Pfu/Psp (RTL) DNA Polymerase

Datasheet
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Pfu/Psp RED DNA Polymerase
Features/Beschreibung:
Pfu/Psp-DNA-Polymerase ist eine hochprozessive 5'→3'- DNA-Polymerase mit einer zusätzlichen 3'→5'-ExonukleaseAktivität (proof-reading). Eine 5'→3'-Exonuklease-Aktivität ist nicht vorhanden. Pfu/Psp-DNA-Polymerase ist
besonders hoch aufgereinigt. Im Vergleich zu anderen Polymerasen ist das Enzym thermostabiler und hat eine ca. 10fach höhere Genauigkeit gegenüber der Taq DNA Polymerase. Die PCR Produkte sind "blunt-end". Für die visuelle
Kontrolle und für ein direktes Laden auf ein Agarosegel enthält das Produkte einen Farbstoff, der gleichzeitig den
Ladepuffer ersetzt. Die Polymerase ist dadurch "Ready-to-Load" = RTL.
Anwendungen:
- "blunt end" PCR Klonierung
- "High-fidelity" PCR
- Primer-Extensions Reaktionen
Konzentration: 1 u/µl
Einheitendefinition:
Eine Unit ist die Enzymmenge, die benötigt wird, um 10 nmol dNTP in 30 min bei 72 °C in säureunlösliche Substanz
zu überführen.
Lagerpuffer:
50 mM Tris-HCl, pH 8.2, 0.1 mM EDTA, 0.1% Tween 20, 0.1% Nonident P40, 1 mM DTT, 50% Glycerol, roter
Farbstoff/Ladepuffer
10 X Reaktionspuffer:
100 mM KCl, 160 mM (NH4)2SO4, 20 mM MgSO4, 200 mM Tris-HCl, pH8.8, 1% Triton X-100, 1 mg/ml BSA
Qualitätstests:
- Frei von Endonukleasen
- PCR Tests mit Lambda DNA und humaner Plazenta DNA
- Reinheit: SDS-Page > 90 %
Anwendung
- Verwenden Sie kein dUTP
Komponenten
10X Reaktionspuffer mit MgSO4
dNTP-Mix (40mM = 10mM pro Nukleotid)
Up-stream primer (z.B. 20 µM)
Down-stream primer (z.B. 20 µM)
Template DNA (10 ng/µl)
Pfu/Psp DNA Polymerase (1 u/µl)
Steriles dest. Water (PCR-Grade)
Volumen/Reaktion
5 µl
1.0 µl
0,5 µl
0.5 µl
1.0 µl
1 - 2 µl
up to 50 µl
End-Konz.
1X
200 µM pro Nukl.
0.1-1.0 µM
0.1-1.0 µM
<= 0,5 µg
1-2 units
Hinweis:
- Alle Komponenten vor dem Ansatz vortexen
- Reaktionsgemisch auf Eis ansetzen
- Das Enzym nach der Template-DNA zusetzen
- Möglicherweise ist es erforderlich die MgSO4 zu optimieren
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Contact Phone +49-(0)-621- 5720 864 Fax: +49-(0)-621-5724 462
E-Mail: mailto:[email protected] WEB: http://www.taq-dna.com/
Version: 25.10.2009 AS
Datasheet
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Allgemeines Cycler-Protokoll:
Schritt
Erste Denaturierung
Zeit
1-3 min
Temperatur
95°C
25-35 Zyklen:
Denaturierung
Annealing
Extension
30-100 sec
30-65 sec
1-2 min (per 1kb)
95°C
37-69°C
72-75°C
Final extension
5 min
72-75°C
Lagerung: bei -20°C für 24 Monate
Transport: mit Kühlakkus
Bestellinformation:
Kat.-Nr:
S127
S119
S120
Beschreibung
Pfu/Psp RTL DNA Polymerase
Pfu/Psp RTL DNA Polymerase
Pfu/Psp RTL DNA Polymerase
Menge
1x250 units
2x250 units
10x250 units
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Version: 25.10.2009 AS