Aus dem Institut für Pathologie der Berufsgenossenschaftlichen Kliniken Bergmannsheil - Universitätsklinik der Ruhr-Universität Bochum Direktor: Prof. Dr. med. K.-M. Müller Fibromatosen des Weichgewebes: Charakterisierung der Tumormatrix und klinisch-pathologische Korrelationen Inaugural- Dissertation zur Erlangung des Doktorgrades der Medizin einer Hohen Medizinischen Fakultät der Ruhr-Universität Bochum vorgelegt von Marlene Helwing aus Stettin 2003 Dekan: Prof. Dr. med. G. Muhr Referent: PD Dr. med. C. Kuhnen Korreferent: PD Dr. med. J. Baier Tag der Mündlichen Prüfung: 22.07.2004 Diese Arbeit sei Bartos Helwing und Elisabeth und Richard Benkowski gewidmet -4- INHALTSVERZEICHNIS TABELLENVERZEICHNIS .............................................................................................................. 7 ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS........................................................................................................ 8 1 EINLEITUNG.............................................................................................................................. 9 1.1 AGGRESSIVE FIBROMATOSEN ................................................................................................... 9 1.1.1 Historische Daten ............................................................................................................... 9 1.1.2 Übersicht zum Krankheitsbild............................................................................................ 9 1.1.3 Ätiologie........................................................................................................................... 11 1.1.4 Pathogenese...................................................................................................................... 12 1.1.5 Myofibroblasten ............................................................................................................... 13 1.1.6 Klinisches Verhalten ........................................................................................................ 15 1.1.7 Gardner Syndrom ............................................................................................................. 16 1.1.8 Tumorlokalisation ............................................................................................................ 16 1.1.9 Rezidivhäufigkeit ............................................................................................................. 17 1.1.10 Makroskopische Pathologie ......................................................................................... 18 1.1.11 Histopathologie ............................................................................................................ 22 1.1.12 Therapiemöglichkeiten der tiefen Fibromatosen.......................................................... 24 1.1.13 Differentialdiagnose ..................................................................................................... 25 1.2 SUPERFIZIELLE FIBROMATOSEN .............................................................................................. 26 1.2.1 Morbus Dupuytren ........................................................................................................... 26 1.2.1.1 Historische Daten ..................................................................................................... 26 1.2.1.2 Übersicht zum Krankheitsbild.................................................................................. 26 1.2.1.3 Ätiologie................................................................................................................... 27 1.2.1.4 Klinisches Verhalten ................................................................................................ 28 1.2.1.5 Makropathologie ...................................................................................................... 29 1.2.1.6 Histopathologie ........................................................................................................ 30 1.2.1.7 Differentialdiagnose ................................................................................................. 31 1.3 ANGIOGENESE......................................................................................................................... 32 1.4 MIB-1..................................................................................................................................... 33 1.5 CD-31..................................................................................................................................... 34 1.6 ZIELSETZUNG UND FRAGESTELLUNGEN .................................................................................. 35 2 MATERIAL UND METHODEN ............................................................................................. 37 2.1 UNTERSUCHUNGSGUT ............................................................................................................. 37 2.1.1 Patientenübersicht ............................................................................................................ 38 2.2 METHODEN ............................................................................................................................. 40 2.2.1 Histomorphologische Untersuchungsmethoden............................................................... 40 2.2.1.1 HE-Färbung.............................................................................................................. 40 2.2.1.2 Berliner-Blau-Reaktion ............................................................................................ 41 2.2.1.3 EvG-Färbung............................................................................................................ 41 2.2.1.4 Silberfärbung nach Gomorri..................................................................................... 42 2.2.2 Immunhistochemische Methoden..................................................................................... 43 2.2.2.1 APAAP-Methode ..................................................................................................... 44 2.2.3 Auswertung aller Präparate .............................................................................................. 46 2.2.3.1 Auswertung immunhistochemischer Reaktionen mit dem Marker CD-31 / Mikrogefäßdichte......................................................................................................................... 46 2.2.3.2 Auswertung der immunhistochemischen Reaktionen mit dem Marker MiB-1 ........ 47 2.3 STATISTISCHE AUSWERTUNG .................................................................................................. 48 3 ERGEBNISSE............................................................................................................................ 49 3.1 ERGEBNISSE ZU PATIENTENDATEN ......................................................................................... 49 3.1.1 Ergebnisse zu Patientenalter und Geschlechtsverteilung im Gesamtkollektiv................. 49 3.1.2 Geschlechtsverteilung bei Patienten mit aggressiven Fibromatosen................................ 49 3.1.3 Altersverteilung bei Patienten mit aggressiven Fibromatosen ......................................... 50 -53.1.4 Geschlechtsverteilung bei Patienten mit Morbus Dupuytren ........................................... 51 3.1.5 Altersverteilung bei Patienten mit Morbus Dupuytren .................................................... 51 3.2 KLINISCH-PATHOLOGISCHE DATEN VON 33 AGGRESSIVEN FIBROMATOSEN ........................... 52 3.2.1 Tumorgröße...................................................................................................................... 52 3.2.2 Tumorlokalisation ............................................................................................................ 52 3.2.3 Resektionsstatus ............................................................................................................... 53 3.2.4 Adjuvante Therapie .......................................................................................................... 54 3.3 ERGEBNISSE DER LICHTMIKROSKOPISCHEN UNTERSUCHUNGEN ............................................. 54 3.3.1 Histopathologisches Erscheinungsbild der aggressiven Fibromatosen ............................ 54 3.3.2 Histopathologisches Erscheinungsbild der superfiziellen Fibromatosen ......................... 55 3.3.3 Histopathologisches Erscheinungsbild der Narben.......................................................... 56 3.4 NUKLEOLENANZAHL ............................................................................................................... 57 3.4.1 Nukleolenanzahl in den Zellen der aggressiven Fibromatosen ........................................ 57 3.4.2 Nukleolenanzahl in den Zellen des Morbus Dupuytren ................................................... 57 3.4.3 Nukleolenanzahl in den Zellen der Narben...................................................................... 57 3.5 MITOSEN ................................................................................................................................. 58 3.5.1 Mitosefiguren in aggressiven Fibromatosen .................................................................... 58 3.5.2 Mitosefiguren im Morbus Dupuytren............................................................................... 58 3.5.3 Mitosefiguren in Narben .................................................................................................. 58 3.6 ERYTHROZYTENEXTRAVASATE............................................................................................... 59 3.6.1 Erythrozytenextravasate in aggressiven Fibromatosen .................................................... 59 3.6.2 Erythrozytenextravasate im Morbus Dupuytren .............................................................. 59 3.6.3 Erythrozytenextravasate in Narben .................................................................................. 59 3.7 ENTZÜNDUNGSINFILTRATE ..................................................................................................... 60 3.7.1 Entzündungsinfiltrate in aggressiven Fibromatosen ........................................................ 60 3.7.2 Entzündungsinfiltrate im Morbus Dupuytren................................................................... 60 3.7.3 Entzündungsinfiltrate in Narben ...................................................................................... 60 3.8 ENTWICKLUNG DER AGGRESSIVEN FIBROMATOSEN IM RAHMEN EINER GRAVIDITÄT ............. 63 3.9 MULTIZENTRISCHE UND FAMILIÄRE AGGRESSIVE FIBROMATOSEN ......................................... 63 3.10 MORPHOLOGIE NACH GORE-TEX-IMPLANTATION .................................................................. 64 3.11 HÄMOSIDERINABLAGERUNGEN ............................................................................................... 66 3.11.1 Hämosiderinablagerungen in aggressiven Fibromatosen ............................................. 