Medizinische Mikrobiologie und Hygiene

Medizinische Mikrobiologie
und Hygiene
(Einführung-Färbungen)
Pharmazie/Lebensmittelchemie
Barbara Kahl
Sommersemester 2011
Organisatorisches
• 1. Kursplan:
Aushang: Schwarzes Brett
• 2. Fehlzeiten:
Max. 1 x unentschuldigt möglich
• 3. Klausur:
13.07.2011 (11:00 Uhr im L10 im Lehrgebäude)
20 Fragen (MC), mind. 60 % (12 Fragen)
Vorbesprechung, Skript, (Lehrbuch, Vorlesung)
• 4. Nachprüfung:
1. Nachklausur
2. Reguläre Klausur im Folgesemester
Medizinische Mikrobiologie und Hygiene
• 1. Hygiene (Theorie)
Do 8:15-9:00 (Ph und LCh: verpflichtend)
• 2. Medizinische Mikrobiologie (Theorie)
Mi 10:30-11:15 Vorlesung und Vorbesprechung für
das Praktikum
LCH Anwesenheitsbestätigung
durch Dozenten
• 3. Praktikum
11:30-13:00 Ph: Anwesenheit!
LCh: mit Wahlfach wie Ph
Kurstage
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1. Kurstag: Nativpräparat, einfache Färbung, Gramfärbung
2. Kurstag: Grampositive Kokken I
3. Kurstag: Grampositive Kokken II
4. Kurstag: Gramnegative Stäbchen I
5. Kurstag: Gramnegative Stäbchen II
6. Kurstag: Diphtherie, Listerien, Tuberkulose
7. Kurstag: Anaerobier, Sporenbildner
8. Kurstag: Antibiotika
9. Kurstag: Medizinische Parasitologie
10. Kurstag: Medizinische Mykologie
11. Kurstag: Hygiene I
12. Kurstag: Hygiene II
13. Kurstag: Virologie
14. Kurstag: Klausur
Kursskript
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Allgemeine Arbeitsvorschriften
Regeln zur Sicherheit
Reinigung der Arbeitsplätze
Methoden
Hintergrundinformationen
• Kurstage, heute ab S. 32
Bedeutung der Mikrobiologie
• WHO Statistik von 1999
– Mehr als 13 Millionen Todesfälle weltweit
durch Infektionskrankheiten, vor allem in den
Entwicklungsländern
• 6 Infektionen verursachen 90 % aller
Todesfälle
– Diarrhoe, Masern, Malaria, Pneumonie, HIV/Aids,
Tuberkulose
An das Robert-Koch Institut gemeldete Infektionen
2010 in Deutschland (Auswahl)
Infektionen
Influenza
Patienten
3.048
Meningokokken
348
Masern
723
TB
3.873
H. influenzae
171
Legionellen
629
Leptospiren
63
Listeriosen
349
Q-Fieber
250
Hepatitis A
723
Hepatitis B
679
Hepatitis C
4.813
www.rki.de
Quelle,
RKI,
Epidemiolog. Bulletin
Mikroorganismen
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Parasiten
Pilze
Bakterien
Viren
Größenvergleich verschiedener Mikroorganismen
Bandwurm
Würmer
1 cm
1 mm
Größenvergleich verschiedener Mikroorganismen
1 µm
1 nm
Relation Mikroorganismen/menschlicher Körper
• Menschlicher Körper: 10 % menschliche Zellen
90 % Mikroorganismen
• 1 x 1014 Zellen insgesamt
• 1 x 1013 Zellen davon menschlich
• 9 x 1013 Zellen Mikroorganismen
– Bakterien, Pilze, Viren, Parasiten
Bakterielle Zelle
Zellwand
DNA
50
50
50
30
30
30
Ribosomen
Zellmembran
Einteilung und
Identifizierung von
Bakterien
Bakterieneinteilung, morphologisch
Kokken
Stäbchen
Kettenkokken
Spirochäten
Haufenkokken
Hefen
Bakterieneinteilung nach der
Gramfärbung
Grampositiv
Gramnegativ
Kokken oder Stäbchen
Bakterielle Zellwand
Grampositive
Gramnegative
Fettsäuren
Zellwand
Peptidoglycan
(Murein)
40 Schichten
Zellmembran
1-2 Schichten
Porin
Lipid A
Zellwand
Zellmembran
äußere
Membran
Lipoproteine
Flußdiagramm zur bakteriellen Diagnostik
S. 127
Sicherheit im Kurssaal
Sicherheit im Kurssaal
•
Gefahrstoffe: Ethanol, Kristallviolett, Methylenblau
•
Offene Flamme (Bunsenbrenner)!
