Aus der Ambulatorischen und Geburtshilflichen Tierklinik der Veterinärmedizinischen Fakultät der Universität Leipzig Einfluss einer intramammären Endlaktationstherapie auf das Ergebnis der späteren antibiotischen Trockenstellung bei Kühen mit klinisch inapparenten Eutererkrankungen Inaugural-Dissertation zur Erlangung des Grades eines Doctor medicinae veterinariae (Dr. med. vet.) durch die Veterinärmedizinische Fakultät der Universität Leipzig eingereicht von Diana Felgendreher aus Salzwedel Leipzig, 2005 Mit Genehmigung der Veterinärmedizinischen Fakultät der Universität Leipzig Dekan: Prof. Dr. Gotthold Gäbel, Betreuer: Prof. Dr. Axel Sobiraj, Gutachter: Prof. Dr. Axel Sobiraj, Ambulatorische und Geburtshilfliche Tierklinik, Veterinärmedizinische Fakultät der Universität Leipzig PD Dr. Peggy Braun, Institut für Lebensmittelhygiene, Veterinärmedizinische Fakultät der Universität Leipzig PD Dr. Rainer Hospes, Klinik für Geburtshilfe, Gynäkologie und Andrologie der Groß- und Kleintiere mit Tierärztlicher Ambulanz Justus-Liebig-Universität Gießen Tag der Verteidigung: 26. April 2005 gewidmet meinen Eltern Arnhild und Edmund Felgendreher Inhaltsverzeichnis 1 Einleitung 1 2 Literaturübersicht 3 2.1 Die Milchdrüse des Rindes 3 2.1.1 Allgemeines 3 2.1.2 Abwehrfaktoren der Milchdrüse 3 2.1.2.1 Strichkanal 4 2.1.2.2 Phagozytose 4 2.1.2.3 Spezifisches Abwehrsystem 5 2.2 Wichtige Kriterien der Milchuntersuchung 5 2.2.1 Zellzahl 5 2.2.1.1 Einfluss der Laktationszahl auf die Zellzahl 7 2.2.1.2 Einfluss des Laktationsstadiums auf die Zellzahl 7 2.2.1.3 Einfluss der Melkfrequenz auf die Zellzahl 7 2.2.1.4 Verfahren zur Bestimmung der Zellzahl 7 2.2.1.4.1 Mikroskopische Zählung 8 2.2.1.4.2 Elektronische Partikelzählung (Coulter-Counter-Verfahren) 8 2.2.1.4.3 Fluoreszenzoptische Zellzählung (Fossomatic®-Verfahren) 8 2.2.1.4.4 Indirekte Messung (Schalmtest) 9 2.2.2 Elektrische Leitfähigkeit 9 2.2.3 Keimzahl 10 2.3 Bovine Mastitis 10 2.4 Klinisch inapparente Euterinfektionen 11 2.4.1 Pathogenese der subklinischen Mastitis 12 2.4.2 Infektionsrisiko 13 2.4.3 Erreger der subklinischen Mastitis 13 2.4.3.1 Grampositive Kokken 14 2.4.3.1.1 Staphylococcus 14 2.4.3.1.1.1 S. aureus 15 2.4.3.1.1.2 Koagulasenegative Staphylokokken (KNS) 16 2.4.3.1.2 Streptokokken 17 2.4.3.1.2.1 Sc. agalactiae 17 2.4.3.1.2.2 Sc. dysgalactiae 18 2.4.3.1.2.3 Sc. uberis 18 2.4.3.1.2.4 Streptococcus spp. 18 2.4.3.1.3 Enterokokken 19 2.4.3.2 Andere Keime 19 2.4.4 Erregerverteilung 19 2.4.5 Diagnose subklinischer Mastitiden 21 2.4.6 Mastitistherapie 22 2.4.6.1 Therapie der Mastitis allgemein 22 2.4.6.2 Impfung 23 2.4.6.3 Therapie subklinischer Mastitiden 23 2.4.6.3.1 Laktationstherapie 24 2.4.6.3.2 Wirkstoffverhalten nach intramammärer Applikation 25 2.4.6.3.2.1 Pharmazeutische Phase 25 2.4.6.3.2.2 Pharmakokinetische Phase 25 2.4.6.3.3 Therapie der subklinischen Mastitis mit Cephalosporinen 25 2.4.6.3.4 Heilungserfolg der Laktationstherapie 26 2.5 Mastitisprophylaxe 28 2.6 Trockenstehendes Euter 28 2.6.1 Trockenstellen 29 2.6.1.1 Methoden des Trockenstellens 29 2.6.1.1.1 Trockenstellen durch wiederholtes Überspringen einer Melkzeit 29 2.6.1.1.1.1 Ohne Einsatz von Medikamenten 29 2.6.1.1.1.2 Unter Einsatz von Medikamenten 29 2.6.1.1.2 Abruptes Trockenstellen 30 2.6.1.1.2.1 Ohne Einsatz von Medikamenten 30 2.6.1.1.2.2 Unter Einsatz von Medikamenten 30 2.6.2 Phasen der Trockenperiode 30 2.6.3 Länge der Trockenstehphase 30 2.6.4 Bedeutung des Trockenstehens 31 2.6.5 Trockenstelltherapie 31 2.6.5.1 Bedeutung der Trockenstelltherapie 33 2.6.5.2 Diagnostik beim Trockenstellen und in der Trockenstehzeit 34 2.6.5.3 Anforderungen an Trockenzeitpräparate 35 2.6.5.4 Heilungserfolg subklinischer Mastitiden durch antibiotisches Trockenstellen 2.6.5.5 Ursachen für das Versagen der antibiotischen Therapie zum Trockenstellen 2.6.6 36 38 Alternativen zum antibiotischen Trockenstellen zur Verhinderung von Neuinfektionen 38 2.6.6.1 Externe Zitzenversiegler 39 2.6.6.2 Interne Zitzenversiegler 39 2.7 Resistenzen infektiöser Keime gegen Antibiotika 39 3 Tiere, Material und Methoden 41 3.1 Betriebsauswahl 41 3.2 Betriebsbeschreibung 41 3.2.1 Bauliche Gegebenheiten 41 3.2.2 Fütterung und Tränke 42 3.2.3 Melkvorgang 42 3.3 Vorauswahl von Kühen 43 3.3.1 Einschlusskriterien 43 3.3.2 Ausschlusskriterien 44 3.4 Versuchsaufbau 44 3.5 Milchprobenentnahme und Versand 45 3.6 Arzneimittel und Kontrollsubstanzen 46 3.7 Dokumentation 47 3.8 Behandlung / Behandlungsgruppen 47 3.8.1 Applikation des Euterinjektors Peracef® 49 3.8.2 Applikation des Trockenstellers 50 3.9 Überprüfung der Heilungserfolge 50 3.9.1 Kontrolle des Behandlungserfolges 50 3.9.2 Überprüfung der Selbstheilung 50 3.9.3 Kontrolle der Trockenstelltherapie 51 3.10 Versuchszeitraum 51 3.11 Untersuchung der Milchproben 51 3.11.1 Zellzählung in den eingesandten Proben 51 3.11.2 Isolierung und Identifizierung von Mastitiserregern 52 3.11.2.1 Kulturmedien 52 3.11.2.2 Präparation der Proben 52 3.11.2.3 Inkubation 52 3.11.2.4 Identifizierung spezifischer Mastitiserreger 52 3.11.2.4.1 Auswertungskriterien 52 3.11.2.4.2 Biologische Merkmale 52 3.12 Statistische Auswertung 56 4 Ergebnisse 57 4.1 Anzahl der Kühe im Versuch 57 4.1.1 Anzahl von Kühen zum Tag MP1 (31 Tage vor Laktationsende) 57 4.1.2 Anzahl von Kühen zum Tag MP2 (24 Tage vor Laktationsende) 57 4.1.3 Anzahl von Kühen zum Tag MP3 (23 Tage vor Laktationsende) 57 4.1.4 Anzahl von Kühen zum Tag MP4 (7 Tage vor Laktationsende, 15 Tage nach Therapieende) 4.1.5 57 Anzahl von Kühen zum Tag MP5 (Tag des Trockenstellens, 22 Tage nach Therapieende) 57 4.1.6 Anzahl von Kühen zum Tag MP6 (Tag der Geburt) 57 4.1.7 Anzahl von Kühen zum Tag MP7 (1 Woche post partum) 58 4.1.8 Anzahl von Kühen zum Tag MP8 (28 Tage post partum) 58 4.2 Gründe für das Ausscheiden von 15 Kühen 58 4.3 Selektion der Milchproben nach dem zytobakteriologischen Untersuchungsbefund 58 4.3.1 Verteilung der Zellzahlgruppen 59 4.3.1.1 MP1 (31 Tage vor Laktationsende) 59 4.3.1.2 MP2 (24 Tage vor Laktationsende) 61 4.3.1.3 MP3 (23 Tage vor Laktationsende) 62 4.3.2 Verteilung der Erreger 64 4.3.2.1 MP1 (31 Tage vor dem Laktationsende) 64 4.3.2.2 MP2 (24 Tage vor dem Laktationsende) 65 4.3.2.3 MP3 (23 Tage vor dem Laktationsende) 66 4.3.3 Verteilung der Erreger bezogen auf die Zellzahlgruppen 67 4.3.3.1 Zeitpunkt MP1 (31 Tage vor Laktationsende) 67 4.3.3.2 Zeitpunkt MP2 (24 Tage vor Laktationsende) 68 4.3.3.3 Zeitpunkt MP3 (23 Tage vor Laktationsende) 4.3.4 Zeitpunkt MP4, Erregerverteilung (7 Tage vor Laktationsende, 69 15 Tage nach Therapieende) 70 4.3.4.1 Erregerverteilung in der Therapiegruppe 70 4.3.4.2 Erregerverteilung in der Kontrollgruppe 70 4.3.5 Zeitpunkt MP4, Zellzahlgruppenverteilung 72 4.3.5.1 Zellzahlgruppenverteilung in der Therapiegruppe 72 4.3.5.2 Zellzahlgruppenverteilung in der Kontrollgruppe 72 4.3.6 Zeitpunkt MP5, Erregerverteilung ( Tag des Trockenstellens, 22 Tage nach Therapieende) 72 4.3.6.1 Erregerverteilung in der Therapiegruppe 72 4.3.6.2 Erregerverteilung in der Kontrollgruppe 72 4.3.7 Zeitpunkt MP5, Zellzahlgruppenverteilung 74 4.3.7.1 Zellzahlgruppenverteilung in der Therapiegruppe 74 4.3.7.2 Zellzahlgruppenverteilung in der Kontrollgruppe 74 4.4 Heilungserfolg 74 4.4.1 Heilungserfolg der Endlaktationstherapie 74 4.4.2 Selbstheilungsrate in der Kontrollgruppe 74 4.4.3 Vergleich beider Therapiegruppen bezüglich der Heilungsraten 75 4.5 Erregerverteilung und Zellzahlgruppenverteilung nach dem Abkalben 76 4.5.1 Erregerverteilung zum Zeitpunkt MP6 (Tag der Geburt) 76 4.5.2 Erregerverteilung zum Zeitpunkt MP7 (7 Tage p. p.) 77 4.5.3 Zellzahlgruppenverteilung zum Zeitpunkt MP7 (7 Tage p. p.) 79 4.5.4 Erregerverteilung zum Zeitpunkt MP8 (28 Tage p. p.) 79 4.5.5 Zellzahlgruppenverteilung zum Zeitpunkt MP8 80 4.6. Erläuterungen zu den aufgetretenen klinischen Mastitiden 80 4.7. Heilungserfolg der Trockenstelltherapie 81 4.7.1 Heilungserfolg der Trockenstelltherapie in der Therapiegruppe 81 4.7.2 Heilungserfolg der Trockenstelltherapie in der Kontrollgruppe 81 4.7.3 Vergleich beider Therapieformen 82 5 Diskussion 84 5.1 Ziel der Untersuchungen 84 5.2 Erläuterungen zur Wahl der Untersuchungsmethoden 84 5.3 Ergebnisse 87 5.3.1 Einfluss der Laktationsnummer 87 5.3.2 Verteilung der Erreger bezogen auf die Zellzahlgruppen 87 5.3.3 Beurteilung der Endlaktationstherapie 87 5.3.4 Beurteilung des Trockenstellerfolges 88 5.4 Schlussbetrachtung 89 6 Zusammenfassung 93 7 Summary 95 8 Literaturverzeichnis 97 Liste der Abkürzungen A. Arcanobacterium Abb. Abbildung AG Aktiengesellschaft ad us. vet. ad usum veterinarium a. p. ante partum BU Bakteriologische Untersuchung bzw. beziehungsweise °C Grad Celsius ca. zirka Cl Chlor cm Zentimeter cm² Quadratzentimeter DDR Deutsche Demokratische Republik d. h. das heißt DIN Deutsche Industrie-Norm DNA Desoxyribonukleinsäure DVG Deutsche Veterinärmedizinische Gesellschaft E. coli Escherichia coli EDV Elektronische Datenverarbeitung et al. et alii EU Europäische Union e. V. eingetragener Verein Fa. Firma g Gramm G+C-Gehalt Guanin+Cytosin-Gehalt GmbH Gesellschaft mit beschränkter Haftung ha Hektar HF Holstein-Friesian IDF International Dairy Federation Ig Immunglobulin K Kalium kg Kilogramm KNS koagulasenegative Staphylokokken kPa Kilopascal l Liter LDH Laktatdehydrogenase LMBG Lebensmittel- und Bedarfsgegenständegesetz MHK Minimale Hemmkonzentration Mio. Millionen m² Quadratmeter mg Milligramm ml Milliliter MLP Milchleistungsprüfung mm Millimeter µm Mikrometer MP Milchprobe Na Natrium NaCl Natriumchlorid n. s. nicht signifikant o. b. B. ohne besonderen Befund p. p. post partum S. aureus Staphylococcus aureus Sc. Streptococcus SMR Schwarzbuntes Milchrind spp. Spezies t Tonne TGD Tiergesundheitsdienst TS Trockenstellen u. a. unter anderem z. B. zum Beispiel ZZ Zellzahl(en) § Paragraph % Prozent 1 1 Einleitung Die Viehhaltung als Grundlage der Versorgung mit tierischen Nahrungsmitteln ist die Haupteinkommensquelle der Landwirtschaft. Insgesamt wurden im Jahr 2002 in Deutschland 27.874.000 t Milch erzeugt (Statistisches Jahrbuch 2003). Die Wirtschaftlichkeit der Milchproduktion ist nicht nur von der Milchleistung der einzelnen Kuh abhängig, sondern zunehmend von der Produktion qualitativ hochwertiger Milch. Die entscheidende Voraussetzung zur Erzeugung eines so hochwertigen Lebensmittels ist die Gesundheit der Milchdrüse. Aus ökonomischen und lebensmittelhygienischen und folglich gesundheitlichen Verbraucherschutzgründen ist diese Tatsache zu einer Existenzfrage für Milcherzeuger geworden. Die von KLIMMER im Jahre 1929 geäußerte Feststellung, dass auch uns Tierärzten eine große und bedeutungsvolle Aufgabe an der Steigerung der Milchbeschaffenheit zufällt, hat bis zum heutigen Tage nicht an ihrer Wertigkeit verloren. Schon in der amtlichen Begründung zum Milchgesetz vom 31. Juli 1930 heißt es: „ Die Sicherstellung einer stofflich und gesundheitlich einwandfreien Milch bildet eine unerlässliche hygienische Forderung. Für die Erzielung einer derartigen Milch ist in erster Linie der Gesundheitszustand der Milchtiere maßgebend. Gesunde Milch kann nur von gesunden Kühen gewonnen werden“ (Reichstagsdrucksache 1930). HAMANN (2002) präzisierte diesen Fakt zusätzlich mit der Forderung, dass diese gesunden Kühe auch vier gesunde Euterviertel besitzen müssen. Mastitiden, die in den meisten Fällen auf einer bakteriellen Infektion der Milchdrüse beruhen, stellen neben der Unfruchtbarkeit und Gliedmaßenerkrankungen eine der bedeutendsten und verlustreichsten Erkrankungen in der Milchviehhaltung dar. So wurden nach Angaben von HAMANN (2001) im Jahre 1999 in Deutschland 15,9 % der Kühe aufgrund von Mastitiserkrankungen geschlachtet. Klinisch inapparente Euterinfektionen machen den Hauptteil des Mastitisgeschehens aus. Sie treten 20- bis 50-mal häufiger als klinische Mastitiden auf (TOLLE 1982, DODD 1983, BRAMLEY u. DODD 1984). Man kann davon ausgehen, dass keine Herde frei von Kühen mit subklinischen Mastitiden ist. Die Häufigkeit der Neuinfektionen und die Dauer vorhandener Infektionen bestimmen den Infektionsgrad (DODD u. GRIFFIN 1975). 2 Die finanziellen Verluste entstehen den Betrieben sowohl durch Kürzungen des Milchgeldes nach der Milchgüteverordnung und Wegfall der Qualitätszuschläge, vor allem aber durch geringere Milchleistung so erkrankter Kühe und tierärztliche Behandlungskosten. Neben den Milchleistungseinbußen und der Gefährdung der Eutergesundheit des Bestandes besteht außerdem jederzeit die Möglichkeit, dass sich aus einer subklinischen Mastitis eine klinische Form entwickelt. Die Rolle der Therapie während der Laktation im Rahmen der Bekämpfung der subklinischen Rindermastitis wird in der Literatur kontrovers diskutiert. Schlechte Behandlungsergebnisse, besonders bei der S. aureus-Mastitis, werden günstigeren Behandlungserfolgen gegenübergestellt, die im Verbund mit hygienischen Maßnahmen eine begrenzte Therapie in der Laktation zweckmäßig erscheinen lassen. Das alleinige lokal-antibiotische Trockenstellen von Kühen, die an subklinischer Mastitis erkrankt sind, reicht nicht aus (GEDEK 1980, MEIN u. BROWNING 1990). Bei Auftreten klinisch inapparenter Euterinfektionen wird vielfach empfohlen, noch vor dem antibiotischen Trockenstellen eine Endlaktationstherapie mit Kurzzeitpräparaten durchzuführen (KLEINSCHROTH et al. 1990, KLEINSCHROTH 1992, FEHLINGS 1995, TSCHISCHKALE 1996, FEHLINGS 1999). Mit zunehmendem Kostendruck im Bereich der Milchproduktion und der zwingend notwendig gewordenen Verringerung des Antibiotikaeinsatzes in der Veterinärmedizin soll die vorliegende Arbeit die Effektivität einer solchen Endlaktationstherapie prüfen. 3 2 Literaturübersicht 2.1 Die Milchdrüse des Rindes 2.1.1 Allgemeines Phylogenetisch ist die Milchrüse eine Hautdrüse, für deren besondere Ausbildung beim weiblichen Tier der Einfluss der Geschlechtshormone bestimmend ist (MICHEL 1994). Das Euter des Rindes besteht in der Regel aus vier einzelnen Vierteln, die anatomisch als Hälften zu trennen, funktionell jedoch völlig selbstständig sind. Der Drüsenkörper besteht aus Alveolen, Läppchen und Lappen (WENDT et al. 1998). Die laktierende Milchdrüse wird zur Gewährleistung einer ausreichenden Versorgung mit Nährstoffen und Sauerstoff stark durchblutet. Für die Bildung von 1 kg Milch bedarf es eines Blutdurchflusses im Euter von 500 l Blut (SCHENCK u. KOLB 1982). In Millionen von Alveolen, in denen die einzelnen Milchkomponenten produziert werden, sammelt sich die Milch. Zur Melkzeit befindet sich schon etwas Milch in der Euterzisterne, die sich leicht absaugen lässt. Das durch die mechanische Stimulation frei werdende Oxytocin bewirkt durch das Kontrahieren der Myoepithelzellen rund um die Alveolen ein Auspressen der Milch in die Euterzisterne, die sich dann problemlos ausmelken lässt. 2.1.2 Abwehrfaktoren der Milchdrüse Das natürliche Abwehrsystem des Rindereuters besteht neben morphologischen Einrichtungen des Zitzenkanals aus dem mechanischen Ausspülen der Erreger beim Melkakt, dem bakteriziden Laktosebum im Zitzenkanal und dem Bakterienantagonismus in dessen Spitze, systemischen Abwehrzellen sowie enzymatischen Resistenzfaktoren in der Milch. Nach WENDT et al. (1998) lassen sich die wesentlichen Faktoren in drei Bereiche der Milchdrüse aufteilen ● Zitzenbarriere ● Abwehrpositionen in der Milch ● Blut-Milch-Schranke. Das lokale Abwehrsystem ist eingebunden in die Euterschranken. Die BlutEutergewebe-Milch-Schranke mit den Anteilen Blutkapillare-Bindegewebe und Bindegewebe-Alveolarepithel bzw. Gangepithel-Milch und die Blut-Milch-Schranke mit dem Anteil Blutkapillare-Alveolarepithel bzw. Gangepithel-Milch ermöglichen einen gezielten Austausch in beide Richtungen (DVG 1993). 4 2.1.2.1 Strichkanal Der größte Teil der Euterinfektionen erfolgt über den Strichkanal (HAMANN 1989a, SENFT u. NEUDECKER 1991). Er ist die erste Barriere gegen das Eindringen von Mastitiserregern (DVG 2002). Ein Eindringen fremder Bestandteile ins Euter durch den Zitzenkanal wird durch den Schließmuskel erschwert, teilweise auch verhindert. Das im Stratum corneum des Strichkanalepithels gebildete Strichkanalkeratin stellt die nächste mechanische Barriere für eingedrungene Erreger dar. Zusätzlich wirkt das Strichkanalkeratin auch bakteriostatisch bzw. bakterizid (SENFT u. NEUDECKER 1991). Der intensive Verhornungsprozess und der nach außen gerichtete Nachschub der Hornschicht tragen einerseits in Verbindung mit dem Schließmuskel der Zitze zur Einengung des Strichkanallumens zwischen den Melkzeiten bei und wirken so aszendierenden Infektionen der Milchdrüse entgegen, andererseits wird die Hauptmasse der eingedrungenen Mikroorganismen mit abschilfernden Hornschuppen ständig entfernt (SMOLLICH u. MICHEL 1992). Die Fürstenbergsche Rosette bildet am Übergang vom Strichkanal zur Zitzenzisterne einen Faltenkranz. Dieser mechanische Verschlussmechanismus ist bei der Verhinderung des Eindringens von Keimen von Bedeutung. Zusätzlich erfolgt in den Falten noch die immunzelluläre Abwehr (MIELKE 1994, WENDT et al. 1998). Mit steigender Anzahl von Laktationen dilatiert der Strichkanal, was zum Teil die erhöhte Mastitisfrequenz älterer Kühe erklärt (TOLLE 1982). Nach HAMANN (1989a) bedingt auch die Abnahme des Tonus der glatten Muskulatur im Zitzengewebe mit steigender Milchmengenleistung eine Reduzierung der Verschlussintensität. Die Effektivität der hier lokalisierten Invasionsabwehrsysteme wird damit beeinträchtigt (HAMANN u. FUNKE 1999). 2.1.2.2 Phagozytose Sie stellt den leistungsfähigsten Mechanismus zur Eliminierung von Erregern dar, die ins Euter eingedrungen sind (BERCHTOLD et al. 1983). Haben Bakterien den Strichkanal passiert, übernehmen die Milchleukozyten die Funktion der Abwehr. In erster Linie sind polymorphkernige Leukozyten beteiligt, die in der gesunden Milchdrüse 30 - 40 % repräsentieren (TOLLE 1982). Diese stammen aus dem Blut und treten in die Milch über. Hier ist ihre phagozytäre Wirkung jedoch geringer als im Blut aufgrund eines Mangels an Opsoninen, geringem Sauerstoffgehalt, 5 verminderter Glykogenreserven und der Phagozytose von Fett- und Kaseinpartikeln (JAIN 1977, WISNIOWSKI et al. 1978, PAAPE et al. 1979). Aufgrund der Zellschädigung infolge der Infektion werden Mediatoren wie Histamin, Lysozyme und Enzyme freigesetzt. Diese erhöhen die Permeabilität der Gefäße und führen zu einer Verringerung des Blutstromes in den perialveolären Kapillaren, wodurch der Übertritt von Leukozyten aus dem Blut in die Milchdrüse und die Alveolen erleichtert wird (TOLLE 1982). 2.1.2.3 Spezifisches Abwehrsystem Neben den unspezifischen Abwehrmechanismen ist die Milchdrüse auch zu spezifischen Reaktionen in der Lage. Bei Antigenkontakt werden Lymphozyten sensibilisiert, die eine spezifische Immunreaktion auslösen. Die Immunglobuline sind hochmolekulare Eiweißstoffe, die sich an die Bakterienoberfläche anlagern. Damit sind die Erreger für die Phagozytose opsoniert. Durch Antigen-Antikörper-Komplexe kann außerdem das Komplementsystem aktiviert werden (SENFT u. NEUDECKER 1991). Die in der Kuhmilch vorkommenden Immunglobuline IgG1, IgG2, IgM und IgA erreichen im Erstkolostrum hohe Werte. Zu diesem Zeitpunkt liegt ihre biologische Bedeutung nicht im besonders guten Immunschutz des Euters, sondern in der Bereitstellung von wichtigen Schutzstoffen für das Kalb. In der reifen Kuhmilch sind relativ niedrige Ig-Konzentrationen vorhanden (MIELKE 1994). Manche Autoren betrachten die zum Euterschutz bestimmten Abwehrmechanismen als rudimentär (CRAVEN u. WILLIAMS 1985). 2.2 Wichtige Kriterien der Milchuntersuchung 2.2.1 Zellzahl Der Gehalt der Milch an somatischen Zellen wird als Parameter für die Eutergesundheit und für die Gestaltung des Milchpreises für den Milchproduzenten genutzt. Der mittlere Zellgehalt pro ml Milch beträgt bei gesunden Kühen 30.000 bis 100.000. Die Zellzahlbestimmung ist in der Praxis ein geeignetes Mittel zur Überwachung der Eutergesundheit geworden (DOGGWEILER u. HESS 1983, BRADE 2001). Während die Zellzahlgrenze für gesunde Euter international bei 100.000/ml Milch definiert wurde, variiert der Zellzahlwert für verarbeitungsfähige Milch international von 250.000 bis 6 750.000/ml Milch (KIRST et al. 2001). In der EU, damit in Deutschland, liegt derzeit der Grenzwert für verkehrstaugliche Milch bei maximal 400.000 Zellen/ml Tankmilch. Zwischen Zellzahl und Milchleistung besteht ein negativer Zusammenhang (RAUBERTAS u. SHOOK 1982). Je 100.000 Zellen/ml Milch beträgt der Milchverlust bis zum Bereich von 500.000 Zellen je 1 %. Danach steigt er noch stärker an (HARR 1984). Nach MILLER et al. (1991) setzt sich die Zellzahl in der Milch gesunder Eutern aus 59 % Makrophagen, 24 % Lymphozyten, 14 % Leukozyten und 2 % Epithelzellen zusammen. MIELKE (1994) spricht von 24 % Makrophagen, 4 - 31 % Lymphozyten, 12 - 61 % Leukozyten und 14 - 54 % nicht differenzierbaren Zellen. Die prozentualen Anteile dieser Zellen variieren bereits unter physiologischen Bedingungen. Der Zellgehalt der Viertelgemelke wird durch physiologische, melkhäufigkeitsabhängige und stressauslösende Faktoren in einem für die Praxis nicht relevanten Umfang beeinflusst (DVG 2002). Bereits der Zellgehalt im Viertelgemelk muss als Ergebnis einer Mischung von Teilzellgehalten aufgefasst werden, was auf die unterschiedliche Abwehrlage verschiedener Areale des Drüsenparenchyms zurückzuführen ist (DVG 1990). Den stärksten Einfluss auf den Zellgehalt hat die Infektion des Euterviertels (DVG 2002); denn neben den physiologischen Einflüssen ist der somatische Zellgehalt vor allem Ausdruck aktiver Abwehrreaktionen des Milchgang- und Drüsengewebes gegen Euterinfektionen (SCHÖTT 1996). Im Verlauf einer Euterentzündung kommt es zum massiven Einschwemmen vor allem der Leukozyten aus dem Blut in die Milch (BRADE 2001). KIELWEIN und SCHLENSTEDT (1993) konnten beim Vergleich statistischer Kenndaten für den Zellgehalt der Milch ableiten, dass Infektionen mit Sc. agalactiae oder mit G- und ganz besonders mit L-Streptokokken zu einem besonders hohen Zellgehalt führen. Wesentlich darunter lagen die ZZ in Proben aus mit S. aureus, Sc. uberis oder Sc. dysgalactiae infizierten Vierteln, wobei eine deutliche Abnahme in der genannten Reihenfolge beobachtet wurde. Euterinfektionen mit KNS oder mit Enterokokken führen zu relativ gering- bis mittelgradigen Zellzahlerhöhungen. Vergleichende Untersuchungen an KNS lassen erkennen, dass zwischen den verschiedenen Arten Pathogenitätsunterschiede bestehen. 7 Aus diesen Gründen werden die obengenannten Mastitiserreger als major-pathogen bezeichnet, während KNS und Mikrokokken sowie Corynebacterium species als minorpathogen eingestuft werden. Aus lebensmittelhygienischer Sicht bedeutet die Einhaltung eines Zellgehaltes, dass nicht nur die gesundheitliche Unbedenklichkeit und hohe Qualität des Rohstoffes bzw. der Produkte gewährleistet sind, sondern auch die Akzeptanz für den Verbraucher und - von zunehmender Bedeutung - der freie Warenverkehr von Milch und Milchprodukten im internationalen Handel. So ist der Zellgehalt aus der Sicht von Hygiene und Qualität von seiner Funktion als möglichem „Leitparameter der Mastitisbekämpfung“ zu trennen (DVG 2002). 