66 3.11.2 Hämosiderinablagerungen im Morbus Dupuytren ....................................................... 67 3.11.3 Hämosiderinablagerungen in Narben........................................................................... 67 3.12 FASERDARSTELLUNGEN (KOLLAGENFASERN UND ELASTISCHE FASERN)................................ 68 3.12.1 Elastische Fasern in aggressiven Fibromatosen ........................................................... 68 3.12.2 Elastische Fasern im Morbus Dupuytren ..................................................................... 69 3.12.3 Elastische Fasern in Narben ......................................................................................... 69 3.13 DARSTELLUNG DER RETIKULINFASERN .................................................................................. 73 3.13.1 Retikulinfasern in aggressiven Fibromatosen .............................................................. 73 3.13.2 Retikulinfasern im Morbus Dupuytren......................................................................... 73 3.13.3 Retikulinfasern in Narben ............................................................................................ 73 3.14 IMMUNHISTOCHEMISCHE EXPRESSIONSMUSTER ..................................................................... 76 3.14.1 MiB-1-Expressionsmuster in aggressiven Fibromatosen ............................................. 76 3.14.2 MiB-1-Expressionsmuster in superfiziellen Fibromatosen .......................................... 76 3.14.3 CD-31-Expressionsmuster/Mikrogefäßdichte in aggressiven Fibromatosen ............... 76 3.14.4 CD-31-Expressionsmuster/Mikrogefäßdichte in superfiziellen Fibromatosen ............ 77 3.15 ERGEBNISSE DER STATISTISCHEN UNTERSUCHUNGEN ............................................................ 79 3.15.1 Klinische Verlaufsdaten ............................................................................................... 79 3.15.2 Prognostische Parameter .............................................................................................. 79 3.15.2.1 Patientengeschlecht .................................................................................................. 81 3.15.2.2 Patientenalter............................................................................................................ 82 3.15.2.3 Tumortopographie.................................................................................................... 83 3.15.2.4 Tumorgröße.............................................................................................................. 84 3.15.2.5 Mitosenanzahl .......................................................................................................... 85 3.15.2.6 Proliferationsaktivität - MiB-1 ................................................................................. 86 3.15.2.7 Gefäßdichte .............................................................................................................. 87 3.15.2.8 Resektionsstatus ....................................................................................................... 88 3.15.2.9 Adjuvante Bestrahlung............................................................................................. 89 -63.16 ERGEBNISSE DER 14 REZIDIVE DER AGGRESSIVEN FIBROMATOSEN ........................................ 90 3.16.1 Histopathologisches Erscheinungsbild der Rezidive.................................................... 90 3.16.2 Nukleolenanzahl........................................................................................................... 90 3.16.3 Mitosenanzahl .............................................................................................................. 91 3.16.4 Erythrozytenextravasate ............................................................................................... 91 3.16.5 Entzündungsinfiltrate ................................................................................................... 91 3.16.6 Infiltration in das umgebende Gewebe......................................................................... 91 3.16.7 Hämosiderinablagerungen............................................................................................ 91 3.16.8 Elastische Fasern in den Rezidiven .............................................................................. 92 3.16.9 Retikulinfasern in den Rezidiven ................................................................................. 92 3.16.10 Immunhistochemische Expressionsmuster der 14 Rezidive......................................... 93 3.16.10.1 MiB-1-Expressionsmuster..................................................................................... 93 3.16.10.2 CD-31-Expressionsmuster / Gefäßdichte.............................................................. 93 3.17 TABELLEN............................................................................................................................... 94 3.18 ZUSAMMENFASSUNG DER ERGEBNISSE ................................................................................... 99 4 DISKUSSION........................................................................................................................... 102 4.1 AUFBAU DER STUDIE ............................................................................................................ 102 4.1.1 Patientenkollektiv der aggressiven Fibromatosen .......................................................... 102 4.1.2 Tumorlokalisation .......................................................................................................... 102 4.1.3 Lokalrezidivrate ............................................................................................................. 103 4.1.4 Gravidität........................................................................................................................ 104 4.1.5 Multizentrische aggressive Fibromatosen ...................................................................... 105 4.2 LICHTMIKROSKOPISCHE UNTERSUCHUNGSERGEBNISSE BEI AGGRESSIVEN FIBROMATOSEN . 106 4.2.1 Histopathologisches Erscheinungsbild der aggressiven Fibromatosen .......................... 106 4.2.2 Nukleolenanzahl............................................................................................................. 107 4.2.3 Mitosen........................................................................................................................... 107 4.2.4 Erythrozytenextravasate ................................................................................................. 108 4.2.5 Entzündungsinfiltrationen .............................................................................................. 109 4.2.6 Hämosiderinablagerungen.............................................................................................. 109 4.2.7 Elastische Fasern ............................................................................................................ 110 4.2.8 Retikulinfasern ............................................................................................................... 110 4.2.9 Immunhistochemische Expressionsmuster..................................................................... 110 4.2.9.1 MiB-1-Expression .................................................................................................. 110 4.2.9.2 CD-31-Expression / Gefäßdichte ........................................................................... 111 4.2.10 Prognostische Werte................................................................................................... 111 4.2.10.1 Geschlecht der Patienten ........................................................................................ 111 4.2.10.2 Alter der Patienten.................................................................................................. 111 4.2.10.3 Tumortopographie.................................................................................................. 112 4.2.10.4 Tumorgröße............................................................................................................ 113 4.2.10.5 Mitosenanzahl ........................................................................................................ 114 4.2.10.6 MiB-1 ..................................................................................................................... 114 4.2.10.7 CD-31..................................................................................................................... 115 4.2.10.8 Resektionsstatus ..................................................................................................... 116 4.2.10.9 Adjuvante Bestrahlung........................................................................................... 117 4.3 LICHTMIKROSKOPISCHE UNTERSUCHUNGSERGEBNISSE BEIM MORBUS DUPUYTREN............ 119 4.4 ZUSAMMENFASSUNG DER DISKUSSION .................... FEHLER! TEXTMARKE NICHT DEFINIERT. 4.5 FAZIT FÜR DIE KLINIK ........................................................................................................... 123 5 ZUSAMMENFASSUNG......................................................................................................... 124 LITERATURVERZEICHNIS ........................................................................................................ 126 DANKSAGUNG............................................................................................................................... 143 LEBENSLAUF ................................................................................................................................. 144 -7- TABELLENVERZEICHNIS TAB. 1: TAB. 2: TAB. 3: TAB. 4: TAB. 5: TAB. 6: TAB. 7: ÜBERSICHT DER PATIENTEN MIT MORBUS DUPUYTREN .................................................... 38 ÜBERSICHT DER PATIENTEN MIT NARBEN ......................................................................... 38 ÜBERSICHT DER PATIENTEN MIT AGGRESSIVEN FIBROMATOSEN....................................... 39 ANGABEN ZU PATIENTEN MIT DESMOIDTUMOREN ............................................................ 96 ANGABEN ZU PATIENTEN MIT MORBUS DUPUYTREN ........................................................ 97 ANGABEN ZU PATIENTEN MIT NARBEN ............................................................................. 97 ANGABEN ZU REZIDIVEN DER AGGRESSIVEN FIBROMATOSE ............................................. 