Diazyme Procalcitonin Assay
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Diazyme Laboratories 12889 Gregg Court Poway, CA 92064, USA Tel.: 858-455-4768 / Fax: 858-455-3701 E-Mail: [email protected] Website: www.diazyme.com Warnhinweise Diazyme Procalcitonin Assay Das Reagenz enthält < 0,1 % Natriumazid (NaN3) als Konservierungsmittel. Natriumazid kann bei einer Reaktion mit Blei- oder Kupferleitungen hochexplosive Metallazide bilden. Bei der Entsorgung mit reichlich Wasser nachspülen, um Azidbildung zu vermeiden. Ausführung Die Reagenzien für den Procalcitonin (PCT) Assay von Diazyme sind nur in größeren Mengen in der folgenden Ausführung erhältlich: Handhabung der Reagenzien Die REAGENZIEN des PCT Assay von Diazyme sind gebrauchsfertige, stabile Flüssigreagenzien. REF Kit-Umfang R1: 44 mL DZ558A-K R2: 14 mL *Kalibratoren und Kontrollen sind separat erhältlich. Lagerung und Haltbarkeit der Reagenzien Verwendungszweck Der Procalcitonin Assay von Diazyme dient zur quantitativen Bestimmung von PCT in Serumproben und Plasmaproben in EDTA oder Li-Heparin mittels latexverstärkter Immunturbidimetrie. Hintergrund Procalcitonin (PCT) ist ein Protein aus 116 Aminosäuren und das Prohormon des Calcitonins. Während das hormonell aktive Calcitonin ausschließlich in den CZellen der Schilddrüse nach spezifischer intrazellulärer proteolytischer Prozession des Prohormons PCT gebildet wird, wird PCT flächendeckend und einheitlich in verschiedenen Geweben im ganzen Körper als Reaktion auf eine Sepsis exprimiert1. Bei einem gesunden Menschen ist der PCT-Spiegel im Blutkreislauf sehr gering (< 0,05 ng/mL). Erhöhte PCT-Spiegel im Blutkreislauf sind wichtige Indikatoren für mikrobielle Infektionen und ein leistungsstarker Marker für die Früherkennung einer Sepsis. Testprinzip Der PCT Assay von Diazyme ist ein latexverstärkter immunturbidimetrischer Assay. Durch Bindung der in der Probe vorhandenen PCT-Proteine an die mit den spezifischen Anti-PCT-Antikörpern beschichteten Latexpartikel kommt es zu einer Agglutination. Der Grad der durch die Agglutination hervorgerufenen Trübung der Probe ist optisch messbar. Er verhält sich proportional zur PCTKonzentration in der Probe. Das Gerät berechnet die PCT-Konzentration einer Probe durch Interpolation des erfassten Signals einer 6-Punkt-Kalibrationskurve. Bei Lagerung bei 2–8 °C ist das REAGENZ bis zu dem auf dem Etikett angegebenen Verfallsdatum haltbar. REAGENZIEN aus verschiedenen Chargen nicht mischen. NICHT EINFRIEREN. Entnahme und Vorbereitung von Proben2, 3, 8 Der PCT Assay von Diazyme ist zur Verwendung mit Serum, Li-Heparin-Plasma und EDTA-Plasma vorgesehen. Zur besseren Überwachung sollte immer dieselbe Probenmatrix verwendet werden. Die in arteriellem Blut gemessenen PCT-Werte sind etwa 4 % höher als die in venösem Blut. Etwa 3 Stunden nach einer bakteriellen Infektion erhöht sich der PCT-Spiegel und erreicht nach 6– 12 Stunden sein Maximum, bei einer Halbwertszeit zwischen 25 und 30 Stunden. PCT ist sowohl in Plasma- als auch in Serumproben relativ stabil und es gelten keine besonderen Anforderungen für die Handhabung der Proben vor der Analyse. Bei 