2.2.1.1 Einfluss der Laktationszahl auf die Zellzahl Von SHELDRAKE et al. (1983) und EMANUELSON et al. (1988) wurde nachgewiesen, dass nur infizierte Drüsenkomplexe mit zunehmendem Alter der Kühe eine Erhöhung des Zellgehaltes erkennen ließen. Die gesunden Euterviertel wiesen ein stabil niedriges Zellzahlniveau in Größenordnungen von ≤ 100.000 Zellen/ml Milch auf. 2.2.1.2 Einfluss des Laktationsstadiums auf die Zellzahl Während der Laktation unterliegt der Zellgehalt der Milch gesunder Euterviertel einer physiologischen Dynamik. Vielfach wird in der Literatur ein Zellzahlanstieg während der Laktation beschrieben (DOGGWEILER u. HESS 1983, SHELDRAKE et al. 1983, EMANUELSON et al. 1988). 2.2.1.3 Einfluss der Melkfrequenz auf die Zellzahl In der Regel wird zweimal täglich gemolken, wobei Zwischenmelkzeiten von 12 Stunden anzustreben sind (WEHOWSKY u. TRÖGER 1994). HOGEVEEN et al. (2001) überprüften in einer Studie den Einfluss des täglich dreimaligen Melkens auf die Milchleistung und Eutergesundheit. Sie stellten eine signifikante Steigerung der Milchmengenleistung bei identischen Werten für Fett und Eiweiß sowie signifikant niedrigere Zellzahlbefunde fest. 2.2.1.4 Verfahren zur Bestimmung der Zellzahl Die Bestimmung der Zellzahl ist ein wesentliches Indiz für das frühzeitige Erkennen der subklinischen Euterentzündung. Eine Vielzahl von Methoden wurde dazu entwickelt. 8 2.2.1.4.1 Mikroskopische Zählung Sie erfasst somatische Zellen, z. B. Leukozyten und Epithelzellen, deren Kerne mit Methylenblau angefärbt werden können. Dazu werden auf 1 cm² Fläche eines Objektträgers 0,01 ml Milch ausgestrichen, getrocknet und gefärbt. In einem definierten Bereich wird dann unter dem Mikroskop gezählt und mit dem Mikroskopfaktor multipliziert, um die Zellzahl/ml Milch zu erhalten (HAASMANN u. SCHULZ 1994). Diese Methode bietet neben der Ermittlung der Gesamtzellzahl auch die Erfassung der Zellarten (WENDT et al. 1998), die insbesondere zur Erforschung der Abwehrfunktion des Euters große Bedeutung haben (HAASMANN u. SCHULZ 1994). Der Zeit- und Arbeitsaufwand ist jedoch hoch, so dass sich Massenuntersuchungen ausschließen (WENDT et al. 1998). 2.2.1.4.2 Elektronische Partikelzählung (Coulter-Counter-Verfahren) Die elektronische Partikelzählung nach dem Coulter-Counter-Verfahren beruht auf der unterschiedlichen elektrischen Leitfähigkeit der zu zählenden Teilchen gegenüber der Flüssigkeit, in der sie suspendiert sind. Dieses leitfähige Medium (Milch nach Entfettung und Enteiweißung) wird durch eine Kapillaröffnung gesaugt, die sich zwischen zwei Tauchelektroden befindet. Passiert ein Partikel die Kapillaröffnung, tritt ein elektrischer Impuls durch die bewirkte Widerstandsänderung auf. Diese Impulse zählt das Gerät (HAASMANN u. SCHULZ 1994). 2.2.1.4.3 Fluoreszenzoptische Zellzählung (Fossomatic®-Verfahren) Bei dieser Methode erfolgt die Zellzählung auf der Basis einer Fluoreszenzfärbung der DNA der Zellkerne mit Ethidiumbromid. Dazu werden 0,2 ml der Probe mit Puffer und Farblösung vermischt. Von diesem Gemisch wird dann ein dünner Film auf eine rotierende Scheibe aufgetragen. Die von den fluoreszierenden Teilchen ausgehenden Impulse werden mit Hilfe eines Mikroskops aufgenommen und können nach Weiterverarbeitung im Gerät auch sofort als ermittelte Zellzahl ausgedruckt werden (HAASMANN u. SCHULZ 1994). Die Fossomatic®-Technik besitzt eine hohe Sicherheit, genaue Aussage, EU-Anerkennung und wird für Massenuntersuchungen an Liefermilch und bei Leistungsprüfungen genutzt (WENDT et al. 1998). 9 2.2.1.4.4 Indirekte Messung (Schalmtest) Der Schalmtest ist eine diagnostische Schnellmethode zur semiquantitativen Bestimmung des Zellgehaltes in der Milch. Ursprünglich wurde er California-Mastitis-Test genannt, da die Entwicklungsarbeiten von SCHALM und NORLANDER in Kalifornien durchgeführt wurden. Dieser Test beruht auf dem Vermögen oberflächenaktiver Stoffe, Leukozyten und deren Kerne aufzulösen. Die aus den Kernen frei werdende DNA bildet mit dem Reagenz einen gelförmigen Komplex. Der Grad der Konsistenzänderung ist von der Anzahl der Zellen in der Milch abhängig. Wegen des physiologisch hohen Zellgehaltes zu Beginn der Laktation sollte der Test nicht vor dem 3. Tag nach der Geburt herangezogen werden. Der Test ermöglicht es, bakteriologische Untersuchungen auf tatsächliche Viertel bzw. Kühe zu beschränken (SCHALM 1960). Bis in die Gegenwart hat der Test nicht an Bedeutung verloren. Das bestätigen zahlreiche Autoren mit ihren Untersuchungen (IDF 1981, NICOLET et al. 1983, BÖHM u. WAGNER 1988, TSCHISCHKALE 1996, SARGEANT et al. 2001, REDETZKY u. HAMANN 2003). 2.2.2 Elektrische Leitfähigkeit Die elektrische Leitfähigkeit der Milch ergibt sich aus dem Vorhandensein von Elektrolyten (WENDT et al. 1998). Sie ist Ausdruck der Permeabilität des Eutergewebes. Schädigungen des Gewebes führen z. B. zu einem Anstieg der Cl- und NaIonen und zu einem Rückgang des K-Ionen- und des Laktosegehaltes der Milch, was insbesondere die in der Zisterne gespeicherte Fraktion betrifft (MIELKE 1975). Für die Bestandskontrolle im Rahmen der Mastitisprophylaxe stehen Handmessgeräte zur Verfügung, die bei einer regelmäßigen Nutzung gute Informationen über den Gesundheitszustand der Milchdrüse liefern können (GRAUPNER et al. 1989). Hinsichtlich der Faktoren, die die Leitfähigkeit der Milch zusätzlich beeinflussen können, besteht aber noch Forschungsbedarf (HAMANN u. ZECCONI 1998). Eine Meta-Analyse vorhandener Untersuchungen zeigte, dass die mittlere Sensitivität für die Erkennung subklinischer Mastitiden anhand der Leitfähigkeitsmessung nur etwa 61 % beträgt (HAMANN u. ZECCONI 1998). Weitere Untersuchungsergebnisse zeigten außerdem, dass die Messung der elektrischen Leitfähigkeit zur Erfolgskontrolle einer Mastitistherapie ungeeignet ist (BARTH u. KRAETZL 2000). 10 2.2.3 Keimzahl Da die Milch im Euter äußerst keimarm ist, kann man nach MROZEK (1972) davon ausgehen, dass nahezu der gesamte Keimgehalt der Rohmilch durch Kontaminationen beim oder nach dem Melken bedingt ist. 2.3 Bovine Mastitis Als Mastitis bezeichnet man die Entzündung der Milchdrüse in der Gesamtheit ihrer milchbildenden, -speichernden und -ableitenden Abschnitte. Als Folge der Entzündung kommt es zu einer Leistungsdepression, die GEDEK (1980) mit 20 % weniger Milch je erkranktem Euterviertel beziffert. Die Entzündung kann akut oder chronisch verlaufen. Die Symptome können einer klinisch manifesten oder subklinischen Mastitis entsprechen (SCHULZ 1994). KLEINSCHROTH et al. (1990) bezeichnen die Mastitis sogar als „Berufskrankheit“ unserer Hochleistungskühe. Aufgrund ihrer umfangreichen Verbreitung verursachen Euterentzündungen nicht nur die größten krankheitsbedingten Verluste in Milchviehbeständen, sondern sind häufig auch für den größten Antibiotikaverbrauch in diesen Betrieben verantwortlich (KRÖMKER u. GRABOWSKI 2002). An der Entstehung von Mastitiden sind drei Biosysteme – Wirt, Erreger und Umwelt − beteiligt. Das Infektionsrisiko wird letztlich von der Empfänglichkeit des Wirtstieres, von der Kontamination mit Mastitiserregern und der Invasion durch Letztere bestimmt (HAMANN 1989a). Daraus resultiert für die Mastitis der Charakter einer infektiösen Faktorenkrankheit. Der Infektionsdruck, dem das Tier ausgesetzt ist, wird von der Pathogenität der Erreger und der Keimzahl bestimmt. Bei der Betrachtung der Mastitis als Bestandsproblem hat sich folgende Einteilung der Erreger als günstig erwiesen: kontagiöse oder infektiöse Mastitiserreger (klassische Mastitiserreger) und umweltassoziierte Keime. Zu den Umwelterregern gehören die koliformen Keime, Enterokokken und Sc. uberis. Klassische, euterassoziierte Mastitiserreger sind Sc. agalactiae, Sc. dysgalactiae und S. aureus (GRUNERT et al. 1996). Die Mastitiserreger können auf drei verschiedenen Wegen das Euter infizieren – galaktogen-aszendierend, (SCHULZ 1994). hämatogen-deszendierend oder traumatogen-lymphogen 11 Topographisch kann die Euterentzündung den Drüsenläppchen (Mastitis alveolares bzw. interstitiales) oder den Abschnitten des Gangsystems bis in den Zitzenkanal (Galaktophoritis) zugeordnet sein (EHINGER u. KIETZMANN 1998). Kann eine Euterinfektion nur labordiagnostisch festgestellt werden, ist sie inapparent. International werden inapparente Euterinfektionen wie folgt definiert: Die klinische Euteruntersuchung (Adspektion und Palpation) einschließlich der grobsinnlichen Sekretüberwachung sind o. b. B. Eine subklinische Mastitis liegt dann vor, wenn die Zellzahl (im Viertelanfangsgemelk) erhöht ist, gleichzeitig überwiegend (bei wiederholter Beprobung) ein Erregernachweis gelingt. Gelingt bei erhöhter Zellzahl trotz wiederholter Beprobung ein Erregernachweis nicht, handelt es sich um eine unspezifische Mastitis. Gelingt hingegen ein Erregernachweis (in Monokultur) bei gleichzeitig nicht erhöhter Zellzahl, handelt es sich um eine so genannte latente Infektion (IDF 1987, DVG 2002). Jede der drei Formen der inapparenten Infektionen bzw. Mastitiden kann jederzeit zu einer klinischen Mastitis exazerbieren. Die häufigste, gleichzeitig ökonomisch bedeutsamste inapparente Euterinfektion ist die subklinische Mastitis. 2.4 Klinisch inapparente Euterinfektionen Es sind Mastitisformen, bei denen Adspektion und Palpation der Milchdrüse sowie grobsinnliche Sekretprüfung keine krankhaften Abweichungen ergeben. Das Ausmaß der Veränderungen im milchbindenden und -speichernden Gewebe bestimmt im Wesentlichen, ob die Mastitis klinisch erfassbar wird oder ob sie subklinisch verläuft (SEFFNER u. HADDAD 1981, BEUCHE 1987). Subklinische Mastitiden stellen immer ein multifaktorielles Herdenproblem dar; denn die Erkrankung einzelner Tiere vergrößert einerseits das Erkrankungsrisiko der übrigen Kühe und andererseits beeinflussen die Rahmenbedingungen der Gesamtherde auch das Einzeltier (SCHNEIDER u. MANSFELD 1989). Der Internationale Milchverband, der sich bezüglich der Eutergesundheit am Nachweis von euterpathogenen Mikroorganismen und am Zellgehalt der Milch orientiert, bezeichnet ein zytologisch unauffälliges Ergebnis mit Nachweis von Mastitiserregern als latente Infektion, ein Zellgehalt von über 100.000 Zellen/ml Milch ohne mikrobiologischen Befund hingegen bereits als Sekretionsstörung (DVG 2002). 12 2.4.1 Pathogenese der subklinischen Mastitis Das von MURPHY im Jahre 1947 aufgestellte Dreiphasen-Konzept: Invasion, Infektion und Entzündung gilt auch für die subklinische Mastitis (KIELWEIN u. SCHLENSTEDT 1993). Die unmittelbare Ursache von Mastitiden ist die Infektion des Euters mit Krankheitserregern, die in der Regel den Strichkanal überwinden, in das Drüsengewebe vordringen und sich dort vermehren. Die Inzidenz der Infektionen korreliert mit der Anzahl Mastitiserreger auf der Zitzenhaut zum Zeitpunkt des Melkens (PANKEY 1989, FOX et al. 1991). Die Überwindung der Strichkanalbarriere erfolgt entweder durch Rückspray bakterienhaltiger Milch von infizierten Vierteln während des Melkens (direkter Transport) oder durch das indirekte Eindringen der Erreger durch den Strichkanal in der Zwischenmelkzeit und während der Trockenperiode (KLEINSCHROTH et al. 1990). Die Erreger kontagiöser Mastitiden (Sc. agalactiae, S. aureus, Streptokokken der Serogruppen G und L) haften, bedingt durch ihre Pathogenitätsmechanismen, relativ leicht im Euter. Die der konstitutionellen Mastitiden (KNS, Sc. dysgalactiae, Sc. uberis, und Enterokokken) setzen sich im Euter jedoch nur dann fest, wenn die Infektionsabwehr, besonders die auf zellulärer Basis, geschwächt ist (KIELWEIN u. SCHLENSTEDT 1993). Fast 200 Bakterienarten und Vertreter von Pilzen und Algen sind bereits als Mastitiserreger beschrieben. Neben der Pathogenität und Virulenz der Erreger sind prädisponierende Faktoren, der Funktionszustand der Milchdrüse und die Ausprägung der so genannten Blut-Euter-Schranke für die multifaktorielle Faktorenkrankheit verantwortlich (SCHULZ 1994). An der Schleimhaut der milchableitenden Wege sowie den zisternennahen Alveolen verursachen die galaktogen-aszendierenden Erreger primäre Gewebeschädigungen (EHINGER u. KIETZMANN 1998). Die quantitativen Merkmale einer Mastitis, die sich aus der räumlichen Ausdehnung der entzündlichen Veränderungen ergeben, sind bestimmend für die Aussage des adspektorischen und palpatorischen Befundes bei der klinischen Untersuchung. Bei subklinischen Mastitiden sind diese Veränderungen nur histologisch wahrnehmbar (SCHULZ 1994). Auch SEFFNER und HADDAD (1981) fanden heraus, dass die morphologischen Unterschiede zwischen subklinischer und klinischer Mastitis vom Ausmaß der 13 exsudativ- und proliferativ-entzündlichen Veränderungen im Gangsystem abhängig sind. Entzündungen am Gangsystem sind bei subklinischer Mastitis nicht nachzuweisen. 2.4.2 Infektionsrisiko Vektor bei der Übertragung mikrobieller Erreger ist die Melktechnik, die zu einer Kontamination der Strichkuppen und zusätzlich durch pulsationsabhängige Mechanismen zu einer Invasion des Strichkanals führen kann. Die infizierte Milchdrüse oder ein Drüsenkomplex ist das primäre Erregerreservoir für S. aureus und Sc. agalactiae (HAMANN 1982). Infektionen auf einem Euterviertel erhöhen die Wahrscheinlichkeit, dass weitere Viertel derselben Kuh positiv werden (BARKEMA et al. 1997). Ergebnisse von ZDUNCZYK et al. (2002) deuten darauf hin, dass der Anstieg der plazentaren Östrogene eine wichtige Bedeutung für das Auftreten von Mastitiden in der Spätgravidität haben. In dieser Studie entwickelten zuvor subklinisch infizierte Euterviertel unter dem Einfluss von Estron klinisch manifeste Mastitiden. 2.4.3 Erreger der subklinischen Mastitis GEDEK (1993) unterteilt die subklinischen Mastitiden nach den beteiligten Mikroorganismen in kontagiöse und konstitutionelle. Bei den tieradaptierten Keimen sind der Ort der Vermehrung und die eigentliche Infektionsquelle das Euter selbst, während die so genannten Umweltkeime außerhalb des Euters angesiedelt sind. Nicht infizierte Euterviertel einer Kuh sind zu jeder Zeit im Leben einer Kuh der Gefahr der Kontamination durch Umweltkeime ausgesetzt. Im Gegensatz dazu ist die Übertragung der kontagiösen Mikroorganismen direkt an den Melkprozess gebunden (HAMANN 1982). Mit den Änderungen der Haltungssysteme war eine Verschiebung des Spektrums der Mastitiserreger in Richtung auf umweltassoziierte Erreger, wie z. B. Sc. uberis und E. coli verbunden (BRAMLEY 1987). SEIDL und MANSFELD (2003) geben an, dass 50 bis 60 % aller Neuinfektionen mit koliformen Keimen in der Trockenstehzeit erfolgen, obwohl die nicht laktierende Milchdrüse generell als resistent gegenüber Infektionen mit Enterobakterien galt. Besonders Hochleistungskühe reagieren z. B. auf Fütterungsfehler vor und nach der Kalbung (so genannte Transitphase) mit Stoffwechselstörungen, in deren Folge die körpereigene Abwehr geschwächt ist. 14 Saprophytäre oder fakultativ pathogene Keime können sich bei entsprechendem Keimdruck auch im Euter vermehren und zu Mastitiden führen (SCHNEIDER u. MANSFELD 1989). 2.4.3.1 Grampositive Kokken Traditionell wurden die als Krankheitserreger wichtigen Vertreter den Familien Micrococcaceae und Streptococcaceae zugeordnet. Nach neueren phylogenetischen Untersuchungen werden die grampositiven Bakterien mit einem G+C-Gehalt über 50 mol% in die Klasse Actinobacteria und die Vertreter mit weniger als 50 mol% G+CGehalt in eine eigene Gruppe (low G+C Gram positives) eingeordenet. Staphylokokken und Streptokokken gehören zur Gruppe der grampositiven Bakterien mit niedrigen G+C-Gehalten, während die Familie Micrococcaceae in die Klasse Actinobacteria eingeordnet wurde (SELBITZ 2002). 2.4.3.1.1 Staphylococcus Der Name wurde vom schottischen Chirurgen OGSTON im Jahre 1882 geprägt, als dieser traubenförmig angeordnete Kugelmikroben in Eiter wahrgenommen hatte (ROLLE u. MAYR 1993). Die Gattung Staphylococcus umfasst grampositive, kugelförmige Zellen von 0,5-1,5 µm Durchmesser. Durch die Teilung in mehrere Ebenen entstehen Haufenformen, die aber nicht so regelmäßig in Traubenform beobachtet werden, dass sie ein sicheres diagnostisches Kriterium wären (SELBITZ 2002). Staphylokokken sind fakultative Anaerobier, gewöhnlich katalasepositiv, bilden keine Dauerformen und zählen trotzdem zu den widerstandsfähigsten Keimen unter den nicht sporenbildenden Bakterien. In der Veterinärmedizin haben sie ihre größte Bedeutung als Erreger der bovinen Mastitis, meist subklinischer, mitunter aber auch gangränöser Formen (GEDEK 1972). Systematisch eingeteilt werden sie hinsichtlich ihrer Fähigkeit, das Enzym Koagulase zu bilden (ROLLE u. MAYR 1993). SEFFNER und BERGMANN (1994) beschreiben die Koagulase als wichtigstes Pathogenitätsmerkmal von S. aureus. Zur Feststellung der Penicillinresistenz von Staphylokokken ist die Prüfung der Penicillinasebildung eine sichere Methode (GEDEK 1981). 15 2.4.3.1.1.1 S. aureus S. aureus kommt in der Umgebung und auf der Haut der Tiere vor; das wichtigste Reservoir ist jedoch die infizierte Milchdrüse. Der Name ist von der häufig goldfarbenen Pigmentierung der Kolonien abgeleitet (BLOBEL u. BRÜCKLER 1980). Bei zahlreichen Untersuchungen wurde S. aureus als dominanter Keim in der Verursachung subklinischer Mastitiden ermittelt (DUTTA et al. 1995, TRAEDER u. IRION 1996, SOBIRAJ et al. 1997, WINTER et al. 1997, FRITON et al. 1998). Neben der infizierten Milchdrüse beschreibt HOEDEMAKER (2001) auch verschiedene andere Körperregionen als S. aureus-Reservoire, zu denen auch Wunden an der Euter- und Zitzenhaut zählen. Die Fähigkeit des Erregers, durch Wachstum und damit Ausbreitung seiner Kolonien aktiv den Zitzenkanal zu passieren, wäre eine Erklärung für die galaktogene Infektion in der Trockenstehphase. SCHUKKEN et al. (1995) bezeichnen durch S. aureus hervorgerufene subklinische Mastitiden als schwerwiegendes und multifaktorielles Problem. Der Erreger bildet eine Reihe von Substanzen, die in einem dynamischen Wechselspiel den Wirtsorganismus schädigen können (BLOBEL u. BRÜCKLER 1980). Zu den Pathogenitätsfaktoren zählen u. a. Koagulase, Clumping-Faktor, Hämolysine, Leukozidin, Leukolysin, Staphylokinase, Hyaluronidase. Der Clumping-Faktor ist eine an der Oberfläche der Staphylokokken befindliche Substanz, die direkt mit Fibrinogen reagiert und durch die Umwandlung zu Fibrin eine Verklumpung der Staphylokokken im Plasma bewirkt, wodurch die Phagozytose erschwert wird (SEFFNER u. BERGMANN 1994). Enterotoxine, die von S. aureus gebildet werden können, sind sogar eine Gefahr für den Menschen beim Verzehr von Milch und Milchprodukten (ENEVOLDSEN et al. 1995). Im Gegensatz zu den übrigen Bakterientoxinen, die unter den üblichen Pasteurisationsbedingungen zerstört werden, ist S. aureus-Toxin hitzestabil (BÖHM u. HEESCHEN 1995). S. aureus vermag tief in das Gewebe einzudringen und sich hier mit einem Schutzwall zu umgeben (TOLLE 1982). Werden Staphylokokken phagozytiert, überleben sie häufig intrazellulär. Eine antibiotische Therapie gestaltet sich daher oft schwierig (SOL et al. 2000). S. aureus wird zwar den euterassoziierten major-pathogenen Mastitiskeimen zugeordnet, jedoch haben neuere Untersuchungen ergeben, dass es eine Subspezies dieser Bakterienart gibt, die die epidemiologischen Charakteristika von umweltasso- 16 ziierten Keimen erfüllen (SOMMERHÄUSER 2001, SOMMERHÄUSER et al. 2003), was deren Bekämpfung zusätzlich erschwert. 2.4.3.1.1.2 Koagulasenegative Staphylokokken (KNS) Nachdem lange Zeit nur Staphylococcus epidermidis als einzige koagulasenegative Art anerkannt war, können heute 10 Arten unterschieden werden. (ROLLE u. MAYR 1993). KIELWEIN und SCHLENSTEDT (1993) fanden bei vergleichenden Untersuchungen an KNS Pathogenitätsunterschiede zwischen den verschiedenen Arten in der Weise heraus, dass S. xylosus, S. cohnii, S. simulans und S. warneri als relativ pathogen einzuschätzen sind. Ihre euterpathogene Bedeutung wird in der Literatur unterschiedlich eingeschätzt (MARTIN u. BERGMANN 1993). WHITE et al. (1989) bezeichnen KNS als harmlose Besiedler von Euterhaut und Zitzenkanal. Andere Autoren sehen in ihnen Erreger von subklinischen Mastitiden mit milder Zellgehaltserhöhung in der Milch und langer Persistenz im Euter (TIMMS u. SCHULTZ 1987, RAINARD et al. 1990, MARTIN u. BERGMANN 1993). DEVRIESE und DEKEYSER (1980) bezeichnen KNS als die am häufigsten isolierten Erreger aus Milchproben laktierender Kühe. Bei einer Studie in Prince Edward Island ermittelten DAVIDSON et al. (1992) bei 4,8 - 6,4 % der untersuchten Viertelgemelksproben in den ersten fünf Monaten der Laktation das Vorkommen von KNS und in den letzten vier Laktationsmonaten sogar bei 14,2 - 16,6 % der Proben. Sie kamen zu dem Schluss, dass KNS-Infektionen relativ unbedeutend sind, jedoch das gehäufte Auftreten in einer Herde zu einem signifikanten Anstieg der Tankmilchzellzahl führen könnte. In den USA gibt es sowohl Studien, die von einem Ansteigen der durch KNS verursachten Mastitiden (TIMMS u. SCHULTZ 1987) als auch von einem Rückgang (HOGAN et al. 1987) während der Laktation berichten. In der Literatur wird aber auch beschrieben, dass Euterviertel, die mit KNS infiziert sind, weniger häufig durch major-pathogene Erreger infiziert werden als nicht infizierte Viertel (GENTILINI et al. 2002). KNS werden aufgrund ihrer fraglichen Euterpathogenität zu den minor-pathogenen Bakterien gerechnet. 17 2.4.3.1.2 Streptokokken Nach WIESNER und RIBBECK (2000) werden Streptokokken als grampositive, kugelförmige, in Kettenform wachsende Bakterien, die Erkrankungen bei Mensch und Tier verursachen und als Saprophyten vorkommen können, definiert. Seit den serologischen Untersuchungen von LANCEFIELD liegt für die Klassifizierung der Streptokokken eine Einteilung in 24 Gruppen zugrunde, die auf dem unterschiedlichen Zellwandaufbau in Bezug auf die dem Mureinnetz aufgelagerten Polysaccharidantigenen beruht. Die pathogenen Arten bilden eine Reihe von Toxinen und Enzymen, wie z. B. Streptolysine, Streptokinase, Hyaluronidase, Desoxyribonuklease (DNAse) und Proteinase (SELBITZ 2002). Von besonderer diagnostischer Bedeutung sind die drei Hämolyseformen. Sie lassen sich in drei große Gruppen aufteilen: - hämolysierende, vergrünende und anhämolytische Streptokokken. 