Autoradiographische Untersuchungen über das Verhalten der

D E S O X Y R IB O N U C L E IN S Ä U R E IN H ERPES-VIR U S-INFIZIE RTEN ZE LLEN
211
Autoradiographische U ntersuchungen über das V erhalten
der D eso x y rib o n u clein s äu re in Herpesvirus-infizierten Zellen
V on K.
M unk
u nd G.
S auer
Aus dem Institut für Virusforschung Heidelberg
(Z. N aturforschg. 18 b , 211— 215 [1963] ; ein gegan gen am 6. Novem ber 1962)
Herrn Professor Dr. A.
B utenandt
zum 60. Geburtstag g ew id m et
Herpes-simplex-Virus-(Herpes virus humanus) infizierte HeLa-Zellen wurden autoradiographisch
untersucht. In Kernen, die vor der Infektion 3H-Thymidin in ihre DNS eingebaut hatten, findet sich
die Markierung nach der Infektion in der Peripherie, im sog. Randchromatin wieder. Bei ^ -T h y m i­
din-Zugabe nach der Infektion wird dieses nur noch in den Keminnenbereich aufgenommen. Das
Randchromatin bleibt frei. Daraus geht hervor, daß der zell eigene DNS-Stoffwechsel unterbrochen
wurde und nur noch im Keminnenbereich ein DNS-Stoffwechsel für die Virus-Neubildung abläuft.
D as H erpes-sim plex-V irus (H sV ), (H erpes virus
h u m a n u s), gehört zu den V irusarten, deren V erm eh­
ru n g nicht n u r in den m akrom olekularen S ynthese­
stufen im K ern erfolgt, sondern die sich d o rt schon
zum N ucleocapsid zusam m ensetzen, das elektronen­
optisch erk en n b ar ist
D a dem N ucleocapsid noch eine zw eite H ülle
(envelope) fehlt, stellt es noch nicht das vollstän­
dige, infektiöse V irio n d a r 2. D iese w ird später, v er­
m utlich beim V erlassen des K ernes z u g e fü g t3.
D er erste und w esentliche A bschnitt d er V iru sv er­
m ehrung, die B ildung des genetischen M aterials,
vollzieht sich an den Stoffw echselvorgängen des Zell­
kernes, wobei fü r das D N S-haltige H s V 4 in erster
L inie der DNS-Stoffwechsel in F rag e kom m t. D as
E ingreifen in den K em stoffw echsel ist nicht ohne
E influß auf die K ern stru k tu r. D ie in m it H erp es­
v irus infizierten Zellen bekannten K ern-„E inschlußk örperchen“ entstehen nach heutiger K enntnis durch
S chrum pfung infolge bestim m ter histologischer F i­
xierungsm ethoden aus dem zentralen Bereich des
K ernes. Bei geeigneter F ix ieru n g bleib t diese E r ­
scheinung aus. Dem Innenbereich des cytopathisch
v eränderten K ernes g ilt h ie r die besondere A ufm erk­
sam keit, daneben ab er auch der v erän d erten R a n d ­
zone des K ernes. Im V erlauf der V irusv erm eh ru n g
w andert näm lich das K ernchrom atin an die M em ­
b ran . D adurch entsteht eine m ikroskopisch deutlich
erkennbare, Feulgen-positive V erdickung, das sog.
R andchrom atin (A bb. 3 ) . D ie N ucleoli sind m it
A bschluß der K ernum w andlung verschw unden.
E. P. J o n e s , J. exp.
Medicine 110, 643 [1959].
T h . F r a n c is j d n . u . H . B. K u r t z , Yale J. Biol. Med. 22, 579
[1950].
