deutsch - Thermo Fisher Scientific
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DEUTSCH Thermo Scientific™ Richard-Allan Scientific Chromaview® – Erweitertes Färben Gram-Färbemittel Gewebe Gebrauchsanweisung Technische Beschreibung Technische Hinweise Mikrotomie Fertigen Sie Schnittpräparate von 4-6 Mikron an. Fixierung Keine besonderen Anforderungen. Eine Formalinfixierung ist ausreichend. Wenn es bei der Kristallviolettlösung zur Ausfällung kommt, stellen Sie die Lösung in einen warmen Ofen (ca. 35 ºC) und rühren Sie sie. Die Gram-Jod-Lösung wird mit der Zeit möglicherweise schwächer. Wahrscheinliche Wirkungsweise Technisches Verfahren Standardfärbeprotokoll 1. Schnitte entparaffinieren und bis entionisiertem Wasser hydrieren. 2. Färben Sie die Schnittpräparate 1 Minute lang in Kristallviolettlösung. 3. Spülen Sie die Schnittpräparate 1 Minuten lang in laufendem Wasser. 4. Geben Sie die Schnittpräparate 5 Minuten lang in Gram-Jod-Lösung. 5. Spülen Sie die Schnittpräparate 30 Sekunden lang in laufendem Wasser. 6. Differenzieren Sie die Schnittpräparate in Entfärbungslösung. 7. Spülen Sie die Schnittpräparate 30 Sekunden lang in laufendem Wasser. 8. Färben Sie die Schnittpräparate 30 Sekunden lang in Safranin-O-Färbelösung. 9. Spülen Sie die Schnittpräparate 30 Sekunden lang in laufendem Wasser. 10. Färben Sie die Schnittpräparate 20 Sekunden lang in Tartrazin-O-Färbelösung. 11. Dehydrieren Sie die Schnittpräparate zweimal in frischem wasserfreien Alkohol, jeweils 10 Mal eintauchen. 12. Klären Sie die Schnittpräparate zweimal jeweils 1 Minute lang mit frischem Klärmittel und decken Sie das Präparat ein. Ergebnisse Elastische Fasern - schwarz Grampositive Organismen - blau Gramnegative Organismen - rot Hintergrund - gelb Bakterien können basierend auf der Stärke der peptidoglycanhaltigen Zellwand in zwei Gruppen unterteilt werden. Gram-positive Bakterien haben eine dicke peptidoglycanhaltige Zellwand. Gram-negative Bakterien haben eine dünne peptidoglycanhaltige Zellwand. Sowohl Gram-positive als auch Gram-negative Bakterien werden mit dem Farbstoff aus Kristallviolett-Färbelösung und Jodbeize gefärbt. Jedoch wird der Farbstoff beim Spülen mit Entfärbungslösung von dünnwandigen, Gram-negativen Bakterien vollständig abgespült. Die Zellwand wird mit der Safranin-O-Färbelösung gegengefärbt. Durch die kurze Dauer der Spülung mit der Entfärbungslösung verbleibt der Farbstoff in der dickeren, Gram-positiven Zellwand. Bei der Spülung des Objektträgers mit der Entfärbungslösung ist vorsichtig vorzugehen. Durch längere Spülung mit der Entfärbungslösung kann der Kristallviolett-Farbstoff ebenso wie bei den Gram-negativen Bakterien auch aus der dickeren Zellwand der Gram-positiven Bakterien ausgewaschen werden. Die Gewebeelemente werden mit dem gelben Farbstoff Tartrazin gegengefärbt. Literaturverzeichnis 1. Bancroft, J.D. und Stevens, A. Theory and Practice of Histological Techniques. Churchill Livingstone, New York, NY, 1977. 2. Sheehan, D.C. und Hrapchak, B.B. Theory and Practice of Histotechnology, 2. Ausgabe. Mosby, St. Louis, MO, 1980. 3. Thompson, C.C. Selected Histochemical and Histopathological Methods. Springfield, IL, 1966. 4. Lillie, R.D., H.J. Conn’s Biological Stains. Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 1972. Bestellinformation Produkt Größe MengeArt-Nr Gram-Färbe-Kit - Gewebe 1 Kit 1 87018 Tartrazin-Färbelösung500ml 1 88012 Kristallviolettlösung500ml 1 88101 Diskussion Gram-Jod-Lösung500ml 1 88102 Alle Färbereagenzien sollten bei Zimmertemperatur aufbewahrt werden. Das Gramfärbereagenz dient nur zum In-vitro-Gebrauch. Gesundheits- und Sicherheitsinformationen entnehmen Sie dem Materialsicherheitsdatenblatt. Alle Reagenzien sind stabil und sollten unter normalen Lagerbedingungen keine Ausfällungen bilden. Es wird empfohlen, die Gram-Jod-Lösung und Entfärbungslösung nach dem Gebrauch wegzuwerfen. Die Kristallviolettlösung, Safranin-O-Färbelösung und die Tartrazin-Färbelösung können falls gewünscht gefiltert und wiederverwendet werden. Die Färbemittel sind gebrauchsfertig und sollten nicht verdünnt werden. Alle in diesen Formeln verwendeten Färbemittel sind von der US-Kommission für biologische Farbstoffe (Biological Stain Commission) zertifiziert. Safranin-O-Färbelösung500ml 1 88103 Entfärbungslösung500ml 1 88104 ©2013 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. All trademarks are the property of Thermo Fisher Scientific Inc. and its subsidiaries. Anatomical Pathology IS87018DE R5/13 Richard-Allan Scientific Subsidiary of Thermo Fisher Scientific 4481 Campus Drive, Kalamazoo, MI 49008 Phone: 1 (800) 522-7270 Phone: + 1 (269) 544-5600 www.thermoscientific.com/pathology Thermo Shandon Limited Subsidiary of Thermo Fisher Scientific Tudor Road, Manor Park, Runcorn, Cheshire WA7 1TA, UK Phone: +44 (0) 1928 534 050 Fax: + 44 (0) 1928 534 049