98 -8- ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS APAAP: Alkalische Phosphatase Anti-Alkalische Phosphatase CCD: Charge Coupled Device CD-31: Cluster of Differentiation / Designation, Nummer 31 CD-34: Cluster of Differentiation / Designation, Nummer 34 EvG: Elastica van Gieson FAP: Familiäre Adenomatöse Polyposis FISH: Fluoreszenz in sititu Hybridisierung HE: Hämatoxylin-Eosin HPF: High Power Field (Hochvergrößerte Felder, Angabe auf 40er Objektiv) IMD: Intratumoral Microvessel Density Ki-67: Kiel, Antigen Nummer 67 M. D.: Morbus Dupuytren MiB-1: Made in Borstel, Antikörper Nummer 1 PDGF-ß: Platelet-Derived Growth Factor ß-Receptor UICC: Union Internationale Contre le Cancer U-Nummer: Untersuchungsnummer VEGF: Vascular Endothelial Growth Factor -9- Einleitung 1 EINLEITUNG 1.1 Aggressive Fibromatosen 1.1.1 Historische Daten Die erste Verwendung des Ausdrucks „Desmoid“ wird Müller zugeschrieben (Müller 1838; Pack & Ehrlich 1944). Diesen Ausdruck benutzte er 1838 in seinem Kapitel „Von der sehnigen Fasergeschwulst, Tumor fibrous S. desmoides“ und beschrieb die feste und sehnenartige Konsistenz des Tumors. Dabei ging er vorwiegend auf den häufigsten Sitz dieser „faserigen Geschwülste“ im Uterus ein und entwarf damit ein Bild von den Leiomyomen (Pack & Ehrlich 1944). Das Wort Desmoid leitet sich von dem griechischen Wort „desmos“ ab und bedeutet band- oder sehnenartig (Easter & Halasz 1989). Aufgrund einer Beschreibung eines Operationsgutes von Macfarlane im Jahre 1832 kann auf die erste Beobachtung dieses Tumors geschlossen werden. Laut Macfarlane operierte er eine junge Frau, leider mit unglücklichem Operationsausgang, und entfernte einen im Unterbauch zwischen den Muskellagen liegenden Tumor (Macfarlane 1832). Auch Graetzer schien sich in seiner Dissertationsschrift mit dem Desmoid zu beschäftigen (Graetzer 1879). Bei der 33-jährigen Witwe Dorothea Dietrich untersuchte er die postpartal auftretenden Tumoren, beschrieb diese makroskopisch als „Fibroma myxomatoides... zu beiden Seiten der Bauchdecken“ und wies dabei auch auf die Histologie hin: „... welliges, faseriges Bindegewebe in einzelnen Gruppen angeordnet, die zum Theil sich unter rechten und schiefen Winkeln kreuzten, zum Theil parallel verliefen“. 1.1.2 Übersicht zum Krankheitsbild Die Fibromatosen werden unterteilt in superfizielle und tiefe Fibromatosen (Mentzel & Fletcher 1997). Aggressive Fibromatosen, auch Desmoidtumoren genannt, gehören zu den tiefen Fibromatosen (Enzinger & Weiss 1983). Abdominale (49%), extraabdominale (43%) und intraabdominale (8%) Formen werden dabei voneinander abgegrenzt (Reitamo et al. 1986). Der Desmoidtumor kann sowohl als eine sporadische Erkrankung auftreten, als auch im Rahmen der Familiären - 10 - Einleitung Adenomatösen Polyposis (FAP) erscheinen (Jones et al. 1986; Reitamo et al. 1982; Penna et al. 1993; Caspari et al.1995; Clark et al. 1997). Die Geschlechtsverteilung variiert bezüglich des Typs der aggressiven Fibromatose. Bei der sporadischen Form des Desmoidtumors ist die weibliche Bevölkerung ungefähr 2-5 mal häufiger betroffen (Qi et al. 1996; Posner et al. 1989; Brasfield & Das Gupta 1969). Bereits 1916 erkannte Bolognesi diese Tatsache, wobei er diese Tumoren als Sarkome einstufte (Bolognesi 1916). Bei der FAP-assoziierten Form dagegen beträgt der weiblich-männliche Quotient 1, so dass in diesem Falle beide Geschlechter gleich häufig betroffen sind (Gurbuz et al. 1994; Rodriguez-Bigas et al. 1994; Jarvinen 1987; Lotfi et al. 1989). Die sporadischen Desmoidtumoren lassen sich in 4 Untergruppen einteilen (Reitamo et al. 1982); dabei wird unterschieden zwischen: 1. Desmoidtumoren im juvenilen Alter. Sie treten vorwiegend als extraabdominale Formen und bevorzugt bei Frauen auf. 2. Desmoidtumoren im gebärfähigen Alter. Sie treten vorwiegend als abdominale Formen bei zeugungsfähigen Frauen auf. 3. Desmoidtumoren im menopausalen Alter. Sie treten vorwiegend als abdominale Formen auf, wobei Frauen und Männer gleich häufig betroffen sind. 4. Desmoidtumoren im senilen Alter. Sie treten vorwiegend als abdominale oder extraabdominale Formen in gleicher Häufigkeit auf. Beide Geschlechter sind gleich selten betroffen. Die Desmoidtumoren treten hauptsächlich im Erwachsenenalter auf (Enzinger & Weiss 1983). Bei beiden Typen liegt der Inzidenzgipfel bei 28-31 Jahren, mit einer Spannweite von 4 Monaten bis 80 Jahren (Burke et al. 1990; Klemmer et al. 1987; Clark & Philips 1996). Desmoidtumoren sind selten (Häyry et al. 1982b; Bridge et al. 1992; Faulkner et al. 1995;). Sie machen 0,1% aller Tumoren und 3,5% aller Tumoren des fibrösen Gewebes aus (Dahn et al. 1963; Mc Adam & Goligher 1970). Die Neuerkrankungsrate für abdominale und extraabdominale Formen liegt zusammen pro Jahr bei 2,4-4,3/1 Million (Dahn et al. 1963; Reitamo et al. 1986). - 11 - Einleitung 1.1.3 Ätiologie Die präzise Ätiologie des Desmoidtumors ist unbekannt. Bekannt ist aber, dass genetische Abnormalitäten, Traumen und steroidale Geschlechtshormone Faktoren sind, die zur Entstehung dieser Tumoren beitragen können. Vor allem Traumen spielen offenbar eine sehr große Rolle, da viele der Fibromatosen mit chirurgischen Narben oder Narben durch Radiatio assoziiert sind (Pettit et al. 1954; Berardi & Canlas 1973). Bei Pritchard et al. wird für die Entstehung extraabdominaler Tumoren bei 16% der Patienten ein Trauma angegeben; bei 8% der Patienten entwickelten sich die Tumoren in Narben nach vorausgegangenen Operationen (Pritchard et al. 1996). Erwiesen ist, dass die Wachstumsrate der Desmoidtumoren oft durch Geschlechtshormone reguliert wird, und dass Östrogen gegenüber dem Progesteron in Hinblick auf die Induktion des Tumorwachstums dominiert. Lipshutz et al. beschreiben eine Methode zur Induktion des Desmoidtumors durch Injektion von Östrogenen in die Abdominalwand von Ratten. Gleichzeitig beschreibt er die Prävention einer Tumorentstehung durch vorherige Injektion von Testosteron, Progesteron und Desoxycorticosteronsäure (Lipshutz et al. 1944). Vor allem findet sich eine Beziehung zwischen extraabdominalem Desmoidtumor und den Geschlechtshormonen. Es liegt eine erhöhte Inzidenzrate bezüglich dieses Tumors vor bei Frauen während des reproduktiven Alters oder während des Zeitraumes der Einnahme von Kontrazeptiva (Waddell 1975; Häyry et al. 1982a). Abdominale Desmoidtumoren treten dagegen gehäuft während oder kurz nach einer Schwangerschaft auf (Brasfield & Das Gupta 1969; Mc Adam & Goligher 1970; Kinzbrunner et al. 1983). In 25%-75% aller Desmoidtumoren finden sich Östrogenoder Anti-Östrogen-Rezeptoren (Mc Adam & Goligher 1970; Häyry et al. 1982b; Tonelli et al. 1994). Laut Häyry et al. (Häyry et al.1982a), Reitamo (Reitamo 1983), Disler et al. (Disler et al. 1993) und Sahn et al. (Sahn et al. 1993) sind vererbte Defekte oder erworbene Mutationen im Rahmen der Wachstumsregulation des Bindegewebes die zugrundeliegenden Ursachen für die Entstehung des sporadischen Desmoidtumors. Bereits mehrfach schon wurde darauf hingewiesen, dass eine Assoziation zwischen der Häufigkeit des Auftretens des Desmoidtumors und dem Vorkommen von Trisomie 8 als auch Trisomie 20 vorliegt. Ungefähr die Hälfte oder etwas weniger der sporadischen Desmoidtumoren zeigen in der FISH (Fluoreszenz in situ - 12 - Einleitung Hybridisierung) das Vorkommen einer Trisomie 8 und / oder Trisomie 20 (Mertens et al. 1991; Fletcher et al. 1994; Dal Cin et al. 1994; Bridge et al. 1996). Einige Autoren gehen sogar soweit, dass sie anhand ihrer Studien Trisomie 8 als einen prognostischen Faktor für die Erkrankung annehmen (Fletcher 1998). Eine andere mit dem Vorkommen der Desmoidtumoren verknüpfte genetische Abnormalität ist der Verlust des Y-Chromosoms (Bridge et al. 1992). Zudem existieren auch Artikel über spontane Desmoidtumoren, die besonders während des Klimakteriums oder der Menarche der Frau oder auch der Pubertät beim Mann auftreten (Reitamo et al. 1982). 1.1.4 Pathogenese Die Natur der aggressiven Fibromatose wird kontrovers diskutiert. Zum einen wird behauptet, es liege ein entzündlicher reaktiver Prozess vor, zum anderen eine wahre Neoplasie. Laut Stout zum Beispiel handelt es sich bei den Desmoidtumoren nicht um wahre Neoplasien, sondern eher um infiltrative fibroblastäre Läsionen, die in ihrem Verhalten zwischen einer überschießenden Proliferation und einem niedriggradigen Fibrosarkom stehen (Stout 1954). Die von Alman et al. 1997 veröffentlichte Studie beweist jedoch, dass es sich bei dem Desmoidtumor um einen monoklonalen, und nicht wie oft angenommen um einen entzündlichen Prozess, handelt. Sie führen den Beweis auf, dass die aggressive Fibromatose aus einer einzigen Stammzelle mit einem Wachstumsvorsprung entsteht (Alman et al. 1997). Auch in der jüngsten Vergangenheit konnte durch Lucas et al. nachgewiesen werden, dass es sich bei den Desmoidfibromatosen um klonale zelluläre Proliferationen handelt (Lucas et al. 1997). Somit sind Fibromatosen als echte Tumoren (Neoplasien) zu betrachten und entsprechen nicht reaktiven, pseudosarkomatösen Läsionen wie beispielsweise die noduläre Fasziitis. Aggressive Fibromatosen sind die meist vorkommenden und best untersuchten myofibroblastären Tumoren (Fletcher 1998). Proliferierende Myofibroblasten stellen die eigentlichen Tumorzellen der aggressiven Fibromatosen dar (Seemayer et al.1979). - 13 - Einleitung 1.1.5 Myofibroblasten Der Begriff „Myofibroblast“ wurde das erste Mal von G. Majno und G. Gabbianni im Jahre 1971 benutzt. Es handelt sich um einen von diesen beiden Wissenschaftlern eingeführten Namen für modifizierte Fibroblasten, welche die Wissenschaftler kurz zuvor erforscht hatten (Kosmehl et al. 1992; Schürch et al. 1992). Im Jahre 1969 wurden diese Fibroblasten im Rahmen experimenteller Entzündungsmodelle in der pyogenen Membran durch G. Majno und G. Gabbianni und ihre Mitarbeiter entdeckt (Gabbianni et al. 1971; Schürch et al.1992). Im Jahre 1971 erforschten die beiden experimentell das Granulationsgewebe und den Wundverschluss; aus ihren Experimenten zogen sie den Schluss, dass Granulationsgewebe modifizierte Fibroblasten mit der Fähigkeit zur Kontraktion enthält (Gabbianni 1994; Gabbianni et al. 1972, Majno et al. 1971). Aufgrund vieler Ähnlichkeiten zu Muskelzellen gaben sie diesen Fibroblasten den Namen „Myofibroblasten“ (Gabbianni et al. 1971; Schürch et al. 1992). Myofibroblasten sind morphologisch charakterisiert als spindelartige Zellen mit einem schlecht definiertem eosinophilem Zytoplasma und Kernkörperchen, die symmetrisch aufeinander zulaufen oder wellig oder eher plump sind (Weiss et al. 1989). Diese Zellen sind nicht identisch mit Fibroblasten oder glatten Muskelzellen. Sie besitzen eher Eigenschaften beider Zellarten vereint in einer Zelle. Von den Fibroblasten unterscheiden sie sich durch Einkerbungen der Kerne, eine diskontinuierliche Basallamina und reichlich dünne Filamente mit fokalen Verdichtungen (Mentzel & Fletcher 1997). Von den glatten Muskelzellen unterscheiden sie sich durch eine diskontinuierliche Basallamina, reichlich raues endoplasmatisches Retikulum und reichlich Kollagenproduktion (Mentzel & Fletcher 1997). Somit nehmen die Myofibroblasten eine Intermediärstellung zwischen Kollagen produzierenden Fibroblasten und glatten Muskelzellen ein (Mentzel & Katenkamp 1998). Zwar erscheint das Bild der Myofibroblasten im Elektronenmikroskop als relativ uniform, doch ist der immunhistochemische Phänotyp dieser Zellen variabel (Skalli et al. 1989). Entsprechend der Expression von Vimentin, α-glattmuskulärem Aktin, β-Aktin, γAktin und Desmin, einzeln oder in Kombinationen, werden phänotypische Varianten - 14 - Einleitung der Myofibroblasten unterschieden (Hoffmann-Berling 1954; Schürch et al. 1990). Folgende immunhistochemische Unterteilung der Myofibroblasten ist üblich: • V-Typ: Dieser Myofibroblastentyp exprimiert β-Aktin, γ-Aktin und Vimentin. • VD-Typ: Dieser Myofibroblastentyp exprimiert β-Aktin, γ-Aktin, Vimentin und Desmin. • VA-Typ: Dieser Myofibroblastentyp exprimiert β-Aktin, γ-Aktin, Vimentin und α-glattmuskuläres Aktin. • VAD-Typ: Dieser Myofibroblastentyp exprimiert β-Aktin, γ-Aktin, Vimentin, α-glattmuskuläres Aktin und Desmin. Der am meisten vorkommende Phänotyp ist der VA-Typ (Fletcher 1998). Myofibroblasten sind in allen Weichteiltumoren vorhanden, jedoch nehmen sie jeweils verschiedene Stellungen ein, von „unschuldigen Zuschauern“ bis hin zum Hauptzelltyp (Fletcher 1998). Die ersten tumorähnlichen Veränderungen, in denen Myofibroblasten als dominierende proliferierende Zellen nachgewiesen wurden, waren der Morbus Dupuytren und der Morbus Ledderhose (Gabbianni & Majno 1972). Daneben sind diese Zellen auch in vielen physiologischen Läsionen vorhanden, zum Beispiel dem Granulationsgewebe (Fletcher 1998). Die Möglichkeit, dass Myofibroblasten aus bestimmten mesenchymalen Zellen bestimmter Organe entstehen, fand in den letzten Jahren eine Bestätigung. Unter allen Bindegewebszellen, welche zu Myofibroblasten transformieren können, gibt es einige bestimmte mesenchymale Zellen, die als Kandidaten in Frage kommen können; diese sind Fibroblasten, Pericyten und glatte Muskelzellen (Fletcher 1998). Ultrastrukturelle Daten führen den Beweis an, dass während pathologischer oder kultureller Bedingungen Fibroblasten und glatte Muskelzellen morphologische Eigenschaften erwerben, die denen von Myofibroblasten ähneln; so kann daraus gefolgert werden, dass beide Zelltypen die Stammzellen von Myofibroblasten sind (Kocher et al. 1984; Mosse et al. 1985; Olivetti et al. 1980). - 15 - Einleitung 1.1.6 Klinisches Verhalten Das Wachstum des Desmoidtumors ist typenabhängig. FAP-assoziierte Desmoidtumoren tendieren zu einem eher aggressiveren Wachstum, wobei die Wachstumsrate im Verlaufe der Krankheit stark variiert (Church 1995; Burke et al. 1990; Penna et al. 1993). Dennoch bleiben die Desmoidtumoren die zweit häufigste Todesursache bei FAP-Patienten (Arvanitis et al. 1990). Bei den sporadischen Tumoren kann generell gesagt werden, dass das Tumorwachstum bei Männern, sehr jungen und älteren Frauen langsam, wohingegen er bei Frauen im Alter von 15-59 Jahren rasch ist (Enzinger & Weiss 1983; Häyry et al. 1982a). 10% zeigen eine spontane Regression, 29% weisen abwechselnd Zyklen von Regression und Wachstumsschub auf, 47% bleiben in der Wachstumsrate stabil und 10% wachsen rapide schnell (Church 1995). Typisch für die Fibromatosen ist, dass sie sich klinisch in frühen Stadien schmerzlos verhalten (Mentzel & Fletcher 1997). Fibromatosen besitzen ein infiltratives Wachstum und eine hohe Rezidivrate, aber im Gegenteil zu Sarkomen metastasieren die Fibromatosen nie (Enzinger & Weiss 1983; Mentzel & Katenkamp 1998). Das Wachstumsmuster ist zudem auch stark destruierend (Fletcher 1998). Prinzipiell beziehen sie tiefere Strukturen ein, vor allem die Muskulatur des Rumpfes und die Extremitäten (Enzinger & Weiss 1983). Aufgrund eines solchen Wachstumsmusters ist eine komplette Exzision der tiefen Fibromatose mit dem Ziel der freien Ränder sehr schwierig und oft unmöglich (Mentzel & Fletcher 1997). Mortalität auf der Basis von Desmoidtumoren der Extremitäten ist äußerst ungewöhnlich, doch abhängig von der lokalen Aggressivität des Tumors, durch die oft entstellenden oder verstümmelnden Operationen spielt die Morbidität hierbei jedoch eine entscheidende Rolle (Penna et al. 1993; Faulkner et al. 1995). Die Tumoren können als Einzelformen aber ebenfalls multizentrisch auftreten. Ein familiäres Vorkommen und die Assoziation mit der Familiären Adenomatösen Polyposis (FAP) kann auch beobachtet werden, im Zusammenhang damit wird vom Gardner-Syndrom gesprochen (Mentzel & Fletcher 1997). Charakteristisch für infantile Fibromatosen ist ein variables klinisches Verhalten; die Tumoren können hier als gutartige Läsionen in Erscheinung treten, die sogar eine spontane Regression aufzeigen, genauso können sie aber eine progressive Entwicklung einnehmen bis hin zu multizentrischen Läsionen mit visceraler oder ossärer Beteiligung mit fatalem Ausgang (Mentzel & Fletcher 1997). - 16 - Einleitung Es wurde bereits erwähnt, dass die aggressive Fibromatose in Untergruppen eingeteilt wird. Dabei handelt es sich um die Formen der extraabdominalen, abdominalen und intraabdominalen Fibromatose. Eine Subgruppe der intraabdominalen Fibromatose ist die mesenteriale Fibromatose. Mesenteriale Desmoidtumoren verursachen Kompressionen des Dünndarms, komprimieren das umgebende Gewebe und wachsen infiltrativ in dieses hinein (Church 1995; Clark & Philips 1996). 1.1.7 Gardner Syndrom 1923 wurde zum ersten Mal die Assoziation des Desmoidtumors mit der Familiären Adenomatösen Polyposis (FAP) von Nicholas beschrieben (Nicholas 1923). 1951 beschrieb Gardner die nach ihm benannte Erkrankung „Gardner’s Syndrome“ (Gardner 1951). Bei diesem Krankheitsbild handelt es sich um eine autosomaldominant vererbte Erkrankung, bei welcher die aggressive Fibromatose vom intraabdominalen Typ in Assoziation mit Polyposis, Osteomen und kutanen Zysten gefunden wird. Circa die Hälfte der Kinder der von dieser Erkrankung betroffenen Eltern wird von der Krankheit heimgesucht. Die aggressive Fibromatose tritt als mesenterialer oder retroperitonealer Desmoidtumor in Erscheinung meistens in einem Abstand von ungefähr ein bis zwei Jahren nach erfolgter Exzision erkrankter Anteile des Intestinaltraktes in Form von Polypen oder bereits in Adeno-Carcinome transformierten Polypen. Selten aber auch können die Desmoide noch vor Auftreten der Polypen beobachtet werden. Im Grunde existieren keine mikroskopischen Unterschiede zu anderen Fibromatosen, außer dass die Myofibroblasten lockerer zueinander angeordnet sind und sie eine mehr prominente Matrix besitzen. Der für dieses Syndrom verantwortliche Defekt ist lokalisiert auf dem langen Arm des Chromosoms 5 an der Stelle q21-q22 (Bodmer et al. 1987). 1.1.8 Tumorlokalisation Reitamo et al. untersuchten 89 Patienten. Ihre Angaben bezüglich der anatomischen Lokalisation beziehen sich nur auf die grobe Einteilung der aggressiven Fibromatose in die drei Hauptgruppen extraabdominales Desmoid, abdominales Desmoid und intraabdominales Desmoid. Bei den von ihnen untersuchten Patienten hatten 49% einen abdominalen Tumor, 43% einen extraabdominalen Tumor und 8% einen - 17 - Einleitung mesenterialen Tumor. Der abdominale Desmoidtumor war in den meisten Fällen im Musculus rectus abdominis lokalisiert (Reitamo et al. 1982). Enzinger untersuchte 367 Patienten innerhalb von 20 Jahren. Die häufigsten anatomischen Lokalisationen fand er mit 22,1% in der Schultermuskulatur, mit 17,2% im Bereich des Rückens und der Brust, mit 12,5% im Oberschenkel und mit 10,4% im Mesenterium. Die restlichen anatomischen Lokalisationen waren in einer Häufigkeit von 7,6% bis 0,3% vertreten (Enzinger & Weiss 1983). 1.1.9 Rezidivhäufigkeit Wie oben angeführt, metastasieren die aggressiven Fibromatosen niemals, dafür aber tendieren sie zur lokalen Rezidivierung. Die Rezidive können auch nach kompletter chirurgischer Exstirpation des Tumors auftreten; die allgemeine Rezidivrate für Desmoidtumoren liegt bei 40% (Jones et al. 1986; Penna et al. 1993; RodriguezBigas et al. 1994). Die Rezidivrate des sporadischen Desmoidtumors liegt bei 16%40%, wobei 90% dieser Rezidive innerhalb der ersten drei Jahre nach primärer Therapie auftreten, 51% werden bereits während des ersten Jahres nach primärer Behandlung beobachtet (Batsakis & Raslan 1994; Easter & Halasz 1989; Faulkner et al. 1995). Intraabdominale Desmoidtumoren weisen eine Rezidivrate von 57%-85% auf, hierbei treten 70%-90% dieser Tumoren innerhalb von zwei Jahren nach primärer Operation auf (Kim et al. 1971; Naylor et al. 1979; Berk et al. 1988; Hamilton et al. 1996). Eine signifikante Zunahme der Rezidivhäufigkeit wird hauptsächlich bei Patienten zwischen dem 18. und 30. Lebensjahr dokumentiert (Posner et al. 1989). Baerg et al. untersuchten 55 Fälle der aggressiven Fibromatose bei Kindern. Sie kamen zu dem Ergebnis, dass Rezidive vor allem zu beobachten waren, wenn der Primärtumor bei einem älteren Kind diagnostiziert wurde, wenn der Tumor Nekroseareale, Entzündungsareale oder eine erhöhte Anzahl an mitotischen Figuren besaß, in einer der Extremitäten lokalisiert war oder wenn die Primärresektion des Tumors nicht im gesunden Gewebe erfolgte, das heißt die Resektionsränder nicht tumorfrei waren (Baerg et al. 1999). Die Präsenz von Rezidiven bedeutet aber nicht automatisch eine Risikozunahme für weiteres Auftreten von Rezidiven (Rock et al. 1984; Reitamo et al. 1986; Faulkner et al. 1995). - 18 - Einleitung 1.1.10 Makroskopische Pathologie Der Desmoidtumor misst meist 5-10 cm im Durchmesser. Nicht selten werden aber auch Tumoren mit einer Größe über 20 cm angetroffen. Der Desmoidtumor beschränkt sich in den meisten Fällen auf die Muskulatur oder die den Muskel umgebende Faszie. Nur selten infiltriert er auch das subkutane Gewebe, dies wird vor allem bei sehr großen Tumoren beobachtet. Makroskopisch erscheint der Tumor als ein fester gelblich-weißer Knoten mit längeren Tentakeln, die in die umgebende Muskulatur infiltrieren. Die Schnittfläche erinnert stark an Narbengewebe, die Konsistenz ist hölzern-fest. Charakteristisch ist eine Wirbelbildung der weißlich-derben Schnittfläche. - 19 - a) Abb. 1: Einleitung b) a) und b) Schnittflächen einer aggressiven Fibromatose im Bereich der linken Axilla. Tentakelartige Infiltration der Fibromatose in das umgebende Gewebe. U-Nummer: E1981/01, weiblich, 35 Jahre. a) Abb. 2: b) a) Magnetresonanztomographisches Bild einer aggressiven Fibromatose. Homogene homodense Struktur im Bereich der linken Axilla. U-Nummer: E1981/01, weiblich, 35 Jahre. b) Schnittfläche eines Desmoidtumors der linken lateralen Thoraxwand. Einblutungen im Tumor, zudem hier ungewöhnlich zystiforme Regression. U-Nummer: E20727/99, weiblich, 42 Jahre. - 20 - a) Abb. 3: Einleitung b) a) Schnittfläche einer aggressiven Fibromatose im Bereich der rechten Schulter. Einblutungen in den Tumor und tentakelförmiges Wachstum des Desmoidtumors. U-Nummer: E6275/00, männlich, 43 Jahre. b) Magnetresonanztomographische Darstellung desselben Tumors. Homogene hyperdense lateral des rechten Caput humeri gelegene runde Struktur. U-Nummer: E6275/00, männlich, 43 Jahre. - 21 - a) Abb. 4: Einleitung b) a) Schnittfläche eines Desmoidtumors im Bereich des rechten Oberarmes. Helles in das umgebende Gewebe infiltrierendes Neoplasma inmitten des rechten Musculus deltoideus. U-Nummer: E7577/01, weiblich, 58 Jahre. b) Schnittfläche einer aggressiven Fibromatose im Bereich des linken Musculus rectus abdominis. Großes Neoplasma mit charakteristischer tentakelförmiger Struktur und randständigen Einblutungen. U-Nummer: E18165/02, weiblich, 