1 C . M organ , H . M . R o se, M . H olden u .
2
D ie geschilderten cytopathischen E rscheinungen
w erfen die F rag e auf, in welchem Z usam m enhang
die K ernveränderungen zur V iru sv erm eh ru n g , in s­
besondere zum DNS-Stoffwechsel, stehen. Elekronenoptische und fluoreszenzim m unologische U n ter­
suchungen lassen zw ar O rt u n d Zeit des A uftretens
der ersten virusspezifischen E inheiten erkennen, je ­
doch geben sie keine w eitere A uskunft ü b er die
S tru k tu r des K erninnenbereiches und des R andchrom atins, ebensow enig wie ü b er die d a rin ab lau ­
fenden Stoffwechselvorgänge w äh ren d d er V iru s­
verm ehrung.
D ie B egrenzung dieser M ethoden fü r die B eob­
achtung des V erm ehrungsablaufes beim H sV u n d
seines Stoffwechsels fü h rten zu dem G edanken,
U ntersuchungen m it H ilfe au to rad io g rap h isch er M e­
thoden un ter V erw endung von 3 H -T hym idin zu b e ­
ginnen. Ü ber die ersten E rgebnisse soll h ie r berich­
tet w erden.
Material und M ethoden
Virus
Der hier verwendete Herpesvirus-Stamm „Hofmei­
ster“ wurde von Prof. Dr. Th. N a s e m a n n aus typi­
schen Herpes-Bläschen (genitale Lokalisation) isoliert,
zuerst auf der CAM angezüchtet und später auf HeLaZellkulturen fortgeführt. Der Stamm durchlief während
dieser Untersuchungen die 19. —28. HeLa-Zellpassage.
Gewebekultur
Alle Untersuchungen wurden mit einem HeLa-Zellstamm durchgeführt, den wir dem Inst. f. Exp. Krebs3 D. F a l k e , R . S ie g e r t u . W. V o g e l l , Arch. Virusforschg.
IX, 484 [1959].
4 W. C. R u s s e l , Virology 16, 355 [1962].
Dieses Werk wurde im Jahr 2013 vom Verlag Zeitschrift für Naturforschung
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K. M U N K UND G. S A U E R
212
forschung Heidelberg (Direktor Prof. Dr. H. L e t t r e ) ,
verdanken. Das verwendete Nährmedium bestand aus
H a n k s scher Lösung mit 0,5% Lactalbumin-Hydrolysat, 5% Kälberserum und Antibioticazusatz. Die Zel­
len wurden durch Behandlung mit Natrium-Versenat
umgesetzt.
F ür die hier beschriebenen Versuche wurden die
HeLa-Zellen auf Deckgläschen 7-30 mm angezüchtet,
die in Kulturröhrchen unter 5,0 ml Nährmedium gehal­
ten wurden. Zum Wechseln des Nährmediums wurden
die Deckgläschen von einem Kulturröhrchen steril in
ein anderes gebracht.
Radioisotope
Das hier verwendete 3 H-Thymidin (spezifische Akti­
vität 2,40 C/mMol) wurde vom Radiochemical Centre,
Amersham, Buckinghamshire, bezogen.
Färbemethoden
Das Färben der gestrippten P räparate erfolgte in üb­
licher Weise nach der von R o m e i s 6 angegebenen Me­
thode in E h r l i c h schem Hämatoxylin und anschlie­
ßender Differenzierung mit Salzsäurealkohol. Zum
Schluß wurden die entwässerten P räparate unter Ver­
wendung von Eukitt mit einem 7 •30 mm-Deckglas ein­
gedeckt.
V ersu ch e
Die Versuche wurden mit einem HsV-Stamm durch­
geführt, dessen cytopathogenes Verhalten auf der
HeLa-Zellkultur anderen O rtes 7 genauer beschrieben
wird. Der Stamm bildet in HeLa-Zellkulturen groß­
flächige Syncytien (Abb. 2). Er ähnelt damit dem von
Autoradiographische Methode
Zur autoradiographischen Darstellung wurden die
Deckgläschen entsprechend der Versuchsanordnung
dem Medium entnommen, in H a n k s scher Lösung ge­
waschen, in Osmiumsäuredämpfen fixiert und in
70-proz. Alkohol gebracht. Zur weiteren Verarbeitung
wurden die luftgetrockneten Deckgläschen auf gut ge­
reinigte O bjektträger mit Eukitt befestigt und darauf­
hin nicht weniger als 5 Stdn. fließend gewässert. Nach
erneuter Trocknung erhielten sie einen Gelatineüberzug
durch kurzes Eintauchen in Gelatinelösung: 5,0 g Foto­
gelatine, 0,5 g Chromalaun auf 1000 ml dest. Wasser.