2.4.3.1.2.1 Sc. agalactiae Bei einer seuchenhaft auftretenden Mastitisepidemie im Jahre 1884 in Frankreich fanden NOCARD und MOLLEREAU einen in langen, staketförmigen Ketten angeordneten Erreger, der ursprünglich als Streptococcus nocardi bezeichnet und erst 1896 nach LEHMANN und NEUMANN in Sc. agalactiae umbenannt wurde (JELINKOVA 1977). Die Bezeichnung als „Krebsschaden der deutschen Milchwirtschaft“ spiegelt auch aus historischer Sicht die Bedeutung des Gelben Galtes wider (EHRLICH 1928). Die Galt-Mastitis ist nach wie vor eine stark verbreitete Erkrankung des Rindereuters (KEEFE 1997, WENDT et al. 1998). Sc. agalactiae gehört zur serologischen Gruppe B, zeigt alle Formen des Hämolyseverhaltens, ist nicht in der Lage, Äskulin zu spalten und gilt als obligat euterpathogen. Der Erreger gelangt laktogen (über den Zitzenkanal) in die Milchdrüse, die das Reservoir für diesen Keim darstellt. Die meisten Streptokokken befinden sich in den Milchgängen (HEJLIČEK 1994). Der Keim benötigt das spezifische Milieu der Milchdrüse zum Wachstum (WANGER u. DANNY 1984). Die diskontinuierliche Ausscheidung des Erregers mit der Milch bedingt teilweise mehrfach den Versuch des kulturellen Nachweises beim Freimachen eines infizierten Kuhbestandes vom Gelben Galt. MURPHY hat schon das Ziel gesetzt, den Erreger gänzlich aus der 18 Rinderpopulation zu eliminieren, was TOLLE (1982) aufgrund der Lokalisation des Erregers auf der Schleimhaut, der Penicillinempfindlichkeit und die dadurch begrenzte Überlebensmöglichkeit in der Außenwelt auch für realisierbar hält. 2.4.3.1.2.2 Sc. dysgalactiae Serologisch gehört Sc. dysgalactiae zur Gruppe C; er wächst auf Blutagar mit α-Hämolyse und Vergrünung. Pathogenese und Klinik der Mastitis entsprechen weitgehend der durch Sc. agalactiae hervorgerufenen; Kontagiosität und Eutervirulenz sind aber geringer (SELBITZ 2002). Der Erreger ist jedoch nicht in gleicher Weise auf die Milchdrüse angewiesen, sondern auch in Organen wie Uterus, Vagina, Tonsillen oder an Hautverletzungen vorkommend (TOLLE 1982). So zeichnet sich die Tendenz ab, die durch Sc. dysgalactiae verursachten Euterentzündungen bei den Umweltmastitiden einzuordnen (KIELWEIN u. SCHLENSTEDT 1993, KIELWEIN 1994). 2.4.3.1.2.3 Sc. uberis Sc. uberis ist kein obligater Mastitiserreger, sondern ein in der Umgebung des Rindes weit verbreiteter Keim. Er wurde im Pansen, in der Maulhöhle und im Rektum gefunden. Wesentliche Bedeutung bei der Verbreitung scheint Rinderkot zu haben (HEJLIČEK 1994). Milchdrüseninfektionen werden vor allem während des Trockenstehens beschrieben (BROWNING et al. 1990). Zahlreiche Autoren geben Sc. uberis als ursächlichen Erreger für klinische und subklinische Mastitiden an (HOGAN et al. 1989, WILLIAMSON et al. 1995, BARKEMA et al. 1998); er ist einer der klassischen Vertreter der umweltassoziierten, major-pathogenen Mastitiskeime. 2.4.3.1.2.4 Streptococcus spp. Sie lassen sich nicht in eine der serologischen Gruppen nach Lancefield einteilen. Dazu zählen z. B. G-, L- und P-Streptokokken. Aus dem Untersuchungsmaterial der Streptokokkenzentrale der Bundesanstalt für Milchforschung in den Jahren 1965 - 1980 wurden aus 10911 Viertelgemelksproben mit Streptokokkenbefund 9,6 % der serologischen Gruppe L, 2,5 % der serologischen Gruppe G und 1 % der serologischen Gruppe P zugehörig, identifiziert (TOLLE 1982). 19 2.4.3.1.3 Enterokokken Diese Bakterien werden wegen ihres Vorkommens im Darm bzw. in den Fäzes Enterokokken genannt. Lange wurde ihnen innerhalb der Gattung Streptococcus eine gewisse Sonderstellung eingeräumt, bis sie als eigene Gattung abgetrennt wurden. Die Sherman-Kriterien, die das Wachstum in einem Bereich von 10 - 45 °C bei einem pHWert von 9,6 in Anwesenheit von 6,5 % NaCl und 40 % Galle beinhalten, sind für die Abgrenzung von den Streptokokken wesentlich (SELBITZ 2002). Enterokokken, die sich als Saprophyten in Verdauungsorganen der Tiere und als fäkal kontaminierende Mikroflora in der Stallumwelt befinden, verursachen überwiegend subklinische Mastitiden (HEJLIČEK 1994), können aber auch klinische Mastitiden hervorrufen. 2.4.3.2 Andere Keime Gelegentlich sind auch gramnegative Erreger an subklinischen Mastitiden beteiligt (SCHNEIDER u. MANSFELD 1989). Auch in bakteriologisch positiven Viertelgemelksproben von abkalbenden Färsen konnten KLEINHANS et al. (2001) E. coli und Klebsiellen nachweisen. SOBIRAJ et al. (1997) ermittelten bei einer bundesweiten Untersuchung über die Erregerbeteiligung bei sublinischen Mastitiden in 3,3 % Enterobacteriaceae, die sich aus E. coli, Proteus vulgaris und Klebsiella pneumoniae zusammensetzten. Auch Corynebakterien und aerobe Bazillen konnten nachgewiesen werden; diese gelten jedoch als apathogen für das Euter. Die durch Enterobakterien verursachten Mastitiden haben ihren Ursprung in der Umweltkontamination (BERGMANN 1994). Auch Mykoplasmen und Chlamydien verursachen subklinische Mastitiden, was häufig zu chronischen Ausscheidern führt (TRAEDER et al. 2003). 2.4.4 Erregerverteilung Die in der Literatur angegebenen Häufigkeiten des Vorkommens der beteiligten Erreger schwanken sehr. Etwa 90 % der subklinischen Mastitiden werden durch grampositive Kokken verursacht (TOLLE 1982). KLEINSCHROTH (1991) gibt nach einer stichprobenartigen Auswertung über die Ätiologie subklinischer Mastitiden in Bayern 53,50 % Micrococcaceae und 42,63 % 20 Streptokokken als kausale Agenzien an. In der Schweiz wurden im Jahr 1994 in 59,9 % der Fälle Micrococcaceae und in 31,2 % Streptokokken als Ursache für subklinische Mastitiden ermittelt (SCHÄLLIBAUM 1997). KIELWEIN und SCHLENSTEDT (1993) bemerken nicht nur regionale Unterschiede, sondern auch Verschiebungen des Erregerspektrums in den vergangenen Jahrzehnten. Auch andere Autoren beschreiben den Wandel in der Erregerverteilung von Sc. agalactiae als Haupterreger der chronischkatarrhalischen und subklinischen Mastitis zu wesentlich problematischeren Keimen, von denen S. aureus schon jetzt dominierend ist (KIELWEIN 1994, SOBIRAJ et al. 1997, HILLERTON 1998, DVG 2002). Die Ursache für die Zunahme von „Umweltmastitiden“ sehen SCHNEIDER und MANSFELD (1989) in der Beeinträchtigung systemischer Abwehrprinzipien, indem das Adaptationsvermögen der Tiere an bestimmte Umweltbedingungen durch Stresssituationen überfordert wird. So können sich saprophytäre oder fakultativ pathogene Bakterien bei entsprechendem Keimdruck auch im Euter vermehren und zu Mastitiden führen. BARKEMA et al. (1997) isolierten bei der Untersuchung von 35.828 Eutervierteln am häufigsten S. aureus von der Gruppe der major-pathogenen Keime und von den minorpathogenen Keimen Corynebacterium bovis und KNS. Nach WENDT (2001) sind die Erreger KNS und Corynebacterium bovis weniger mit klinischen Veränderungen verbunden, sondern vielmehr als Hygieneindikatoren zu verstehen. Bei einer Studie in Thailand wurde das Vorkommen von durch KNS verursachte subklinische Mastitiden mit 5 bis 66,7 % ermittelt (AJARIYAKHAJORN et al. 2000). In Brasilien konnte im Rahmen einer Studie in 54 % der subklinisch an Mastitis erkrankten Euterviertel KNS als Erreger nachgewiesen werden (RIBEIRO et al. 1999). In Kroatien wurden bei einer Untersuchung zellzahlerhöhter Milchproben 40,19 % S. aureus, 4,78 % Sc. agalactiae, 6,69 % Sc. Gruppe D, 0,47 % Sc. Gruppe C und in 2,39 % der Proben E. coli gefunden (TOPOLKO et al. 2000). Nach HILLERTON (1998) ist Sc. agalactiae in den USA und Großbritannien (UK) kaum noch vorkommend. Ähnliches trifft auch für S. aureus zu. Diese Veränderungen sind das Resultat von Mastitisbekämpfungsprogrammen, die antibiotische Behandlungsmaßnahmen beinhalten. An Stelle dieser Erreger scheinen andere, wie z. B. coliforme Keime und Sc. uberis mehr an Bedeutung zu gewinnen. Zahlreiche Autoren verweisen auf ähnliche Beobachtungen (HOGAN et al. 1989, BARKEMA et al. 1998, MCDOUGALL 1998, BRADLEY u. GREEN 2000, BRADLEY u. GREEN 2001). SOBIRAJ et al. (1997) konnten diese aus dem Ausland mitgeteilten zunehmenden 21 Raten von mild verlaufenden klinischen und subklinischen Mastitiden mit Nachweis von coliformen Bakterien für Deutschland nicht bestätigen, wiesen aber ebenfalls den Wechsel zu wesentlich problematischeren Keimen wie S. aureus und den so genannten Umweltkeimen wie Sc. uberis nach. Auch LEIGH (1999) stellte fest, dass zwar Fortschritte bei der Bekämpfung von Sc. agalactiae, Sc. dysgalactiae und S. aureus erzielt wurden, was für Sc. uberis in den vergangenen 30 Jahren nicht zutrifft. FRITON (1998) ermittelte folgende Erregerbeteiligung bei subklinisch an Mastitis erkrankten Kühen: S. aureus (38 %), KNS, einschließlich Mikrokokken (22 %), sonstige Streptokokken (12 %), Enterokokken (8 %), Sc. agalactiae (7 %), Sc. dysgalactiae (6 %) und Sc. uberis (4 %). SOBIRAJ et al. (2000) fanden bei einer Trockenstellstudie eine ähnliche Ausgangssituation vor. Hier lag nur der Anteil KNS einschließlich Mikrokokken mit 38 % vor den Nachweisen mit S. aureus mit 23 %. 2.4.5 Diagnose subklinischer Mastitiden Die Diagnose „subklinische Mastitis“ kann durch eine klinische Untersuchung nicht gestellt werden. Die mikrobiologisch-zytologische Milchuntersuchung ermöglicht die sicherste Beurteilung der Eutergesundheit der Herde. Die bakteriologische Untersuchung von Milchproben ist ein allgemein übliches Nachweisverfahren, aber kosten- und arbeitsintensiv. Die Sensitivität einer Untersuchungsmethode zur Erkennung von Infektionen gibt den Prozentsatz der infizierten Tiere an, die mittels dieser Methode korrekt als infiziert erkannt wurden. Parameter für den Prozentsatz falsch positiver Tiere ist die Spezifität. So gibt die Differenz von 100 % minus der Spezifität den Prozentsatz der nicht infizierten Tiere an, die mit dem Test als positiv identifiziert wurden (HOEDEMAKER 2001). Es wird zunehmend der Gehalt somatischer Zellen herangezogen, um verdächtige Tiere zu selektieren. Um moderne Systeme für die Mastitisfrüherkennung nutzen zu können, sind definierte physiologische Grenzwerte unter Berücksichtigung laktationsphysiologischer Einflüsse auf die Milchinhaltsstoffe notwendig. HAMANN et al. (2002) beobachteten deutliche Unterschiede bei Entzündungsparametern während der Früh- und Spätlaktation. Zusätzlich zum Laktationsstadium sind Faktoren wie Fütterung, Laktationsnummer, Melkfrequenz und Mastitisvorgeschichte von Bedeutung. 22 Neben dem somatischen Zellgehalt sind Na-, K-, Cl-Konzentrationen sowie die LDHAktivität empfindliche und gute Indikatoren für das Vorliegen subklinischer Mastitiden, was ZADNIK et al. (2000) bei der Untersuchung von Tankmilch belegten. Untersuchungen von KRÜGER und NEUMANN (1999) belegen, dass die Erfassung des CRP-Gehaltes in Viertelanfangsgemelksproben subklinisch erkrankter Euterviertel neben der ZZ, dem Laktosegehalt, der elektrischen Leitfähigkeit und dem bakteriologischen Befund geeignet ist, die individuelle Reaktivität eines Euterviertels in Beziehung zum Keimgehalt, der Erregerspezies und der Dauer des Erkrankungsprozesses zu charakterisieren. Das C-reaktive Protein (CRP) ist ein Akute-Phase-Protein, dessen Vorkommen bei verschiedenen Tierarten beschrieben wurde und nach Entwicklung eines Testsystems auch in der bovinen Rohmilch bestimmt werden kann (SCHRÖDL et al. 1995). 2.4.6 Mastitistherapie 2.4.6.1 Therapie der Mastitis allgemein Der Einsatz von Chemotherapeutika in Form der Akridinfarbstoffe wurde von ERNST (1926) erstmals empfohlen. Nach SEELEMANN (1931) war das Trockenstadium dafür am besten geeignet. Mit der Einführung der Antibiotika nach dem 2. Weltkrieg war die Medizin erstmals zu einem wirksamen Vorgehen gegen zahlreiche bakterielle Infektionskrankheiten in der Lage (DODD 1983). Grundsätzlich sind die systemische (intravenös, intramuskulär oder subkutan) und die intrazisternale Applikation möglich (EHINGER u. KIETZMANN 1998). Ein ideales intramammär zu verabreichendes Antibiotikum sollte über eine gute lokale Verträglichkeit, eine niedrige minimale Hemmkonzentration (MHK), eine hohe Gewebepenetration und eine kurze Ausscheidungszeit verfügen (ZIV 1980). Intrazisternal zu verabreichende Zubereitungen sollten möglichst schnell nach deren Anwendung Milchwirkstoffspiegel oberhalb des MHK-Levels der wichtigsten Mastitiskeime erreichen und für einen bestimmten Zeitraum aufrecht erhalten können (BARTHEL 1989). Antibakterielle Chemotherapeutika wirken bakterizid, indem sie die Zellwandsynthese und die Proteinsynthese im Zellinneren beeinträchtigen bzw. die Zellwand zerstören oder bakteriostatisch, indem sie das Bakterienwachstum verhindern oder die Biosynthese der Folsäure in den Bakterien stören. Die Kombination von bakteriostatischen und bakteriziden Substanzen ist kontraindiziert (SCHULZ 1994). 23 Nach UNGEMACH (1999) sind antimikrobiell wirksame Pharmaka unverzichtbare Therapeutika in der Veterinärmedizin, da eine wirksame Bekämpfung von Infektionskrankheiten, wie z. B. der Milchdrüse, aus folgenden Gründen erforderlich ist: ● Tierschutz ● Verhinderung der Ausbreitung von Krankheiten ● Erhöhung der Effizienz in der tierischen Produktion ● Vermeidung von Zooanthroponosen ● Schaffung qualitativ hochwertiger und sicherer Lebensmittel tierischer Herkunft ● Verhütung von ernährungsbedingten Krankheiten. 2.4.6.2 Impfung Zur Erhöhung der Mastitisresistenz der Kühe wurden zahlreiche Versuche unternommen, die antikörpergebundene Immunität in der Milchdrüse mit klassischen Impfmethoden anzuregen. Dieses auf die systemische Immunantwort ausgerichtete Verfahren hat sich als praktisch unwirksam gezeigt (BENDA 1993). Auch SENFT und NEUDECKER (1991) bezeichnen die systemische Vakzination als problematisch wegen des geringen Transfers von Immunglobulinen aus dem Blut in die Milch. 2.3.6.3 Therapie subklinischer Mastitiden Wurde früher von einer antibiotischen Behandlung subklinisch erkrankter Tiere abgeraten und das Augenmerk auf die Abstellung prädisponierender Faktoren gerichtet, so lässt sich heute eine Laktationstherapie, nicht zuletzt wegen der gesetzlich festgesetzten Grenzwerte für Herdensammelmilch, gelegentlich nicht umgehen (GRUNERT et al. 1996). Etwa 30 % der subklinischen Mastitisfälle wurden im Jahre 1999 in Deutschland behandelt. Die am häufigsten verwendeten Antibiotika sind Penicilline und Cephalosporine (HAMANN 2001). Für den optimalen Therapiezeitpunkt subklinischer Mastitiden findet man in der Literatur unterschiedliche Angaben. Infektionen zu Beginn der Laktation bringen bessere Heilungschancen, wenn eine sofortige Therapie eingeleitet wird (RIBOLDI 1989, HAMANN 1993, DUTTA et al. 1995, SCHUH 1996, HILLERTON u. SEMMENS 1999). 24 2.4.6.3.1 Laktationstherapie Zur Behandlung subklinischer Mastitiden während der Laktationsperiode gibt es unterschiedliche Auffassungen. Der Einsatz therapeutischer Maßnahmen erscheint aber grundsätzlich nur dannn gerechtfertigt, wenn man in mindestens 75 % der Fälle eine Heilung erzielt (KLASTRUP 1987). Wenn die lokale und systemische Verträglichkeit des Arzneimittels sowie die Passierbarkeit der Milchgänge bis in den Alveolarbereich gegeben ist, gilt bei subklinischen Euterentzündungen die lokale Behandlung als das Mittel der Wahl (FUNKE 1961). Sind die Erreger nicht nur oberflächlich auf der Schleimhaut, sondern gleichzeitig tief im Gewebe zu erwarten, ist die parenterale Behandlung als Ergänzung zur lokalen Gabe in Betracht zu ziehen (SOBIRAJ et al. 1997). Die ökonomischen Aspekte stehen auch bei der Mastitisbekämpfung für den Tierhalter im Vordergrund. In der Literatur werden Modellrechnungen diskutiert, die zwar die Milchgeldverluste bedingt durch die Wartezeit bei der Behandlung der subklinischen Fälle während der Laktation einschließen, jedoch die positiven Langzeiteffekte der Verminderung der Neuinfektionsrate unberücksichtigt lassen (BOOTH 1992). Subklinische Mastitiden sollten erregerspezifisch auf der Grundlage eines Antibiogramms möglichst rasch nach erfolgter Infektion therapiert werden, um zu vermeiden, dass sie klinisch manifest werden und zu irreversiblen Gewebsveränderungen führen (KLEINSCHROTH 1992, HAMANN 1993, SCHUH 1996). Nach KLEINSCHROTH (1992) sollte die Behandlung subklinisch euterkranker Tiere möglichst vorgenommen werden, wenn nach zytologischen und mikrobiologischen Untersuchungen sämtlicher laktierender Tiere ein Herdenprofil vorliegt. Abgesehen von Galtmastitiden sollte vorzugsweise eine systemische oder aber eine Kombinationstherapie zum Einsatz kommen. Für die Therapie von durch KNS ausgelösten subklinischen Mastitiden gibt es keine sicheren Daten für eine Therapieempfehlung. Trotz der bekannten möglichen Nachteile einer Laktationstherapie, wie zusätzliche Behandlungskosten, Verwerfen der antibiotikahaltigen Milch, relativ geringe Wirksamkeit und der Rückstandsproblematik wird diese Maßnahme als zusätzliche und / oder alternative Möglichkeit zur antibiotischen Trockenstellung diskutiert (DVG 1993). 25 Für die Behandlung subklinischer Mastitiden, die durch Streptokokken verursacht werden, gelten β-Laktam-Antibiotika als Mittel der Wahl (HELLMANN et al. 1993, TROLLDENIER et al. 2000). Die antibiotischen Behandlungen von S. aureusMastitiden haben dagegen nur wenig Erfolg. Sie sind in Größenordnungen von 30 bis 40 % zu finden (GRUNERT et al. 1996), was besonders im Hinblick auf die geschätzte Selbstheilungsrate von 25 % oder mehr als kritisch zu beurteilen ist (CRAVEN 1987). 2.4.6.3.2 Wirkstoffverhalten nach intramammärer Applikation Die Beschreibung des Verhaltens der intrazisternal applizierten Antibiotika im Euter kann einer pharmazeutischen und einer pharmakokinetischen Phase zugeordnet werden (EHINGER u. KIETZMANN 1998), die Kenntnisse zur Wirkstoffverteilung im Milchdrüsengewebe aber sind unbefriedigend (EHINGER et al. 2004). 2.4.6.3.2.1 Pharmazeutische Phase Gekennzeichnet ist diese erste Phase durch die Freisetzung des Wirkstoffes aus seiner Formulierung in die Milch (EHINGER u. KIETZMANN 1998). Durch die Verabreichung schwer löslicher Salze von Antibiotika mit einer adsorbierenden Chemikalie wie Aluminiummonostearat als großes inertes Molekül in öliger Grundlage kann die antimikrobielle Aktivität im Sekret des trockengestellten Euters teilweise über Wochen aufrechterhalten werden (WRIGTH 1983). 2.4.6.3.2.2 Pharmakokinetische Phase Diese Phase beschreibt die Prozesse, welche die Arzneimittelkonzentrationen im Kompartiment Milch oder Trockenstehersekret beeinflussen. Wichtig für die Arzneimittelverteilung ist die Diffusion durch hydrophile und lipophile Kompartimente und die passive Wirkstoffbewegung durch die Blut-Euter-Milch-Schranke, das Eutergewebe sowie die Barrieren zwischen Krankheitserreger und Medikament (SCHULZ 1994, EHINGER u. KIETZMANN 1998, UNGEMACH et al. 2003). 2.4.6.3.3 Therapie der subklinischen Mastitis mit Cephalosporinen Im Jahre 1945 entdeckte BROTZU Mikroorganismen, deren Rohfiltrat in der Lage war, das Wachstum verschiedener grampositiver und gramnegativer Bakterien zu hemmen (ONKEN 1990). 26 Von diesem entdeckten Pilz, der 7 unterschiedliche antimikrobielle Substanzen bilden konnte, war nur das Ceohalosporin C interessant, wovon der Grundkörper – die 7Amino-Cephalosporansäure − abgespalten wurde (WALTHER u. MEYER 1986). Nach GEDEK (1985) wurde mit den Cephalosporinen eine Gruppe von Antibiotika in der Tiermedizin eingeführt, die einerseits über ein breites antibakterielles Wirkungsspektrum und andererseits über eine weitgehende Penicillinase-Festigkeit verfügt. Vielfach werden sie nach den Daten der Neueinführungen als Stoffe der 1. - 4. Generation klassifiziert, obwohl die Berücksichtigung der Darreichungsform und der Stabilität gegenüber β-Laktamasen sinnvoller erscheint (KROKER 2003). Die β-Laktam-Antibiotika (Penicilline und Cephalosporine) wirken bakterizid; sie stören den Aufbau einer funktionsfähigen Zellmembran (WERNER 1986). In ihrer Stabilität gegenüber der Cephalosporinase sind die Cephalosporine sehr verschieden. Eine sehr schlechte Wirksamkeit gegenüber gramnegativen Keimen haben Cephalosporine der ersten Generation, dagegen sind solche der dritten Generation hoch wirksam (KLEINHANS 2000). 2.4.6.3.4 Heilungserfolg der Laktationstherapie Das entscheidende Erfolgskriterium eines Mastitisbekämpfungsprogramms ist die Eutergesundheit der gesamten Herde (WALSER et al. 1973). Kühe, die trotz sachgerechter Therapie innerhalb einer Laktation auf demselben Euterviertel mehr als zweimal erkranken, sind als therapieresistent einzustufen (DVG 2002) und sollten den Bestand verlassen. Bei einem Vergleich der in der Literatur beschriebenen Ergebnisse der Therapie der subklinischen Rindermastitis werden große Unterschiede in den Versuchsanordnungen deutlich. Die Angaben über Behandlungsergebnisse von subklinischen StaphylokokkenMastitiden schwanken sehr. Heilungsraten von 40 - 60 % erzielten u. a. NEUMEISTER (1971), SCHÄLLIBAUM et al. (1981), BERCHTOLD et al. (1983) und FRITON (1998). Die Ursachen für diese unbefriedigenden Ergebnisse sind Faktoren, die verhindern, dass am Ort der Infektion minimale Hemmkonzentrationen erreicht werden. Hier sind u. a. das Eindringen der Erreger in das interstitielle Bindegewebe und die Bildung von Mikroabszessen zu nennen. Eine weitere Erklärung für das Persistieren von Infektionen ist, dass Staphylokokken zwar phagozytiert, aber im Inneren des Leukozyten nicht 27 zerstört werden und so beim Zerfall des Leukozyten wieder vermehrungsfähige Erreger im Euter vorhanden sind. Auch die Erhöhung des Vehikelvolumens für die intrazisternal verabreichten Antibiotika von 50 auf 1000 ml bzw. die Verwendung einer 5prozentigen Glukoselösung als Vehikel bewirkten keine Verbesserung der Behandlungsergebnisse bei chronischen subklinischen Staphylokokken-Mastitiden (BERCHTOLD et al. 1983). Bei der Behandlung von subklinischen Sc. agalactiae-Mastitiden konnten YAMAGATA et al. (1987) eine Heilungsrate von 98 % erzielen. In Verbindung damit konnten sie einen ökonomischen Nutzen in der Laktationsbehandlung, besonders zu Beginn der Laktation nachweisen. Bei Infektionen mit Sc. agalactiae wird eine lokal-antibiotische Laktationstherapie wegen der guten Heilungsaussichten ausdrücklich empfohlen (YAMAGATA et al. 1987, KEEFE 1997). Abgesehen von subklinischen Mastitiden, verursacht durch Sc. agalactiae, sprechen andere Autoren von schlechten Therapieresultaten bei subklinischen Mastitiden in der Laktation (GEDEK 1980, OWENS et al. 1999). Nach Angaben von HELLMANN et al. (1993) führte eine zweimalige Verabreichung von je 100 mg Cefoperazon bei 31 % der therapierten, subklinisch infiziert gewesenen Euterviertel zu einer zytobakteriologischen Heilung 14 Tage nach der Behandlung. SHEPARD et al. (2000) kamen nach einer Studie an Kühen mit erhöhten Zellzahlen zu dem Schluss, dass die antibiotische Behandlung während der Laktation weder bakteriologisch noch zytologisch effektiv war. Bezogen auf einzelne Erreger konnten sie aber ebenfalls Unterschiede feststellen. Für die Behandlung der durch Streptokokken verursachten subklinischen Mastitiden konnten bessere Ergebnisse ermittelt werden im Vergleich zu den durch S. aureus hervorgerufenen. Die höchste Selbstheilungsrate wiesen sie bei Sc. uberis-Infektionen nach. NICOLET et al. (1983) erreichten mit einer Blitztherapie als eine Möglichkeit der kurzfristigen Bestandssanierung bakteriologische Heilungsraten von 84,6 % eine Woche nach der Behandlung; vier Wochen nach der Behandlung war die Heilungsrate zwar deutlich niedriger, bestätigte aber die Abheilungstendenz. Diesen Erfolg begründeten die Untersucher hauptsächlich mit der systematischen Durchführung einer Herdentherapie und der wirksamen Unterbrechung der Infektionskette in Verbindung mit Mängelabstellung bei Melkmaschinen und Melktechnik. 