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Thermo Scientific™ Richard-Allan Scientific Chromaview® – Erweitertes Färben
Gram-Färbemittel Gewebe
Gebrauchsanweisung
Technische Beschreibung
Technische Hinweise
Mikrotomie
Fertigen Sie Schnittpräparate von 4-6 Mikron an.
Fixierung
Keine besonderen Anforderungen. Eine Formalinfixierung ist ausreichend.
Wenn es bei der Kristallviolettlösung zur Ausfällung kommt, stellen Sie die Lösung in einen warmen Ofen
(ca. 35 ºC) und rühren Sie sie. Die Gram-Jod-Lösung wird mit der Zeit möglicherweise schwächer.
Wahrscheinliche Wirkungsweise
Technisches Verfahren
Standardfärbeprotokoll
1. Schnitte entparaffinieren und bis entionisiertem Wasser hydrieren.
2. Färben Sie die Schnittpräparate 1 Minute lang in Kristallviolettlösung.
3. Spülen Sie die Schnittpräparate 1 Minuten lang in laufendem Wasser.
4. Geben Sie die Schnittpräparate 5 Minuten lang in Gram-Jod-Lösung.
5. Spülen Sie die Schnittpräparate 30 Sekunden lang in laufendem Wasser.
6. Differenzieren Sie die Schnittpräparate in Entfärbungslösung.
7. Spülen Sie die Schnittpräparate 30 Sekunden lang in laufendem Wasser.
8. Färben Sie die Schnittpräparate 30 Sekunden lang in Safranin-O-Färbelösung.
9. Spülen Sie die Schnittpräparate 30 Sekunden lang in laufendem Wasser.
10. Färben Sie die Schnittpräparate 20 Sekunden lang in Tartrazin-O-Färbelösung.
11. Dehydrieren Sie die Schnittpräparate zweimal in frischem wasserfreien Alkohol, jeweils 10 Mal eintauchen.
12. Klären Sie die Schnittpräparate zweimal jeweils 1 Minute lang mit frischem Klärmittel und decken Sie das
Präparat ein.
Ergebnisse
Elastische Fasern - schwarz
Grampositive Organismen - blau
Gramnegative Organismen - rot
Hintergrund - gelb
Bakterien können basierend auf der Stärke der peptidoglycanhaltigen Zellwand in zwei Gruppen unterteilt werden.
Gram-positive Bakterien haben eine dicke peptidoglycanhaltige Zellwand. Gram-negative Bakterien haben eine
dünne peptidoglycanhaltige Zellwand. Sowohl Gram-positive als auch Gram-negative Bakterien werden mit
dem Farbstoff aus Kristallviolett-Färbelösung und Jodbeize gefärbt. Jedoch wird der Farbstoff beim Spülen mit
Entfärbungslösung von dünnwandigen, Gram-negativen Bakterien vollständig abgespült. Die Zellwand wird mit der
Safranin-O-Färbelösung gegengefärbt. Durch die kurze Dauer der Spülung mit der Entfärbungslösung verbleibt
der Farbstoff in der dickeren, Gram-positiven Zellwand. Bei der Spülung des Objektträgers mit der Entfärbungslösung ist vorsichtig vorzugehen. Durch längere Spülung mit der Entfärbungslösung kann der Kristallviolett-Farbstoff
ebenso wie bei den Gram-negativen Bakterien auch aus der dickeren Zellwand der Gram-positiven Bakterien
ausgewaschen werden. Die Gewebeelemente werden mit dem gelben Farbstoff Tartrazin gegengefärbt.
Literaturverzeichnis
1. Bancroft, J.D. und Stevens, A. Theory and Practice of Histological Techniques. Churchill Livingstone, New York,
NY, 1977.
2. Sheehan, D.C. und Hrapchak, B.B. Theory and Practice of Histotechnology, 2. Ausgabe. Mosby, St. Louis, MO,
1980.
3. Thompson, C.C. Selected Histochemical and Histopathological Methods. Springfield, IL, 1966.
4. Lillie, R.D., H.J. Conn’s Biological Stains. Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 1972.
Bestellinformation
Produkt
Größe
MengeArt-Nr
Gram-Färbe-Kit - Gewebe
1 Kit
1
87018
Tartrazin-Färbelösung500ml
1
88012
Kristallviolettlösung500ml
1
88101
Diskussion
Gram-Jod-Lösung500ml
1
88102
Alle Färbereagenzien sollten bei Zimmertemperatur aufbewahrt werden. Das Gramfärbereagenz dient nur zum
In-vitro-Gebrauch. Gesundheits- und Sicherheitsinformationen entnehmen Sie dem Materialsicherheitsdatenblatt. Alle Reagenzien sind stabil und sollten unter normalen Lagerbedingungen keine Ausfällungen bilden.
Es wird empfohlen, die Gram-Jod-Lösung und Entfärbungslösung nach dem Gebrauch wegzuwerfen. Die
Kristallviolettlösung, Safranin-O-Färbelösung und die Tartrazin-Färbelösung können falls gewünscht gefiltert
und wiederverwendet werden. Die Färbemittel sind gebrauchsfertig und sollten nicht verdünnt werden. Alle in
diesen Formeln verwendeten Färbemittel sind von der US-Kommission für biologische Farbstoffe (Biological
Stain Commission) zertifiziert.
Safranin-O-Färbelösung500ml
1
88103
Entfärbungslösung500ml
1
88104
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