Ein anschließendes dünnes Bestreichen des O bjektträ­
gers mit Eiweißglycerin unter Aussparung des Ge­
webepräparates diente zum besseren Haften des Strip­
pingfilmes.
Der hier verwendete Kodak-A.R. 1 0 -Strippingfilm
wurde mit der lichtempfindlichen Schicht nach unten
auf einem Wasserbad (25 ) ausgebreitet und über die
P räparate gezogen. Das dest. Wasser des Wasserbades
enthielt 1% Kaliumbichromat, um unerwünschte W ir­
kungen reduzierender Substanzen auf den Film zu ver­
meiden. Auf ein faltenfreies und dichtes Anliegen des
Strippingfilmes auf den P räparaten war besonders zu
achten. Nach schnellem Trocknen der P räparate wurden
sie, gegen Licht und Feuchtigkeit geschützt, bei 4 C
aufbewahrt. Die Expositionszeit betrug in der Regel
7 Tage. Anschließend erfolgte die Entwicklung der
Filme mit Amidol-Entwickler5: Amidol 1,125 g, NaSulfit (wasserfrei) 4,5 g, K-Bromid in 10-proz. Lösung
2,0 ml auf 250 ml dest. Wasser.
Die Entwicklungszeit betrug 20 min bei 14°. Nach
kurzer Wässerung wurden die Präparate in Kodak-Xray-Fixage 1 0 min bei 14° fixiert und anschließend eine
Stde. gewässert.
5 C. D i l w o r t h , G. P. S. O c c h ia l in i u. L. V e r m a e s e n , Bull.
centre Phys. nucleaire Univ. libre Bruxelle 13 a, 16 [1950].
6 B. R o m e is , Mikroskop. Technik, Leibniz, München 1948.
7 K. M u n k u . D . D o n n e r , in Vorbereitung.
Abb. 1. HeLa-Zellkultur. Vergr.: 400-fach.
Abb. 2. HeLa-Zell-Syncytium nach Infektion mit Herpesvirus-Stamm „Hofmeister“ 48 Stdn. p. infectionem. Dunkle,
abgestorbene Zellen liegen auf dem Syncytium.
Vergr.: 100-fach.
S cott
und M itarbb. beschriebenen Stamm
„GC“ 8 und dem Stamm „M P“ von H o g g a n und Roizm a n 9. Die durch unseren Stamm hervorgerufenen KernM cN a i r
D. L . M c L e o d u . T . T o k u m a r u , J. Im­
munology 86, 1 [1961].
9 M. D. H o g g a n u. B. R o iz m a n , Amer. J. H y g . 70, 208 [1959].
s T . F . M c N a ir S c o t t ,
D E S O X Y R IB O N U C L E IN S Ä U R E IN H E R P E S -V IR U S IN F IZ IE R T E N ZELLEN
Veränderungen, lassen ein deutliches Randchromatin
und einen mikroskopisch strukturlos erscheinenden
Kerninnenbereich erkennen (Abb. 3). Die volle Aus­
prägung des cytopathischen Effektes dauert bei einer
M ultiplicity unter 1 zwischen 24 —48 Stunden. Die
Syncytienbildung ist für den Stamm genotypisch. Um­
fang und Anzahl der Syncytien können jedoch bei P as­
sagen durch Milieubedingungen des Gewebekulturme­
diums wechseln. Auf eine gute Syncytienbildung kam
es uns bei diesen Versuchen zum Erkennen der infizier­
ten Zellen an.
Abb. 3. Ausschnitt aus einem Syncytium. Kerne mit dunkel
gefärbtem Randchromatin. Vergr.: 400-fach.