4 °C gelagerte Proben behalten mehrere Tage lang > 90 % ihrer Anfangskonzentration; Proben, die 24 Stunden bei Raumtemperatur gelagert werden, behalten 80 % ihrer Anfangskonzentration. Bei Lagerung bei –20 °C sind die Proben 6 Monate haltbar.3 Einfrier-/Auftauzyklen führen zu einem Verlust von < 2 % PCT in der Probe.Nach dem Auftauen müssen trübe Proben durch Zentrifugieren geklärt werden. Im Lieferumfang enthaltene Materialien Weitere Informationen Arbeitslösungen“. dazu enthält der Abschnitt „Reagenzien – Zusätzlich benötigte Materialien REAGENZ 1 : Tris-Pufferlösung, 100 mM, gebrauchsfertig Es kann jedes Laborgerät verwendet werden, dessen Temperatur auf 37 ± 0,5 °C eingestellt ist und mit dem die Absorption bei 600 nm präzise bestimmt werden kann. REAGENZ 2 : Suspension von mit anti-humanen monoklonalen PCT-Antikörpern von der Maus beschichteten Latexpartikeln (< 0,2 %), gebrauchsfertig Das PCT Kalibratorset von Diazyme ( REF DZ558A-CAL) und das PCT Kontrollset von Diazyme ( REF DZ558A-CON) sind separat erhältlich. KALIBRATOREN : enthalten PCT in einer Humanserummatrix und sind Testschema für Analyzer für die klinische Chemie Reagenzien – Arbeitslösungen lyophilisiert Die Messung von PCT sollte gemäß den spezifischen Applikationsparametern für die jeweiligen Analyzer für die klinische Chemie durchgeführt werden. Ein allgemeines Testschema für den Assay ist nachstehend dargestellt. Vorsichtsmaßnahmen 1. USA: Verwendung nur zu Forschungszwecken. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren. 2. EU: IVD 3. Die REAGENZIEN nach dem auf der Verpackung angegebenen Verfallsdatum nicht mehr verwenden. 4. Die Häufigkeit der Kalibrierung hängt vom verwendeten Gerät ab. Zusätzlich sollten bei jeder neuen Reagenzcharge eine erneute Kalibrierung und Kontrollläufe durchgeführt werden. 5. Verschlucken sowie Kontakt mit Haut und Augen vermeiden. 6. Proben, die Material humanen Ursprungs enthalten, sind als potenziell infektiös und gemäß den Vorschriften für sicheres Arbeiten im Labor zu handhaben, wie im Dokument „Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories“ (HHS Publication Number [CDC] 93-8395) beschrieben. 7. Weitere Sicherheitshinweise zur Lagerung und Handhabung dieses Produkts sind dem Sicherheitsdatenblatt des Produkts zu entnehmen. Sicherheitsdatenblätter sind bei unserer Kundendienstabteilung unter der Rufnummer 858-455-4768 erhältlich. R1: 180 µL Probe: 20 µL Probe: 8 µL 0 Min. R2: 60 µL H2O: 20 µL 600 nm 37 °C 4,5 Min. 6,5 Min. A1 10 Min. A2 Applikationsspezifische Fragen zum PCT Assay von Diazyme beantwortet der technische Support von Diazyme. Rufen Sie uns an unter (858)-455-4768 oder senden Sie uns eine E-Mail an [email protected]. Diazyme Laboratories 70967 Rev. G Seite 1 von 2 Gültig ab: 12/8/15 Kalibrierung Der PCT Assay von Diazyme sollte mit dem PCT Kalibratorset von Diazyme ( REF DZ558A-CAL) kalibriert werden. Die PCT-Konzentration in der Probe wird anhand einer Kalibrationskurve bestimmt, die mit den PCT KALIBRATOREN erstellt wurde. Die PCT Kalibratoren von Diazyme liegen als lyophilisiertes Pulver vor und müssen vor der Verwendung mit kaltem