nackentumoren oder Tumoren an entfernten Stellen ist, bei denen primäre Lungenkarzinome bzw. Schilddrüsenkarzinome eine Möglichkeit sind. PAX-8, zusammen mit organsystemspezifischen Markern wie Uroplakin, Mammaglobin und TTF-1, können ein sehr hilfreiches Feld zur Bestimmung der Primärorte von invasiven mikropapillaren Karzinomen der Eileiter von Blase, Lunge und Brust aus sein. Anwendung Kontrolle Visualisierung Haltbarkeit Paraffin, eingefroren Ovarialkarzinom (nicht muzinöses Karzinom), Schilddrüsenkarzinom Nukleär Bis zu 36 monate; lagerung bei 2-8° C Die Immunoglobulinkonzentration des Reagenzes ist auf dem Produk- tetikett angegeben. Die antikörperfarbe hat keinen einfluss auf das ergebnis Beschreibung 0.1 ml, konzentrat 0.5 ml, konzentrat 1 ml, vorverdünnt 7 ml, vorverdünnt Positivkontrollen P C Kat. Nr. 363A-14 363A-15 363A-17 363A-18 363S Verdünnung/Kommentar 1:25 - 1:100* 1:25 - 1:100* Gebrauchsfertig Gebrauchsfertig 5 lames/paquet vorverdünnt konzentrat *Die Verdünnungen oben sind Schätzungen; tatsächliche Resultate können wegen der Veränderlichkeit in den Methoden und in den Protokollen sich unterscheiden. Gültigkeitserklärung der Antikörperleistung und -protokolls ist die Verantwortlichkeit des Endbenutzers. Rev. 0.1 v1 6600 Sierra College Blvd. • Rocklin, CA 95677 USA • 800-665-7284 CMC36311001 PAX-8 (polyclonal) Zur Verwendung In Der In Vitro Diagnostik (IVD) Deutsch: Anwendungsvorschriften Vorbereitung und Vorbehandlung 1.Von formalin-fixierten und in Paraffin eingebetteten Gewebeproben 3-4 µm dicke Schnitte anfertigen und auf positiv geladene Objektträger legen. Über Nacht bei 58° C trocknen. 2.Entparaffinieren, rehydrieren und Epitopdemaskierung (Epitoprückgewinnung). Die bevorzugte Methode für die Vorbehandlung ist die Technik der Hitze-induzierten Epitop-Rückgewinnung (HIER) mit Cell Marque’s Trilogy™ in Verbindung mit einem Dampfkocher. Diese Methode gestattet die gleichzeitige Entparaffinierung, Rehydrierung und Demaskierung (Epitoprückgewinnung). 5 mal mit frischem destilliertem oder deionisiertem Wasser spülen. 3.Bei der Verwendung eines HRP-Detektionssystems Objektträger für 10 Minuten mit Peroxidase-Blocker behandeln und anschließend spülen. Wenn AP Detektionssystem verwendet wird, lassen Sie diesen Schritt aus. Empfohlenes Protokoll für die Färbung bei Raumtemperatur mit dem CytoScan™ BSA Detektionssystem 1.Primärantikörper 30 - 60 Minuten inkubieren; spülen. 2.Brückenantikörper 10 Minuten inkubieren; spülen. 3.Markierten Sekundärantikörper 10 Minuten inkubieren; spülen. 4.Ausreichende Menge Chromogen 1 - 10 Minuten inkubieren; spülen. 5.Entwässern und mit Deckgläschen bedecken. Empfohlenes Protokoll für die Färbung bei Raumtemperatur mit dem PolyScan™ Polymer Detektionssystem 1.Primärantikörper 30 - 60 Minuten inkubieren; spülen. 2.PolyScan™ Polymer Kaninchen/Maus Detektionssystem 30 Minuten inkubieren, spülen. 3.Ausreichende Menge Chromogen 1 - 10 Minuten inkubieren; spülen. 4.Entwässern und mit Deckgläschen bedecken. Literatur 1. Tamara L, Lotan, et al., Immunohistochemical panel to identify the primary site of invasive micropapillary carcinoma. Am J Surg Pathol. 2009. 2. Daisuke Nonaka, Yunjia Tang, et al., Diagnostic utility of thyroid thranscription factors Pax8 and TTF-2 (Fox E1) in thyroid epithelial neoplasms. Mod. Pathol. 2008;21: 192-200. 3. Nikiforova MN, Biddingger Pw, et al., PAX8-PPARgamma rearrangement in thyroid tumors: RT-PCR and immunphistochemical analyses. Am J Surg Pathol. 2002 Aug;26(8):1016-23. 4. Marques AR, Espadinha C, et al., Expression of PAX8-PPAR gamma1 rearrangements in both follicular thyroid carcinoma and adenomas. J Clin Endocrinol Metab. 2002 Aug; 87(8):3947-52. 5. Tina DP, Rpberto Nitsch, et al., The paired Domain-containing factor Pax8 and the homeodomain-containing factor TTF-1 directly interact and synergistically activate transcription. J. Bio Chem. 2003 Jan;278(5)3395-3402. 6. Zhang P, Zuo H, et al., Immunohistochemical analysis of thyroid-specific transcription factors in thyroid tumors. Pathol Int 2006; 56:240-245. 7. 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