213
Im ersten Versuchsansatz hatten die Zellen 12 Stdn.
vor der Infektion 0,5 //C /l ml 3 H-Thymidin erhalten.
Diese Zeitspanne erwies sich als ausreichend, weil nach
12 Stdn. die meisten Zellen genügend 3 H-Thymidin incorporiert haben. Eine längere Verweildauer hatte kei­
nen Einfluß auf das Ergebnis. Unmittelbar vor der Beimpfung wurde das Nährmedium gewechselt und durch
mehrmaliges Waschen der Tritium-Überschuß beseitigt.
Im zweiten, in der Regel gleichzeitig vorgenomme­
nen Versuchsansatz wurden 0,5 //C/m l 3 H-Thymidin
bei der Beimpfung zugefügt. Gegenüber dem ersten
Ansatz wurden in dieser Versuchsreihe die Zellen län ­
ger, bis 24 Stdn. p.i. in 3 H-Thymidin-Gegenwart gehal­
ten, dam it sie während der Dauer der Virusvermehrung
Tritium incorporieren konnten. Nach diesem Zeitpunkt
mußten die K ulturen jedoch in tritiumfreies Medium
umgesetzt werden, um ein unspezifisches Adsorbieren
an absterbende Zellen zu vermeiden. Diese beiden Ver­
suchsansätze endeten 72 Stdn. p.i. mit der Entnahme
und Fixierung der Präparate.
Im dritten Versuchsansatz wurde eine Reihe der
oben beschriebenen Deckglas-Zellkulturen zur selben
Zeit mit der gleichen Virusdosis beimpft. Zu bestimm­
ten Zeiten: 2, 4, 8 , 12 und 24 Stdn. p.i. erhielt je eines
dieser Röhrchen 2,0 //C /l ml 3 H-Thymidin. 48 Stdn. p.i.
wurden alle K ulturen fixiert und weiter verarbeitet.
In einer Abwandlung des letzten Versuchsansatzes
wurde in verschiedenen, begrenzten Zeitintervallen p.i.
3 H-Thymidin dem Nährmedium zugesetzt (0 —3, 3 —6 ,
6 —9, 9 —12, 12 —24, 24 —36 und 36 —48 Stdn. p.i.).
Das geschah in der Absicht, den Zeitraum der stärksten
Thymidinaufnahme genauer einzuengen. In den kurzen
Abschnitten von 0 —12 Stdn. p.i. betrug die TritiumKonzentration 1,0 //C/ml, in den folgenden, langen
Intervallen von 1 2 —48 Stdn. p.i. wurde sie auf
0,5 //C /m l herabgesetzt.
Die Versuchsreihen 1 und 2 wurden viermal, der
Versuchsansatz 3 zweimal mit dem gleichen Ergebnis
wiederholt. Alle Versuche wurden bei 37^ durchge­
führt.
Ergebnisse
Abb. 4. HeLa-Zellkultur. Markierung mit 3H-Thymidin,
0,5 /xC/ml. Vergr.: 400-fach.
Unsere ersten beiden Versuchsreihen hatten zum
Ziel, festzustellen: 1 . wie sich die Zell-DNS, die bereits
in der unbeimpften Zelle mit 3 H-Thymidin m arkiert
worden war, unter dem Einfluß der Virusvermehrung
verhält und 2. wo ein DNS-Stoffwechsel in der Herpesvirus-infizierten Zelle stattfindet.
Die dritte Versuchsreihe galt der Frage, wie lange
nach der Virusinfektion in der Zelle noch eine Thymi­
dinaufnahme andauert.
Bei allen Versuchen wurden HeLa-Zellkulturen auf
7 • 30 mm-Deckgläschen in Kulturröhrchen mit 5,0 ml
Nährmedium angelegt. Nach 48 Stdn., als sie sich in
einem guten Vermehrungsstadium befanden, wurden
sie mit Virus beimpft. Beim Beimpfen wurde das N ähr­
medium erneuert.