45 Jahre. - 22 - Einleitung 1.1.11 Histopathologie Die histopathologischen Eigenschaften der sporadischen Desmoidtumoren und der FAP-assoziierten Desmoidtumoren sind sehr ähnlich. Aggressive Fibromatosen sind charakterisiert durch uniforme spindelige Zellformen (Myofibroblasten) mit plumpen 2-3 Nukleolen und mild eosinophilem Zytoplasma. Die Tumorkerne sind klar. Die Tumorzellen sind in Faszikeln zueinander angeordnet, wobei jede Reihe durch eine variabel große Menge an Kollagen voneinander getrennt ist (Goellner & Soule 1980; Reitamo et al. 1986; Pritchard et al. 1996). Ein solches Bild ähnelt einer hypertrophischen Narbe (Alman et al. 1997). Ein Lymphozyteninfiltrat kann in der Nähe der Gefäße vorkommen, noch prominenter erscheint es in der Tumorperipherie (Rock et al. 1984). Insgesamt ist der Desmoidtumor relativ gefäßarm (Enzinger & Weiss 1983). Nekrosen oder Anaplasien sind uncharakteristisch (Leibel et al. 1983; Faulkner et al. 1995; Spear et al. 1998). Der Tumorkern ist meist azellular, wogegen die Tumorperipherie diffuses Zellreichtum wiedergibt, ein Fibrosarkom nachahmend (MacKenzie 1972). Viele dieser Zellen sind Myofibroblasten (Kirya et al. 1985). Sarkoplasmatische Riesenzellen sind häufig vorhanden (Reitamo et al. 1982, Jones et al. 1986, Batsakis & Raslan 1994). Im Gegensatz zu Fibrosarkomen sind die Fibroblasten der aggressiven Fibromatose hoch differenziert, zytologische Atypien fehlen bei ihnen, ebenso wie eine hohe mitotische Aktivität (Naylor et al. 1979; Burke et al. 1990; Clark & Philips 1996). Falls vorhanden, werden mitotische Figuren nur in geringer Anzahl und nur in circa der Hälfte aller Desmoidtumoren entdeckt (Burke et al. 1990). Eine Pseudokapsel ist beim Desmoidtumor nicht bekannt (Goellner & Soule 1980). Die Tumoren sind meist groß, bis zu 15 cm im Durchmesser, und gut umschrieben. Elektronenmikroskopisch weisen sie jedoch bis zu mehreren cm lange, außerhalb der palpablen Ränder in das umgebende Gewebe infiltrierende, „Tentakel“ auf (Naylor et al. 1979; Posner et al. 1989; Clark & Philips 1996). Stets liegt eine Infiltration des muskulären Gewebes vor, der Tumor infiltriert die Muskelfasern (Enzinger & Weiss 1983). Des öfteren werden auch eine muskuläre Hyperplasie der kleinen Arterien und perivaskuläre Mikrohämorrhagien dokumentiert (Burke et al. 1990). Bei sehr großen Desmoidtumoren findet sich manchmal auch eine zystische Degeneration (Mc Adam & Goligher 1970). - 23 - Einleitung a) b) c) d) Abb. 5: Histologisches Erscheinungsbild einer aggressiven Fibromatose des linken Oberschenkels in der HE-Färbung. a) Übersicht des Zellverbandes der Fibroblasten in Faszikelform. b) Verflochtene Faszikelbündel, die durch große Kollagenmengen voneinander separiert sind. c) Ausschnittsvergrößerung mit Darstellung des faszikulären Wachstumsmusters der myofibroblastären Tumorzellen. d) Typisch „geschlängelte“ Tumorzellen mit elongierten Zellkernen mit spitz zulaufenden Kernenden. U-Nummer: E502/96, weiblich, 41 Jahre. - 24 - Einleitung 1.1.12 Therapiemöglichkeiten der tiefen Fibromatosen Zahlreiche Therapiemöglichkeiten sind für die Behandlung des Desmoidtumors beschrieben worden. Die wichtigsten sind die chirurgische Exstirpation, die Radiatio und die medikamentöse Therapie. Es ist schwierig, sich mit 100 prozentiger Sicherheit auf eine bestimmte Therapiemöglichkeit festzulegen. Erschwert wird dieses unter anderem durch die Tatsache, dass die einzelnen Rezidive der Patienten nicht selten in verschiedenen Kliniken mit unterschiedlichen Therapieansätzen behandelt werden. Eine genaue Evaluation der Therapien bleibt deshalb mehrfach inkomplett (Pignatti et al. 2000). Trotzdem scheint es aber, dass, die Häufigkeit des Rezidivierens dieses Tumors in Betracht ziehend, die chirurgische Excision des Tumors das Mittel der Wahl ist, wobei diese am effektivsten erscheint, wenn sie als weite Excision mit tumorfreien Rändern erfolgt (Harvey et al. 1997; Reitamo 1983; Khorsand & Karakousis 1985). Faulkner berichtet, dass tumorfreie Excisionsränder der einzige Faktor sei, der über die Rezidivrate beim Patienten bestimmt. In seinen Studien kommt er zu dem Ergebnis, dass der Anteil der rezidivfreien Patienten mit der erhöhten Anzahl an Resektionsstatus R-0 in den Excisaten steigt (Faulkner et al. 1995). In vielen Artikeln der letzten Jahre werden auch positive Aussagen bezüglich der Anwendung der Radiatio in der Behandlung des Desmoidtumors vorgefunden. Dabei wird insbesondere auf die Nützlichkeit der Strahlentherapie bei aufgrund der anatomischen Lokalisation inkomplett resezierten Tumoren oder aktiven wachsenden Tumoren verwiesen, bei denen die chirurgische Exstirpation unmöglich ist (Leibel et al. 1983; Posner et al. 1989; Bridge et al. 1992). Enzinger verweist aber auf das von Soule und Scanlon suggerierte Risiko einer späteren malignen Transformation der Fibromatose bei der Wahl der Radiatio als Therapie (Enzinger & Weiss 1983). Zudem besteht auch die Möglichkeit der Kombination der Radiatio mit der chirurgischen Therapie. Erfolge dieser Kombination zeigen sich insofern, als durch die Kombination eine Reduktion der Rezidive um 20%-30% erreicht wird (Khorsand & Karakousis 1985; Mirabell et al. 1990; Bridge et al. 1992). Die medikamentöse Therapie umfasst die Einnahme von zytotoxischen Pharmaka, antiproliferativen Pharmaka und anderen Pharmaka-Sorten. In-vitro Studien zeigten, dass Sulindac zum Beispiel das Wachstum des Desmoidtumors hemmt (Hail et al. - 25 - Einleitung 1977; Tonelli et al. 1994). Bei Sulindac handelt es sich um das synthetische Analogon des Indomethacin (Winde et al. 1997). Obwohl weniger wirksam als Sulindac wird vor allem bei der Behandlung des Desmoids Tamoxifen benutzt (Belliveau & Graham 1984; Lotfi et al. 1989; Weiss & Lackman 1996). Bei diesem Pharmakon handelt es sich um ein nicht steroidales Antiöstrogen. Es führt zur Sekretion von PDGF-ß in den Fibroblasten. Das PDGF-ß wiederum hemmt abweichende Fibroblasten in den Desmoidtumoren und in den Polypen des Gastrointestinaltraktes (Colletta et al. 1990; Butta et al. 1992; Benson & Baum 1993). Die zytotoxische Therapie wird vorwiegend bei rezidivierenden nicht-resektablen und auf andere Medikamente nicht ansprechenden Tumoren angewandt. In einer kleinen Zahl dieser Fälle kann eine entscheidende Remission des Tumors nachgewiesen werden (Easter & Halasz 1989; Rodriguez-Bigas et al. 1994; Clark et al. 1997). 1.1.13 Differentialdiagnose Tiefe Fibromatosen müssen unterschieden werden von der nodulären Fasziitis und dem seltenen Fibrosarkom (Enzinger & Weiss 1983). Die noduläre Fasziitis und andere ähnliche Läsionen äußern sich in ihrem klinischen Verhalten durch ein rapides Wachstum. Ihre morphologischen Eigenschaften sind vom Alter der Läsion abhängig. So zeigen diese Läsionen in ihren frühen Stadien reichlich mitotisch aktive Myofibroblasten und auch Entzündungszellen. In späteren Phasen dagegen erscheint das Bild eher zellarm und nimmt einen eher fibroblastischen Phänotyp an. Ein wichtiger Unterschied zu der aggressiven Fibromatose liegt aber auch in der Therapie, denn eine lokale Excision ist in den meisten Fällen bei der Behandlung der nodulären Fasziitis endgültig kurativ (Mentzel & Fletcher 1997). Gegen das Fibrosarkom sprechen die einheitliche Wachstumsart, fehlende mitotische Figuren und vor allem die ausgedehnte Infiltration der Fibromatosen in das umgebende Gewebe (Enzinger & Weiss 1983). Trotzdem warnt Enzinger vor der Entnahme einer zu kleinen Probebiopsie, da auch das Fibrosarkom einige kleinere hypozelluläre Areale besitzen kann, die der Fibromatose identisch sind. - 26 - Einleitung 1.2 Superfizielle Fibromatosen Wie zuvor erwähnt, werden die Fibromatosen in superfizielle und tiefe Fibromatosen klassifiziert. Zu den superfiziellen Fibromatosen zählen Läsionen der Hände, der Füße und des Penis. Die Erkrankungen der Hände werden unterteilt in Morbus Dupuytren, „knuckle pads“ (Fingerknöchel-Polsterungen) und die infantile digitale Fibromatose. Die Fibromatose der Füße wird als Morbus Ledderhose und die des Penis als Morbus Peyronie bezeichnet (Allen 1977). Als Synonyme für Morbus Dupuytren werden die Bezeichnungen Fibromatose der Palmaraponeurose, Palmarfibromatose und Dupuytren-Kontraktur beziehungsweise Krankheit verwendet. 1.2.1 Morbus Dupuytren 1.2.1.1 Historische Daten Die ersten Berichte über die heute als Morbus Dupuytren bekannte Erkrankung stammen bereits aus dem 12. und 13. Jahrhundert; Der Bischof von Island und Earl of Orkney schilderten dieses Erkrankungsbild im Zusammenhang mit Wunderheilungen (Whaley & Elliot 1993). Die erste anatomische Beschreibung dieser Erkrankung lieferte der Baseler Anatom Felix Plater im Jahre 1614 in seinem Buch „Observationum in Hominis Affectibus“, der sie jedoch als Sehnenluxation fehldeutete (Coenen 1918). Als „une affection de l’aponéurose palmaire“ wurde sie in den 30er Jahren des neunzehnten Jahrhunderts richtig von Baron Guillaume Dupuytren erkannt (Dupuytren 1832; Dupuytren 1834) und nach ihm benannt. 1.2.1.2 Übersicht zum Krankheitsbild Der Morbus Dupuytren ist der häufigste Typ der Fibromatose und gehört zu der superfiziellen Form der Fibromatosen. Die Palmarfibromatose führt zu einer Fibromatose und Kontraktur spezifischer Faszienbänder der Hohlhandfläche (Chiu & McFarlane 1978). - 27 - Einleitung 1.2.1.3 Ätiologie Die Ätiologie dieser Krankheit ist unklar. Genetische und rassische Faktoren disponieren zu einer besonderen Bindegewebsantwort, die offenbar als polyätiologisches Reaktionssyndrom aufgefasst werden muss (Beneke et al. 1970; Allegra & Broderick 1973; Anderson et al. 1975). Die Erkrankung scheint häufiger bei Epileptikern und bei Patienten mit anitkonvulsiver Therapie aufzutreten (Lund 1941; Skoog 1948; Early 1962; Pojer et al. 1972). Weiterhin sind auch Diabetiker gehäuft betroffen. Heathcote et al. berichten bei Diabetikern von einer Prävalenz von 42% (Heathcote et al. 1981). Neuere Studien teilen auch mit, dass relativ häufig eine Korrelation zwischen der Erkrankung und der Alkoholkrankheit verbunden mit Leberzirrhose existiert. Dabei wird explizit auf den Zusammenhang der Alkoholkrankheit mit der Leberzirrhose verwiesen, da nur in dieser Verbindung das gehäufte Auftreten des Morbus Dupuytren angegeben wird. Dabei finden sich Angaben von 66% an Palmarfibromatose leidenden Patienten, die gleichzeitig von der Alkoholkrankheit und der Leberzirrhose betroffen sind (Mohr 2000). Eine erhöhte Prävalenz für diese Erkrankung findet sich bei der nordeuropäischen Bevölkerung, vorwiegend den Bewohnern von Skandinavien, Großbritannien und Irland (McFarlane 1990; McFarlane 1991; Mitra & Goldstein 1994). Äußerst selten dagegen wird diese Erkrankung bei Schwarzen und Asiaten vorgefunden (Enzinger & Weiss 1983; Mitra & Goldstein 1994; Sladicka et al. 1996). Gudmundsson et al. untersuchten einen Teil der Bevölkerung von Island. Sie kamen zu dem Ergebnis, dass die Palmarfibromatose in der Tat eine in Island häufige Erkrankung der Männer, vor allem der handwerklich tätigen Männer, ist. Ihre Hypothese diesbezüglich ist, dass