28 WILSON et al. (1999) erreichten bei einer umfangreichen Studie durch die antibiotische Behandlung subklinischer Mastitiden eine Heilungsrate von 75 %, die Selbstheilungsrate der unbehandelten Kühe lag aber im Vergleich dazu bei 68 %. SOL et al. (1997) wiesen nach, dass das Alter der Kuh, die Zellzahl zum Behandlungszeitpunkt, das Vorliegen der Infektion in vorderen Eutevierteln und das Laktationsstadium die Heilung subklinischer S. aureus-Mastitiden beeinflussen. Im Gegensatz dazu korrelierte die Anzahl infizierter Viertel pro Kuh nicht signifikant mit dem Heilungserfolg. 2.5 Mastitisprophylaxe Die Zitzendesinfektion nach dem Melken ist eine bedeutende Maßnahme in der täglichen Melkroutine, welche die Inzidenz subklinischer intramammärer Neuinfektionen in der Laktation reduzieren kann (BRAMLEY u. DODD 1984, DVG, LESLIE u. DINGWELL 2002, LEON et al. 2004). Desinfizierende Präparate nach dem Melken zeigen insbesondere eine gute Wirksamkeit gegenüber Infektionen durch euterassoziierte Mastitiserreger wie Sc. agalactiae und S. aureus (PANKEY et al. 1983; BODDIE u. NICKERSON 1997). 2.6 Trockenstehendes Euter Die morphologischen Veränderungen zum Trockenstellen setzen bereits im letzten Laktationsdrittel ein. Zunehmend mehr Alveolen stellen neben noch voll funktionierenden im Drüsenverband ihre Funktion ein, der Bindegewebsanteil nimmt zu, und die Milchsynthese sinkt. Diese Involutionsprozesse erfassen das gesamte Euter und sind von einer herdförmigen Heilung mit Gefahr der Vernarbung nach einer proliferativen Mastitis zu unterscheiden (MIELKE et al. 1991). Das bewusste Trockenstellen durch Unterlassen des Melkens forciert diesen Prozess und bringt ihn zum Abschluss. Die noch verbleibende Milchmenge nach dem Melkende erzeugt im Euter einen Stauungsdruck, der wiederum zum Sistieren der Milchsekretion führt. Die anschließende Resorptionsphase ist dadurch gekennzeichnet, dass infolge der Lockerung der Schrankenfunktion Flüssigkeit und Laktose aus dem Gangsystem ins Blut übertreten. Damit vermindert sich der Euterinnendruck allmählich, die Blutdurchflussrate geht zurück, und die partikulären Milchbestandteile unterliegen der Phagozytose. Etwa zehn Tage nach dem letzten Melken befindet sich das Euter in der Ruhephase und lässt sich auch nicht mehr anrüsten (WENDT et al. 1998). 29 2.6.1 Trockenstellen Hierunter versteht man das bewusste Einstellen des Milchentzuges bei Kühen 8 - 6 Wochen vor dem Geburtstermin, um dem verstärkten Massewachstum des Kalbes ausreichend Energie zur Verfügung zu stellen, dem Muttertier die Möglichkeit zur Anlage von Energiereserven zu geben und der Milchdrüse die Vorbereitung auf die folgende Laktation (Regeneration und anschließende Kolostrumbildung) zu ermöglichen (RÜSSE 1979, WENDT et al. 1998). Während der Trockenzeit sollten Kühe so gefüttert werden, als ob sie 5 kg Milch geben würden. Methodisch gibt es zwei grundlegende Prinzipien des Trockenstellens: das „Ausschleichen“ aus der Laktation durch zeitlich begrenztes Auslassen von Melkzeiten und den abrupten Abbruch des Melkens. Die Art der Trockenstellung hat bei gesunden Eutern keine wesentliche Bedeutung für einen störungsfreien Verlauf (BIEBER 1990, WENDT et al. 1998). Trotzdem lässt sich bei Hochleistungstieren eine zugespitzte Situation kaum verhindern, da bei Milchmengen über 15 kg/Kuh/Tag nach dem letzten Melken für etwa 3 Tage in den Vierteln ein hoher Stauungsdruck von bis zu 5 kPa entsteht (WENDT 2001). Gesunde Euter gesunder Tiere bedürfen beim Trockenstellen in der Regel auch keiner chemotherapeutischen Prophylaxe (RÜSSE 1979). 2.6.1.1 Methoden des Trockenstellens 2.6.1.1.1 Trockenstellen durch wiederholtes Überspringen einer Melkzeit 2.6.1.1.1.1 Ohne Einsatz von Medikamenten Einige Tage vor dem Trockenstellen wird die Kraftfuttergabe reduziert. An drei aufeinanderfolgenden Tagen wird die Kuh nur noch einmal gemolken und die zweite Melkzeit übersprungen. Nach dem letzten maschinellen Milchentzug wird das Euter gründlich ausgemolken und anschließend die Zitzenkuppe desinfiziert. Diese Methode ist nur für eutergesunde Kühe geeignet. 2.6.1.1.1.2 Unter Einsatz von Medikamenten Bis zur Desinfektion wird wie unter Punkt 2.6.1.1.1.1 verfahren. Im Anschluss daran wird ein antibiotikahaltiges Langzeitpräparat in Form eines Injektors in die Zitzenzisterne appliziert. 30 2.6.1.1.2 Abruptes Trockenstellen 2.6.1.1.2.1 Ohne Einsatz von Medikamenten Auch hier wird die Kraftfutterration einige Tage vor dem Trockenstellen reduziert bzw. abgesetzt. Zum Trockenstellen wird das Euter nach dem letzten maschinellen Milchentzug gründlich ausgemolken und die Zitzenkuppe desinfiziert. Auch diese Methode eignet sich nur für eutergesunde Kühe. 2.6.1.1.2.2 Unter Einsatz von Medikamenten Hierbei wird wie unter Punkt 2.6.1.1.2.1 verfahren und im Anschluss an die Zitzendesinfektion das Langzeitpräparat in die Zitzenzisterne verabreicht. 2.6.2 Phasen der Trockenperiode Die Trockenperiode umfasst mehrere Phasen, die in der Literatur von den einzelnen Autoren unterschiedlich bezeichnet werden. SCHULZ et al. (1974) unterteilen die Trockenperiode in Stauungsphase (3 - 6 Tage), Ruhepause und Übergang zur neuen Laktation (ab etwa 10 Tage a. p.). Von SCHULZ und WENDT (1986) und BIEBER (1990) wurde sie in vier Phasen unterteilt – Stauungsphase, Reabsorptionsphase, Ruhepause und Kolostralphase. SMITH und TODHUNTER (1982) gliederten in drei Phasen auf, die beginnend mit Beendigung des Milchentzuges und etwa drei Wochen dauernde Phase der aktiven Involution, Phase der Steady-State-Involution, in der keine Milch im Euter vorhanden ist und die Phase der Kolostrumformation und des Laktationsbeginns ab etwa zwei Wochen a. p. 2.6.3 Länge der Trockenstehphase ENEVOLDSEN und SØRENSEN (1992) merkten an, dass das Verhältnis Länge der Trockenperiode und Milchleistung in der folgenden Laktation die optimale Dauer des Trockenstehens ermitteln hilft. Die Abhängigkeit von Erkrankungen, besonders von Mastitiden, sollte dabei ebenfalls Beachtung finden, da sich tierärztliche Behandlungskosten wiederum mindernd auf das Ergebnis der Milchleistung auswirken. NATZKE et al. (1975) ermittelten das geringste Risiko für Mastitiden bei Trockenstehzeiten von weniger als 30 Tagen und RINDSING et al. (1978) fanden ein steigendes Risiko von Mastitiden bei steigender Dauer der Trockenperiode. Sieben Wochen sind nach Angaben von ENEVOLDSEN und SØRENSEN (1992) mit dem geringsten Risiko für 31 eine klinische Erkrankung verbunden, wobei sie aber die Bedeutung anderer Faktoren wie die Milchmenge und eventuelle Mastitiden zum Zeitpunkt des Trockenstellens als wesentlich bedeutendere Einflussgrößen unterstreichen. 2.6.4 Bedeutung des Trockenstehens WENDT (2001) bezeichnet die Trockenstehzeit einer Kuh nicht nur als Wartezeit, sondern in erster Linie als aktive Service-Periode in Vorbereitung einer effektiven folgenden Laktation und festen Bestandteil der Produktionssicherheit im Bestand. Wenn man die Laktationsruhe als extrem lange „Zwischenmelkzeit“ betrachtet, dann ist verständlich, dass auch hier euterpathogene Mikroorganismen Invasions- bzw. Infektionsvoraussetzungen vorfinden können (DVG 2002). Das Trockenstellen von Milchdrüsen ist so belastend für die Kühe, dass sich aus inapparenten Infektionen akute Mastitiden entwickeln können. Während dieser Phase verringerten Hohlraumvolumens und erhöhter Heilungstendenz entzündeter Drüsenbereiche kann der lokale Antibiotikaeinsatz gut und lange wirken (UNGEMACH et al. 2003). 2.6.5 Trockenstelltherapie Das Einbringen von antimikrobiellen Substanzen über den Strichkanal in die Zisterne und die Milchdrüse der laktierenden Kuh unmittelbar nach dem letzten Melken in der jeweiligen Laktationsperiode wird als Trockenstelltherapie bezeichnet. Die Behandlung zum Zeitpunkt des Trockenstellens hat zum Einen das Ziel, bestehende intramammäre Infektionen zu eliminieren und zum Anderen, Neuinfektionen während der Trockenstehzeit zu verhindern. Die intramammäre Verabreichung von Langzeittrockenstellern ist derzeit die effektivste Maßnahme, um dieses Ziel zu erreichen (EBERHART 1986, SCHUKKEN et al. 1993, BERRY u. HILLERTON 2002) GEDEK (1979) fasste die Vorteile der antibiotischen Versorgung des Rindereuters beim Trockenstellen folgendermaßen zusammen: ● hohe Heilungsraten bei bestehenden Euterinfektionen ● metaphylaktische Wirksamkeit gegenüber Neuinfektionen und klinischen Mastitiden ● Minimierung der Gefahr der Kontamination in Verkehr gebrachter Milch mit Antibiotika ● keine Milchverluste. 32 Die antibiotische Versorgung des Euters beim Trockenstellen ohne Einsatz von Langzeitformulierungen in therapeutischer Dosierung muss als unsachgemäß angesehen werden, wenn persistierende Infektionen bestehen. In Herden mit hohem Infektionsdruck, vor allem, wenn die euterassoziierten Keime (S. aureus, Sc. agalactiae) dominieren, muss mit hohen Neuinfektionsraten gerechnet werden, so dass auch hier der metaphylaktische Einsatz von antibiotikahaltigen „Trockenstellern“ gerechtfertigt ist, selbst wenn alle Euterviertel einer Kuh am Tage des Trockenstellens für klinisch gesund befunden werden. Liegen diese Voraussetzungen nicht vor, muss nicht zuletzt unter dem Aspekt des gesundheitlichen Verbraucherschutzes und in Befolgung der Antibiotikaleitlinien der pauschale Einsatz der „Trockensteller“, also auch bei auf allen Vierteln eutergesunden Kühen, als fragwürdig angesehen werden, zumal es mit Zitzenversieglern offenbar effektive Alternativen gibt. Die Applikation eines „Trockenstellers“ ist vielfach Bestandteil der Trockenstellroutine in Milchviehbetrieben und wird weltweit empfohlen (SMITH et al. 1967, PANKEY et al. 1982, EBERHART 1986, BROWNING et al. 1990, RAINARD et al. 1990, HEESCHEN 1993, LESLIE u. DINGWELL 2003b). BUSHE und OLIVER (1987) merken an, dass Methoden zur Absenkung der Milchmenge zum Zeitpunkt des Trockenstellens die Effektivität verabreichter antibiotischer Trockensteller erhöhen. So liegen die Antibiotika in einer geringeren Milchmenge, die vom Euter produziert wird, in höherer Konzentration vor, und die Gefahr des „Austropfens“ von Antibiotika mit dem „Milchtropfen“ ist ebenfalls reduziert. In 99 % der Milchfarmen Großbritanniens wird das routinemäßige Trockenstellen unter Antibiotikaeinsatz als eine Säule im Gesamtbekämpfungsprogramm von Euterentzündungen bei der Milchkuh durchgeführt (BERRY u. HILLERTON 2002). In Deutschland wurden nach Angaben von KRÖMKER (1999) 62 % aller Milchkühe im Jahre 1998 mit Langzeitantibiotika trockengestellt. Andere Länder bevorzugen das selektive medikamentöse Trockenstellen einzelner Kühe oder auch nur betroffener Viertel (BRATLIE 1972, ØSTERAS et al. 1994). Australische Autoren halten die selektive Trockenstelltherapie für vertretbar, aber es sollten sämtliche Euterviertel zum Trockenstellen antibiotisch versorgt werden, sobald die Milch mindestens eines Euterviertels bakteriologisch und zytologisch positiv ist, da eine selektive Behandlung der subklinisch erkrankten Euterviertel mit einem signifikant 33 erhöhten Neuinfektionstisiko der betreffenden Tiere verbunden ist (MEIN u. BROWNING 1990, BROWNING et al. 1994). Diese Neuinfektionen wurden hauptsächlich durch S. aureus und Sc. uberis hervorgerufen. Aus Praktikabilitätsgründen propagieren andere Autoren die pauschale Trockenstelltherapie aller Kühe auf allen Vierteln (BERRY et al. 1997). BERRY (2003) merkt an, dass, trotz der eigentlich beschränkten Indikation der antibiotischen Trockenstellung auf infizierte Euterviertel, die Kuh doch als eine Einheit bei der Behandlung betrachtet werden muss. Auch GEDEK (1979) gibt der Behandlung aller Euterviertel den Vorzug, da die gesunden Viertel unter infizierten Eutervierteln derselben Kuh durch Kreuzinfektion besonders gefährdet sind. BARKEMA et al. (1997) bestätigen die höhere Wahrscheinlichkeit der Infektion von Eutervierteln, wenn bereits ein Viertel der Kuh erkrankt ist. SMITH et al. (1985) empfehlen, alle Euterviertel aller Kühe antibiotisch trockenzustellen, um die prophylaktische Komponente der Trockenstelltherapie maximal auszuschöpfen. ØSTERAS et al. (1991) folgerten, dass, wenn einzelne Kühe selektiert werden, dann müssen alle Viertel dieser Kühe behandelt werden. Unter den besonderen Bedingungen der norwegischen Milchwirtschaft führten spätere Untersuchungen zu dem Vorschlag, die Entscheidung zur Behandlung und zur Verwendung von kurzzeit- oder langzeitwirksamen Präparaten von konkreten Risikofaktoren abhängig zu machen (ØSTERAS et al. 1999). ØSTERAS und SANDVIK (1996) geben der intramammären Versorgung nur bakteriologisch positiver Viertel über mehrere Tage den Vorzug. Aktuellen Angaben zufolge werden in Norwegen nur noch 1 - 2 % der Milchkühe selektiv antibiotisch trockengestellt, in Finnland etwa 20 % der Milchkühe, in Dänemark 6 - 7 % (EKMAN und ØSTERAS 2003) und in Schweden etwa 25 % (ODENSVIK 2002). 2.6.5.1 Bedeutung der Trockenstelltherapie Die höchste Inzidenz von Mastitis-Neuerkrankungen und Rezidiven wird im Peripartalzeitraum beobachtet, der somit eine sehr bedeutende Phase im reproduktiven Zyklus hochleistender Milchkühe darstellt (GRABOWSKI et al. 2002). Schon im Jahre 1930 stellte MÜHLINGHAUS fest, dass die Nachfrage nach rasch wirkenden und zugleich das Allgemeinbefinden der Kühe wenig beeinflussenden, milchvertreibenden Mitteln in der tierärztlichen Praxis groß geworden ist. 34 Die praktische Erfahrung lehrte, dass durch längeres und völliges Trockenstehen eine Milderung gewisser Euterleiden, ja sogar manchmal Heilung, besonders der durch Streptokokken bedingten Krankheitszustände eintritt. Nach Einführung der Antibiotika in die Mastitistherapie wurden bald die Vorteile des Antibiotikaeinsatzes beim Trockenstellen erkannt (SCHALM u. ORMSBEE 1949, DODD u. NEAVE 1951, PEARSON 1951). NEAVE et al. (1966) stellten die Bedeutung der systematischen Antibiotikatherapie beim Trockenstellen als effektive Mastitiskontrollmaßnahme heraus. Dazu wurden dann Antibiotika-Formulierungen entwickelt, die eine möglichst lange therapeutisch wirksame Antibiotika-Konzentration im Euter gewährleisteten. Beispiele sind die von SMITH et al. (1966) beschriebenen Modellexperimente mit Cloxacillin. WOOLFORD et al. (2001) kamen nach einer Vergleichsstudie ebenfalls zu dem Ergebnis, dass Langzeit-Antibiotika-Formulierungen beim Trockenstellen einen größeren prophylaktischen Effekt erzielen als lokal auf den Zitzenkanal oder Zitzensinus beschränkte Antibiotika-Gaben. Bereits NEAVE et al. (1950) hatten nachgewiesen, dass nicht infizierte Viertel einer Kuh mit einem oder mehreren bereits infizierten Vierteln für eine Neuinfektion während der Trockenstehphase empfänglicher waren. Besonders im ersten und letzten Drittel der Trockenstehperiode ist das nicht laktierende Euter für Infektionen über den Strichkanal empfänglich (COUSINS et al. 1980, SMITH et al. 1985), was in physiologischen, immunologischen und anatomischen Veränderungen im Euter während dieser Zeit begründet ist (BUSHE u. OLIVER 1987). 2.6.5.2 Diagnostik beim Trockenstellen und in der Trockenstehzeit Die zur sicheren Diagnostik von subklinischen Mastitiden in der Laktation verfügbare Palette von zytologischen, mikrobiologischen, chemischen und physikalischen Untersuchungsmethoden kann für die Diagnostik am trockenstehenden Euter nicht in vollem Umfang eingesetzt werden (BEUCHE et al.1977). Die Konzentrationen der Inhaltsstoffe des Kolostrums verschieben sich im Verlaufe der Trockenzeit deutlich, wobei der Anstieg des Gesamtproteingehaltes wegen der therapeutisch bedeutsamen Bindung von Antibiotika besonderes Interesse verdient (GEDEK 1979). 35 2.6.5.3 Anforderungen an Trockenzeitpräparate Da überwiegend grampositive Erreger in der Trockenstehzeit die Milchdrüse des Rindes belasten, konzentrieren sich die therapeutisch / prophylaktisch eingesetzten Antibiotika auf die β-Laktam-Gruppe, auf bio- und halbsynthetische Penicilline und einige Cephalosporine. Um auch β-Laktamase-bildende Staphylokokken beeinflussen zu können, finden neben dem Penicillin G und Amoxicillin vor allem Cloxacillin und Cephalosporine Verwendung. Einige wenige Handelspräparate enthalten als Wirkkomponente gegen gramnegative Bakterien Framycetin. Die verabreichten Trockenzeitformulierungen dürfen keine Reizeinwirkung auf das Eutergewebe ausüben. Nach ZIV (1975) kann sogar eine bei Laktationsformulierungen tolerierte und zur Stimulation unspezfischer Abwehrmechanismen vielleicht sogar erwünschte geringfügige Euterreizung bei der langfristigen Therapie, in der Trockenstehperiode, schwere Gewebsschädigungen auslösen. Die Verwendung bakterizid wirkender Antibiotika wurde als vorteilhaft angesehen, um die Gefahr der Resistenzausbildung bei niedriger Wirkstoffkonzentration in der zweiten Hälfte der Trockenstehzeit zu mindern (ZIV 1975). Eine möglichst gute Verteilung des in das Euter eingebrachten Medikamentes über die gesamte Milchdrüse ist für eine erfolgreiche Erregereliminierung von entscheidender Bedeutung (SCHMID et al. 1972). Eine genügend hohe Wirkstoffkonzentration über eine ausreichend lange Zeit am Ort des Infektionsgeschehens ist für die bakteriologische Ausheilung notwendig (SCHMID et al. 1973) und sollte mindestens den MHK-Wert der einzelnen Keime für 9 Wochen überschreiten (TRAEDER u. IRION 1996). Für die Rückstandssituation ist eine linear abfallende Ausscheidungsgerade wichtig, damit nach Ablauf der fünftägigen Kolostralphase keine Rückstände im Gesamtgemelk vorhanden sind. Die in Deutschland zugelassenen Trockensteller sind ölige Suspensionen, die aus einer äußeren Phase (dem Dispersionsmittel) und einer darin fein verteilten inneren Phase aus zerkleinerten, nicht gelösten Feststoffen bestehen (BENTZ et al. 1978). Nach EHINGER et al. (2001) hat eine geringe Partikelgröße von Antibiotika einen positiven Einfluss auf die Hemmkonzentration im Drüsengewebe, die nach intrazisternaler Applikation bei trockenzustellenden Kühen erreicht werden kann. Geeignete Hilfsstoffe einer öligen Suspension können dann trotz schneller Anflutung des Wirkstoffes im Euter eine verzögerte Resorption in das Blut bewirken. 36 Nach Angaben von TRAEDER und IRION (1996) wird durch eine spezielle Vermahlung („dynomilling“) der Rohstoff Cloxacillin bei der Herstellung von Orbenin® Extra auf eine gleichmäßige Größe verkleinert und so die Bioverfügbarkeit um 20 - 30 % erhöht. 2.6.5.4 Heilungserfolg subklinischer Mastitiden durch antibiotisches Trockenstellen TOLLE et al. (1977) bezeichnen das Trockenstellen als den optimalen Zeitpunkt zur Behandlung subklinischer Mastitiden. Nach HAMANN (1989b) steht die Nützlichkeit der antibiotischen Trockenstellung insbesondere beim Vorliegen von Mastitisproblemen mit Streptokokken und Staphylokokken außer Frage, allerdings verringern sich mit zunehmendem Lebensalter die Heilungsraten nach Trockenstellung unter antibiotischem Schutz (HAMANN u. FUNKE 1999). BROWNING et al. (1994) machen dafür die Chronizität der Mastitiden verantwortlich. Hintere Euterviertel zeigen im Vergleich zu vorderen Drüsenkomplexen grundsätzlich niedrigere Heilungserfolge. Die Ursachen hierfür könnten mit den ungünstigeren hygienischen Bedingungen für diesen Euterbereich und in der kürzeren Zitzenlänge der hinteren Zitzen im Vergleich zu den vorderen begründet sein (HAMANN u. BURVENICH 1994). VOLKERT (1992) gibt bakteriologische Heilungsraten von 60,1 % nach einer Trockenphasentherapie mit 500 mg Cloxacillin je Viertel an und bezeichnet die Trockenphasentherapie ebenfalls als beste Möglichkeit, um subklinische Euterentzündungen zu heilen. LEON und ANDERSSON (2002) zeigten durch Untersuchungsergebnisse einer Trockenstellstudie, dass bei Tieren mit Infektionen auf allen vier Eutervierteln die Heilungsrate deutlich schlechter ist. SOL et al. (1994) ermittelten Heilungsraten von 65,8 % bei subklinisch mit S. aureus infizierten Eutervierteln zum Zeitpunkt des Trockenstellens. Von negativem Einfluss auf den Heilungserfolg waren ein erhöhter Zellgehalt, höheres Alter der Kuh, das Vorliegen von mehreren infizierten Vierteln bei derselben Kuh und die Infektion hinterer Viertel, was auch andere Autoren bestätigten (ØSTERAS et al. 1999, ØSTERAS u. EDGE 2000). 37 Die Dauer der Trockenperiode beeinflusste die Heilung nicht. Im Vorfeld bemerkten SOL et al. (1990a), dass Trockenperioden von mehr als 43 Tagen zu einer signifikanten Reduzierung der Heilungsraten von S. aureus-Mastitiden führen könnten. BANSAL et al. (1994) konnten die Inzidenz von subklinischen Mastitiden durch antibiotisches Trockenstellen und anschließendes Zitzendippen um 54,27 % (kuhbezogen) und um 65,72 % (viertelbezogen) senken. LEON und ANDERSSON (2002) erzielten in ihrer Studie eine Heilung von 82 % bei S. aureus-Infektionen bezogen auf Euterviertelebene; die schlechtesten Heilungsquoten wiesen sie bei Kühen mit vier kranken Vierteln nach. Hinsichtlich der Laktationsnummer konnten keine signifikanten Unterschiede zwischen den geheilten und den therapieresistenten Tieren festgestellt werden. ZECCONI et al. (1999) erreichten durch die systemische Verabreichung von basischem Tylosin zwei Wochen vor dem berechneten Kalbetermin bessere Heilungsraten als mit dem traditionellen Trockenstellen allein bezogen auf S. aureus und UmweltStreptokokken. Hamann et al. (1998) erzielten bei einer Trockenstellstudie mit Benestermycin® (1 Injektor enthält: 100 mg Penethamathydrojodid, 280 mg Benethamin-Penicillin und 100 mg Framycetinsulfat) bakteriologische Heilungsraten von 61 % bzw. 55 % in einer zweiten Herde. Parallel dazu betrugen die Neuinfektionsraten 6 % und 17 %. Mit den Ergebnissen wurde die Zweckmäßigkeit der antibiotischen Versorgung zum Trockenstellen, aber auch die Notwendigkeit der parallelen Durchführung eines Hygienemanagements für eine erfolgreiche Mastitisbekämpfung belegt. Unter In-vivo-Bedingungen sind auch pharmakokinetische Gründe für ausbleibende antibakterielle Wirkung zu beachten. So hat die Partikelgröße des Wirkstoffs einen starken Einfluss auf Gewebsverteilung, systematische Resorption, Ausscheidungszeit und damit auch auf die Wirksamkeit der Antibiotika im Rindereuter nach intrazisternaler Verabreichung (EHINGER u. KIEZMANN 1998, SOBIRAJ et al. 2000). BERRY und HILLERTON (2002) stellten fest, dass im Vergleich von antibiotisch trockengestellten Kühen zu nicht antibiotisch trockengestellten Kühen Letztere zum Zeitpunkt der Abkalbung eine signifikant höhere Anzahl an Neuinfektionen aufwiesen. Unbehandelte Viertel, die zum Trockenstellen mit Corynebacterium bovis oder KNS infiziert waren, wiesen eine stärkere Anfälligkeit gegen Neuinfektionen mit Sc. uberis oder coliformen Keimen auf. 38 Auch neuseeländische Forscher fanden heraus, dass gesunde Kühe durch das antibiotische Trockenstellen eine geringere Inzidenz gegenüber klinischen Mastitiden durch Sc. uberis hatten als unbehandelte Kühe, was allerdings für Kühe, die zum Laktationsende mit Keimen infiziert waren, nicht zutraf (WILLIAMSON et al. 1995). MERCK und JAKOB (1979) schlussfolgerten, dass subklinisch erkrankte Euterviertel nach einem erfolgreichen medikamentellen Trockenstellen die Leistung gesunder Euterviertel erreichen, sofern sie nicht aus einer klinisch verlaufenden Euterentzündung entstanden waren. BERRY et al. (1997) befürworten das antibiotische Trockenstellen aufgrund der nachgewiesenen höheren Milchleistung von behandelten Kühen im Vergleich zur Kontrollgruppe. SOBIRAJ et al. (2000) belegten anhand ihrer Untersuchungsergebnisse, dass die Applikation eines langzeitwirksamen Trockenstellers gute bis sehr gute Effekte auf die Folgelaktation hat, wobei der therapeutische Erfolg bedeutender als der prophylaktische Effekt war. HASSAN et al. (1999) erzielten nach dem Trockenstellen aller Viertel aller Kühe die besten Heilungsergebnisse. 