BR 9550DSGER APPLIKATION Partikeltechnologie Analyse von Albumin mit dynamischer (DLS) und elektrophoretischer (ELS) Lichtstreuung Albumin: Ergebnisse: Albumin gehört wie andere Globuline zur Gruppe der globulären Proteine. Es hat im Organismus die Aufgabe, Wasser im Blut zu binden und damit den kolloidosmotischen Druck aufrecht zu erhalten. Albumin in seinen verschiedenen Herkunftsformen besteht aus ca. 580-590 Aminosäuren mit einem Gesamtmolekülgewicht von 66-69 kDa. Der isoelektrische Punkt liegt bei pH 4.7 (25°C). Die in den Abbildungen 1 und 2 gezeigten Ergebnisse belegen die gute, reproduzierbare Messung von Albumin. Die dynamische Streulichtmessung ermittelt reproduzierbar innerhalb von 60 s einen mittleren Durchmesser von 8.2 nm, was einem Molekulargewicht von ca. 68 kDa entspricht. Das Zetapotential der Probe (pH=6,9) liegt bei - 20 mV. Abildung 3 zeigt die Titrationskurve zur automatischen Ermittlung des isoelektrischen Punktes mit Hilfe des Autotitrators (DelsaTMNano C) Analyse: Zur Messung von BSA (bovine serum albumin) wurde das Zusammenfassung: Delsa™Nano C verwendet. Das Delsa™Nano C bestimmt Für eine exakte Ermittlung der Größe eines Proteins das Molekulargewicht über die dynamische Lichtstreuung, sowie ein schnelles Screening des Zustandes (Monowobei ein Detektionswinkel von 165° die Messung auch von mer, Dimer) Ist das Delsa™Nano C ideal geeignet. Auch hochkonzentrierten Proben ermöglicht. Das Molekulargedurch die Aussagen zum Ladungsverhalten lassen wicht kann im Bereich von sich wichtige Rückschlüsse Größenbestimmung von BSA (Auswertung nach Kumulantenmethode) 1•10 3 - 3•107 Da bestimmt werden. auf den Zustand des ProDie Ermittlung des Zetapotentials teins ermitteln. Darüber bzw. des isoelektrischen Punktes hinaus lassen sich über erfolgt mit dem gleichen Gerät über die Veränderung der die elektrophoretische Lichtstreuung Grösse in Abhängigkeit durch zusätzliches Anlegen eines von der Temperatur die elektrischen Feldes. Schmelzpunkte diverser Abb. 1 Messbedingungen: Die gekühlten Proben, die in einer Konzentration von 50 mg/ml vorliegen, werden auf 20°C gebracht und dann über einen 0,1 µm Whatman-Spritzenfilter filtriert. Zur Messung der Größenverteilung werden 20 µl der Probe unverdünnt in die „Small Volume Cell“ gegeben. Die Messzeit beträgt ca. 140 s und die Messungen wurde 3 mal bei einer Messtemperatur von 25°C wiederholt. Die Zetapotentialmessung wird in der Durchflusszelle in Kombination mit dem Delsa™Nano-Autotitrator durchgeführt. Dabei wird eine Spannung von 60 V an der Messzelle angelegt, aus der sich ein elektrisches Feld von 15, 65 V/cm ergibt. Die Auswertung erfolgt nach Smoluchowski. Zetapotentialbestimmung von BSA (pH= 6,9 ; T=25°C) Abb. 2 Proteine bestim- men. Bestimmung des isoelektrischen Punktes mittels automatischer Titrationskurve (DelsaTMNano AT) Abb. 3 Beckman Coulter GmbH Europark Fichtenhain B13, 47807 Krefeld, Telefon 02151 333-625, Fax 02151 333-631, [email protected]