Richard-Allan Scientific Chromaview Advanced Testing Gram Stain
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DEUTSCH Thermo Scientific™ Richard-Allan Scientific Chromaview® – Erweitertes Färben Gram-Färbung Film Gebrauchsanweisung Technische Beschreibung Wahrscheinliche Wirkungsweise Vorbereitung Einen einschichtigen Ausstrich auf einen sauberen Objektträger aus Glas auftragen. Fixierung Objektträger mit absolutem Methanol fixieren oder über Flamme hitzefixieren. Qualitätskontrolle Der Gebrauch von Kontrollträgern von denen bekannt ist, dass sie grampositive und gramnegative Organismen enthalten, wird empfohlen. Bakterien können basierend auf der Stärke der peptidoglycanhaltigen Zellwand in zwei Gruppen unterteilt werden. Gram-positive Bakterien haben eine dicke peptidoglycanhaltige Zellwand. Gram-negative Bakterien haben eine dünne peptidoglycanhaltige Zellwand. Sowohl Gram-positive als auch Gram-negative Bakterien werden mit dem Farbstoff aus Kristallviolett-Färbelösung und Jodbeize gefärbt. Jedoch wird der Farbstoff beim Spülen mit Entfärbungslösung von dünnwandigen, Gram-negativen Bakterien vollständig abgespült. Die Zellwand wird mit der Safranin-O-Färbelösung gegengefärbt. Durch die kurze Dauer der Spülung mit der Entfärbungslösung verbleibt das Farbstoffbad in der dickeren, Gram-positiven Zellwand. Bei der Spülung des Objektträgers mit der Entfärbungslösung ist vorsichtig vorzugehen. Durch längere Spülung mit der Entfärbungslösung kann das KristallviolettFarbstoffbad ebenso wie bei den Gram-negativen Bakterien auch aus der dickeren Zellwand der Gram-positiven Bakterien ausgewaschen werden. Technisches Verfahren Standard-Färbeverfahren 1. Ausstrich 1 Minute mit Kristallviolett-Lösung bedecken. Optionaler Schritt: 5 Tropfen Natriumbicarbonat hinzufügen, um die Kristallviolett-Aufnahme zu verstärken. 2. Überflüssige Farbe 30 Sekunden unter entionisiertem Wasser abspülen. 3. Ausstrich 1 Minute mit Gram Jodlösung bedecken. 4. Überflüssige Farbe 30 Sekunden unter entionisiertem Wasser abspülen. 5. Ausstrich in Entfärbelösung differenzieren. 6. 30 Sekunden mit entionisiertem Wasser spülen. 7. Ausstrich 1 Minute mit Safranin O-Lösung bedecken. 8. Überflüssige Farbe 30 Sekunden unter entionisiertem Wasser abspülen. 9. Objektträger mit Löschpapier abtupfen. 10. Mikroskopisch untersuchen. Literaturverzeichnis 1. Bancroft, J.D. und Stevens, A. Theory and Practice of Histological Techniques. Churchill Livingstone, New York, NY, 1977. 2. Volk, W.A. Essentials of Medical Microbiology. J.B. Lippincott Company, Philadelphia, PA, 1982. 3. Manual of Clinical Microbiology of the American Society for Microbiology, 30-45: 1970. 4. Hucker G.J. und Conn, H.J. Further Studies on the Methods of Gram Staining. NY Agric Exp Stain Technology Bulletin. No. 128, 1927. 5. Cutlin, B.W. 1975. Cellular Elongation Under the Influence of Antibacterial Agents: Way to Differentiate Coccobacilli from Cocci. J. Clin, Micro 1:102-105. Bestellinformation Produkt Größe MengeArt-Nr. Gram-Färbe-Kit (Film) 1 Kit 1 87101 Kristallviolett-Lösung 500 ml 1 88101 Ergebnisse Gram Jodlösung 500 ml 1 88102 Grampositiver Organismus - Blaufärbung Gramnegativer Organismus - Rotfärbung Safranin O-Lösung 500 ml 1 88103 Entfärbelösung 500 ml 1 88104 Diskussion Natriumcarbonat-Lösung 8 ml 2/cs. 88116 Alle Färbereagenzien sollten bei Raumtemperatur gelagert werden. Die Reagenzien für die Gram-Färbung sind nur für “In-vitro” Diagnostik bestimmt. Bitte das Materialsicherheitsdatenblatt bezüglich der Sicherheits- und Gesundheitsinformationen konsultieren. Alle Reagenzien sind stabil und sollten bei normalen Lagerbedingungen keinen Niederschlag bilden. Die Lösungen sind gebrauchsfertig und sollten nicht verdünnt werden. Alle Farbstoffe dieser Ansätze sind von der Biological Stain Commission zertifiziert. Technische Hinweise Bei einer Ausfällung der Kristallviolett-Lösung diese in einen warmen Ofen (bei ungefähr 35 °C) stellen und umrühren. Gram Jodlösung kann über die Zeit hinweg an Wirksamkeit einbüßen. Der fertige Objektträger ist unbegrenzt haltbar Wird die Gram-Färbung mit einer Bakterienkultur durchgeführt, ist das Alter der Kultur zu berücksichtigen. Diese kann den Grad der grampositiven Färbung beeinflussen. Antibakterielle Behandlungen können ebenfalls die grampositive Farbgebung beeinflussen – wobei zu bedenken ist, dass eine übermäßige Entfärbung wahrscheinlicher ist. ©2013 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. All trademarks are the property of Thermo Fisher Scientific Inc. and its subsidiaries. Anatomical Pathology IS87101DE R4/13 Richard-Allan Scientific Subsidiary of Thermo Fisher Scientific 4481 Campus Drive, Kalamazoo, MI 49008 Phone: 1 (800) 522-7270 Phone: + 1 (269) 544-5600 www.thermoscientific.com/pathology Thermo Shandon Limited Subsidiary of Thermo Fisher Scientific Tudor Road, Manor Park, Runcorn, Cheshire WA7 1TA, UK Phone: +44 (0) 1928 534 050 Fax: + 44 (0) 1928 534 049