2.6.5.5 Ursachen für das Versagen der antibiotischen Therapie zum Trockenstellen Trotz der Behandlung mit antimikrobiell wirksamen Langzeitformulierungen kalben manche Kühe mit subklinischen oder klinischen Mastitiden ab. Eine bedeutsame Ursache hierfür sind Infektionen, die über den gesamten Trockenstehzeitraum persistieren, wozu besonders S. aureus-Infektionen zählen (PHILPOT 1969). Weiterhin sind die Trockenstehformulierungen hauptsächlich gegen grampositive Kokken und weniger gegen gramnegative Bakterien wirksam (EBERHART et al. 1979). Die Wirksamkeit des Trockenstellers über die gesamte Trockenperiode ist mitunter nicht gegeben. Der in der frühen Trockenstehzeit gewährleistete Schutz ist oft zum Ende dieser und insbesondere in der kritischen Phase um den nahen Geburtszeitpunkt nicht mehr vorhanden (SCHULTZE 1983, SMITH et al. 1985). 2.6.6 Alternativen zum antibiotischen Trockenstellen zum Schutz vor Neuinfektionen Dazu zählen Präparate, die den Zitzenkanal versiegeln. WILLIAMSON et al. (1995) fanden bei Untersuchungen heraus, dass 7 bzw. 50 Tage nach Beginn der Trockenstehzeit noch 50 % bzw. 5 % der Zitzenkanäle ohne ausreichend schützenden 39 Keratinpfropf waren. Damit besteht in diesen beiden Zeitabschnitten ein großes Risiko für bakterielle Neuinfektionen. Um diese zu verhindern, werden gegenwärtig Verfahren zum Verschluss der Zitzenöffnung entweder als filmbildende Zitzentauchmittel zur äußeren Anwendung oder über die Injektion von wismuthaltigen Suspensionen in den Zitzenkanal diskutiert; die Indikation für die Anwendung ist auf infektionsfreie Euterviertel begrenzt (REDETZKY u. HAMANN 2003). 2.6.6.1 Externe Zitzenversiegler Die äußere Anwendung eines filmbildenden Zitzentauchmittels soll für mehrere Tage einen Verschluss der äußeren Zitzenkanalöffnung und damit Schutz gegen Feuchtigkeit, Dung und euterpathogene Mikroorganismen bewirken (REDETZKY u. HAMANN 2003). Nach TIMMS (2000) können externe Zitzenversiegler die Rate der Neuinfektionen während der Trockenstehperiode reduzieren. 2.6.6.2 Interne Zitzenversiegler Zitzenversiegler auf der Basis von Wismutsubnitrat reduzierten ebenfalls erfolgreich Neuinfektionen im Zeitraum des Trockenstehens. Ihr Einsatz setzt allerdings Folgendes voraus: eine so zu behandelnde Kuh muss klinisch und anhand der ZZ-Daten (MLP) für auf allen Vierteln als eutergesund befunden werden. Darüber hinaus dürfen Infektionen mit S. aureus und / oder Sc. agalactiae im Betrieb nur von untergeordneter Bedeutung sein. Folglich ist der interne Zitzenversiegler in erster Linie gegen das Zustandekommen von Neuinfektionen des Euters mit umweltassoziierten Erregern während der Trockenstehperiode ausgelegt (MEANEY 1976; WOOLFORD et al. 1998; HUXLEY et al. 2002). 2.7 Resistenzen infektiöser Keime gegen Antibiotika Resistenz eines Erregers liegt vor, „wenn die zu seiner Hemmung oder Abtötung notwendige Wirkstoffkonzentration höher ist als die in vivo realisierbare“ (Normenausschuss Medizin 1979). Immer mehr Erreger von Infektionskrankheiten entwickeln Resistenzen gegen Antibiotika. Die häufigste Ursache für diese Resistenz ist die Bildung von Enzymen (Penicillinase, Cephalosporinase), die die Penicilline und Cephalosporine unwirksam machen können (KLEINHANS 2000). So konnte KIRST (2001a) im Zeitraum 1997 - 2000 in 40 Norddeutschland bei 60 % der nachgewiesenen Mastitiserreger eine Resistenz gegen mehrere (bis zu acht) Antibiotika und bei 21 % gegen ein Antibiotikum nachweisen. Lediglich 19 % der Erreger waren ohne Resistenzerscheinungen. Ein Teil der Erreger zeigte auch intermediäre Wirkung (geringe Empfindlichkeit) gegenüber Antibiotika. Nach LEVY (1998) gibt es schon viele S. aureus-Stämme, die gegen alle bekannten Antibiotika resistent sind. Nach Angaben von TRAEDER und IRION (1996) nimmt der Anteil β-Laktamasepositiver Staphylokokken ständig zu und beträgt regional bereits über 25 %. Die seit 1992 vom Bundesinstitut für gesundheitlichen Verbraucherschutz und Veterinärmedizin mittels EDV zusammengefassten in der täglichen Resistenztestung anfallenden Antibiogramme von Instituten aus 14 Bundesländern zeigten bis zum Jahre 1996 ansteigende Resistenzsätze. Im Jahr 1997 wurde erstmals ein konstantes oder sogar sinkendes Niveau bei einigen Erregern und Wirkstoffen registriert. So hat sich die Resistenz von S. aureus des Rindes gegen natürliche Penicilline mit Werten von 51 bis 53 % gleichbleibend eingestellt (TROLLDENIER 1999). SOBIRAJ et al. (1997) konnten bei der Prüfung der euterpathogenen Erreger von subklinischen Mastitiden nur geringfügige Unterschiede zwischen verschiedenen Regionen Deutschlands feststellen. Die dort gefundene geringfügig geringere Sensitivität von Sc. uberis gegenüber Benzylpenicillin wurde von TROLLDENIER et al. (2000) bestätigt. Nach Angaben von TRAEDER und BARTHEL (1990) weisen ca. 2,7 % der Streptokokken im Agar-Diffusionstest eine Resistenz gegen Cefoperazon auf, während Staphylokokken-Stämme mit 1,7 % als insgesamt empfindlicher zu werten sind. KRABISCH und GANGL (2000) belegten auf der Basis einer bundesweiten Multicenterstudie mit 701 Mastitiserregern für das Cephalosporin Cefaperazon in vitro eine Sensitivität der meisten Mastitiserreger zwischen 98 und 100 %, was auch für die β-Laktamasebildner galt. Auch SCHUH (1995) gibt eine gute Wirksamkeit von Cephalosporinen an. So waren β-hämolisierende Streptokokken in Österreich zu 93,5 % empfindlich gegenüber Cefoperazon, S. aureus zu 85,1 %. KÖSTER et al. (2002) ermittelten im Rahmen einer epidemiologischen Studie zur Untersuchung der Zusammenhänge von Herdenmanagement und Eutergesundheit eine Resistenz von S. aureusStämmen von 46 % gegen Penicillin und Ampicillin. Am höchsten war die Sensibilität gegen Cloxacillin, gefolgt von SUTR und Cephalosporinen. 41 3 Tiere, Material und Methoden 3.1 Betriebsauswahl Aufgrund der Bestandsgröße von annähernd 1.400 Kühen wurde dieser Milchviehbetrieb in Sachsen (Regierungsbezirk Chemnitz) ausgewählt. Anhand der durch die monatliche Milchleistungsprüfung ermittelten Zellzahlbefunde der letzten Monate vor Versuchsbeginn konnte das Vorkommen subklinischer Mastitiden bei Kühen vermutet werden. 3.2 Betriebsbeschreibung Der Landwirtschaftsbetrieb wurde in der Rechtsform einer Aktiengesellschaft 1991 gegründet. Es werden ca. 4.000 ha Fläche bewirtschaftet, wozu ca. 1.400 ha natürliches Grünland zählen. Die Milchproduktion ist auf zwei Standorte mit jeweils 1.400 und 500 Kühen verteilt. Die Kühe (Verdrängungskreuzung SMR mit HF) hatten im Versuchszeitraum eine 305-Tage-Leistung von 8.400 l Milch. Das Durchschnittsalter der Kühe betrug 4,2 Jahre und das Erstkalbealter lag bei 25,3 Monaten. Die Zwischenkalbezeit betrug 450 Tage und die Kalberate 85,6 %. 3.2.1 Bauliche Gegebenheiten Die Anlage wurde 1979 erbaut. In der damaligen DDR war dieser Stall für ca. 2.000 Kühe konzipiert. Die Tiere werden in einem Laufstall in Boxen zu je 50 Tieren gehalten. Seit der Erneuerung der gesamten Ausrüstung im Jahr 2001 sind die Liegeflächen mit isolierendem, verformbarem Material ausgestattet. Die gegenständigen Liegeboxen haben eine Länge von 210 cm und eine Breite von 120 cm. Die freitragenden Trennbügel sind 55 cm vom Boden entfernt und der Niveauunterschied (Kotstufe) zum 310 cm breiten Laufgang beträgt 18 cm. Die Entmistung findet über Vollspalten (Schlitzbreite der Vollspalten: 5 cm) und Güllekanäle statt. Die Reproduktionsabteilung, in welche die Kühe ca. 1 Woche vor dem Abkalbetermin umgestallt werden, besteht seit dem Jahre 2001 aus 8 Abkalbeboxen (Strohmatte) zu je 40 m². 42 3.2.2 Fütterung und Tränke Die Fütterung erfolgt nach Zuordnung der Kühe in Leistungsgruppen über ein Futterband. Eine Einzel-Leistungsfütterung wird nicht durchgeführt. Tabelle 1: Rationsbeispiel Futtermittel (kg) Stroh Maissilage Heu Grassilage Getreide Eigenmischung Fett Salz Kraftfuttermischung Deuka Grünpellets Raps Zuckerrübenpellets Maisschrot Melasse Propylenglykol Grundmineralstoff Kalk Saure Salze Soja Hochlaktation Basis Vorbereitung Starter Trockensteher 1,3 6,3 4,2 5,7 0,9 0,4 4,4 10,6 2 3,8 8,1 2,8 3,3 1 1,6 0,4 0,5 0,2 0,04 0,03 0,04 0,7 0,5 1,4 3 1 0,05 1 0,5 1 1 3 1 0,5 0,15 0,2 0,13 0,05 2,5 0,5 0,2 0,1 0,14 0,35 1 2,5 0,5 0,3 0,15 0,18 0,1 2 Das Trinkwasser wird den Kühen in großvolumigen Trogtränken mit einer Länge von 200 cm angeboten. 3.2.3 Melkvorgang Die Kühe werden in einem Karussell mit 40 Plätzen, die von den Tieren vom Vorwartehof her kontinuierlich während der Fahrt betreten und nach einer Umdrehung wieder verlassen werden, gemolken. Aus Gründen der Leistungssteigerung werden die Kühe dreimal am Tag gemolken. Bei euterkranken Kühen wird die Melkfrequenz auf zweimal pro Tag gesenkt. Zur Reinigung der Zitzen werden gewaschene und geschleuderte Eutertücher und im starken Verschmutzungsfall die Euterdusche vom Melkpersonal eingesetzt. 43 Nach dem Melken wird eine Sprühdesinfektion der Zitzen mit neosan Dip vorgenommen. Die Melkbecher erfahren eine Zwischendesinfektion (Tauchbad) mit Peressigsäure. Der arithmetische Mittelwert der durch die Milchleistungsprüfung bestimmten ZZ lag während des Untersuchungszeitraumes unter 250.000 Zellen/ml Milch. 3.3 Vorauswahl von Kühen Die Vorauswahl für den Versuch geeigneter Kühe erfolgte über die Kontrolle der Daten der Milchleistungsprüfung der letzten drei Monate. Voraussetzung war eine Zellzahl von 100.000/ml Milch oder mehr. Dieses Auswahlkriterium gibt einen Hinweis auf das Vorliegen einer subklinischen Mastitis auf mindestens einem Viertel. Es mussten tragende Kühe der ersten bis dritten Laktation in der Endphase der Laktation (ca. 6 bis 5 Wochen vor dem geplanten Trockenstellen) sein, die zu diesem Zeitpunkt noch mindestens eine Milchleistung von 10 Liter/Tag hatten. 3.3.1 Einschlusskriterien Tiere, die für den Versuch vorgesehen waren, wurden unter besonderer Berücksichtigung des Euters klinisch untersucht. Dabei mussten sie dreimal im Wochenabstand folgenden Kriterien genügen: 1. Klinische Allgemeinuntersuchung 1.1 Allgemeinbefinden ungestört 2. Klinische Euteruntersuchung 2.1 Adspektionsbefund von Euter und Zitzen: o. b. B. 2.2 Handmelkbarkeit: problemlos 2.3 Euterpalpation (nach dem Melken) 2.3.1 Fehlen von knotigen oder diffusen Indurationen im Parenchym 2.4 Grobsinnliche Milchsekretüberprüfung 2.4.1 keine Flocken oder maximal einzelne Flocken im Anfangsgemelk 2.4.2 Milchcharakter erhalten: Fehlen von Verfärbungen (Blutmelken und ähnliches) 2.5 Ergebnis des Mastitisschnelltests in den Viertelanfangsgemelken 2.5.1 mindestens einfach positive Reaktion auf mindestens einem Viertel 44 3.3.2 Ausschlusskriterien 1. Akute, subakute oder chronisch klinische Mastitiden (Ausschluss von Rubor, Tumor, Dolor, Calor, Functio laesa) 2. Kühe mit vier eutergesunden Vierteln 3. Thelitis, Zisternitis, Stenosen der Zitzen 4. Akute Zitzenverletzungen, Milchinkotinenz, Schwermelkbarkeit durch Stenosen 5. Antibiotische und / oder entzündungshemmende Behandlungen des Tieres wegen Mastitis oder sonstigen Allgemeinerkrankungen binnen der letzten 30 Tage (Bezugsgröße: Zeitpunkt MP1) 6. Störungen des Allgemeinbefindens zu den Zeitpunkten der Probenentnahmen (MP1, 2 und 3) 7. Kühe, die während der Behandlungen vor dem Trockenstellen oder während der Trockenstehperiode oder mit Laktationsbeginn eine akute klinische Mastitis oder Störungen des Allgemeinbefindens entwickelten, fielen aus dem Versuch heraus. Bei Auftreten einer Mastitis wurde eine MP zur BU genommen. 3.4 Versuchsaufbau 31 Tage (1 Monat) vor dem Trockenstellen: MP1: BU, ZZ 24 Tage vor dem Trockenstellen: MP2: BU, ZZ 23 Tage vor dem Trockenstellen: MP3: BU, ZZ Laktationsbehandlung 1 22 Tage vor dem Trockenstellen: 7 Tage vor dem Trockenstellen: Laktationsbehandlung 2 MP4: BU, ZZ = Laktationsbehandlungskontrolle 1 Tag des Trockenstellens: = Laktationsbehandlungskontrolle 2 MP5: BU, ZZ antibiotischeTrockenstellerbehandlung Tag der Geburt: MP6: BU 7 Tage p. p.: MP7: BU, ZZ 28 Tage p. p.: MP8: BU, ZZ 45 3.5 Milchprobenentnahme und Versand Von den Kühen, die zum Zeitpunkt der jeweiligen Probenentnahme die Einschlusskriterien erfüllten, wurden vor dem Melkvorgang die Euter je nach Verschmutzungsgrad nass gereinigt und mit gewaschenen und geschleuderten Eutertüchern trockengerieben. Anschließend wurden die Zitzen und Zitzenkanalöffnungen sorgfältig mit alkoholgetränkten Einmaltüchern desinfiziert. In Anwendung der Richtlinien der DVG über die sachgerechte Entnahme von Milchproben unter antiseptischen Bedingungen (DVG 2000) wurden zur Entnahme der Milchproben Einmalhandschuhe getragen (ein frisches Paar pro Kuh). Die ersten Milchstrahlen wurden in Euterschalen aufgefangen und dienten der grobsinnlichen Beurteilung der Vorgemelksprobe. Anschließend wurde der Mastitis-Schnelltest mit dem Mastitis-Schnelltest „Bernburg“ der Fa. Serum-WerkBernburg AG durchgeführt. Dazu wurden durch Schräghalten der Testschalen die verbliebenen 2 ml Milch mit 2 ml Testflüssigkeit vermischt. Die Bewertung des Zellgehaltes wurde nach folgendem Schema vorgenommen: negativ (-): Gemisch aus Milch und Testflüssigkeit bleibt unverändert flüssig und zeigt keine sichtbaren Veränderungen (bis 200.000 Zellen/ml Milch) schwach positiv (+): Gemisch wird schlierig (200.000 - 500.000 Zellen/ml Milch) positiv +: Stärkere Schlierenbildung (500.000 - 800.000 Zellen/ml Milch) positiv ++: Deutliche Schleimbildung (Bewegung des Gemisches verlangsamt) (800.000 - 5 Mio. Zellen/ml Milch) stark positiv +++: Gemisch zähschleimig bis gallertig, fließt nicht mehr auseinander, Klumpenbildung (meist über 5 Mio Zellen/ml Milch). Für jede Kuh wurde eine eigene Testschale verwendet. Vom Anfangsgemelk wurden aus jedem Euterviertel ca. 10 ml Milch in sterile Milchröhrchen mit 0,25 g Borsäure als Konservierungsmittel gemolken, die Röhrchen verschlossen und beschriftet. 46 Im Kühlschrank wurden die Röhrchen im Anschluss an die Probenentnahme bis zum Versand per Post an den TGD Thüringen e. V. in Bad Langensalza, wo die zytologischen und bakteriologischen Untersuchungen durchgeführt wurden, gelagert. 3.6 Arzneimittel und Kontrollsubstanzen 1. Name des Wirkstoffes: Cloxacillin-Benzathin (2:1) Handelsname: Orbenin® Extra, Fa. Pfizer GmbH, Karlsruhe Formulierung: Ölige Suspension zum Eingeben in den Strichkanal Konzentration: 1000 mg in 6 g Suspension Charge: 10769037 Haltbarkeit: 12/2002 2. Name des Wirkstoffes: Cefoperazon Handelsname: Peracef®, Fa. Pfizer GmbH, Karlsruhe Formulierung: Ölige Suspension zum Eingeben in das Euter Konzentration: 100 mg Cefoperazon in 10 ml Suspension Chargen: 00735204, 10735099 Haltbarkeit: 10/2002, 03/2003 3. Name des Wirkstoffes: Handelsname: Natriumchlorid Isotonische Natruimchlorid-Lösung ad. us. vet., Fa. Selectavet, Holzollung Formulierung: Wässerige Lösung zur intravenösen Infusion, subkutanen, intraperitonealen Injektion und äußerlichen Anwendung Konzentration: 0,90 g Natriumchlorid in 100 ml Lösung Charge: 04131 Haltbarkeit: 09/2003 4. Euterdesinfektionsmittel: Dipmittel Handelsname: Gelstadip® forte, Fa. Pfizer, Karlsruhe Formulierung: Lösung zur äußerlichen Anwendung Konzentration: 26,33 g Nonoxinol-9-Jod Komplex in 100 ml Lösung Charge: 10332 Haltbarkeit : 11/2003 47 5. Testflüssigkeit: Handelsname: Schalmtest Mastitis-Schnelltest „Bernburg“, Bernburg Fa. Serum-Werk-Bernburg AG Formulierung: Testlösung Konzentration: 2,0 g Alkylarylsulfonat und 0,01 g Bromkresolpurpur in 100 ml Testlösung Charge: 0088 Haltbarkeit: 09/2003 3.7 Dokumentation Beginnend mit dem Tag der Vorselektion der Kühe wurden für jedes Tier alle ermittelten Daten in vorgefertigten Formblättern (Fallbögen) aufgezeichnet. Die Ergebnisse der bakteriologischen und zytologischen Untersuchungen wurden nach Zusendung der Untersuchungsprotokolle durch das Milchlabor des TGD Thüringen e. V. in die Fallbögen übertragen. 3.8 Behandlung / Behandlungsgruppen Insgesamt wurden 80 Kühe in den Versuch aufgenommen. Jeweils 40 Kühe wurden zwei Behandlungsgruppen zugeordnet. Da parallel zu dieser Studie noch ein zweiter Versuch (Kombination von lokaler und parenteraler Antibiotikagabe) durchgeführt wurde, kamen 40 weitere Kühe hinzu, die in die Randomisierung mit aufgenommen wurden. Um eine objektive, nicht vorselektierte Endauswertung zu erhalten, sind die Therapiegruppen nach dem „Rotationsprinzip unter Berücksichtigung der Laktationszahl“ gewählt worden. Nicht alle Tiere traten gleichzeitig in die Studie ein. Der Zeitpunkt des abrupten Trockenstellens unter antibiotischem Schutz, mit vorausgehender klinischer Euteruntersuchung und Milchprobennahme, wurde als MP5 fixiert. Alle vorausgehenden Untersuchungen und Probennahmen (MP1 - MP4, siehe Versuchsaufbau) hingen zeitlich unmittelbar von diesem Termin ab. Der Tag des Abkalbens war nicht genau vorhersagbar. Im Rahmen dieser Studie wurde dieser Zeitpunkt als MP6 definiert. Die sich anschließenden zwei Untersuchungs- und Beprobungszeitpunkte (MP7, MP8) hingen zeitlich unmittelbar von diesem Termin ab. 48 Entsprechend des Randomisierungsplanes wurde bei den Kühen der Therapiegruppe am Tag MP3 (23 Tage vor dem Trockenstellen) die Laktationsbehandlung begonnen. Diese bestand aus der zweimaligen Gabe von Peracef® intrazisternal im Abstand von 24 Stunden in alle zum Tag MP1 bakteriologisch und / oder zytologisch auffälligen Euterviertel. Diese nicht eutergesunden Viertel umfassten subklinisch und unspezifisch erkrankte Viertel und solche mit latenten Infektionen. Die Behandlung erfolgte nach gründlichem Ausmelken und Reinigen der Zitzen sowie Desinfektion der Zitzenkuppen nach dem Abendmelken im Karussell. Im Anschluss daran wurden die Zitzen mit dem Präparat Gelstadip® forte der Fa. Pfizer gedippt. Zusätzlich wurde bei diesen Kühen im Anschluss an das Melken in der Laufbox noch eine parenterale Gabe von 25 ml NaCl vorgenommen, da außerhalb dieser Untersuchungen die Kühe der so genannten Behandlungsgruppe 2 eine Kombinationstherapie, bestehend aus der lokalen Gabe von Peracef® und der parenteralen Gabe von Advocid®, einem Quinolonpräparat, erhielten. Die Behandlungsgruppe 2 wird in einer gesonderten Arbeit parallel zu den hier vorliegenden Studien bearbeitet und hat keinen Einfluss auf die Ergebnisse der eigenen Untersuchungen. Der Fakt ist deshalb zu erwähnen, weil in der Randomisierungsliste auch Kühe der Therapiegruppe 2 enthalten sind. Wegen des eher unwahrscheinlichen Einlusses der NaCl-Injektionen auf das Therapieergebnis in der Behandlungsgruppe bleibt dieser Tatbestand in den weiteren Ausführungen über die Ergebnisse unberücksichtigt. Eine weitere zu erstellende Auswertung vergleicht die drei Gruppen - lokale Laktationsbehandlung, kombinierte Laktationsbehandlung und alleinige Trockenstellung untereinander. Die ebenfalls nach dem Zufallsprinzip der Kontrollgruppe zugeordneten Tiere blieben ohne Laktationsbehandlung und konnten somit zur Überprüfung der Selbstheilungsrate bis zum Trockenstellen herangezogen werden. Am Tag des Trockenstellens wurde bei allen Kühen (Therapiegruppe und Kontrollgruppe) nach dem letzten gründlichen Ausmelken und der Zitzendesinfektion die antibiotische Trockenstellung mit Orbenin® Extra durchgeführt. Die Zitzen wurden ebenfalls mit dem Präparat Gelstadip® forte gedippt. 49 Antibiotische Behandlungen (Endlaktationstherapie): Therapiegruppe: 39 Kühe erhielten auf jedem mikrobiologisch und / oder zytologisch positivem Euterviertel (ZZ > 100.000/ml Milch) 2-mal im Abstand von 24 h je einen Injektor mit 100 g Cefoperazon (Peracef®, Pfizer GmbH) intrazisternal verabreicht (Behandlungstage 1 und 2). Wegen einer Klauenerkrankung wurde 1 Kuh ausgeschlossen. Kontrollgruppe: 40 Kühe mit subklinisch / unspezifischer Mastitis oder latenter Infektion blieben unbehandelt und dienten als Kontrolle Antibiotische Behandlungen (Trockenstelltherapie): Therapiegruppe: 39 Kühe erhielten auf jedem Viertel 1000 mg Cloxacillin-Benzathin (Orbenin® Extra, Pfizer GmbH) intrazisternal verabreicht (Tag des Trockenstellens) Kontrollgruppe: 37 Kühe erhielten ebenfalls auf jedem Viertel 1000 mg CloxacillinBenzathin (Orbenin® Extra, Pfizer GmbH) intrazisternal verabreicht (Tag des Trockenstellens). 3 Kühe wurden von der Studie ausgeschlossen, da 2 Kühe an einer Pneumonie und 1 Tier an einer klinischen Mastitis erkrankt waren. Am Tag der Geburt (MP6) wurden von allen Kühen Viertelgemelksproben zur bakteriologischen Untersuchung eingesandt, nachdem die Tiere, ihre Euter und Zitzen sowie das Kolostrum klinisch untersucht worden waren. Eine Zellzahlbestimmung wurde nicht vorgenommen. 7 Tage p. p. wurden von allen Versuchskühen Viertelgemelksproben entnommen, die wiederum einer bakteriologischen und zytologischen Bestimmung zugeführt wurden. Die versuchsabschließende und letzte Milchprobenentnahme der Viertel aller Versuchskühe wurde 28 Tage p. p. durchgeführt. Zur zytobakteriologischen Untersuchung wurden die Proben eingesandt. 3.8.1 Applikation des Euterinjektors Peracef® Die der Therapiegruppe zugeordneten Kühe wurden am Tag MP3 auf allen nicht gesunden Vierteln mit Peracef® (100 mg Cefoperazon pro Injektor mit 10,0 ml öliger Suspension) behandelt. Wie vom Hersteller vorgeschrieben, wurden die betreffenden Viertel zweimal im Abstand von 24 Stunden mit je einem Injektor therapiert. 50 Zur Anwendung kamen Injektoren der Chargennummern 00735204 und 10735099. Zusätzlich zur lokalen Peracefgabe wurden parenteral 25 ml NaCl-Lösung verabreicht. 