Handarbeit im kalten Klima zu einer verlängerten Vasokonstriktion in den Händen führt, was eine Ursache der Erkrankung vorwiegend im Nordwesten Europas darstellen möge (Gudmundsson et al. 2000). Die Inzidenz für die Erkrankung liegt in der Allgemeinbevölkerung bei 1% bis zu 2%, wobei jedoch Kinder und junge Erwachsene sehr selten betroffen sind. Vordergründig findet sich die Erkrankung bei über 65-jährigen Patienten. Ungefähr 20% der Menschen dieser Altersgruppe leiden an dieser Krankheit, meist betroffen ist die männliche Bevölkerung (Enzinger & Weiss 1983). Statistisch gesehen sind Männer circa drei bis vier mal häufiger betroffen als Frauen (Conway 1954). Ross berichtet aber, dass in der neunten Lebensdekade die Inzidenz für beide Geschlechter etwa gleich ist (Ross 1999). - 28 - Einleitung Da Hände mechanisch belastete Werkzeuge sind, stellt sich die Frage, ob im vermuteten Ursachengefüge physikalischen Schäden eine Rolle zukommt. Bereits 1832 vermutete Dupuytren selbst, dass wiederholte kleinere Traumen die Grundursache der Erkrankung darstellen. Skoog führte die Hypothese auf, dass die mehrfachen kleineren Traumen zur partiellen Ruptur der Aponeurose führen; nachfolgend kommt es zu einer Reparatur dieser Verletzung durch Fibroblastenproliferation; daraus wiederum resultiert eine Vernarbung und letztendlich die Kontraktur (Skoog 1957). Diese Auffassung wird jedoch durch manche Autoren widerlegt. Argumente, die Skoogs und Dupuytrens gemeinsame Hypothese entkräften, sind zum Beispiel gleich häufiges Vorkommen der Erkrankung bei der sowohl handwerklich wie auch geistig arbeitenden Bevölkerung. Gleichermaßen stark betonend wird darauf hingewiesen, dass diese Erkrankung nicht selten in der linken Hand von Rechtshändern diagnostiziert wird (Davis et al. 1932; Larsen et al. 1958). Andererseits existieren auch Berichte von der Entstehung der Erkrankung nach signifikanten Handverletzungen, wobei auch Operationen der Hände eine große Rolle spielen (Lanzetta & Morrison 1996). Zudem wird von Studien berichtet, die aussagen, dass von der Erkrankung besonders Männer betroffen sind, die viel mit Händen und hierbei insbesondere mit vibrierenden Geräten arbeiten (Thomas 1992; Liss & Stock 1996). Die genaue Ätiologie der Erkrankung scheint aber bis heute trotzdem nicht genau geklärt zu sein. 1.2.1.4 Klinisches Verhalten Der Basisprozess der Krankheit ist die knotige fibroblastäre Proliferation auf der volaren Fläche der Hand (Enzinger & Weiss 1983). Durch die fibrotische, kontrahierte Faszie ist die Bewegung der einzelnen Finger eingeschränkt, oder führt oft sogar zu einem Funktionsverlust (Luck 1959). Die Flexionskontraktur bezieht meist den vierten und fünften Finger der Hand. Diese charakteristische Kontraktur führt zur „Schwurhand“ (Weber 1978). Klinisch gesehen, vollzieht die Erkrankung einen progressiven Verlauf. Sie beginnt mit einem „aktiven Knoten“ und endet mit einem kontrahierten Band (Luck 1959). Die klassischen drei Stadien der Erkrankung sind die Entstehung eines Knotens, gefolgt von der Bildung eines sich langsam kontrahierenden Bandes und endend in einer progressiven Flexionsdeformität des Fingers oder der Finger (Rayan 1999). Doch ist dieses progressive Verhalten nicht in - 29 - Einleitung jeder Palmarfibromatose gleich; theoretisch ist es möglich, alle drei Stadien der Erkrankung in einer einzigen von der Fibromatose befallenen Hand zu sehen (McFarlane 1994). In circa der Hälfte der Fälle ist nur eine Hand von dem Krankheitsprozess betroffen, vorzugsweise ist es die rechte Hand. In ungefähr 40%60% sind beide Hände betroffen (Enzinger & Weiss 1983). 1.2.1.5 Makropathologie Makroskopisch erscheinen die Operationspräparate als einzelne kleinere Knoten oder mehrere zusammenhängende Knötchen oft gebunden an Portionen der verdickten Palmaraponeurose und des subkutanen Fettgewebes (Enzinger & Weiss 1983). Nur selten überschreiten die Knoten den Durchmesser von 1 cm. Sie bestehen aus verdicktem Bindegewebe mit manchmal kleinen siderotischen Herden. Die Konsistenz des fibrösen Bindegewebes ist fest und narbenähnlich bei der Palpation (Enzinger & Weiss 1983). Abhängig vom Alter der Läsion variiert die Farbe des Gewebes zwischen grau-gelb bis grau-weiß (Enzinger & Weiss 1983). a) Abb. 6: b) a) und b) Makroskopische Befunde von knotigen Strukturen einer superfiziellen Fibromatose der rechten Hand gebunden an die Palmaraponeurose und das subkutane Fettgewebe. U-Nummer: E1240/02, männlich, 64 Jahre. - 30 - Einleitung 1.2.1.6 Histopathologie Laut Mac Kenzie bildet ein knotenförmiges Zellproliferat mit je nach dem Alter der Läsion wechselndem Kollagengehalt das typische Bild der Palmarfibromatose (Mac Kenzie 1970). Der in der gesunden Palmaraponeurose hauptsächlich vorkommende Kollagentyp ist Typ I, nur kleine Anteile an Kolagentyp III lassen sich nachweisen. Die Palmarfibromatose zeigt jedoch erhöhte Anteile an Kollagentyp III (Badalamente & Hurst 1999). Nur spezifische anatomische Anteile der palmaren Faszie sind in den Erkrankungsprozess involviert. Es handelt sich hierbei um Bänder, die in der Hand eine longitudinale Verlaufsrichtung einnehmen (Chiu & McFarlane 1978; McGrouther 1999). Der histomorphologische Hintergrund der superfiziellen Fibromatose ist der tiefen Fibromatose fast identisch (Montgomery et al. 2001). 1972 wiesen Gabbianni und Majno auf das Vorkommen von Myofibroblasten in den Knoten der Palmarfibromatose hin (Gabbianni & Majno 1972). 1976 untersuchten Gokel und Mitarbeiter licht-, elektronen- und immunfluoreszenzmikroskopisch das Vorkommen der Myofibroblasten in den verschiedenen Stadien des Morbus Dupuytren (Gokel et al. 1976). Es lassen sich drei morphologische Phasen der Palmarfibromatose voneinander trennen. Das erste Stadium wird als Proliferationsphase bezeichnet. Während dieses Stadiums werden in der Palmaraponeurose knotige vorwiegend aus zahlreichen Myofibroblasten bestehende Gewebsverdichtungen nachgewiesen, die von Bändern des Kollagentyp III umgeben sind. Das zweite Stadium wird als Involutionsphase bezeichnet. Histologisch wird das Bild sowohl von Myofibroblasten als auch von Fibroblasten geprägt. Diesmal sind diese Zellen von Kollagentyp I und III umgeben. Das dritte Stadium wird als Residualphase charakterisiert. Die Knoten in diesem Stadium sind zellarm; feinstrukturell finden sich inaktive Fibrozyten und reichlich Interzellularsubstanz vom Kollagentyp I; Myofibroblasten sind nicht nachweisbar (Gokel & Hübner 1977). Die Knoten gleichen in dieser Phase einem Narbengewebe. - 31 - Einleitung 1.2.1.7 Differentialdiagnose Die Diagnosestellung „Morbus Dupuytren“ ist besonders in den ersten Stadien der Erkrankung besonders schwierig. Deshalb sollten die verschiedenen Differentialdiagnosen, welche mit einer abnormalen Haltung der Hand oder dem Vorkommen von Knoten in der Hand einhergehen, beachtet werden, denn diese können die Palmarfibromatose nachahmen. Zu den Differentialdiagnosen zählen Riesenzelltumoren des Weichgewebes, Ganglione im Bereich der Hohlhand, Zysten, Sehnenscheidenentzündungen und intrinsische Gelenkkontrakturen (Rayan 1999). - 32 - Einleitung 1.3 Angiogenese Während der Embryonalentwicklung werden Blutgefäße durch eine de novoSynthese von Endothelzellen aus mesodermalen Vorläufern aufgebaut. Dieser Vorgang wird als Vaskulogenese bezeichnet (Risau 1997). Es entstehen dabei Blutgefäße aus frühen Vorläuferzellen im Dottersack des Embryo. Durch Sprossung und Spaltung wird der dabei entstehende primäre Gefäßplexus hinterher reorganisiert. Die anschließende Erweiterung des primären Gefäßplexus erfolgt durch den Prozess der Angiogenese. Dabei ist dieser Begriff definiert als das Aussprossen neuer Kapillaren aus bereits vorbestehenden Blutgefäßen (Polverini & Nickoloff 1995). Die Angiogenese ist somit essentieller Bestandteil der Entwicklung eines funktionellen Blutgefäßsystems. Sie findet sich sowohl im Rahmen physiologischer als auch pathologischer Zustände. Zu den wenigen physiologischen Vorgängen mit aktiver Angiogenese im adulten Körper zählen die verschiedenen Prozesse im weiblichen Reproduktionssystem: Follikelreifung, Aufbau des Endometriums, Aufbau des Corpus luteums (ten Dijke & Iwata 1989; Philips et al. 1990). Daneben wird die physiologische Angiogenese vor allem auch in der Embryonalentwicklung vorgefunden (Peters et al. 1993). Pathologische Prozesse, die mit einer Angiogenese einhergehen, betreffen die Wundheilung (zum Beispiel auch Diabetes mellitus), entzündliche Reaktionen wie Sarkoidose (Tolnay et al. 1998), rheumatoide Arthritis, Psoriasis (Detmar et al. 1995) oder Hypersensibilitätserkrankungen der Haut (Brown et al. 1995) sowie das Wachstum verschiedener solider Tumoren. Die im Verlauf des Tumorwachstums neu entstandenen Gefäße unterscheiden sich von Endothelien gesunder Gewebe durch höhere Permeabilitätsrate, weniger Proliferationsrate (Hobson 1984). Basalmembrananteile und höhere - 33 - Einleitung 1.4 MIB-1 Für die Bestimmung der proliferativen Aktivität maligner Tumoren stehen verschiedene immunhistochemische Verfahren zur Verfügung. Eines dieser Verfahren ist der Nachweis des Zellkernantigens Ki-67 mit Hilfe des monoklonalen Antikörpers MIB-1. Das Zellkernantigen Ki-67 wurde von Gerdes et al. entdeckt, wobei gleichzeitig nachgewiesen wurde, dass es sich um ein Antigen handelt, welches ausschließlich in proliferierenden, nicht aber in ruhenden Zellen auftritt (Gerdes et al. 1983). Es ist ein Protein mit einem Molekulargewicht von 345-395 kD, welches frei oder assoziiert mit der DNA vorliegen kann, und welches in allen aktiven Phasen des Zellzyklus exprimiert wird, jedoch nicht in der G0-Phase (Key et al. 1993; Lopez et al. 1994). Somit gilt es als spezifisch für die reduplikative DNASyntheseaktivität und kann infolgedessen nicht in ruhenden Zellkernen, die sich in der G0-Phase befinden, nachgewiesen werden. Nur Zellen in der S-, G2-, M- und G1-Phase reagieren mit dem MIB-1-Antikörper (Steinbeck 1997). Die konventionelle Ki-67-Färbung erfolgt nur an Frischmaterial (Kryoschnitten). Gerdes und seine Mitarbeiter entwickelten 1992 jedoch mit Hilfe der Immunisierung von Mäusen mit rekombinanten Ki-67 einen MIB-1-Antikörper, welcher die proliferierenden Zellen auch in formalin-fixiertem und paraffineingebetteten Gewebe detektiert (Gerdes 1992). - 34 - Einleitung 1.5 CD-31 Ein wichtiger Faktor der Angiogenese ist das VEGF (Vascular Endothelial Growth Factor). Es stimuliert die Angiogenese in vivo und führt zur Hyperpermeabilität kapillärer Blutgefäße. Neben VEGF als messbaren Parameter der Aktivität der Angiogenese hat vor allem die quantitative Bestimmung der Mikrogefäßdichte einen hohen Stellenwert in der Forschung auf dem Gebiet der Angiogenese (Weidner et al. 1991). Bezüglich der Mikrogefäßdichte wurden bereits zahlreiche, meist epitheliale Neoplasien untersucht. Ziel der Untersuchungen war dabei die Beurteilung des Zusammenhangs zwischen der tumorinduzierten Angiogenese und der Tumorprogression und damit der Prognose dieser Tumoren. Die quantitative Bestimmung der Mikrogefäßdichte erfolgt dabei mit Hilfe der immunhistochemischen Darstellung des endothelialen Antigens CD-31. Bei dem CD-31-Antikörper handelt es sich um den sensitivsten und spezifischsten endothelialen Marker, der mit diesen Eigenschaften andere endotheliale Marker wie beispielsweise CD-34 oder Faktor VIII assoziiertes Antigen weit übertrifft (De Young et al. 1993). - 35 - Einleitung 1.6 Zielsetzung und Fragestellungen Die aggressive Fibromatose ist ein sehr seltener Tumor. Histologisch weist dieser Tumor viele Gemeinsamkeiten mit den superfiziellen Fibromatosen und niedrig malignen Sarkomen auf. Dieser Tumor metastasiert nie, doch besteht immer ein hohes Risiko bezüglich eines Rezidivs mit destruktivem Wachstum gegen angrenzende Gewebsstrukturen. Ziele dieser Untersuchungen sind: 1. Eine genaue Charakterisierung der feingeweblichen Befunde verschiedener Arten von Fibromatosen insbesondere der Zellularmatrix vor allem hinsichtlich einer sicheren differentialdiagnostischen Abgrenzung der Fibromatosetypen. 