•
(Fakultativ) pathogene Mikroorganismen
•
NICHT: Essen, Trinken, Rauchen!
•
Lange Haare: zusammenbinden!
•
Schutzkittel tragen! Kittel schließen!
Siehe Skript S. 1-3
Am Ende jeder Stunde…….
Reinigung des Platzes am Ende jeder Stunde
-sichere Entsorgung kontaminierter Gegenstände
-Färbelösungen, Materialien (Objektträger, Ösen) auffüllen
-Wasser wechseln
-Färbewanne säubern (Zellstoff in gelbe Tonnen, mit neuem Zellstoff auffüllen)
Desinfektion:
-Arbeitsplatz mit Bacillol und weißen Tüchern desinfizieren
-Händedesinfektion
-Bei Unfällen immer sofort an Kurs-Assistenten wenden!
-Schwangere?
Entsorgung
Objektträger
Ösen
Handschuhe
Nachfüllen des Materials
Ihr Arbeitsplatz
Hinterer Kurssaal, rechts
Vorderer Kurssaal, rechts
Färbereagenzien
Wasser wechseln
Färbewanne säubern
Agarplatten, gebrauchter Zellstoff,
Usw.
Arbeitsplatz säubern
Hygienische Händedesinfektion
1.
2.
Einführung
Kurs
Bakteriolgischer Teil
Handwerkszeug
Mikroskop
Impföse
Agarplatten
Agarplatten
• dienen
–
–
–
–
–
Zur Anzucht von Bakterien
Blutagar (Vollmedium)
Selektivagar, Differenzierungsagar (Endo-Agar)
Schaedler Agar
und andere
• Beschriftung
– Mit einem wasserfesten Stift (z.B. Edding)
– Auf dem Boden der Agarplatte
• Vorsicht:
– Keine offenen Agarplatten
Kulturmedien
Medium/Agar
Verwendung
Dextrose-Bouillon
Universalmedium zur Anreicherung von Bakterien
Blut-Agar
Standardagar für die meisten klinisch relevanten
Bakterien und Pilze
McConkey-Agar
Selektivagar für Gram-negative Stäbchen durch
Gallensalze, enthält auch Laktose und einen
Farbindikator (auch: Differentialagar)
Kochblut-Agar
Agar für anspruchsvolle Erreger durch Erhitzen von
Blut
Plastik-Impföse
– Griff
– Öse
– dient
• zur Abimpfung von Bakterien
• zur Aufnahme eines definierten Inokulums
– „Drei-Ösen-Ausstrich“
zum Vereinzeln von Bakterien
- „Acht-Ösen-Ausstrich
zum gleichmäßigen Verteilung der Bakterien
Nativpräparat und einfache Färbung
Einfache Färbung
Gram-Färbung: nach Gram (1884)
Durchführung
Färbeschritt
Präparat trocknen und
hitzefixieren
Färbung mit Karbol-Gentianaviolett, 1-2 min
auf der Färbebank, abgießen
Beizung mit Lugol‘scher Lsg., 1 min,
abgießen
(Jod bildet mit Karbol-Gentianaviolett wasserunlösliche
Lacke, die in Alkohol nur mässig löslich sind)
Entfärbung (Differenzierung) mit Alkohol, 30 s,
gut mit Wasser spülen
(Gram-pos.:
halten den Farbstoff-Jod-Komplex zurück
Gram-neg.: durch Alkohol entfärbt)
Gegenfärbung mit Fuchsin, 1 min,
Spülen mit Wasser, trocknen
Aussehen der Bakterien im Mikroskop
grampositiv
gramnegativ
Ergebnis der Gramfärbung
Bakterien-Spezies
Verhalten in der
Morphologie
Gramfärbung
(Kokken/Stäbchen)
Staphylococcus aureus
Escherichia coli
Pseudomonas aeruginosa
Streptococcus sp.
Moraxella catarrhalis
Seite 33
Gefärbte Präparate
• Mit Immersionsöl mikroskopieren
• 100 x fache Objektiv-Vergrößerung,
Blende bei gefärbten Präparaten offen
(Mit Öl immer nur das 100-er Objektiv
verwenden!!!)
• Präparate zeichnen und beschreiben
Tischeinteilung
• Gibt es noch Fragen?
• Viel Spaß und viel Erfolg im Kurs!!!