3.8.2 Applikation des Trockenstellers Nach sorgfältiger Desinfektion der Strichkanalöffnung wurde der Injektorkonus nur wenige Millimeter in den Strichkanal eingeführt und anschließend der Injektorinhalt in das Euterviertel appliziert. Danach wurden die Zitzen mit Gelstadip® forte gedippt. 3.9 Überprüfung der Heilungserfolge 3.9.1 Kontrolle des Behandlungserfolges Zur Kontrolle des Behandlungserfolges wurden 15 und 22 Tage nach dem Ende der Laktationsbehandlung bzw. 7 Tage vor dem Trockenstellen und am Tage des Trockenstellens Viertelgemelksproben aller Euterviertel eines Versuchstieres zur zytologischen und bakteriologischen Untersuchung eingesandt. Nach den vorliegenden Ergebnissen dieser beiden Milchprobenentnahmen wurden die Euterviertel der Versuchskühe der Therapiegruppe wie folgt bewertet: Heilung: BU negativ, ZZ < 100.000/ml Milch Keine Heilung: BU positiv, ZZ ≥ 100.000/ml Milch Neuinfektion: BU positiv, ZZ ≥ 100.000/ml Milch, aber Erregerwechsel zu MP1 Gesund geblieben: BU negativ, ZZ < 100.000/ml Milch 3.9.2 Überprüfung der Selbstheilung Analog zur Kontrolle des Behandlungserfolges bei den Kühen der Therapiegruppe konnte bei den Versuchskühen der Kontrollgruppe anhand der ausgewerteten Milchproben der Entnahmezeitpunkte MP4 und 5 eine möglicherweise stattgefundene Selbstheilung ermittelt werden. Hierfür wurde das gleiche Bewertungsschema wie im Punkt 3.9.1 herangezogen. Als Bezugsgröße für die Ausgangssituation wurden die Entnahmezeitpunkte MP1 - 3 in die Wertung einbezogen. So galt folgendes Schema für die Einteilung der Euterviertel der Kühe in der Kontrollgruppe zum Zeitpunkt vor der Behandlung: 51 Subklinische Mastitis: BU mindestens einmal positiv, ZZ mindestens zweimal ≥ 100.000/ml Milch Unspezifische Mastitis: BU dreimal negativ, ZZ mindestens zweimal ≥ 100.000/ml Milch Latente Infektion: BU mindestens einmal positiv, ZZ mindestens zweimal < 100.000/ml Milch Eutergesund: BU dreimal negativ, ZZ dreimal < 100.000/ml Milch 3.9.3 Kontrolle der Trockenstelltherapie Zur Überprüfung des Erfolges der antibiotischen Trockenstelltherapie wurden von allen Kühen Viertelgemelksproben jeweils am Tag der Abkalbung, 7 und 28 Tage p. p. entnommen. Die am Tag der Abkalbung entnommenen Milchproben wurden nur bakteriologisch untersucht, die zu den späteren Zeitpunkten entnommenen Proben zytobakteriologisch. 3.10 Versuchszeitraum Der Versuch erstreckte sich von Juni 2001 bis Juli 2002. 3.11 Untersuchung der Milchproben 3.11.1 Zellzählung in den eingesandten Proben Die zytologische Untersuchung der Viertelanfangsgemelksproben wurde auf der Grundlage der Methode L.01.01.-1 (September 1998) der amtlichen Sammlung von Untersuchungsverfahren nach § 35 LMBG mittels Fossomatic® 360 im Milchlabor des Tiergesundheitsdienstes Thüringen e. V. durchgeführt. Dazu wurden 0,2 ml der Milch der Probe mit Puffer und Farblösung gründlich vermischt und in Form eines dünnen Filmes von 0,5 mm Breite und 10 µm Dicke auf eine rotierende Scheibe, die als Objektträger für ein Fluoreszenzmikroskop dient, aufgetragen. Die elektrischen Impulse, die jede Zelle durch die Anfärbung der Zellkern-DNA produziert, wurden registriert. 52 3.11.2 Isolierung und Identifizierung von Mastitiserregern 3.11.2.1 Kulturmedien Für die Untersuchung der eingesandten Milchproben wurde als nicht selektives Standardnährmedium ÄSCULIN-Blutagar, modifiziert (RPP 023 B; Fa. OXOID) und als Selektivmedium SABOURAUD-DEXTROSE-Agar (RPP 001; Fa. OXOID) eingesetzt. Die ÄSCULIN-Blutplatten wurden mit einem S. aureus-Stamm gestempelt, der als Amme für die Kontrolle von Camp-Phänomenen dient. 3.11.2.2 Präparation der Proben Die Proben wurden auf Zimmertemperatur erwärmt und sorgfältig durchmischt, da sich die Bakterien nach Kühlung der Proben in der Fettschicht befinden. Als Inokulum wurde eine Milch- bzw. Sekretmenge von ca. 0,01 ml mittels Glasstab auf der Nährbodenplatte ausgestrichen. 3.11.2.3 Inkubation Die Inkubationstemperatur betrug 36 + / - 1°C. Die Auswertung der Platten erfolgte erstmals nach 18 - 20 Stunden und ein weiteres Mal nach 48 Stunden. 3.11.2.4 Identifizierung spezifischer Mastitiserreger Folgende Auswertungskriterien wurden der Erregerbestimmung zugrunde gelegt: 3.11.2.4.1 Auswertungskriterien Koloniemorphologie und Pigmentbildung (Form, Farbe, Größe, Geruch) Stärke und Einheitlichkeit des Keimwachstums Gram-Färbung Katalase-Test Latex-Agglutinationstest zur Identifizierung der Streptokokken 3.11.2.4.2 Biologische Merkmale Staphylococcus (S.) aureus: Koloniemorphologie: stecknadelkopfgroße, runde glänzende Kolonien, teilweise pigmentiert (weiß bis gelb) 53 Hämolyse: breite, vollständige Hämolyse Gramfärbung: grampositive Kokken Katalase-Test: positiv Staphaurex-ObjektträgerSchnelltest: positiv (Clumping factor Protein A) Koagulase negative Staphylokokken (KNS): Koloniemorphologie: stecknadelkopfgroße, runde glänzende Kolonien, teilweise pigmentiert (weiß bis gelb) Hämolyse: ohne Hämolyse, vereinzelt mit Hämolyse wachsend Gramfärbung: grampositive Kokken Katalase-Test: positiv Staphaurex-ObjektträgerSchnelltest: negativ (Clumping factor Protein A) Streptococcus (Sc.) agalactiae: Koloniemorphologie: stecknadelkopfgroße, glänzende, glattrandige Kolonien Hämolyse: -, - oder -Hämolyse Gramfärbung: grampositive Kokken Äskulinspaltung: negativ Katalase-Test: negativ serologische Gruppe: B (nach Lancefield) Streptococcus (Sc.) dysgalactiae: Koloniemorphologie: stecknadelkopfgroße, glänzende, glattrandige Kolonien Hämolyse: - oder -Hämolyse 54 Gramfärbung: grampositive Kokken Äskulinspaltung: negativ Katalase-Test: negativ serologische Gruppe: C (nach Lancefield) Sonstige Äskulinpositive Streptokokken (exklusive Sc. uberis): Koloniemorphologie: stecknadelkopfgroße, glänzende, glattrandige Kolonien Hämolyse: - oder -Hämolyse, zum Teil vergrünend wachsend Gramfärbung: grampositive Kokken Äskulinspaltung: positiv Katalase-Test: negativ serologische Gruppe: besitzen kein gemeinsames Gruppenantigen (nach Lancefield) BBL CRYSTAL: Gram-positiv: Konfidenzbereich für eine sichere Identifikation zwischen 70 und 99,9 % Streptococcus( Sc.) uberis: Koloniemorphologie: stecknadelkopfgroße Kolonien Hämolyse: -Hämolyse, eventuell mit Vergrünung oder Hämolyse Gramfärbung: grampositive Kokken Äskulinspaltung: positiv Katalase-Test: negativ serologische Gruppe: kein gemeinsames Gruppenantigen, selten Gr. E (nach Lancefield) Coliforme einschließlich Escherichia (E.) coli: ● Koloniemorphologie: runde, grauweiße, glattrandige, schleimig glänzende Kolonien teilweise mit -Hämolyse, aber auch ohne Hämolyse wachsend 55 Gramfärbung: gramnegative, plumpe Stäbchen Oxidase: negativ Nocardien: Koloniemorphologie: Standardmedium: weißgraue, runde, ovale bis bizarr gestaltete trockene Kolonien - krümelige, sandähnliche Konsistenz - erhabenes Zentrum - Kolonie tief in den Agar eingesunken Selektivmedium: weißgraue trockene Kolonien Gramfärbung: grampositiver, verzweigter, teilweise granulierter Faden oder teils langes kokkoides Stäbchen Ziehl-Neelsen: meistens säurefest Hefen / Sprosspilze: Koloniemorphologie: Standardmedium: porzellanfarbene, trockene oder mattglänzende Kolonien Selektivmedium: trockene oder mattglänzende Kolonien, typischer Hefegeruch Gramfärbung: grampositive, eiförmige längliche Zellen, deutlich größer als Bakterien Die Empfindlichkeitsprüfung der isolierten Mastitiserreger gegenüber den zum Einsatz gekommenen Chemotherapeutika wurde im Agar-Diffusionstest ermittelt. Der Agar-Diffusionstest wurde als Blättchentest nach DIN 58940 und AVID-“Arbeitsanleitung für die Resistenzbestimmung schnell wachsender Bakterien in der Veterinärmedizin“ auf einem festen Kulturmedium (Mueller-Hinton-Agar) durchgeführt. Alle Viertelgemelksproben mit positivem bakterologischen Untersuchungsergebnis wurden gegen Cefoperazon (10 µg) und Cloxacillin (5 µg) getestet. 56 Die gemessenen Hemmhofdurchmesser wurden für jeden Wirkstoff getrennt den Bewertungsstufen sensibel, intermediär und resistent zugeordnet. Bei allen Stapylokokken-Stämmen wurde das Vorhandensein der β-Laktamase (Penicillinase) mittels DrySlide β-Laktamase (Nitrocefin) der Firma Becton Dickinson GmbH, Standort Heidelberg getestet. 3.12 Statistische Auswertung Alle ermittelten Daten und Untersuchungsergebnisse wurden in codierter Form in eine Microsoft-Excel-Datei eingegeben und anschließend auf den Zentralen Rechner des Hochschulrechenzentrums der Universität Leipzig übertragen. Die erfassten qualitativen Merkmale und deren relative Ereignishäufigkeiten wurden mit Kreuztabellen und der Prüfgröße chi² nach PEARSON auf Signifikanz (Signifikanz p ≤ 0,05; p ≥ 0,05 = nicht signifikant „n. s.“) geprüft. Der exakte Test nach Fisher, der einen Test auf Unabhängigkeit in einer 2x2-Kreuztabelle darstellt, wurde angewendet, wenn der Stichprobenumfang einer 2x2-Tabelle 20 oder kleiner war. Graphische Darstellungen wurden mit dem Microsoft-Excel-Programm erstellt. 57 4 Ergebnisse 4.1 Anzahl der Kühe im Versuch Insgesamt wurden 120 Kühe in den Versuch aufgenommen, die die Auswahlkriterien erfüllten. 4.1.1 Anzahl von Kühen zum Tag MP1 (31 Tage vor Laktationsende) Zum Tag der ersten Milchprobenentnahme waren jeweils 40 Kühe in den 3 Behandlungsgruppen. 4.1.2 Anzahl von Kühen zum Tag MP2 (24 Tage vor Laktationsende) Eine Woche nach der ersten Milchpronenentnahme wurde die zweite Probenentnahme vorgenommen. Zu diesem Zeitpunkt waren in der Therapiegruppe noch 39 Kühe und in der Kontrollgruppe alle 40 Kühe. 4.1.3 Anzahl von Kühen zum Tag MP3 (23 Tage vor Laktationsende) Einen Tag nach der Milchprobenentnahme 2 wurde die Milchprobenentnahme 3 durchgeführt. Hier waren ebenfalls 39 Kühe in der Therapiegruppe und 40 Tiere in der Kontrollgruppe vorhanden. 4.1.4 Anzahl von Kühen zum Tag MP4 (7 Tage vor Laktationsende, 15 Tage nach Therapieende) In der Therapiegruppe erfüllten zu diesem Zeitpunkt 39 Kühe die Einschlusskriterien. In der Kontrollgruppe waren zu diesem Zeitpunkt noch 38 Kühe. 4.1.5 Anzahl von Kühen zum Tag MP5 (Tag des Trockenstellens, 22 Tage nach Therapieende) Zur Therapiegruppe zählten weiterhin jeweils 39 Kühe und 37 Kühe zur Kontrollgruppe. 4.1.6 Anzahl von Kühen zum Tag MP6 (Tag der Geburt) Es blieben weiterhin 39 Kühe in der Therapiegruppe und 37 Kühe in der Kontrollgruppe. 58 4.1.7 Anzahl von Kühen zum Tag MP7 (1 Woche post partum) Zum Zeitpunkt der Milchprobenentnahme 7 waren in der Therapiegruppe noch 35 Kühe verblieben und in der Kontrollgruppe erfüllten noch 31 Tiere die Einschlusskriterien. 4.1.8 Anzahl von Kühen zum Tag MP8 (28 Tage post partum) In der Therapiegruppe waren bis zur 8. und damit letzten Milchprobenentnahme 35 Kühe. 30 Tiere waren zu diesem Zeitpunkt in der Kontrollgruppe verblieben. 4.2 Gründe für das Ausscheiden von 15 Kühen Tab. 2: Übersicht der aus dem Versuch ausgeschlossenen Tiere Grund Tag des Kühe aus Kühe aus Ausscheidens Theapiegruppe 1 Therapiegruppe 3 Pododermatitis MP2 1 Pneumonie MP4 2 Klinische Masitis MP5 1 Klinische Mastitis MP7 Klinische Mastitis MP8 1 Zitzenverletzung MP7 1 Sectio caesaria MP7 1 Ret. secundinarum MP7 3 1 1 3 4.3 Selektion der Milchproben nach dem zytobakteriologischen Untersuchungsbefund Bei der Selektion der Milchproben nach dem zytologischen und bakteriologischen Untersuchungsbefund nach der ersten Milchprobenentnahme zeigten alle Kühe auf mindestens einem Euterviertel mehr als 100.000 Zellen/ml Milch, und gleichzeitig wurde mindestens ein euterpathogener Erreger nachgewiesen. Alle Euterviertel, die zum Tag der Milchprobenentnahme 1 der Therapiegruppe zugeordnet waren, wurden nach der Milchprobenentnahme 3 auf allen zytologisch und / oder bakteriologisch auffälligen Vierteln zweimal intrazisternal im Abstand von 24 Stunden mit 1 Injektor Peracef ® behandelt; die zytobakteriologisch für gesund befundenen Viertel blieben unbehandelt. 59 Die Einteilung der Milchbefunde wurde nach folgendem Schema vorgenommen: BU positiv und ZZ > 100.000/ml Milch: subklinische Mastitis BU positiv und ZZ < 100.000/ml Milch: latente Infektion BU negativ und ZZ > 100.000/ml Milch: unspezifische Mastitis BU negativ und ZZ < 100.000/ml Milch: eutergesund. Die Tiere der Kontrollgruppe wurden ebenfalls zu allen Zeitpunkten beprobt. Eine Endlaktationstherapie wurde in dieser Gruppe nicht durchgeführt. Die antibiotische Trockenstellung wurde parallel zur Therapiegruppe vorgenommen. Die Ergebnisse der Milchprobenentnahmen 1 - 3 ermöglichten damit eine Aussage über eine mögliche Selbstheilungsrate der inapparenten Infektionen bis zum Tag des Trockenstellens. Zu diesem Zweck wurde ein ähnliches Bewertungsschema wie bei der Therapiegruppe herangezogen. Dazu wurde anhand der Untersuchungsbefunde der Milchproben 1 - 3 wie folgt eingestuft: BU ≥ 1 mal positiv und ZZ ≥ 2 mal ≥ 100.000: subklinische Mastitis BU unspezifische Mastitis 3 mal negativ und ZZ ≥ 2 mal ≥ 100.000: BU ≥ 1 mal positiv und ZZ ≥ 2 mal < 100.000: latente Infektion BU eutergesund. 2 mal negativ und ZZ 2 mal < 100.000: 4.3.1 Verteilung der Zellzahlgruppen 4.3.1.1 MP1 (31 Tage vor Laktationsende) Die nachfolgenden Auswertungen beziehen sich auf die Kühe, die einschließlich bis zum Tag MP5 die Einschlusskriterien erfüllten. Von den 304 Eutervierteln der 76 Kühe hatten zum Zeitpunkt MP1 85 Viertel eine Zellzahl unter 100.000/ml Milch und 219 Viertel eine Zellzahl ≥ 100.000/ml Milch. Die in Abb. 1 dargestellte Verteilung war, bezogen auf die einzelnen Euterviertel, nicht signifikant verschieden (chi² = 2,270; df: 3, p > 0,05). 60 70 60 Anzahl Kühe 50 40 ZZ < 100.000 ZZ ≥ 100.000 30 20 10 0 vl hl hr vr Abb. 1: Verteilung der Zellzahlgruppen zum Zeitpunkt MP1, viertelbezogen Bezogen auf die Laktationsnummer konnten deutliche Unterschiede bei der Verteilung der Zellzahlgruppen ermittelt werden, was in Abb. 2 sichtbar wird. So verzeichneten die Kühe in der 1. Laktation den größten Anteil an Vierteln mit einer Zellzahl < 100.000/ml Milch. Von den 85 Eutervierteln mit < 100.000 Zellen/ml Milch waren 48 Viertel (56,47 %) von Kühen der 1. Laktation, 19 (22,35 %) der 2. Laktation und 18 (21,18 %) der 3. Laktation. Die Verteilung war verschieden, wobei die Euterviertel der Kühe der ersten Laktation signifikant (chi² = 22,598; df: 2, p = 0,001) häufiger eine somatische Zellzahl unter 100.000/ml Milch hatten als Tiere in der 2. oder 3. Laktation. Demgegenüber unterschieden sich die Zellzahlen von Kühen der 2. Laktation nicht signifikant von denen der 3. Laktation. Anzahl Euterviertel ZZ < 100.000 61 60 50 40 30 20 10 0 1 2 3 Laktationsnummer Abb. 2: Unterschiede in der Zellzahl in Abhängigkeit zur Parität 4.3.1.2 MP2 (24 Tage vor Laktationsende) Zu diesem Zeitpunkt lag nur noch bei 65 Eutervierteln die Zellzahl unter 100.000, und insgesamt 239 Viertel hatten eine Zellzahl ≥ 100.000/ml Milch. Die in Abb. 3 dargestellte Verteilung auf die einzelnen Viertel war analog zu MP1ebenfalls nicht signifikant verschieden (chi² = 0.685; df: 3, p > 0,05). 70 60 Anzahl Kühe 50 40 ZZ < 100.000 ZZ ≥ 100.000 30 20 10 0 vl hl hr vr Abb. 3: Verteilung der Zellzahlgruppen zum Zeitpunkt MP2, viertelbezogen 62 Bezogen auf die Laktationsnummern konnte parallel zur ersten Milchprobenentnahme nachgewiesen werden, dass die Kühe in der ersten Laktation einen prozentual höheren Anteil an Eutervierteln mit weniger als 100.000 Zellen/ml Milch hatten als in der 2. und 3. Laktation. Von den 65 Eutervierteln mit weniger als 100.000 Zellen/ml Milch fielen 34 (52,31 %) auf die Kühe in der ersten Laktation, 16 (24,62 %) in der 2. und 15 (23,07 %) in der 3. Laktation (siehe Abb. 4). Auch hier hatten signifikant (chi² = 10,169; df: 2; p = 0,006) häufiger die Euterviertel der Kühe aus der 1. Laktation eine Zellzahl unter 100.000/ml Milch, während diese sich Anzahl Euterviertel ZZ < 100.000 zwischen der 2. und 3. Laktation nicht signifikant voneinander unterschieden. 40 35 30 25 20 15 10 5 0 1 2 3 Laktationsnummer Abb. 4: Unterschiede in der Zellzahl in Abhängigkeit zur Parität 4.3.1.3 MP3 (23 Tage vor Laktationsende) Es hatten 71 Viertel eine Zellzahl unter 100.000 und 233 Viertel eine Zellzahl ≥ 100.000/ml Milch. Abermals bestätigte sich, dass es keine Viertel gab, die signifikant häufiger von einer Zellzahlerhöhung betroffen waren als andere (chi² = 1,966; df: 3; p > 0,05), wie Abb. 5 zeigt. 63 70 Anzahl Kühe 60 50 40 ZZ < 100.000 ZZ ≥ 100.000 30 20 10 0 vl hl hr vr Abb. 5: Verteilung der Zellzahlgruppen zum Zeitpunkt MP3, viertelbezogen Der Vergleich der einzelnen Laktationen miteinander im Hinblick auf die Zellzahlgruppen brachte ein analoges Ergebnis zu MP1 und 2. Von 71 Vierteln der Gruppe < 100.000 Zellen/ml Milch kamen auf die Kühe in der ersten Laktation 36 Euterviertel (50,70 %), 16 (22,54 %) in der 2. und 19 (26,76 %) in der 3. Laktation. Damit hatten die Euterviertel der Kühe in der ersten Laktation signifikant (chi² = 9,71; df: 2; p = 0,008) häufiger Zellzahlen unter 100.000/ml Milch als die der 2. und 3. Laktation, wie Abb. 6 zeigt. 64 Anzahl Euterviertel ZZ < 100.000 40 35 30 25 20 15 10 5 0 1 2 3 Laktationsnummer Abb. 6: Unterschiede in der Zellzahl in Abhängigkeit zur Parität 4.3.2 Verteilung der Erreger 4.3.2.1 MP1 (31 Tage vor dem Laktationsende) Die Verteilung der nachgewiesenen Erreger am Tag MP1 gestaltete sich folgendermaßen: 142 Viertel BU-negativ (= 46,71 % von 304 Vierteln) 162 Viertel BU-positiv (= 53,29 % von 304 Vierteln), davon 68 Viertel KNS (= 22,37 % von 304 Vierteln bzw. 41,98 % von 162 Vierteln) 58 Viertel S. aureus (= 19,08 % von 304 Vierteln bzw. 35,80 % von 162 Vierteln) 21 Viertel Sc. uberis (= 6,91 % von 304 Vierteln bzw. 12,96 % von 162 Vierteln) 9 Viertel Sonstige Äskulinpositive Streptokokken (= 2,97 % von 304 Vierteln bzw. 5,56 % von 162 Vierteln 3 Viertel Sc. agalactiae (= 0,99 % von 304 Vierteln bzw. 1,85 % von 162 Vierteln) 2 Viertel Sc. dysgalactiae (= 0,66 % von 304 Vierteln bzw. 1,23 % von 162 Vierteln) 1 Viertel coliforme Keime einschließlich E. coli (= 0,33 % von 304 Vierteln bzw. 0,62 % von 162 Vierteln) 65 S. aureus KNS Sc. agalactiae Sc. uberis Sonst. Äskul. pos. Scc. Sc. dysgalactiae Coliforme einschl. E. coli Abb. 7: Verteilung der Erreger zum Zeitpunkt MP1 (exklusive BU-negative Befunde) Hinsichtlich der Verteilung der Euterviertel mit bakteriologischem Befund auf die Vorder- bzw. Hinterviertel konnten keine signifikanten Unterschiede festgestellt werden. Dies betraf sowohl alle Erreger als Gruppe zusammengefasst wie auch jede Erregerart einzeln betrachtet. Bezogen auf die einzelnen Laktationen konnte analog zur Zellzahlgruppe den Kühen der 1. Laktation signifikant (chi² = 22,566; df: 14; p = 0,048) häufiger der Befund bakteriologisch negative Viertelgemelksprobe bescheinigt werden als den Kühen der 2. und 3. Laktation. 4.3.2.2 MP2 (24 Tage vor dem Laktationsende) Die bakteriologische Milchuntersuchung am Tag MP2 brachte folgendes Ergebnis: 152 Viertel BU-negativ (= 50 % von 304 Vierteln) 152 Viertel BU-positiv (= 50 % von 304 Vierteln), davon 56 Viertel S. aureus (= 18,42 % von 304 Vierteln bzw. 36,84 % von 152 Vierteln) 41 Viertel KNS (= 13,49 % von 304 Vierteln bzw. 26,98 % von 152 Vierteln) 23 Viertel Sc. uberis (= 7,57 % von 304 Vierteln bzw. 15,14 % von 152 Vierteln) 14 Viertel Sonstige Äskulinpositive Streptokokken (= 4,60 % von 304 Vierteln bzw. 9,20 % von 152 Vierteln) 66 10 Viertel coliforme Keime einschließlich E. coli (= 3,29 % von 304 Vierteln bzw. 6,58 % von 152 Vierteln) 5 Viertel Sc. agalactiae (= 1,64 % von 304 Vierteln bzw. 3,28 % von 152 Vierteln) 3 Viertel Sc. dysgalactiae (= 0,99 % von 304 Viertel bzw. 1,98 % von 152 Vierteln) S. aureus KNS Sc. agalactiae Sc. uberis Sonst. Äskul. pos. Scc. Sc. dysgalactiae Coliforme einschl. E. coli Abb. 8: Verteilung der Erreger zum Zeitpunkt MP2 (exklusive BU-negative Befunde) Die Verteilung der ermittelten Erreger auf die einzelnen Viertel brachte keine signifikanten Unterschiede. Laktationsnummerbezogen waren auch hier die Euterviertel der Kühe aus der 1. Laktation signifikant (chi² = 26,591; df: 14; p < 0,022) häufiger bakteriologisch negativ als die der 2. und 3. Laktation. 4.3.2.3 MP3 (23 Tage vor dem Laktationsende) Zum Zeitpunkt MP3 gingen 303 Euterviertel in die Auswertung ein, da in einem Viertel einer Kuh zwei Erreger gleichzeitig nachgewiesen wurden. Da eine Mischinfektion nur dieses eine Mal auftrat, wurde sie von der Wertung ausgeschlossen. Die bakteriologischen Untersuchungen der Viertelgemelksproben brachten folgendes Ergebnis: 165 Viertel BU-negativ (= 54,46 % von 303 Vierteln) 138 Viertel BU-positiv (=45,54 % von 303 Vierteln), davon 54 Viertel S. aureus (= 17,89 % von 304 Vierteln bzw. 39,13 % von 138 Vierteln) 67 44 Viertel KNS (= 14,52 % von 303 Vierteln bzw. 31,88 % von 138 Vierteln) 22 Viertel Sc. uberis (= 7,26 % von 303 Vierteln bzw. 15,94 % von 138 Vierteln) 8 Viertel Sonstige Äskulinpositive Streptokokken (= 2,64 % von 303 Vierteln bzw. 5,80 % von 138 Vierteln) 4 Viertel Sc. agalactiae (= 1,32 % von 303 Vierteln bzw. 2,90 % von 138 Vierteln) 4 Viertel coliforme Keime einschließlich E. coli (= 1,32 % von 303 Viertel bzw. 2,90 % von 138 Vierteln) 2 Viertel Sc. dysgalactiae (= 0,66 % von 303 Vierteln bzw. 1,45 % von 138 Vierteln) S. aureus KNS Sc. agalactiae Sc. uberis Sonst. Äskul. pos. Scc. Sc. dysgalactiae Coliforme einschl. E. coli Abb. 9: Verteilung der Erreger zum Zeitpunkt MP3 (exklusive BU-negative Befunde) Die Verteilung der Erregerbefunde auf die einzelnen Euterviertel brachte keine signifikanten Unterschiede. Die Kühe der 1. Laktation waren signifikant (chi² = 30,622; df: 14; p = 0.006) häufiger bakteriologisch negativ als Kühe, die sich bereits in der 2. oder 3. Laktation befanden. 4.3.3 Verteilung der Erreger bezogen auf die Zellzahlgruppen 4.3.3.1 Zeitpunkt MP1 (31 Tage vor Laktationsende) Zum Zeitpunkt MP1 waren von 85 Eutervierteln mit einer ZZ unter 100.000/ml Milch 67 Viertel BU-negativ; bei den 18 positiven Vierteln wurden 6 x S. aureus, 11 x KNS und 1 x E. coli nachgewiesen. Folglich handelt es sich um eine latente Infektion. Von 219 Eutervierteln mit einer ZZ ≥ 100.000/ml Milch waren 75 Viertel BU-negativ; 68 demnach lagen hierbei unspezifische Mastitiden vor. Die 144 positiven Viertelbefunde mit subklinischer Mastitis setzten sich wie folgt zusammen: 52 x S. aureus, 57 x KNS, 3 x Sc. agalactiae, 21 x Sc. uberis, 9 x Sonstige Äskulinpositive Scc. und 2 x Sc. dys- 60 50 40 30 20 10 0 po s. Sc Sc .d c. ys ga C la ol ct ifo ia e rm e/ E. co li be ris e ia .u ku l. Sc ga la ct KN So ns t. Äs Sc .a re au S. S ZZ < 100.000 ZZ ≥ 100.000 us Anzahl galactiae. Erreger Abb. 10: Verteilung der Erreger bezogen auf die Zellzahlgruppen zum Zeitpunkt MP1 Das Ergebnis zeigt, dass ein positiver bakteriologischer Untersuchungsbefund signifikant (chi² = 55,834; df: 7; p = 0.0001) häufiger mit einer Erhöhung der somatischen Zellzahl verbunden ist, als bakteriologisch negative Milchproben. 