Cytomegalie-Virus (CMV-) DNA-Nachweis mittels quantitativer PCR

Nr. 134
Cytomegalie-Virus (CMV-) DNA-Nachweis mittels quantitativer PCR
Klinik
Das humane Cytomegalievirus (CMV) kann bei einer Infektion im Blut, im Urin, im Gewebe und in praktisch allen Sekretflüssigkeiten nachgewiesen werden. Die Übertragung
erfolgt oral, parenteral, sexuell, intrauterin oder perinatal.
Die Primärinfektion verläuft in der Regel asymptomatisch.
Selten kommt es dabei zu einem mononucleoseähnlichem
Krankheitsbild mit Fieber, Hepatis und Lymphknotenschwellung. Das Virus persistiert im Körper. Eine Infektion in der Schwangerschaft kann zu Fetopathien führen.
Schwere Verläufe werden bei Reaktivierung unter immunsupprimierten Patienten beobachtet.
Methodik
Beim quantitativen CMV-Nachweis mittels Real-Time PCR
werden spezifische Bereiche aus dem Erregergenom amplifiziert und mit Hilfe von Fluoreszenzfarbstoffen detektiert.
Die Farbstoffe sind in der Regel an Oligonukleotid-Sonden
gekoppelt, die spezifisch an das PCR-Amplifikat binden. Die
Detektion der Fluoreszenzintensitäten im Verlauf der RealTime PCR ermöglicht den Nachweis und die Quantifizierung
der Produkte, ohne die Probenröhrchen nach der PCR wieder öffnen zu müssen. Dies eliminiert die Gefahr von carryover Kontamination. Die Methode eignet sich besonders für
die Cito-Diagnostik, da die Auswertung schon im Laufe der
Analyse (online) möglich ist.
Die Sensitivität der Methode ist vergleichbar mit jener,
der von uns bisher angewandten qualitativen Methode.
Mit unserem Standardprotokoll liegt die untere
Nachweisgrenze bei ca. 110 IU/ml. Die Ergebnisangabe
erfolgt quantitativ. Die Resultate werden entweder
als
nicht
nachweisbar/negativ
(kein
Nachweis
von Virus-DNA) oder mit dem gemessenen Wert als IU/ml
(bei positivem Nachweis) angegeben. Dies dient der emp-
findlicheren Erkennung einer Virämie in der Frühphase
einer akuten Infektion, der verbesserten Differenzierung
latenter chronischer CMV-Infektionen sowie der Verlaufskontrolle unter antiviraler Therapie. Die Spezifität der Methode wird in erster Linie durch die Auswahl der Primer und
Sonden sowie die Wahl stringenter Reaktionsbedingungen
gewährleistet.
Material
Für die Untersuchung sind die folgenden Materialien zulässig:
EDTA-Blut/Plasma
mind. 2 ml
EDTA-Blut
Bitte verwenden Sie für molekularbiologische Untersuchungen ein separates Blut-Röhrchen.
Urin, Liquor, Punktat, Fruchtwasser mind. 2ml
Transport
Probentransport zum Labor bei Raumtemperatur innerhalb
von 24 Stunden.
Aufbewahrung in der Praxis bei 4°-8° C.
Abrechnung
Die Möglichkeit der Abrechnung im privatärztlichen Bereich
ist gegeben. Bei Kassenpatienten ist die CMV-PCR nur bei
Immunsuppression möglich. (Bitte Befreiungsziffer angeben)
Literatur
•
Berger A and Preiser W. Viral genome quantification as a tool for improving patient management: the example of HIV, HBV, HCV and CMV.
Journal of antimicrobial Chemotherapy 49;719-721, 2002.
Diag-Info: 134 Version: 2
T. Ziegler
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