2. Die Auswertung klinisch-pathologischer Parameter in Bezug auf eine prognostische Relevanz. Hierbei ergeben sich folgende Fragen: 1. Wie verhalten sich die beiden Fibromatosetypen bezüglich des Zellbildes? 2. Sind mitotische Figuren zu beobachten? 3. In welcher Anzahl und in welcher anatomischen Lokalisation des Tumors treten sie besonders häufig auf? 4. Welche Nukleolenanzahl der Myofibroblasten ist nachzuweisen? 5. Sind Entzündungsinfiltrate vorhanden, falls ja, wie häufig? 6. Ist die Histologie abhängig von der Tumortopographie? 7. Weisen die Fibromatosen auffällige Expressionsmuster auf, zum Beispiel unterschiedliche Faserarten in verschiedener Ausprägung? 8. Inwiefern unterscheiden sich beide Fibromatosetypen bezüglich des Proliferationsmusters? 9. Welche Aussagen lassen sich anhand der Darstellung der Mikrogefäße mit dem Marker CD-31 machen? 10. Welche Zusammenhänge lassen sich zwischen der Lokalrezidivrate und Faktoren wie Alter und Geschlecht des Patienten, Tumortopographie, Tumorgröße, Mitosenanzahl im Tumorgewebe, Proliferationsaktivität des Tumors, Gefäßdichte im Tumorgewebe, Resektionsstatus und einer - 36 - Einleitung adjuvanten Nachbestrahlung des Tumors aus der statistischen Analyse ableiten? 11. Ergeben sich damit hinsichtlich des rezidivfreien Überlebens bei der aggressiven Fibromatose prognostische Faktoren? - 37 - Material und Methoden 2 MATERIAL UND METHODEN 2.1 Untersuchungsgut In der vorliegenden Arbeit sind insgesamt 47 Tumoren vom Typ der aggressiven Fibromatose bei 33 Patienten untersucht worden. Weiterhin wurden 11 Fälle der superfiziellen Fibromatose vom Typ des Morbus Dupuytren (Palmarfibromatose) bei 11 Patienten und bei weiteren 9 Patienten 9 Narben vom Keloidtyp analysiert. Beim Gesamtkollektiv der aggressiven Fibromatosen handelt es sich um 15 Primärtumoren und 32 Rezidive. Bei 8 der 33 Patienten wurden mehrere Tumoren untersucht. Bei den restlichen 25 Patienten stand jeweils nur ein Tumor zur Verfügung. Beim Gesamtkollektiv des Morbus Dupuytren handelt es sich in allen Fällen um die Primärdiagnose. Alle in dieser Arbeit erfassten Patienten wurden in den Jahren von 1992 bis 2002 in der Klinik für Plastische Berufsgenossenschaftlichen Chirurgie Kliniken und Schwerbrandverletzte Bergmannsheil, der Handchirurgiezentrum, Operatives Referenzzentrum für Gliedmaßentumoren (Direktor: Prof. Dr. med. H.-U. Steinau) Universitätsklinik Bochum behandelt. Die resezierten Tumoren oder Narben wurden anschließend im Institut für Pathologie der gleichen Klinik diagnostiziert. Die Fälle der aggressiven Fibromatosen und der Palmarfibromatosen wurden ins Register für Weichgewebstumoren der Berufsgenossenschaftlichen Kliniken Bergmannsheil-Universitätsklinik aufgenommen. Sowohl die klinischen Daten wie Angaben bezüglich des Patientenalters und geschlechts, der Tumorlokalisation, des Auftretens von Rezidiven und des krankheitsfreien Überlebens als auch morphologische Daten bezüglich der Angaben von Tumorgröße, Resektionsstatus und Diagnosestellung wurden den jeweiligen Krankenakten beziehungsweise der Archivierung im Institut für Pathologie entnommen. Sämtliche Tumorpräparate wurden unter Berücksichtigung der unterschiedlich eingesetzten Färbungen sowie immunhistochemischen Reaktionen lichtmikroskopisch analysiert. Im Rahmen der konventionellen Aufarbeitung der Tumoren wurden zwischen 4 und 10 Schnittpräparate der einzelnen Tumoren aggressiver Fibromatosen untersucht. - 38 - Material und Methoden 2.1.1 Patientenübersicht Die folgenden drei Tabellen dienen einer Übersicht der bei dieser Arbeit aufgenommenen Patienten. Für alle Patienten lassen sich Angaben zu Initialen, Geburtsjahr, Geschlecht und Lokalisation des untersuchten Gewebes aus den Tabellen entnehmen. Fernerhin wurden bei Patienten mit aggressiven Fibromatosen Daten bezüglich des Alters bei Primärdiagnose und Anzahl der in dieser Arbeit untersuchten Tumoren eingefügt. Tab. 1: Initialen Übersicht der Patienten mit Morbus Dupuytren Geburtsjahr Geschlecht Lokalisation des Morbus Dupuytren E. K.-J. 1951 m rechte Hand G. W. H. M. K. I. K. J. K. H.-G. M. H. P. H.-R. Q. K. S. J. T. W. 1948 1932 1941 1948 1944 1954 1940 1944 1939 1939 m w w m m m m m m w linke Hand rechte Hand linke Hand rechte Hand linke Hand rechte Hand linke Hand rechte Hand linke Hand rechte Hand Tab. 2: Initialen E. M. F. O. G. M. H. W. S. H. S. K. V. C. V. S. W. H. Übersicht der Patienten mit Narben Geburtsjahr Geschlecht 1943 1991 1938 1952 1944 1971 1946 1989 1950 m m w w m w w w m Lokalisation der Narbe Kopfschwarte rechte Kniekehle linke Schulter rechte Leiste rechter Oberschenkel linke Mamma Bauchdecke Keloid bei Z. n. Verbrennung linke Schulter - 39 Tab. 3: Material und Methoden Übersicht der Patienten mit aggressiven Fibromatosen Alter bei Geburts GeUntersuchte Primär- Lokalisation des Desmoidtumors -jahr schlecht Tumoren diagnose linke und rechte laterale A. D. 1957 w 4 Rezidive 23 Thoraxwand, Mons pubis, linker Musculus rectus abdominis A. S. 1943 w Primärtumor 40 rechter Musculus rectus abdominis B. B. 1974 w Primärtumor 25 linker Musculus rectus abdominis B.-G. G. 1959 w 1 Rezidiv 37 rechte ventrale Thoraxwand B. K. 1954 w 2 Rezidive 38 linker Oberschenkel B. H. 1937 m 1 Rezidiv 56 linke Schulter G. D. 1961 m 3 Rezidive 30 rechter Unterschenkel unberechter Oberarm, rechte Schulter G. B. 1943 w 4 Rezidive kannt G. W. 1945 m 1 Rezidiv 50 linke Schulter G. Do. 1943 w 1 Rezidiv 54 rechter Oberarm Primärtumor 23 linker Oberschenkel H. T. 1969 m u. 1 Rezidiv J. M. 1963 w Primärtumor 35 linke Axilla J. H. 1922 w 1 Rezidiv 69 linkes Ohrläppchen J. He. 1937 w 2 Rezidive 58 rechtes Ohrläppchen Dorsaler Beckenkamm, links K. H. 1939 w Primärtumor 59 paravertebral L. P. 1972 m 3 Rezidive 23 rechter Oberschenkel M. M. 1963 w Primärtumor 35 rechter Musculus rectus abdominis M. R. 1933 m 1 Rezidiv 50 linker Oberarm, linke Schulter unbeP. A. 1928 w 1 Rezidiv linke Schulter kannt R. G. 1936 w Primärtumor 63 links supraklavikulär R. M. 1951 m Primärtumor 46 rechter Latissimus dorsi R. Gu. 1945 w Primärtumor 49 linke Schulter, linker Hals S. A. 1980 m 1 Rezidiv 18 rechter Oberarm rechte paravertebrale S. P. 1961 w 1 Rezidiv 35 Rückenregion im Lendenwirbelbereich S. G. 1927 m Primärtumor 72 linke laterale Thoraxwand S. U. 1965 w Primärtumor 32 Rechte Kniekehle Sc. K. 1938 w 1 Rezidiv 53 linke Glutealregion S. M. 1957 m 1 Rezidiv 40 Rechte Schulter S. K. 1956 w Primärtumor 43 linke Schulter S. R. 1950 m Primärtumor 45 rechter Oberarm S. L. 1955 w 2 Rezidive 30 rechter Unterarm T. B. 1963 w Primärtumor 37 2. linker Zeh lateral T. S. 1966 w Primärtumor 36 linke Glutealregion Initialen - 40 - Material und Methoden 2.2 Methoden 2.2.1 Histomorphologische Untersuchungsmethoden Das in dieser Arbeit aufgenommene Gewebematerial wurde in 4% gepuffertem Formalin fixiert und in Paraffin eingebettet. Es wurden repräsentative Gewebsanteile zur histologischen Untersuchung entnommen, wobei in der Regel pro cm Tumorausdehnung - wenn möglich - ein Gewebsblöckchen entnommen wurde. Von allen Gewebeproben wurden 3-4 µm dicke Gewebsschnitte angefertigt, auf eventuell entsprechend beschichtete Objektträger aufgezogen und anschließend gefärbt. Zum Einsatz kamen die HE-Färbung (Hämatoxylin-Eosin), Berliner-Blau-Reaktion, EvGFärbung (Elastica-van-Gieson) und die Silberfärbung nach Gomorri. 2.2.1.1 HE-Färbung Die HE-Färbung wurde nach histologischem Standardprotokoll bei den einzelnen Gewebsschnitten angewandt. Die Erfassung histologischer und zytologischer Details sowie der Mitosefigurenrate erfolgte mit Hilfe dieser Färbung. Unter dem Begriff Mitose wird die Zellteilung, d.h. die Teilung einer Zelle in zwei Tochterzellen verstanden, wobei während des Vorgangs eine identische Reduplikation des genetischen Materials resultiert und auf jede der Tochterzellen je ein vollständiger Chromosomensatz verteilt wird. Die Zellteilung verläuft in 4 Phasen. Diese werden als Prophase, Metaphase, Anaphase und Telophase bezeichnet. Bei der Beurteilung der Mitosefiguren wurden jeweils alle 4 Phasen in Betracht gezogen. Dabei wurden jeweils bei jedem Gewebsschnitt 50 hochvergrößerte Gesichtsfelder (HPF) aus den proliferativ aktiven Arealen der Fibromatosen beziehungsweise der Narben ausgezählt. Die Auszählung erfolgte bei 400facher Vergrößerung (40x Objektiv, 10x Okular), (1 HPF ⇒ 0,16 mm²). Die Mitosefigurenrate wurde somit als durchschnittliche Mitosefigurenanzahl pro 50 HPF angegeben. Auch die Beurteilung der Nukleolenanzahl in den Kernen der Zellen resultierte aus den mit Hämatoxylin-Eosin angefärbten Gewebsschnitten. - 41 - Material und Methoden 2.2.1.2 Berliner-Blau-Reaktion Zum möglichen Nachweis von Hämosiderinablagerungen als Hinweis abgelaufener Blutungen wurde eine Berliner-Blau-Eisenfärbung durchgeführt. Die Eisenfärbung ist eine chemische Färbemethode und ein histochemischer Nachweis des ionisierten Eisens. Dabei kann das ionisierte Eisen in Form des zweioder dreiwertigen Eisens vorliegen. Der Nachweis des zweiwertigen Eisens erfolgt mit der einfachen Eisenfärbung, der des dreiwertigen Eisens mit Hilfe der BerlinerBlau-Methode. Bei beiden Methoden wird das gebundene Eisen von der Färbung nicht erfasst. Die in dieser Arbeit angewandte Methode ist der einfache Nachweis des zweiwertigen Eisens. Die Anleitung zur Coloration der Gewebsschnitte mit dieser Färbung setzt sich wie folgt zusammen: 1. Entparaffinierung 2. Kaliumhexacyanoferrat 2% mit HCl 2% für 30min 3. Aqua dest für kurz 4. Kernechtrot für 30 min 5. Aqua dest für kurz 6. 70%iger Alkohol für 3 min 7. 70%iger Alkohol für 3 min 8. aufsteigende Alkoholreihe Das dargestellte Eisen zeigt sich als körnchenartige oder schuppige Struktur. Die Auswertung der Schnittpräparate erfolgte folgendermaßen. In jedem Schnittpräparat wurden bei 400facher Vergrößerung (40x Objektiv, 10x Okular) jeweils 3 repräsentative Gesichtsfelder, sogenannte „hot-spots“ zur Beurteilung des Auftretens eisenpositiver Zellen herangezogen. Es wurde die Anzahl der eisenpositiven Zellen in den 3 Feldern angegeben und anschließend für jedes untersuchte Gewebe der Mittelwert aus den 3 untersuchten Feldern errechnet. 