4.3.3.2 Zeitpunkt MP2 (24 Tage vor Laktationsende) Von den 65 Eutervierteln mit einer ZZ < 100.000/ml Milch waren 55 Viertel BUnegativ; die 10 positiv getesteten Euterviertel verteilten sich folgendermaßen: 6 x S. aureus, 3 x KNS und 1 x Sonstige Äskulinpositive Scc. Die 239 Viertel mit ≥ 100.000 Zellen/ml Milch setzten sich aus 97 bakteriologisch negativen und 142 posititven Untersuchungsbefunden zusammen. Letztere gliederten sich in 50 x S. aureus, 38 x KNS, 5 x Sc. agalactiae, 23 x Sc. uberis, 13 x Sonstige Äskulinpositive Scc., 3 x Sc. dysgalactiae und 10 x coliforme Keime einschließlich E. coli auf. 60 50 40 30 20 10 0 . ga C la ol ct ifo ia e rm e/ E. co li cc Sc .d l. ku So ns t. Äs ys po s .u .S be ris e ia Sc .a ga la ct KN S ZZ < 100.000 ZZ ≥ 100.000 Sc S. au re us Anzahl 69 Erreger Abb. 11: Verteilung der Erreger bezogen auf die Zellzahlgruppen zum Zeitpunkt MP2 Auch hier war der Erregernachweis signifikant (chi² = 41,268; df: 7; p = 0,0001) häufiger mit einer erhöhten ZZ verbunden. 4.3.3.3 Zeitpunkt MP3 (23 Tage vor Laktationsende) Diese, einen Tag nach MP2 entnommenen Viertelanfangsgemelksproben unterteilten sich in 71 mit einer ZZ unter 100.000/ml Milch und 232 Viertel mit einer Zellzahl ≥ 100.000/ml Milch. Von den genannten 71 Vierteln waren 61 BU-negativ; die bakteriologisch positiven Euterviertel bestanden aus 6 x S. aureus, 3 x KNS und 1 x Sc. uberis. Von den 232 zytologisch auffälligen Vierteln waren 104 BU-negativ; in 48 Viertelgemelksproben wurde S. aureus nachgewiesen, weiterhin 41 x KNS, 4 x Sc. agalactiae, 21 x Sc. uberis, 8 x Sonstige Äskulinpositive Scc., 2 x Sc. dysgalactiae und 4 x coliforme Keime einschließlich E. coli. 60 50 40 30 20 10 0 . ga C la ol ct ifo ia e rm e/ E. co li cc Sc .d l. ku So ns t. Äs ys po s .u .S be ris e ia Sc .a ga la ct KN S ZZ < 100.000 ZZ ≥ 100.000 Sc S. au re us Anzahl 70 Erreger Abb. 12: Verteilung der Erreger bezogen auf die Zellzahlgruppen zum Zeitpunkt MP3 Der positive Erregernachweis war ebenfalls signifikant (chi² = 38,075; df:7; p = 0,0001) häufiger mit einem positiven zytologischen Befund gekoppelt. 4.3.4 Zeitpunkt MP4, Erregerverteilung (7 Tage vor Laktationsende, 15 Tage nach Ende der Therapie) 4.3.4.1 Erregerverteilung in der Therapiegruppe Von 156 entnommenen und untersuchten Viertelgemelksproben waren 101 Proben (64,74 %) BU-negativ. 17 x (10,90 %) wurde bei den bakteriologisch positiven Milchproben der Befund S. aureus, 23 x (14,74 %) KNS, 1 x (0,64 %) Sc. agalactiae, 8 x (5,13 %) Sc. uberis, 5 x (3,21 %) Sonstige Äskulinpositive Scc. und 1 x (0,64 %) coliforme Keime einschließlich E. coli ermittelt. 4.3.4.2 Erregerverteilung in der Kontrollgruppe Von den 148 untersuchten Viertelgemelksproben waren 66 (44,59 %) bakteriologisch negativ; die 82 (55,41 %) bakteriologisch positiven Befunde resultierten aus den Nachweisen von 33 x (22.30 %) S. aureus, 31 x (20,95 %) KNS, 4 x (2,70 %) Sc. agalactiae, 8 x (5,41 %) Sc. uberis, 4 x (2,70 %) Sonstige Äskulinpositive Scc. und 2 x (1,35 %) Sc. dysgalactiae. 71 S. aureus KNS Sc. agalactiae Sc. uberis Sonst. Äskul. pos. Scc. Coliforme einschl. E. coli Abb. 13: Verteilung der Erreger zum Zeitpunkt MP4 in der Therapiegruppe (exklusive BU-negative Befunde) S. aureus KNS Sc. agalactiae Sc. uberis Sonst. Äskul. pos. Scc. Sc. dysgalactiae Abb. 14: Verteilung der Erreger zum Zeitpunkt MP4 in der Kontrollgruppe (exklusive BU-negative Befunde) 72 4.3.5 Zeitpunkt MP4, Zellzahlgruppenverteilung 4.3.5.1 Zellzahlgruppenverteilung in der Therapiegruppe Der Zellzahlgruppe < 100.000 Zellen/ml Milch konnten 54 Viertel zugeordnet werden, der Zellzahlgruppe ≥ 100.000 Zellen/ml Milch insgesamt 102 Euterviertel. 4.3.5.2 Zellzahlgruppenverteilung in der Kontrollgruppe Nach der Bestimmung des somatischen Zellgehaltes ließen sich 28 Viertel der Zellzahlgruppe < 100.000 Zellen/ml Milch und 120 Viertel der Gruppe ≥ 100.000 Zellen/ml Milch zuordnen. 4.3.6 Zeitpunkt MP5, Erregerverteilung (Tag des Trockenstellens, 22 Tage nach Therapieende) 4.3.6.1 Erregerverteilung in der Therapiegruppe Die ermittelten Befunde wichen nur geringfügig von den eine Woche zuvor ermittelten Ergebnissen (MP4) ab. Konkret waren von den 156 untersuchten Eutervierteln 103 (66,02 %) BU-negativ; die 53 (33,98 %) bakteriologisch positiv getesteten Viertel bestanden aus 15 x (9,62 %), S. aureus, 25 x (16,03 %) KNS, 2 x (1,28 %) Sc. agalactiae, 7 x (4,49 %) Sc. uberis und 4 x (2,56 %) Sonstige Äskulinpositive Scc. 4.3.6.2 Erregerverteilung in der Kontrollgruppe Diese, eine Woche nach MP4 entnommnenen Milchproben bestätigten die zuvor ermittelten Befunde. So waren 73 Viertelgemelksproben (49,66 %) BU-negativ und 74 (50,34 %) BU-positiv. Letztere hatten 21 x (14,29) den Befund S. aureus, 24 x (16,33 %) KNS, 6 x (4,08 %) Sc. agalactiae, 10 x (6,80 %) Sc. uberis, 12 x (8,16 %) Sonstige Äskulinpositive Scc. und 1 x (0,68 %) colif. Keime oder E. coli. 73 S. aureus KNS Sc. agalactiae Sc. uberis Sonst. Äskul. pos. Scc. Abb. 15: Verteilung der Erreger zum Zeitpunkt MP5 in der Therapiegruppe (exklusive BU-negative Befunde) S. aureus KNS Sc. agalactiae Sc. uberis Sonst. Äskul. pos. Scc. Coliforme einschl. E. coli Abb. 16: Verteilung der Erreger zum Zeitpunkt MP5 in der Kontrollgruppe (exklusive BU-negative Befunde) 74 4.3.7 Zeitpunkt MP5, Zellzahlgruppenverteilung 4.3.7.1 Zellzahlgruppenverteilung in der Therapiegruppe Bei der Einteilung in Zellzahlgruppen fielen 49 Viertel auf die Gruppe < 100.000 Zellen/ml Milch und 107 auf die Gruppe ≥ 100.000 Zellen/ml Milch. 4.3.7.2 Zellzahlgruppenverteilung in der Kontrollgruppe Nur neun Euterviertel hatten eine ZZ < 100.000/ml Milch, 139 wiesen ≥ 100.000 Zellen/ml Milch aus. 4.4 Heilungserfolg 4.4.1 Heilungserfolg der Endlaktationstherapie Subklinisch infizierte Viertel Von den 68 vor der lokalen Therapie mit Peracef® subklinisch infizierten Eutervierteln waren zu den Zeitpunkten MP4 und 5 insgesamt 20 Viertel geheilt (29,41 %), 30 nicht geheilt (44,12 %) und 18 neu infiziert (26,47 %). Unspezifisch infizierte Viertel Von den 36 unspezifisch infizerten Eutervierteln vor der Behandlung waren 15 und 22 Tage nach dem Therapieende 10 Viertel geheilt (27,78 %), 5 waren nicht geheilt (13,89 %) und 21 Viertel waren neu infiziert (58,33 %). Latent infizierte Viertel Vor der Therapie waren von den 156 Vierteln 15 latent infizert. Von diesen konnten durch die Endlaktationstherapie neun geheilt werden (60 %), ein Viertel wurde nicht geheilt (6,67 %), fünf hatten sich neu infiziert (33,33 %). Für die zum Zeitpunkt MP1 37 eutergesunden Viertel konnte die Aussage getroffen werden, dass nur 14 (37,84 %) gesund blieben und 23 (62,16 %) eine Sekretionsstörung aufwiesen. 75 4.4.2 Selbstheilungsrate in der Kontrollgruppe Subklinische Mastitiden Zum Zeitpunkt der Überprüfung des Behandlungserfolges in der Therapiegruppe hatten von den 97 subklinisch infizierten Vierteln in der unbehandelten Kontrollgruppe 17 (17,50 %) eine Selbstheilung erfahren, 60 (61,86 %) waren nicht geheilt und 20 (20,62 %) hatten sich neu infizert. Unspezifische Mastitiden Von den 25 Eutervierteln mit einer unspezifischen Mastitis hatten zwei (8 %) eine Selbstheilung erfahren und 23 (92 %) hatten sich neu infiziert, d. h. waren subklinisch oder latent infiziert. Latente Infektionen Bei den sieben latent infizierten Vierteln betraf die Selbstheilungsrate zwei Viertel (28,57 %), drei Viertel waren nicht geheilt (42,86 %) und zwei Viertel (28,57 %) hatten sich neu infizert. Eutergesund geblieben sind in dieser Gruppe drei (15,79 %) von 19 Vierteln und 16 (84,21 %) hatten sich infiziert. 4.4.3 Vergleich beider Therapiegruppen bezüglich der Heilungsraten Der Behandlungserfolg in der Therapiegruppe betrug bei den subklinischen Mastitiden 29,41 %, die erkrankten Euterviertel waren schwach signifikant (chi² = 5,419; df: 2; p = 0,047) häufiger durch die lokale Therapie geheilt als in der unbehandelt gebliebenen Kontrollgruppe. Ein ähnliches Ergebnis wurde bei allen Vierteln mit unspezifischer Mastitis erreicht. Signifikant (chi² = 8,724; df: 2; p = 0,013) häufiger wurden Euterviertel mit unspezifischer Mastitis durch die lokale Endlaktationsbehandlung geheilt als unbehandelte Viertel. Für die latenten Infektionen wurden zwar nennenswerte Ergebnisse erzielt, die aber für statistische Berechnungen in der Gesamtsumme nicht umfangreich genug waren. So wurden von den 15 latent infizierten Vierteln neun Viertel durch die antibiotische Behandlung geheilt; in der Kontrollgruppe waren von 7 infizierten Vierteln lediglich zwei geheilt. 76 4.5 Erregerverteilung und Zellzahlgruppenverteilung nach dem Abkalben 4.5.1 Erregerverteilung zum Zeitpunkt MP6 (Tag der Geburt) Zum Tag der Geburt waren von den 39 trockengestellten Kühen der Therapiegruppe 110 (70,51 %) der 156 Euterviertel bakteriologisch negativ. In den 46 (29,49 %) bakteriologisch positiven Viertelbefunden wurden 10 x (6,41 %) S. aureus, 16 x (10,26 %) KNS, 9 x (5,77 %) Sc. uberis, 1 x (0,64 %) Sc. dysgalactiae und 10 x (6,41 %) Coliforme einschließlich E. coli nachgewiesen. In der Kontrollgruppe waren von 147 Vierteln (1 Viertel konnte wegen einer Strichverletzung nicht beprobt werden) der 37 trockengestellten Kühe zum Zeitpunkt der Geburt 103 (70,08 %) BU-negativ. In den 43 (29,92 %) bakteriologisch positiven Viertelgemelksproben wurden 2 x (1,36 %) S. aureus, 14 x (9,52 %) KNS, 11 x (7,48 %) Sc. uberis, 6 x (4,08 %) Sonstige Äskulinpositive Scc., 7 x (4,76 %) Coliforme einschließlich E. coli, 1 x (0,68 %) Sonstige Keime (A. pyogenes) und 3 x (2,04 %) Mischinfektionen gefunden. S. aureus KNS Sc. uberis Sc. dysgalactiae Coliforme einschl. E. coli Abb. 17: Verteilung der Erreger zum Zeitpunkt MP6 (Tag der Geburt) in der Therapiegruppe (exklusive BU-negative Befunde) 77 S. aureus KNS Sc. uberis Sonst. Äskul. pos. Scc. Coliforme einschl. E. coli A. pyogenes Mischinfektionen Abb. 18: Verteilung der Erreger zum Zeitpunkt MP6 (Tag der Geburt) in der Kontrollgruppe (exklusive BU-negative Befunde) 4.5.2 Erregerverteilung zum Zeitpunkt MP7 (7 Tage p. p.) Zu diesem Zeitpunkt (1 Woche p. p.) befanden sich in der Therapiegruppe noch 35 Kühe. Von deren 140 Eutervierteln waren 119 (85,00 %) BU-negativ; 13 (9,29 %) Viertel waren mit KNS infiziert, sieben (5,00 %) mit Sc. uberis und 1 Viertel (0,71 %) mit Sonstigen Äskulinpositiven Scc. In der Kontrollgruppe waren noch 31 Kühe. Deren 124 beprobte und untersuchte Viertelgemelksproben brachten 100 x (80,64 %) den Befund BU-negativ; 9 x (7,26 %) S. aureus, 10 x (8,06 %) KNS, 1 x (0,81 %) Sc. uberis, 1 x (0,81 %) Sonstige Äskulinpositive Scc. und 3 x (2,42 %) Coliforme einschließlich E. coli. 78 KNS Sc. uberis Sonst. Äskul. pos. Scc. Abb. 19: Verteilung der Erreger zum Zeitpunkt MP7 in der Therapiegruppe (exklusive BU-negative Befunde) S. aureus KNS Sc. uberis Sonst. Äskul. pos. Scc. Coliforme einschl. E. coli Abb. 20: Verteilung der Erreger zum Zeitpunkt MP7 in der Kontrollgruppe (exklusive BU-negative Befunde) 79 4.5.3 Zellzahlgruppenverteilung zum Zeitpunkt MP7 (7 Tage p. p.) Von den 140 Eutervierteln der Kühe in der Therapiegruppe hatten 100 Viertel eine ZZ < 100.000/ml Milch, 40 Euterviertel hatten eine ZZ ≥ 100.000/ml Milch. Von den 124 Vierteln der Kühe in der Kontrollgruppe kamen 122 Viertel in die Auswertung. Bei zwei Milchproben war aufgrund der Sekretveränderung (klinische Mastitiden) keine Zellzahlbestimmung möglich. 93 Viertel konnten der Gruppe ZZ < 100.000/ml Milch zugeordnet werden, 29 Viertel hatten eine ZZ ≥ 100.000/ml Milch. 4.5.4 Erregerverteilung zum Zeitpunkt MP8 (28 Tage p. p.) In der Therapiegruppe befanden sich zum Abschluss der Studie 35 Kühe. Vier Wochen nach dem Abkalben waren 106 (75,71 %) Euterviertel bakteriologisch negativ, aus 11 (7,86 %) Vierteln wurde S. aureus isoliert, aus 14 (10,00 %) Vierteln KNS, aus vier (2,86 %) Vierteln Sc. uberis, aus drei (2,14 %) Vierteln Sonstige Äskulinpositive Scc., aus zwei (1,43 %) Vierteln Coliforme einschließlich E. coli. In der Kontrollgruppe waren zu diesem Zeitpunkt noch 30 Kühe, deren Viertelgemelksproben 85 x (71,43 %) den Befund BU-negativ, 12 x (10,08 %) S. aureus, 18 x (15,13 %) KNS, 3 x (2,52 %) Sc. uberis und 1 x (0,84 %) Coliforme einschließlich E.coli ergaben. Eine Viertelgemelksprobe war auf dem Weg zum Labor ausgelaufen. S. aureus KNS Sc. uberis Sonst. Äskul. pos. Scc. Coliforme einschl. E. coli Abb. 21: Verteilung der Erreger zum Zeitpunkt MP8 in der Therapiegruppe (exklusive BU-negative Befunde) 80 S. aureus KNS Sc. uberis Coliforme einschl. E. coli Abb. 22: Verteilung der Erreger zum Zeitpunkt MP8 in der Kontrollgruppe (exklusive BU-negative Befunde) 4.5.5 Zellzahlgruppenverteilung zum Zeitpunkt MP8 Zum Zeitpunkt MP8 hatten von den 140 Eutervierteln der Kühe in der Therapiegruppe 106 Euterviertel < 100.000 Zellen/ml Milch; 34 Viertel wurden der Gruppe ZZ ≥ 100.000/ml Milch zugeordnet. In der Kontrollgruppe waren zu dieser letzten Milchprobenentnahme noch 30 Kühe verblieben. Von den 120 Proben konnte bei vier Milchproben die Zellzahlbestimmung nicht vorgenommen werden. Eine Probe war ausgelaufen. So gingen 115 Zellzahlbefunde in die Auswertung, von denen 100 zytologisch unauffällig, d. h. < 100.000 Zellen/ml Milch und 15 zytologisch positiv waren, d. h. ≥ 100.000 Zellen/ml Milch aufwiesen. 4.6. Erläuterungen zu den aufgetretenen klinischen Mastitiden Therapiegruppe Zum Zeitpunkt der Geburt (MP6) waren 2 Kühe an einer klinischen Mastitis erkrankt. Bei einer Kuh handelte es sich um eine Neuinfektion mit Erregerwechsel (zum TS Sc. agalactiae − zur Geburt Sc. dysgalactiae). Eine weitere Kuh hatte sich mit S. aureus auf einem zum TS eutergesund gewesenen Viertel infiziert. 81 Vier Tage p. p. war ebenfalls eine Kuh durch Neuinfektion mit Erregerwechsel an klinischer Mastitis erkrankt (zum TS S. aureus und KNS − 4 Tage p. p. Sc. uberis). Diese Tiere efüllten nicht mehr die Einschlusskriterien für den Versuch, wurden aus der Studie ausgeschlossen und einer antibiotischen Behandlung zugeführt. Kontrollgruppe Eine Kuh wurde noch vor dem eigentlichen TS-Termin aus dem Versuch ausgeschlossen, da sich aus der subklinischen Mastitis eine klinische Form entwickelt hatte. Eine Wertung kann in diesem Falle nicht vorgenommen werden, da es ein unbehandeltes Tier aus der Kontrollgruppe war. Ein weiteres Tier war zum Zeitpunkt der Geburt auf einem zuvor eutergesunden Viertel mit Arcanobacterium pyogenes infiziert; es handelte sich also um eine Neuinfektion. Eine Woche p. p. hatte sich eine dritte Kuh mit E. coli infiziert (zum TS waren KNS nachgewiesen); hier handelte es sich um eine Neuinfektion mit Erregerwechsel. Die beiden zuletzt genannten Tiere wurden der Schlachtung zugeführt. 4.7. Heilungserfolg der Trockenstelltherapie 4.7.1 Heilungserfolg der Trockenstelltherapie in der Therapiegruppe Die Einschätzung des Heilungserfolges wurde nach sehr strengen Kriterien vorgenommen. So galt ein Euterviertel nur dann als geheilt bzw. gesund geblieben, wenn die Untersuchungen der Viertelanfangsgemelksproben zu den Zeitpunkten MP6, 7 und 8 bakteriologisch negativ ausfielen und die Zellzahl zu den Zeitpunkten MP7 und 8 < 100.000/ml Milch war. Entsprechend dieser Vorgabe waren 60 % der vor dem Trockenstellen subklinisch infizierten Viertel geheilt; von den Vierteln mit unspezifischer Mastitis wurden 51,1 % der Viertel geheilt und von den latent infizierten Vierteln waren es 55,6 %. 65,4 % der beim Trockenstellen eutergesund gewesenen Viertel sind eutergesund geblieben, 34.6 % hatten sich neu infiziert bzw. wiesen eine Sekretionsstörung auf. 4.7.2 Heilungserfolg der Trockenstelltherapie in der Kontrollgruppe Hier war der Heilungserfolg ähnlich dem in der Therapiegruppe. Von 82 subklinisch infizierten Eutervierteln zum Tag des Trockenstellens waren 44 Viertel (53,7 %) bis 4 Wochen nach dem Abkalben eutergesund. Von den 34 Eutervierteln mit unspezifischer Mastitis konnten 21 (61,8 %) geheilt werden, ein latent 82 infiziertes Viertel wurde ebenfalls geheilt. Von drei eutergesunden Vierteln waren zwei gesund geblieben und ein Viertel hatte sich neu infiziert. 4.7.3 Vergleich beider Therapieformen 70 60 Anteil % 50 subklinisch unspezifisch latent eutergesund 40 30 20 10 0 MP4/MP5(TS) MP6/MP7/MP8(p.p.) Abb. 23: Mastitissituation vor dem TS (MP4 / MP5) gegnüber 28 Tagen p. p. (MP6 / MP7 / MP8) in der Therapiegruppe, viertelbezogen 90 80 70 Anteil % 60 subklinisch unspezifisch latent eutergesund 50 40 30 20 10 0 MP4/MP5(TS) MP6/MP7/MP8(p.p.) Abb. 24: Mastitissituation vor dem TS (MP4 / MP5) gegnüber 28 Tagen p. p. (MP6 / MP7 / MP8) in der Kontrollgruppe, viertelbezogen 83 Die Heilungserfolge in beiden Therapiegruppen waren nicht signifikant verschieden, wie die Abbildungen 23 und 24 veranschaulichen. Der therapeutische und prophylaktische Effekt der TS-Therapie wird deutlich, damit die Verbesserung der Eutergesundheit, gleichzeitig, dass die Endlaktationstherapie in der Therapiegruppe weder eine deutlich bessere Ausgangssituation schafft noch die Trockenstelltherapie verbessert. 84 5 Diskussion 5.1 Ziel der Untersuchungen Anlass zu dieser Studie gab die für die Praxis empfohlene Durchführung einer Endlaktationstherapie bei Kühen mit subklinischen Mastitiden vor der eigentlichen antibiotischen Trockenstellung. Dazu wurden Kühe mit klinisch inapparenten Mastitiden nach zwei Therapieformen eingeteilt. Eine Therapiegruppe erhielt, 24 Tage vor dem errechneten Trockenstelltermin beginnend, eine zweimalige lokale Behandlung mit Peracef® im Abstand von 24 Stunden. Die Kontrollgruppe blieb unbehandelt. Beide Gruppen erhielten am Tage des Trockenstellens das antibiotische Langzeitpräparat Orbenin® Extra. Zur Beurteilung und zum Vergleich der Therapieerfolge miteinander wurden bakteriologische Befunde von Viertelanfangsgemelksproben vom Tag der Geburt und zytologische und bakteriologische Befunde von Viertelanfangsgemelken eine und vier Wochen p. p. ausgewertet. 5.2 Erläuterungen zur Wahl der Untersuchungsmethoden Die Vorauswahl der Kühe anhand der MLP-Daten der zurückliegenden 3 Monate erbrachte den Beweis, dass zumindest in diesem Milchviehbestand der erhöhte Zellzahlbefund mit einem positiven Erregernachweis korrelierte. So wurde die Endalktationsbehandlung auch gleich bezogen auf die zytobakteriologischen Untersuchungsbefunde der ersten Milchprobenentnahme vorgenommen, so dass von den 156 Eutervierteln der in der Therapiegruppe verbliebenen 39 Kühe insgesamt 119 (68 x subklinisch, 36 x unspezifisch, 15 x latent) als inapparent infiziert eingestufte Viertel der lokalen Therapie mit Peracef® zugeführt wurden. Die Situation in der Kontrollgruppe war mit 129 inapparent infizierten Vierteln (97 x subklinisch, 25 x unspezifisch, 7 x latent) von 148 untersuchten Eutervierteln vergleichbar. Die Probenentnahme- und Behandlungszeitpunkte wurden so festgesetzt, um zum Einen relativ nah vor dem Trockenstelltermin ein exaktes Bild vom tatsächlichen Erregervorkommen zu erhalten und zum Anderen einer Endlaktationstherapie den nötigen Zeitraum für eine mögliche erfolgreiche Ausheilung noch vor dem Trockenstellen geben zu können. 85 Insgesamt wurden über den Versuchszeitraum 2392 Viertelgemelksproben entnommen und untersucht. In Anlehnung an die Definition der subklinischen Mastitis der DVG (1994), wonach neben der erhöhten Zellzahl in zwei aus drei Untersuchungen (Probenintervall eine Woche) der Nachweis von Mastitiserregern gelingt, wurde die Mehrfachbeprobung durchgeführt. Danach zeigte jede der, aufgrund des erhöhten Zellgehaltes, untersuchten Kühe im Durchschnitt zwei subklinisch mastitiskranke Euterviertel, was in dieser Form auch von anderen Autoren beschrieben worden ist (PILCHER 1981, GÖTZ 1995, FRITON 1998). Der Mastitis-Schnelltest wurde vor jeder Milchprobenentnahme (außer am Tag der Geburt) durchgeführt, um bereits vor Ort einschätzen zu können, ob die Zellzahl erhöht ist. Weiteren Einfluss auf die Wertung hatte dieses Testergebnis nicht, da die exakte quantitative Bestimmung im Labor die Grundlage für alle nachfolgenden Einstufungen war. Der Grenzwert für die Auswertung der ermittelten Zellzahlbefunde auf Viertelgemelksebene wurde bei 100.000 Zellen/ml Milch festgelegt, was bezogen auf Literaturangaben als physiologischer Normalbereich angesehen wird (DOGGWEILER u. HESS 1983, HAMANN u. REICHMUTH 1990). Dazu wurden zwei Zellzahlgruppen gebildet: < 100.000 Zellen und ≥ 100.000 Zellen/ml Milch, die für die weiterführenden statistischen Berechnungen die Grundlage lieferten. Da die Euterviertel anatomisch und funktionell als unabhängige Einheiten angesehen werden können und in der Regel ein bis zwei Euterviertel einer Kuh von Mastitis betroffen sind, wird die Masitis als Euterviertelkrankheit betrachtet (LEON u. ANDERSSON 2002). Aus diesem Grunde wurden die statistischen Auswertungen ausschließlich auf Euterviertelebene vorgenommen. Von der Gesamtheit der Euterviertel, die vor der Endlaktationstherapie entweder den Kategorien subklinische Mastitis, unspezifische Mastitis oder latente Infektion zuzuordnen waren, wird der prozentuale Anteil, der bis zum Trockenstellen der Kategorie eutergesund zuzuordnen war, als zytobakteriologische Heilungsrate definiert. Dementsprechend wurde von der Gesamtheit der Euterviertel, die zum Trockenstellen einer der Kategorien subklinische Mastitis, unspezifische Mastitis oder latene Infektion zuzuordnen waren, derjenige Anteil als Heilungsrate definiert, der bis einschließlich vier Wochen nach dem Abkalben der Kategorie eutergesund zuzuordnen war. Die Neuinfektionsrate beschreibt von allen Eutervierteln, die vor den jeweiligen Behandlungen eutergesund waren, den prozentualen Anteil der Viertel, die zu oben 86 genannten Zeitpunkten der Kategorie subklinische Mastitis, unspezifische Mastitis oder latente Infektion zugeordnet werden mussten. 87 5.3 Ergebnisse 5.3.1 Einfluss der Laktationsnummer Die deutlichen laktationsbezogenen Unterschiede hinsichtlich der Zellzahlgruppierungen und Erregerbefunde konnten nur für die erste Laktation festgestellt werden. Zwischen Kühen der 2. und 3. Laktation bestanden keine signifikanten Unterschiede. 5.3.2 Verteilung der Erreger bezogen auf die Zellzahlgruppen Ein Erregernachweis korrelierte ganz überwiegend mit einer erhöhten Zellzahl. Nur S. aureus- und KNS-Vorkommen waren auch bei einer Zellzahl unter 100.000 Zellen/ml Milch nachweisbar (latente Infektionen). 5.3.3 Beurteilung der Endlaktationstherapie Vor der Endlaktationstherapie dominierten subklinische Mastitiden (43,6 %) gegenüber unspezifischen Mastitiden (23,1 %) und latent infizierten Eutervierteln (9,6 %). 