deutsch - Thermo Fisher Scientific

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Thermo Scientific™ Richard-Allan Scientific Chromaview® – Erweitertes Färben
Gram-Färbung Film
Gebrauchsanweisung
Technische Beschreibung
Wahrscheinliche Wirkungsweise
Vorbereitung
Einen einschichtigen Ausstrich auf einen sauberen Objektträger aus Glas auftragen.
Fixierung
Objektträger mit absolutem Methanol fixieren oder über Flamme hitzefixieren.
Qualitätskontrolle
Der Gebrauch von Kontrollträgern von denen bekannt ist, dass sie grampositive und gramnegative Organismen
enthalten, wird empfohlen.
Bakterien können basierend auf der Stärke der peptidoglycanhaltigen Zellwand in zwei Gruppen unterteilt werden.
Gram-positive Bakterien haben eine dicke peptidoglycanhaltige Zellwand. Gram-negative Bakterien haben eine
dünne peptidoglycanhaltige Zellwand. Sowohl Gram-positive als auch Gram-negative Bakterien werden mit
dem Farbstoff aus Kristallviolett-Färbelösung und Jodbeize gefärbt. Jedoch wird der Farbstoff beim Spülen mit
Entfärbungslösung von dünnwandigen, Gram-negativen Bakterien vollständig abgespült. Die Zellwand wird mit der
Safranin-O-Färbelösung gegengefärbt. Durch die kurze Dauer der Spülung mit der Entfärbungslösung verbleibt
das Farbstoffbad in der dickeren, Gram-positiven Zellwand. Bei der Spülung des Objektträgers mit der Entfärbungslösung ist vorsichtig vorzugehen. Durch längere Spülung mit der Entfärbungslösung kann das KristallviolettFarbstoffbad ebenso wie bei den Gram-negativen Bakterien auch aus der dickeren Zellwand der Gram-positiven
Bakterien ausgewaschen werden.
Technisches Verfahren
Standard-Färbeverfahren
1. Ausstrich 1 Minute mit Kristallviolett-Lösung bedecken.
Optionaler Schritt: 5 Tropfen Natriumbicarbonat hinzufügen, um die Kristallviolett-Aufnahme zu
verstärken.
2. Überflüssige Farbe 30 Sekunden unter entionisiertem Wasser abspülen.
3. Ausstrich 1 Minute mit Gram Jodlösung bedecken.
4. Überflüssige Farbe 30 Sekunden unter entionisiertem Wasser abspülen.
5. Ausstrich in Entfärbelösung differenzieren.
6. 30 Sekunden mit entionisiertem Wasser spülen.
7. Ausstrich 1 Minute mit Safranin O-Lösung bedecken.
8. Überflüssige Farbe 30 Sekunden unter entionisiertem Wasser abspülen.
9. Objektträger mit Löschpapier abtupfen.
10. Mikroskopisch untersuchen.
Literaturverzeichnis
1. Bancroft, J.D. und Stevens, A. Theory and Practice of Histological Techniques. Churchill Livingstone, New York,
NY, 1977.
2. Volk, W.A. Essentials of Medical Microbiology. J.B. Lippincott Company, Philadelphia, PA, 1982.
3. Manual of Clinical Microbiology of the American Society for Microbiology, 30-45: 1970.
4. Hucker G.J. und Conn, H.J. Further Studies on the Methods of Gram Staining. NY Agric Exp Stain Technology
Bulletin. No. 128, 1927.
5. Cutlin, B.W. 1975. Cellular Elongation Under the Influence of Antibacterial Agents: Way to Differentiate
Coccobacilli from Cocci. J. Clin, Micro 1:102-105.
Bestellinformation
Produkt
Größe
MengeArt-Nr.
Gram-Färbe-Kit (Film)
1 Kit
1
87101
Kristallviolett-Lösung
500 ml
1
88101
Ergebnisse
Gram Jodlösung
500 ml
1
88102
Grampositiver Organismus - Blaufärbung
Gramnegativer Organismus - Rotfärbung
Safranin O-Lösung
500 ml
1
88103
Entfärbelösung
500 ml
1
88104
Diskussion
Natriumcarbonat-Lösung
8 ml
2/cs.
88116
Alle Färbereagenzien sollten bei Raumtemperatur gelagert werden. Die Reagenzien für die
Gram-Färbung sind nur für “In-vitro” Diagnostik bestimmt. Bitte das Materialsicherheitsdatenblatt bezüglich der
Sicherheits- und Gesundheitsinformationen konsultieren. Alle Reagenzien sind stabil und sollten bei normalen
Lagerbedingungen keinen Niederschlag bilden. Die Lösungen sind gebrauchsfertig und sollten nicht verdünnt
werden. Alle Farbstoffe dieser Ansätze sind von der Biological Stain Commission zertifiziert.
Technische Hinweise
Bei einer Ausfällung der Kristallviolett-Lösung diese in einen warmen Ofen (bei ungefähr 35 °C) stellen und
umrühren. Gram Jodlösung kann über die Zeit hinweg an Wirksamkeit einbüßen. Der fertige Objektträger ist
unbegrenzt haltbar Wird die Gram-Färbung mit einer Bakterienkultur durchgeführt, ist das Alter der Kultur zu
berücksichtigen. Diese kann den Grad der grampositiven Färbung beeinflussen. Antibakterielle Behandlungen
können ebenfalls die grampositive Farbgebung beeinflussen – wobei zu bedenken ist, dass eine übermäßige
Entfärbung wahrscheinlicher ist.
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