M it H ilfe au to rad io g rap h isch er M ethoden unter
V erw endung von 3 H -T hym idin sollte ein Einblick in
den DNS-Stoffwechsel H erpesvirus-infizierter Zellen
w ährend d er V iru sv erm eh ru n g gew onnen w erden.
D ie V ersuche boten, sow eit es die M ethode zuläßt,
als erstes E rg eb n is A ufschluß ü ber einige Beziehun­
gen des Zell-DNS-Stoffwechsels zur V irusverm eh­
rung.
H eL a-Z ellkulturen w u rd en : 1. — 12 Stdn. vor
dem B eim pfen m it einem H sV -Stam m , 2 . — gleich­
zeitig u n d 3. — zu bestim m ten Zeiten p.i. m it 3 HT h y m id in m a rk iert.
D ie T h y m idin-A ufnahm e und vor allem die L oka­
lisation dieses V organges in den infizierten und
cytopathisch v erän d erten Zellen w urden mikrosko-
214
K. M U N K U N D G. S A U E R
p isd i beobachtet. V or der B eurteilung d er E rg e b ­
nisse m üssen einige B edingungen berücksichtigt w er­
den. Die D N S-Synthese findet norm alerw eise gegen
E nde der Interphase s ta tt10, deshalb können nicht
alle Zellen zu gleicher Zeit D N S-V orläufer incorporieren.
F ern er ließ sich u n ter unseren V ersuchsbedin g u n ­
gen die V irusm enge zur B eim pfung d er K ultu ren
nicht so hoch w ählen, daß jede Zelle gleichzeitig in ­
fiziert w urde, denn sonst entstehen nicht die ty p i­
schen Syncytien. A uf G rund dieser G egebenheiten
ist zu beachten, daß es in den P rä p a ra te n Zellen
verschiedener Z ustände g ib t: Zellen, die 1. nicht
m a rk iert und nicht infiziert, — 2 . m a rk ie rt und nicht
infiziert, — 3. nicht m a rk iert u n d infiziert, —
4. m a rk iert und infiziert sind. N u r die letztgenann­
ten Zellen w urden ausgew ertet. D abei sind die m a r­
k ierten Zellen klar zu erkennen. D ie infizierten Zel­
len unterscheiden sich von den nicht infizierten durch
die K ernveränderungen und die S yncytienbildung.
In den Z eitangaben w aren die Zeiten der T ritiu m bzw. V irus-Z ugabe zu den P rä p a ra te n m aßgebend,
auch wenn, wie bereits erw ähnt, nicht alle Zellen
des P rä p arate s zur gleichen Zeit 3 H -T hym idin a u f­
genom m en hatten oder infiziert w orden w aren.
Die U ntersuchungen erg ab en : In den Zellen, die
vor der Infektion 3 H -T hym idin aufgenom m en h a t­
ten, w ar die M arkierung im V erlauf der V iru s­
verm ehrung und der cytopathisdien V eränderu n g en
in ganz überw iegendem M aße im K ern-R andchrom atin (A bb. 5) lokalisiert. U m gekehrt w ar die M a r­
kierung bei den Zellen, die gleichzeitig m it d er V i­
rusinfektion oder später das 3 H -T hym idin erhielten
(A bb. 6 und 7 ) , n u r im K erninnenbereich nach­
w eisbar. D as R andchrom atin blieb frei.
im K ern in n en rau m u n d nicht im R andchrom atin. In
dem In terv all zwischen 24. und 36. Stde. p.i. w ar
die 3 H -T hym idin-A ufnahm e wesentlich geringer und
blieb auch zwischen 36. und 48. Stde. auf gleicher
H öhe.
Abb. 5. HeLa-Zell-Syncytium 48 Stdn. nach Infektion mit
Herpesvirus-Stamm „Hofmeister“. 3H-Thymidin-Markierung
im Randchromatin. Audi die in das Kerninnere vorspringen­
den Leisten des Randchromatins sind markiert, 0,5 [a,C/ml.
Vergr.: 400-fach.