23,7 % der Viertel waren als eutergesund zu bezeichnen. In der Kontrollgruppe fand sich eine ähnliche Ausgangssituation. Die subklinischen Mastitiden dominierten mit 65,5 % gegenüber 16,9 % unspezifischen Mastitiden und 4,7 % latent infizierten Vierteln. Als eutergesund waren 12,8 % der Euterviertel einzustufen. Der Vergleich der nach dem Zufallsprinzip entstandenen Gruppen ergab keine statistisch signifikanten Unterschiede, was ebenfalls für die Erregernachweise galt. Im Mittel wurden in 37,3 % der bakteriologisch positiven Milchproben S. aureus nachgewiesen. Es folgten KNS mit 33,6 %. Bei den Sreptokokken dominierten Sc. uberis mit 14,7 % und Äskulinpositive Streptokokken mit 6.9 %. Euterassoziierte Streptokokken traten nur vereinzelt auf (Sc. agalactiae 2,7 % und Sc. dysgalactiae 1,5 %). Enterobacteriaceae (3,4 %) wurden selten nachgewiesen. Die intrazisternalen Behandlungen vor dem Trockenstellen erzielten eine Heilungsrate bei den subklinisch infizierten Eutervierteln, die 29,4 % betrug. Im Vergleich dazu lag die „Selbstheilungsrate“ in der unbehandelten Kontrollgruppe bei 17,5 %. Bringt man die in der unbehandelten Kontrollgruppe bis zum Zeitpunkt des Trockenstellens aufgetretenen zytobakteriologischen Spontanheilungen zur therapierten Gruppe in Abzug, bleibt ein Therapieerfolg von nur 12 %. Dieser Wert ist unbefriedigend und lässt die Durchführung einer Therapie mit Antibiotika gegen Ende der Laktation als ausgenommen fraglich erscheinen. 88 Der Anteil latent infizierter Viertel nahm in beiden Gruppen ab, so dass auch hier von einem Einfluss der Laktationstherapie nicht gesprochen werden kann. Die Rate an unspezifischen Mastitiden stieg in beiden Gruppen, was ebenfalls dafür spricht, dass der Antibiotikaeinsatz eher keine Effekte hatte. Die schlechten Behandlungsergebnisse liegen sogar noch unter den in der Literatur angegebenen Heilungserfolgen während der Laktation. Für die Ausheilung von Staphylokokken-Mastitiden während der Laktation werden 40 - 60 % angegeben (NEUMEISTER 1971, SCHÄLLIBAUM et al. 1981, BERCHTOLD et al. 1983, FRITON 1998). Die für die Erregereliminierung notwendige Phagozytoseleistung der neutrophilen Granulozyten ist an das Vorhandensein von spezifischen Immunglobulinen und von aktivierten Komponenten des Komplementsystems gebunden. BERCHTOLD et al. (1983) gehen davon aus, dass die Ursache für das Therapieversagen wahrscheinlich in diesem Mechanismus zu suchen ist. Auch SOL et al. (1990) hatten bei dem Versuch, im Falle subklinischer S. aureusMastitiden mit einer unmittelbar vor der Trockenstellung vorgenommenen mehrtägigen Laktationsbehandlung das Ergebnis der antibiotischen Trockenstellung zu verbessern, nicht den erwarteten Erfolg. 5.3.4 Beurteilung des Trockenstellerfolges Der Heilungserfolg der Trockenstelltherapie lag deutlich über dem erreichten Heilungserfolg durch die Endlaktationstherapie. Ein statistisch signifikanter Unterschied zwischen beiden Therapiegruppen konnte nicht ermittelt werden. Die vor dem Trockenstellen durchgeführte Endlaktationsbehandlung blieb also im doppelten Sinne erfolglos. Zum Einen brachte sie keinen nennenswerten Heilungserfolg noch während der Spätphase der Laktation, zum Anderen verbesserte sie auch nicht den Heilungserfolg der anschließend durchgeführten Trockenstelltherapie. So galten in der Therapiegruppe 60 % (36 Viertel) der vor dem Trockenstellen subklinisch infizierten Viertel 4 Wochen nach dem Abkalben als geheilt, in der Kontrollgruppe waren es 53,7 % (44 Viertel). Von den unspezifischen Mastitiden galten in der Therapiegruppe 51,1 % (23 Viertel) und in der Kontrollgruppe 61,8 % (21 Viertel) als geheilt. Die Anzahl der latent infizierten Viertel war insgesamt so gering, dass in diesem Falle die prozentualen Angaben nicht überzubewerten sind. In der lokalen Therapiegruppe waren 5 Viertel geheilt (55,6 %) und in der Kontrollgruppe wurde 1 Viertel (100 %) geheilt. 89 Der Vergleich der Erregernachweise in den nicht geheilten bzw. neu infizierten Eutervierteln zwischen den beiden Therapiegruppen ergab ebenfalls keine statistisch signifikanten Unterschiede. Im Mittel der MP6 - 8 wurden in 44 % der erregerpositiven Milchproben KNS nachgewiesen, gefolgt von 21,7 % S. aureus. Bei den Streptokokken waren nur noch umweltassoziierte Vertreter nachzuweisen (Sc. uberis 17,3 % und Äskulinpositive Scc. 4,9 %). Enterobacteriaceae waren zu 10 % am positiven Erregernachweis beteiligt. Die euterassoziierten Streptokokken konnten fast vollständig eliminiert werden; lediglich 0,3 % Sc. dysgalactiae waren am Erregervorkommen beteiligt. Mögliche Selbsheilungsraten während der Trockenperiode, die von CRAVEN (1991) in Größenordnungen von 20 % bis 50 % beschrieben wurden, konnten an dieser Stelle nicht in die Auswertung einbezogen werden, da der Betrieb der Mitführung einer Negativkontrolle nicht zugestimmt hat. Zum Anderen liegt der Therapieerfolg durch den Einsatz des antibiotikumhaltigen Injektors am Tage des Trockenstellens in beiden Gruppen deutlich höher als die in der Literatur beschriebenen Selbstheilungsraten während der Laktationsruhe. 5.4 Schlussbetrachtung Die Bedeutung der Trockenperiode bei der Bekämpfung intramammärer Infektionen bei Milchkühen wurde schon vor über 50 Jahren beschrieben (NEAVE et al. 1950, PEARSON 1950, PEARSON 1951). Die Behandlung subklinischer Mastitiden mit Langzeitantibiotika zu Beginn der Trockenperiode hat sich zur Heilung vorhandener Infektionen zu diesem Zeitpunkt bewährt (EBERHART 1986, RAINARD et al. 1990, SOBIRAJ et al. 2000). Selbst bei nicht geheilten subklinisch erkrankten Eutervierteln wurde durch das medikamentelle Trockenstellen eine Milchleistungssteigerung in der folgenden Laktation ermittelt (MERCK u. JACOB 1979). Auch SMITH et al. (1968) berichten über geringere Milchproduktion in der anschließenden Laktation bei Infektionen, die in der Trockenstehphase stattfanden oder persistierten. BERRY et al. (1997) befürworten das antibiotische Trockenstellen aufgrund der nachgewiesenen höheren Milchleistung von behandelten Kühen im Vergleich zur Kontrollgruppe. Auch EBERHART (1986) beschreibt die intramammäre Gabe von antibiotisch wirksamen Langzeitpräparaten zum Ende der Laktation als effektivste und weit verbreitete Maßnahme, um klinisch inapparente Mastitiden zu bekämpfen. 90 Es sollten sämtliche Euterviertel einer Kuh zum Trockenstellen antibiotisch versorgt werden, da die selektive Behandlung subklinisch erkrankter Euterviertel mit einem signifikant erhöhten Neuinfektionsrisiko verbunden ist (MEIN u. BROWNING 1990). Diese Neuinfektionen werden hauptsächlich durch S. aureus und Sc. uberis hervorgerufen. Auch GEDEK (1979) gibt der Behandlung aller Euterviertel den Vorzug, da die gesunden Viertel unter infizierten Eutervierteln derselben Kuh durch Kreuzinfektion infektionsgefährdet sind. BARKEMA (1997) bestätigt die höhere Wahrscheinlichkeit der Infektion von Eutervierteln, wenn bereits ein Viertel der Kuh erkrankt ist. SMITH et al. (1985) empfehlen, alle Euterviertel aller Kühe antibiotisch trockenzustellen, um die prophylaktische Komponente der Trockenstelltherapie maximal auszuschöpfen. Subklinische Mastitiden sind von großer wirtschaftlicher Bedeutung. Die erhöhte Zahl somatischer Zellen und vorhandener Keime beeinflussen die Milchqualität und damit die Verarbeitungseigenschaften. Die Erkrankung kann in ein klinisches Stadium oder auch in ein chronisches Stadium mit irreparablen Veränderungen im Eutergewebe übergehen. Die Milchleistung betroffener Tiere sinkt, und zum Anderen stellen sie eine ständige Infektionsgefahr für die gesamte Herde dar. Die zunehmende Herdengröße in den Milcherzeugungsbetrieben verlangt auch eine Veränderung der Überwachung der Milchqualität. Das eingeführte Qualitätsmanagementsystem mit integrierter tierärztlicher Bestandskontrolle entspricht den Forderungen des § 16 der Milch-VO (2000) bzw. § 4 der Lebensmittel-Hygiene-VO (1997) und ist analog einem HACCP-Konzept aufgebaut (Kirst 2001b). In einer großen Milchviehanlage bestand die Möglichkeit die vorliegenden Untersuchungen unter annähernd gleichen Versuchsbedingungen durchzuführen. In der Literatur sind die möglichen Erfolge einer reinen Pharmakotherapie bei subklinischen Mastitiden hinlänglich als unzureichend beschrieben (ELMER 1988, OWENS et al. 1988, VOLKERT 1992, HELLMANN et al. 1993, FRITON 1998). So entsprechen die Ergebnisse zur Wirksamkeit von Peracef® bei subklinischen Mastitiden unter Praxisbedingungen auch den Erwartungen für Einzeltierbehandlungen, wie sie von HELLMANN et al. (1993) beschrieben wurden. Nach neueren Empfehlungen von HAMANN und FEHLINGS (2003) ist sogar für die Laktationsbehandlung nur eine Antibiose subklinischer durch Sc. agalactiae ausgelöster Fälle ökonomisch vertretbar. 91 Die Analyse der Ergebnisse der anschließenden Trockenstellung unter Antibiose brachte keine nennenswerte Steigerung der zytobakteriologischen Heilungsraten, die zur Gewinnung milchhygienisch unbedenklicher Milch anzustreben sind, im Vergleich zur antibiotischen Trockenstellung ohne vorherige Endlaktationstherapie. Die lokal-antibiotische Behandlung inapparent erkrankter Viertel bei altmelkenden Kühen ist aus ökonomischer Sicht nicht zu empfehlen, zumindest dann, wenn Infektionen mit S. aureus und / oder umweltassoziierten Keimen dominieren. Resistenzen der Bakterien gegenüber dem eingesetzten Antibiotikum sind nicht die Ursache für den mäßigen Behandlungserfolg. Die durchgeführten Resistenztestungen ergaben in vitro sehr gute bakterizide Effekte. Die Behandlung subklinisch erkrankter Kühe sollte sich alleinig auf die intrazisternale Verabreichung von Langzeitantibiotika am Tage des Trockenstellens beschränken. Eine Endlaktationstherapie kann nicht empfohlen werden. Wegen teilweise ungenügender Heilungsraten sind persistierende, therapieresistente subklinische Mastitiden ein wesentlicher Grund für das Merzen von Kühen. Gemäß den Leitlinien für den sorgfältigen Umgang mit antimikrobiell wirksamen Tierarzneimitteln sind Antibiotika unverzichtbar zur Therapie und Gesunderhaltung von Tieren und Tierbeständen. Der prophylaktische Einsatz von Antibiotika ist nur in besonders begründeten Ausnahmefällen, wie z. B. anlässlich des Trockenstellens vertretbar, denn jeder Einsatz kann zur Entwicklung von Resistenzen führen (Antibiotika-Leitlinien 2000). Die im Jahre 2001 vom BVL in Deutschland erstmals durchgeführte repräsentative Querschnittsuntersuchung der Empfindlichkeit bei ausgewählten pathogenen Bakterien vom Milchrind belegt das Problem der Resistenzbildung, aber macht auch deutlich, dass der umsichtige und sinnvolle Einsatz von Antibiotika unter Einbeziehung abgesicherter Therapiestrategien weiterhin angezeigt ist (WALLMANN et al. 2003). In einer sehr großen Milchviehanlage bestand die Möglichkeit, die vorliegenden Untersuchungen unter annähernd gleichen Versuchsbedingungen durchzuführen. Aus diesem Grunde fanden die äußeren Umstände wie Haltung, Fütterung und Aufstallung keine weitere Beachtung, da sie nicht Gegenstand dieser Studie waren, außerdem deren möglicher Einfluss für alle Tiere gleich war. Die begleitenden hygienischen Maßnahmen, die routinemäßig in dem Betrieb durchgeführt werden, können als gut bezeichnet werden. Sie betreffen die Reinigung und Desinfektion im Reproduktionsabteil um den nahen Geburtszeitraum, die Liegeboxen im Stall und die melktechnischen 92 Reinigungs- und Desinfektionsmaßnahmen im Melkkarussell. Hierzu zählen die strikte Einhaltung der Melkreihenfolge, die Reinigung der Zitzen mit sterilen Eutertüchern, das Zitzendippen und eine laufende Zwischendesinfektion der Melkzeuge. Beurteilt wird der Therapieerfolg lediglich im Hinblick auf die Endlaktation. Unter diesem Gesichtspunkt kann die antibiotische Behandlung als nicht sinnvoll eingeschätzt werden. Die in der Literatur angegebenen Empfehlungen zur Behandlung subklinisch erkrankter Euterviertel in Form einer 2- bis 3-maligen, gezielten Vorbehandlung mit Kurzzeitmedikamenten betragen 3 bis 4 Tage vor dem endgültigen Trockenstellen. In diesem Versuch lag der Behandlungszeitraum bereits 23 und 22 Tage vor dem Trockenstellen. Der Zeitrahmen wurde deshalb so gewählt, um den Therapieerfolg dieser Behandlung auch korrekt abgrenzen zu können von der Trockenstelltherapie. Natürlich bezieht sich die Studie nur auf die konkret eingesetzten Medikamente und kann nicht für andere Medikamente übernommen werden. Da es sich ausschließlich um erhöhte Zellzahlen und bakteriologisch positive Milchbefunde handelte, bleibt die Fragestellung, auf allen Vierteln eutergesunde Kühe unter Antibiotikaschutz trockenzustellen, unberührt. Die eigenen Untersuchungen sollten lediglich den Beweis bringen, ob die antibiotische Behandlung subklinisch bzw. unspezifisch an Mastitis erkrankter oder latent infizierter Kühe unmittelbar vor dem Trockenstellen empfohlen werden kann oder nicht. 93 6 Zusammenfassung Diana Felgendreher Einfluss einer intramammären Endlaktationstherapie auf das Ergebnis der späteren antibiotischen Trockenstellung bei Kühen mit klinisch inapparenten Eutererkrankungen Ambulatorische und Geburtshilfliche Tierklinik der Veterinärmedizinischen Fakultät, Universität Leipzig Eingereicht im Oktober 2004 (114 Seiten, 24 Abbildungen, 2 Tabellen, 257 Literaturangaben) Schlüsselwörter: Milchkuh, inapparente Eutererkrankung, Laktationstherapie, Trockenstelltherapie, Heilungserfolg Ziel der Arbeit war die Überprüfung des Einflusses einer intramammären Endlaktationstherapie mit Antibiotika auf das Ergebnis der antibiotischen Trockenstellung bei Kühen mit inapparenten Eutererkrankungen. In einem Betrieb mit einer Herdengröße von 1.400 Milchkühen wurde eine Vorauswahl von Kühen mit einem erhöhten Zellgehalt (> 100.000 Zellen/ml Milch) anhand der MLP-Ergebnisse bis drei Monate vor Versuchsbeginn getroffen. 80 Kühe der ersten bis dritten Laktation gingen schließlich in den Versuch ein und wurden nach dem Rotationsprinzip zwei Behandlungsgruppen zugeordnet. Aufgrund einer wiederholten zytobakteriologischen Beprobung und einer klinischen Untersuchung kamen nur solche Kühe in den Versuch, welche auf mindestens einem Viertel an einer inapparenten Infektion erkrankt waren. Die Untersuchungen und Beprobungen wurden zu folgenden Zeitpunkten durchgeführt: 31, 24, 23 und 7 Tage vor Laktationsende, am Tag des Trockenstellens, am Tag der Geburt, 7 und 28 Tage p. p. Von den 39 Kühen in der Therapiegruppe wurden insgesamt 119 Viertel lokal zwei Mal mit je 1 Injektor Peracef® (100 mg Cefoperazon; Hersteller: Fa. Pfizer GmbH, Karlsruhe) im Abstand von 24 Stunden 23 bzw. 22 Tage vor dem Trockenstellen versorgt. In der Kontrollgruppe befanden sich am Ende von 37 in die Wertung einbezogenen Kühen insgesamt 129 inapparent infizierte Euterviertel, die unbehandelt blieben. Als Kriterien zur Bestimmung der Eutergesundheit wurden die Anzahl somatischer Zellen und die bakteriologischen Befunde herangezogen. 94 15 und 22 Tage (Tag des Trockenstellens) nach Ende dieser Laktationstherapie wurden nach der Entnahme und Analyse von Viertelgemelksproben der Heilungs- bzw. Selbstheilungserfolg eingeschätzt. Durchschnittlich waren zwei Euterviertel einer Kuh an subklinischer Mastitis erkrankt, wobei die Viertelposition gleichmäßig verteilt war. Die erzielte Heilungsrate in der Therapiegruppe lag mit 20 subklinisch infiziert gewesenen Vierteln (29,4 %) nur geringfügig über der Selbstheilungsrate in der Kontrollgruppe mit 17 subklinisch gewesenen, geheilten Vierteln (17,5 %). Anschließend wurden alle Tiere am Tag des Trockenstellens mit einem Injektor Orbenin® Extra (1,28 g Cloxacillin-Benzathin (2:1) entsprechend 1000 mg Cloxacillin, Fa. Pfizer GmbH, Karlsruhe) pro Euterviertel behandelt. Am Tag des Abkalbens, eine und vier Wochen nach dem Abkalben wurden ebenfalls Viertelanfangsgemelksproben entnommen. Diese wurden am Kalbetag bakteriologisch, am Tag 7 p. p. und am Tag 28 p. p. zytobakteriologisch untersucht. Der dominante Erreger sowohl vor der Endlaktationstherapie als auch vor dem Trockenstellen war S. aureus. Durch die Endlaktationstherapie wie auch das antibiotische Trockenstellen konnte das Vorkommen von S. aureus geringfügig zurückgedrängt werden. KNS waren daneben die häufigsten Erreger nach den Behandlungen und damit vermutlich therapieresistenter als Infektionen mit S. aureus. Im Vergleich dazu konnten Infektionen mit Streptokokken, vor allem solche mit Sc. dysgalactiae und Sc. agalactiae durch den Antibiotikaeinsatz am Tage des Trockenstellens in erheblich höherem Ausmaß zur Heilung gebracht werden. Eine lokal-antibiotische Behandlung inapparent erkrankter Viertel bei altmelkenden Kühen kann nicht empfohlen werden, da die Heilungsraten kaum höher liegen als die Selbstheilungsrate. Hinzu kommt, dass eine solche „Vorbehandlung“ keine Begünstigung für das anschließende Trockenstellen mit Langzeitantibiotika nach sich zieht. Die erzielten Heilungsraten, überprüft anhand der zytobakteriologischen Milchbefunde bis 28 Tage p. p., waren in der vor dem Trockenstellen zusätzlich lokal-antibiotisch therapierten Gruppe nicht höher als in der Kontrollgruppe. In beiden Gruppen erzielte der Einsatz von Langzeitantibiotika am Tage des Trockenstellens eine erhebliche Verbesserung der Eutergesundheit in der Folgelaktation. Zusammenfassend sollte sich die Behandlung von klinisch inapparent infizierten Eutervierteln von altmelkenden Kühen auf die intrazisternale Verabreichung von Langzeitantibiotika mit dem Trockenstellen beschränken. 95 7 Summary Diana Felgendreher: Influence of an intramammary antibiotical administration before the end of lactation on the result of antibiotical dry off therapy in dairy cows with clinical inapparent mastitis Large Animal Clinic for Theriogenology and Ambulatory Services, Faculty of Veterinary Medicine, University of Leipzig Submitted in October 2004 (114 pages, 24 figures, 2 tables, 257 references) Keywords: milk cow, inapparent mastitis, lactation therapy, antibiotical drying off, cure rate Objective of this study was to test the influence of an intramammary antibiotic therapy given at the end of lactation on the result of the antibiotical drying off on cows with inapparent mastitis. In a farm with a total of 1.400 milk cows, animals were preselected which showed an increased somatic cell count (> 100.000 SCC/ml milk in cow sample) by using the regular quality control results during the last three months before start of clinical examination. 80 cows in first, second or third lactation were included in the study and were randomised into two therapy groups. On the basis of repeated quarter milk sampling and clinical examination only those cows with an inapparent infection were taken. The examination and sampling were carried out on 31, 24, 23 and 7 days before end of lactation, on the day of drying off, on the day of parturition, 7 and 28 days post partum respectively. From 39 cows in treatment group all in all 119 quarters received local antibiotic therapy twice with a dosage-free interval of 24 hours using 100 mg Cefoperazon (Peracef®, Pfizer, Karlsruhe, Germany) 23 and 22 days before drying off. In control group from 37 cows 129 quarters were inapparently infected and leaved untreated. Criteria for the udder health were the somatic cell count and the bacteriological investigation. 15 and 22 days after the end of lactation therapy, respectively 7 days before drying off, the cure rate as result of treatment and the self cure rate were compared after collecting and analysing quarter milk samples. 96 In average each cow had two quarters infected with subclinical mastitis, whereby the quarter position had no significant influence. The cure rate in therapy group resulted in 20 subclinical infected quarters (29,4 %) only unlikely better than the self cure rate in the untreated control group with 17 subclinical infected and now cured quarters (17,5 %). At the day of drying off all animals received 1 injector Orbenin ® Extra (1,28 g Cloxacillin-Benzathin (2:1), Pfizer, Karlsruhe, Germany) in all quarters. At calving, 7 and 28 days after parturition quarter milk samples from all cows were taken. At calving the milk samples were investigated bacteriologically. The predominant pathogen in the herd both before the endlactation therapy and before drying off was S. aureus. Trough the antibiotical treatment at the end of lactation and of drying off, the incidence of S. aureus was reduced and coagulase-negative Staphylococci (CNS) were the mostly founded germs. In comparison it was possible to cure infections with Streptococci, especially Sc. dysgalactiae and Sc. agalactiae, through application of antibiotics on the day of drying off in a considerably higher rate. A local antibiotical therapy of inapparent infected quarters at the end of lactation cannot be recommended, because cure rate was not higher than the self cure rate in the untreated group. In addition such a “pre-treatment” is not an improvement for drying off with a long-acting antibiotic. The result of cure rate in the group, which was treated additionally with a local antibiotic before drying off, was not higher than that in the control group until day 28 post partum. In both groups the use of long-acting antibiotics on the day of drying off obtained a considerable improvement of the udder health in the next lactation. The treatment of cows with inapparent udder diseases should be restricted on the intramammary administration of long-acting antibiotics at the time of drying off. 97 8 Literaturverzeichnis Anon. Lebensmittel-Hygiene-VO vom 5. August 1997, BGBL I,2008 ff. Anon. Leitlinien für den sorgfältigen Umgang mit antimikrobiell wirksamen Tierarzneimitteln – mit Erläuterungen –. Bundestierärztekammer (BTK) und Arbeitsgemeinschaft der leitenden Veterinärbeamten (Argevet). Deutsches Tierärzteblatt 2000; 48:3-11. Anon. Normenausschuss Medizin im Deutschen Institut für Normung e.V. 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Mein Dank gilt: Herrn Prof. Dr. Axel Sobiraj für die freundliche Überlassung des Themas der Arbeit, jederzeit gewährte Unterstützung und die hilfreichen Anmerkungen bei der Durchsicht des Manuskripts, der Firma Pfizer / Karlsruhe für die finanzielle Unterstützung durch die kostenlose Bereitstellung der Medikamente, die Kostenübernahme der Milchuntersuchungen und von Auslagen, die im Rahmen dieser Arbeit enstanden sind, Herrn Dr. Stefan Kleinhans für die wertvolle Hilfe bei der Versuchsplanung, Herrn Andreas Richter für die hilfreiche Unterstützung bei der statistischen Auswertung der Ergebnisse, Frau Dr. Sonja Schött und Frau DVM Petra Schnürch für die freundliche Beratung bei mikrobiologischen und zytologischen Fragestellungen, dem Produktionsleiter der Milchviehanlage für die großzügige Zustimmung zur Versuchsdurchführung, den Mitarbeiterinnen und Mitarbeitern der Milchviehanlage für ihre Hilfsbereitschaft und ihre Geduld, wenn meine Entnahme der Milchproben den Arbeitsablauf bremste, ganz besonders meiner Familie für die großzügige und verständnisvolle Unterstützung, ohne die ich den Freiraum zur Fertigstellung dieser Arbeit nicht gehabt hätte, nicht zuletzt allen Freunden und Bekannten für die stets erwiesene Hilfsbereitschaft.