entionisierten Wasser rekonstituiert werden. Kalibrierungshäufigkeit Eine Kalibrierung sollte alle zwei Wochen durchgeführt werden. SD (ng/mL) VK (%) 0,036 7,2 % 0,069 3,2 % 0,353 2,7 % Richtigkeit Die Leistung dieses Assays wurde mit der Leistung eines rechtmäßig vertriebenen PCT-Assays unter Verwendung von Li-Heparin-Plasmaproben verglichen. Bei den 41 Plasmaproben mit PCT-Konzentrationen von 0,18 ng/mL bis 58,44 ng/mL lag der Korrelationskoeffizient zwischen den beiden Methoden bei 0,9141, die Steigung betrug 0,9815 und der y-Achsenschnittpunkt lag bei 0,3137. Quantifizierungsgrenze Qualitätskontrolle Im Rahmen der Guten Laborpraxis wird die Verwendung von KONTROLL Materialien empfohlen. Bei der Durchführung externer Qualitätskontrollen sind die jeweiligen nationalen und regionalen Richtlinien einzuhalten. Zur Gewährleistung einer funktionalen Qualitätskontrolle sollten niedrige und hohe KONTROLLEN mit bekannten Werten wie unbekannte Proben gemessen werden. Das PCT Kontrollset von Diazyme ( REF DZ558A-CON) besteht aus lyophilisiertem Pulver und muss vor der Verwendung mit kaltem entionisiertem Wasser rekonstitutiert werden. Die Quantifizierungsgrenze (LoQ, limit of quantitation) des PCT Assays von Diazyme liegt bei 0,17 ng/mL. Linearität Die Linearität des Assays liegt zwischen 0,17 und 50 ng/mL. Ergebnisse unterhalb von 0,17 ng/mL werden als < 0,17 ng/mL angegeben. Proben, deren Ergebnisse über 50 ng/mL liegen, sollten mit Kochsalzlösung oder Negativprobe verdünnt und erneut getestet werden. Störeinflüsse Die normalerweise in Plasma vorhandenen Substanzen wurden auf Störeinflüsse getestet. Bei Tests mit den unten aufgeführten Konzentrationen ergaben sich Abweichungen von weniger als 10 %. Ergebnisse Die Ergebnisse sind in Einheiten von ng / ml angezeigt. Hinweis: Proben mit Werten über 50 ng / ml sollten negative Probe oder Kalibrator Level 0 verdünnt und erneut analysiert werden.Die Ergebnisse sind mit dem Verdünnungsfaktor zu multiplizieren. Störeinflüsse Ascorbinsäure Freies Bilirubin Konjugiertes Bilirubin Laut Veröffentlichungen der Konsensuskonferenz des American College of Chest Physicians und der Society of Critical Care Medicine werden bei der Diagnose von systemischen bakteriellen Infektionen/Sepsis folgende Kategorien unterschieden2-4: PCT < 0,5 ng/mL: eine systemische Infektion (Sepsis) ist unwahrscheinlich, eine lokale bakterielle Infektion ist möglich; PCT ≥ 0,5 ng/mL und < 2 ng/mL: eine systemische Infektion (Sepsis) ist möglich, es sind jedoch auch andere Ursachen für einen erhöhten PCT-Spiegel bekannt; PCT ≥ 2 ng/mL und < 10 ng/mL: eine systemische Infektion (Sepsis) ist wahrscheinlich, es sei denn, es liegt eine andere bekannte Ursache vor; PCT ≥ 10 ng/mL: als Ursache kommt nahezu ausschließlich ein schwerer bakterieller oder septischer Schock in Frage. Hämoglobin Triglycerid Rheumafaktor Konzentration 10 mM 40 mg/dL 40 mg/dL 400 mg/dL 1000 mg/dL 100 IU/mL Literatur 1. Müller B, et al., Ubiquitous expression of the calcitonin-i gene in multiple tissues in response to sepsis. J Clin Endocrinol Metab 2001; 86(1):396-404. 