Abb. 6. Zweizeiliges HeLa-Zell-Syncytium 48 Stdn. nach In­
fektion mit Herpesvirus-Stamm „Hofmeister“. ^-Thym idinMarkierung im Kerninnenraum, 5,0 /^C/ml. Vergr.: 400-fach.
In der dritten V ersuchsreihe, bei der den K u ltu ­
ren zu verschiedenen Zeiten nach d er In fektio n das
:JH -T hym idin zugefügt w urde, w ar eine ^ - T h y m i ­
din-A ufnahm e in den infizierten Zellen noch 24 Stdn.
p.i. zu beobachten. Sie erfolgte im K erninnenbereich
und schien, sow eit eine quantitative A ussage h ier
zulässig ist, geringer als sonst zu sein.
In einer A bw andlung dieses A nsatzes m it b e­
grenzter 3 H -T hym idin-E inw irkung w urde das E r­
gebnis noch präzisiert. D abei zeigte sich, daß der
stärkste 3 H -T hym idin-E inbau zwischen der 6 . und
24. Stde. p.i. stattfand. E r vollzog sich ausschließlich
10 C. P. S t a n n e r s u . I. E. T il l , Biodiim. biophysica Acta
[Amsterdam] 37,406 [I960].
Abb. 7. HeLa-Zell-Syncytium 48 Stdn. nach Infektion mit
Herpesvirus-Stamm „Hofmeister“. 3H-Thymidin-Markierung
im Kerninnenraum. Randchromatin dunkel gefärbt,
0,5 ^uC/ml. Vergr.: 400-fach.
D E S O X Y R IB O N U C L E I N S Ä U R E IN H ERPES-VIR U S-INFIZIE RTEN ZELL EN
D iskussion
A n der V irusv erm eh ru n g des H erpes-sim plexV irus (H erpes virus h u m a n u s ), das als N ucleinsäure-K om ponente die DNS 4 enthält, ist der DNSStoffwechsel des Zellkernes w eitgehend m itbeteiligt.
F rü h e re U ntersuchungen stam m en von N e w t o n und
S t o k e r 1 1 sowie W i l d y und M ita r b b .12. Sie fanden,
daß bei dem zw ölfstündigen V erm ehrungszyklus
des H sV zwischen der 6 . und 9. Stde. p.i. ein A n­
stieg des D N S-G ehaltes beginnt. E r erreicht das
D oppelte des N orm alw ertes nicht infizierter K erne
nach 72 Stdn. p.i. Sie nehm en jedoch nicht an, daß
die gesam te DNS zum A ufbau neu er V irusteilchen
dient.
D ie durch die H sV -V erm ehrung h ervorgerufene
S tru k tu r-U m w andlung des Z ellkernes lä ß t einm al
das R andchrom atin und zum an d eren den m ik ro ­
skopisch stru k tu rlo s erscheinenden, schwach Feulgenpositiven Innenbereich des K ernes erkennen.
D arin ist elektronenoptisch das erste Erscheinen
inkom pletter V irusteilchen zu beobachten 1. F lu o res­
zenzm ikroskopische U ntersuchungen von L e b r u n 13
zeigten ebenfalls im In n eren des K ernes die erste
B ildung virusspezifischen M aterials.
D iese g enannten B eobachtungen erlau b en noch
keine Schlüsse d arü b e r, w ie sich die V irusverm eh­
ru n g zum DNS-Stoffwechsel verhält. N e w t o n und
S t o k e r verm uteten allerdings, daß es sich bei der
von ihnen beobachteten verm ehrten D N S-B ildung
um eine überschüssig p ro d u zierte Zell-DNS handeln
müsse.
U nsere B eobachtungen fü h re n zu folgender D is­
k ussion: Bei nicht infizierten Zellen ist das ^ - T h y ­
m idin an die chrom osom ale DNS gebunden, denn in
den verschiedenen M itose-Stadien sind n u r die C hro­
m osom en m a rk iert (A bb. 4 ) . W enn solche Zellen
nach 3 H -T hym idin-E inbau infiziert w urden, fand
sich die M arkierung im R and ch ro m atin w ieder
(A bb. 5 ) . D as gleiche gilt auch fü r Zellen, die zwi­
schen 3 H -T hym idin-E inbau u n d In fek tio n in A b­
w esenheit von 3 H -T hym idin m indestens zwei M itose­
zyklen durchlaufen haben. D arau s schließen w ir,
daß das R andchrom atin die ursprü n g lich zelleigene
DNS darstellt. W enn, w ie N e w t o n und M ita rb b . 1 4
11 A. A. N e w t o n , M. G. P. S t o k e r , Virology 5, 549 [1958].
12 P. W il d y , C. S m i t h , A. A. N e w t o n u . P. D e n d y , Virology
1 5 ,4 8 6 [1961].
13 J. L e b r u n , Virology 2, 496 [1956].
215
zeigen konnten, nach der Infektion ein A bbau der
Zell-DNS stattgefunden hat, d an n verbleiben nach
unseren Befunden die D NS-Bruchstücke in der
H auptsache im R andchrom atin.
Nach dem E in d rin g en des V irusgenom s in den
K ern bleibt ein 3 H -T hym idin-E inbau im R an d ch ro ­
m atin aus (A bb. 6 und 7 ) . D arau s erg ib t sich, daß
m it der V irusinfektion d er zelleigene D N S-Stoff­
wechsel unterbrochen w ird. Zu gleicher Zeit setzt im
K erninnenbereich, gem essen an d er T ritiu m m ark ie­
run g , ein n euer DNS-Stoffwechsel ein (A bb. 6
und 7 ) . D a in diesem Bezirk die H erpesvirus-N eub ild u n g abläuft 13, m uß die 3 H -Thym idin-A ufnahm e dam it in u n m ittelbarem Z usam m enhang
stehen. D as bedeutet, daß nach d er In fek tio n ein
DNS-Stoffwechsel n u r noch zum Zwecke d er V irusN eubildung erfolgt. D iese T hym idin-A ufnahm e im
zentralen K ernbereich erreicht ih r stärkstes A usm aß
zwischen 6 und 2 4 S tdn. p.infectionem . In g erin g e­
rem U m fang erstreckt sie sich jedoch noch bis
4 8 Stdn. p.infectionem . Im R and ch ro m atin u n te r­
bleibt sie dagegen ganz.
Ob an der V irus-N eubildung au ß e r dieser denovo-Synthese noch Bruchstücke der abgebauten
Zell-DNS teilnehm en, m uß d ahingestellt bleiben.
Nach unseren B eobachtungen (A bb. 5) k an n dieser
A nteil nicht erheblich sein, vorausgesetzt, daß sich
alle N ucleotide gleichartig v erhalten. Berücksich­
tig t m an die Ü b erlag eru n g des R andchrom atins
(A bb. 5 ) , so k an n es sich bei der M ark ieru n g im
K erninnenbereich n u r um geringe M engen handeln.
Diese Beobachtung findet eine U n terstü tzu n g in den
E rgebnissen von K it u n d D u b b s 15,1 6 m it V accine­
virus.
Im H inblick au f die U nterbrechung des zelleige­
nen DNS-Stoffwechsels nach der V iru sin fek tio n e r­
scheint es fraglich, ob solche Zellen noch zu w eiteren
M itosen fäh ig sind.
H errn Prof. Dr. T h . N a s e m a n n , Dermat. K linik der
Universität München, danken wir für die Überlassung
des Virusstammes, Frau Dr. A. S c h l e i c h und H errn
A. M e y e r , Institut für Exp. Krebsforschung, Heidel­
berg, für wertvolle, technische Ratschläge.
Die Arbeit wurde mit Unterstützung der D e u t ­
s c h e n F o r s c h u n g s g e m e i n s c h a f t durchge­
führt.
14
15
16
A. A. N e w t o n , P. D e n d y , C. L. S m i t h u . P. W il d y , Nature
[London] 194,886 [1962].
S . K i t u . D . R. D u b b s , Virology 18, 274 [1962] .
S . K i t u. D . R. D u b b s , Virology 18, 286 [1962].