2. Meisner M. Procalcitonin (PCT) – A new, innovative infection parameter. Biochemical and clinical aspects. Thieme; Stuttgart, New York, 2000; ISBN 3-13-105503-0. 3. Christ-Crain M, et al., Procalcitonin in bacterial infections – hype, hope or more or less? Swiss Med Wkly 2005; 135: 451-60. 4. Bone RC, Balk RA, Cerra FB, Dellinger RP, Fein AM, Knaus WA, Schein RM, Sibbald Einschränkungen Proben mit einer PCT-Konzentration über der Linearitätsgrenze von 50 ng/mL sind mit Negativprobe zu verdünnen. Wiederholen Sie die Tests und multiplizieren Sie die Ergebnisse mit dem Verdünnungsfaktor. Wie bei auf LatexTurbidimetrie-Verfahren basierenden Immunoassays generell sollten auch im Anschluss an den PCT Assay von Diazyme entsprechende gründliche Waschschritte durchgeführt werden. Weitere Informationen sind den jeweiligen Gerätehandbüchern zu entnehmen. Die REAGENZIEN , rekonstituierten KALIBRATOREN und KONTROLLEN des PCT Assay von Diazyme sollten bei 2–8 °C gelagert werden. REAGENZIEN NICHT EINFRIEREN. Die rekonstituierten KALIBRATOREN und KONTROLLEN können nach der Rekonstitution in Aliquoten bei –20 °C bis zu 6 Monate gelagert werden. Der PCT Assay von Diazyme ist zur Verwendung mit Serum, Li-Heparin-Plasma und EDTA-Plasma vorgesehen. Es besteht die Möglichkeit, dass einige Substanzen, die nicht nachstehend aufgeführt sind, die Testergebnisse beeinträchtigen. 5. 6. 7. 8. WJ. Definitions for sepsis and organ failure and guidelines for the use of innovative therapies in sepsis. The ACCP/SCCM Consensus Conference Committee. American College of Chest Physicians/Society of Critical Care Medicine. Chest 1992; 101: 1644-55 Christ-Crain M, Jaccard-Stolz D, Bingisser R, Gencay MM, Huber PR, Tamm M, Muller B. Effect of procalcitonin-guided treatment on antibiotic use and outcome in lower respiratory tract infections: cluster-randomised, single-blinded intervention trial. Lancet. 2004;363:600-7. Christ-Crain M, Stolz D, Bingisser R, Muller C, Miedinger D, Huber PR, Zimmerli W, Harbarth S, Tamm M, Muller B. Procalcitonin Guidance of Antibiotic Therapy in Community-acquired Pneumonia: A Randomized Trial. Am J Respir Crit Care Med. 2006;174:84-93. Stolz D, Christ-Crain M, Bingisser R, Leuppi J, Miedinger D, Muller C, Huber P, Muller B, Tamm M. Antibiotic treatment of exacerbations of COPD: a randomized, controlled trial comparing procalcitonin-guidance with standard therapy. Chest. 2007;131:9-19. Schuetz P, et al., Long-term stability of procalcitonin in frozen samples and comparison of Kryptor and VIDAS automated immunoassays. Clin Biochem. 2010; 43(3):341-4 Analyseeigenschaften Präzision Die Intra-Assay-Präzision des PCT Assay von Diazyme wurde im Rahmen einer Studie evaluiert. Dabei wurden PCT-Kontrollen in drei Konzentrationen (0,5 ng/mL, 2,14 ng/mL und 13,13 ng/mL PCT) mit jeweils 20 Replikaten in einem Lauf getestet. Konzentration Konzentration Konzentration 1 2 3 20 20 20 Anz. Datenpunkte Mittelwert 0,50 2,14 13,13 (ng/mL) MDSS Schiffgraben 41 30175 Hannover Deutschland Diazyme Laboratories 12889 Gregg Court Poway, CA 92064, USA Tel.: (858) 455-4754 Fax: (858) 455-4750 Diazyme Laboratories 70967 Rev. G Seite 2 von 2 Gültig ab: 12/8/15