2.2.1.3 EvG-Färbung Die Gewebsschnitte wurden als erstes in der absteigenden Alkoholreihe entparaffiniert. Dazu wurden sie zweimal hintereinander für jeweils einen Zeitraum von 5 Minuten in mit Xylol gefüllte Behälter platziert. Anschließend wurden sie jeweils für eine kurze Zeit nacheinander in 100%igen, 96%igen und 70%igen - 42 - Material und Methoden Alkohol eingetaucht. Danach wurden sie in einem Gefäß mit Resorcinlösung belassen. Nach 15 Minuten wurden sie kurz mit Leitungswasser abgespült und ebenfalls nur für kurze Zeit in den Behälter mit 96%igen Alkohol eingetunkt. Hinterher erfolgte eine Deponierung der Schnitte in einem mit Eisenhämatoxylinlösung nach Weigert eingegossenen Glas. Nach fünf Minuten wurden die Schnitte zehn Minuten lang warm gewässert und danach für fünf Minuten in ein mit Pikrofuchsinlösung gefülltes Resevoir eingesetzt. Anschließend wurden sie kurz mit destilliertem Wasser befeuchtet und für zwei bis drei Sekunden in 96%igen Alkohol eingetaucht. Zuletzt erfolgte die Entwässerung mit Hilfe der aufsteigenden Alkoholreihe. Hierfür wurden die Schnitte für jeweils eine Minute schrittweise in 70%igen, 96%igen und 100%igen Alkohol eingetunkt und daraufhin zweimal aufeinander in Xylollösung aufgehellt. Eine der Zielsetzungen dieser Arbeit war die detaillierte Charakterisierung der einzelnen Fasern in den superfiziellen und tiefen Fibromatosen und im Vergleich dazu auch in Narben. Aus diesem Grunde wurde die Elastica-van-Gieson Färbung gewählt, da der verwendete Farbstoff Resorcinfuchsin zur selektiven Anfärbung der elastischen Fasern dient, die in dem histologischen Routineschnitt nicht hervortreten. Das Resorcinfuchsin verleiht den elastischen Fasern einen schwärzlich-braunen Collor. Die Zellkerne erscheinen im schwarzbraunen bis schwarzen und die Muskulatur im gelben Farbton. Das Kollagengewebe wird dagegen rötlich markiert. 2.2.1.4 Silberfärbung nach Gomorri Wie die EvG-Färbung diente auch diese Färbung der Charakterisierung der verschiedenen Fasern der unterschiedlichen Fibromatosen und der Narben. Mit Hilfe der Silberimprägnation nach Gomorri sollten die Retikulinfasern in den Geweben dargestellt werden, da auch hier es sich um Fasern handelt, die bei der Routinefärbung nicht hervortreten. Retikuläre Fasern sind Fasern vom Kollagentyp III (Junquiera & Carneiro 1996). Die Silberimprägnation nach Gomorri ist insofern selektiv für die Darstellung jener Fasern, als dass diese in basischen Lösungen reduzierbarer Silbersalze metallisches Silber binden. Dabei lagern sich Silberpartikel an die Glykoproteinauflagerungen an der Oberfläche der Fasern ab und führen zu einer „periodischen Außenfärbung“; im Gegensatz dazu führen Kollagenfasern zu einer „periodischen Innenfärbung“ (Junquiera & Carneiro 1996). Diese Fasern - 43 - Material und Methoden werden deshalb auch als argyrophile Fasern bezeichnet (Kühnel 1995), oder es wird aufgrund der Bildung feiner Netze um Parenchymzellen in einigen Organen und zarter Gitter zwischen Epithel und Bindegewebe beziehungsweise Muskulatur auch der Ausdruck Gitterfasern verwendet (Junquiera & Carneiro 1996). Die Färbung der argentaffinen Retikulinfasern erfolgte mit einem von der Firma „Färbe Fuchs“ geliefertem KIT (Katalog-Nr. BIO 04-040801). Das KIT setzte sich zusammen aus verschiedenen Lösungen. Bei diesen Lösungen handelte es sich um folgende Stoffe: • Kaliumpermanganat-Lösung 18ml • saurer Aktivierungspulver 18ml • Oxalsäure-Lösung 30ml • Eisen-Ammoniumsulfat-Lösung 30ml • Ammoniakalische Silberlösung 30ml • neutrale Formalin-Lösung 30ml • Natriumhyposulfit-Fixierlösung 30ml Die Färbung erfolgte nach der von der Firma gelieferten Färbevorschrift. Das Ergebnis der Silberimprägnation ist die Verleihung eines schwarzen Farbtons an die Retikulinfasern, welche vornehmlich aus Kollagen des Typs III bestehen. Das restliche vorwiegend aus Kollagen des Typs I bestehende Bindegewebe erhielt einen braunen Farbton. 2.2.2 Immunhistochemische Methoden Verwendete Antikörper waren der zum Nachweis der proliferativen Aktivität monoklonale Mausantikörper MiB-1 (Klon Dianova, Hamburg) und der zur Bestimmung der Mikrogefäßdichte ebenfalls monoklonale Mausantikörper CD-31 (Klon JC/70A) der Firma Dako Hamburg. - 44 - Material und Methoden 2.2.2.1 APAAP-Methode Die immunhistochemischen Schnitte wurden mit Hilfe der APAAP-Methode (alkalische Phosphatase anti-alkalische Phosphatase) unter Verwendung entsprechender Antikörper gefärbt. Im Folgenden werden die einzelnen Schritte dieser Methode aufgeführt, wobei die Sequenzen 1 bis 3 manuell, die Schritte 4 bis 9 automatisch mit Hilfe des Chem Mate 500 der Firma DAKO und der letzte Schritt erneut manuell durchgeführt wurden. 1. 3-4 µm dicke Schnittpräparate des in Formalin fixierten und in Paraffin eingebetteten Gewebes wurden auf einen speziellen mit Poly-L-Lysin beschichteten Kapillarspaltobjektträger der Firma DAKO aufgezogen. Anschließend wurden die Präparate über Nacht bei 37°C im Wärmeschrank getrocknet. 2. Die Schnittpräparate wurden in Xylol entparaffiniert und in einer absteigenden Alkoholreihe rehydriert. Anschließend wurden sie in TrisPuffer (pH 7,2) für 10 Minuten gespült. 3. Dieser Schritt bestand in der Vorbehandlung der Schnitte mit einer Hitzedemaskierung in der Mikrowelle für 3 x 5 Minuten bei 600 Watt. Dabei wurden die auf MiB-1 untersuchten Schnitte in einem Citratpuffer (pH 6,0) und die auf CD-31 untersuchten Schnitte in einem EDTA-Puffer (pH 8,0) gekocht. 4. Die Schnitte wurden mit den entsprechenden Antikörpern in der jeweiligen Gebrauchsverdünnung für 25 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert. Der MiB-1 Antikörper wurde dabei mit einem Diluent der Firma DAKO auf 1:500 und der CD-31-Antikörper auf 1:200 verdünnt. Für die Verdünnung des CD-31-Antikörpers wurde ebenfalls ein Diluent der Firma DAKO verwendet. Anschließend erfolgte eine Spülung der Präparate in einem Puffer-Kit (K5006, Firma DAKO). - 45 5. Material und Methoden Nach erneuter Spülung der Präparate erfolgte eine weitere 25 Minuten lange Inkubation bei Raumtemperatur mit einem Sekundärantikörper = LINK (APAAP-Kit K5000, Firma DAKO, gebrauchsfertig). Bei diesem Brückenantikörper handelt es sich um Kaninchen-Anti-Maus Immunglobuline aller Isotypen. 6. Die Schnitte wurden nun wieder mit dem Puffer gespült und nochmals für weitere 25 Minuten bei Raumtemperatur, diesmal mit einem APAAPKomplex (APAAP-Kit K5000, Firma DAKO, gebrauchsfertig), inkubiert. Der APAAP-Komplex besteht aus monoklonalen Maus Ig-G1 Antikörpern, welche spezifisch an die alkalische Phosphatase aus Kälberdarmmukosa gebunden sind. 7. Nach Spülung der Schnitte mit dem Puffer wurden die Schritte 5 und 6 an dieser Stelle wiederholt. Durch diesen Effekt war eine Verstärkung der Reaktion beabsichtigt worden. 8. Zur Farbentwicklung wurde ebenfalls der APAAP-Kit benutzt. Beim Chromogen-Substrat handelte es sich um Neufuchsin. Die endogene AP wurde durch Zugabe von Levamisol (0,2 mmol), ebenfalls im APAAP-Kit enthalten, geblockt. Die Inkubationszeit betrug 4 x 5 Minuten, wobei zwischendurch Spülvorgänge mit Puffer stattfanden. 9. Die Gegenfärbung erfolgte mit Mayers-Hämatoxylin für 2 Minuten. Anschließend wurden die Präparate erst in Puffer und dann in Aqua dest. gebläut. 10. Der abschließende Schritt wurde erneut manuell durchgeführt. Hierbei wurden die Schnittpräparate in aufsteigender Alkoholreihe dehydriert. Danach wurden die Schnitte über Xylol mit Eindeckfolie (Eindeckautomat der Firma Vogel) abgedeckt. - 46 - Material und Methoden 2.2.3 Auswertung aller Präparate Die Auswertung sowohl der histomorphologischen als auch der immunhistochemischen Schnitte erfolgte mit einem Lichtmikroskop (Axioskop, Carl Zeiss, Jena). Die in dieser Arbeit vorgestellten Abbildungen wurden mit Hilfe einer CCD-Kamera aufgenommen und unter Anwendung von Diskus- Bildbearbeitungsprogrammen am Computer erstellt. Die im Abschnitt Material vorgeführten Tabellen und Graphiken entstanden mit Hilfe des Programms Excel für Windows. 2.2.3.1 Auswertung immunhistochemischer Reaktionen mit dem Marker CD-31 / Mikrogefäßdichte Die quantitative Analyse der tumorassoziierten Mikrogefäße wurde bei 47 aggressiven Fibromatosen und 11 Palmarfibromatosen durchgeführt. Nach vorgegebener Definition war der Nachweis eines sichtbaren Lumens der analysierten Mikrogefäße nicht notwendig (Weidner et al. 1991; Vermeulen et al. 1996). Jede spezifisch immunreaktiv positive Zelle wurde als Kapillarstruktur gewertet und gezählt. Es erfolgte ausschließlich eine Messung von tumorassoziierten Kapillaren, wobei darauf geachtet wurde, dass keine Hämorrhagien oder Degenerationsareale enthalten wurden. Die flächenmäßige Bestimmung der markierten Endothelien erfolgte bei 100facher Vergrößerung (Objektiv 10x, Okular 10x) in einem Feld der Größe von 2,84 mm². Die Analyse der Gefäßstrukturen erfolgte in den Arealen der stärksten Mikrovaskularisierungsdichte („neovascular hot-spots“). Pro Tumorfall wurde jeweils ein Schnitt ausgewertet. Dabei wurden stets drei für den Tumor repräsentative Messfelder beobachtet. Aus der in diesen drei Arealen sich ergebenden Anzahl der Kapillarstrukturen wurde anschließend der arithmetische Mittelwert gebildet. Die Bestimmung der intratumoralen Mikrogefäßdichte („intratumoral microvessel density“) (IMD) erfolgte aus der errechneten Gefäßanzahl bei 100facher Vergrößerung bezogen auf das Gesichtsfeld von 2,84 mm². - 47 - Material und Methoden 2.2.3.2 Auswertung der immunhistochemischen Reaktionen mit dem Marker MiB-1 Alle in dieser Arbeit untersuchten aggressiven und superfiziellen Fibromatosen wurden auf ihre proliferative Aktivität hin analysiert. Die Analyse der proliferativen Aktivität erfolgte mit Hilfe des monoklonalen Antikörpers MiB-1. Dabei wurde jedes Schnittpräparat bei 400facher Vergrößerung betrachtet. Durch Verschieben des Objektträgers wurde nach den ausschließlich sich im Tumor befindenden 3 repräsentativsten Gesichtsfeldern Ausschau gehalten. Unter den repräsentativen Gesichtsfeldern sind in diesem Falle die sogenannten „hot-spots“ zu verstehen, also Felder, welche die meisten positiven Zellen aufzeigten. Die Stärke der nukleären Reaktion wurde dabei nicht berücksichtigt. In jedem der 3 Gesichtsfelder wurde der prozentuale Anteil der MiB-1 positiven Zellen ermittelt und anschließend aus den 3 gegebenen Werten der arithmetische Mittelwert errechnet. Für die statistische Auswertung der Gewebeproben der aggressiven Fibromatose wurden die endgültigen Werte der 33 erfassten Tumoren berücksichtigt. Aus diesen 33 Werten wurde sowohl der arithmetische Mittelwert, welcher bei 2,24% lag und der Median, mit dem Wert von 0,33% errechnet. Anschließend wurde ein Score angelegt, welcher sich an dem ermittelten Median orientierte. Die Einteilung wurde folgendermaßen vorgenommen: Anteil der positiv markierten Zellen im Verhältnis zu den negativen Zellen: • 1⇒ < oder = 0,33% positive Zellen • 2⇒ > 0,33% positive Zellen Viele der untersuchten Gewebsschnitte wiesen am Rand Anteile der Epidermis auf, hiervon betroffen waren fast alle superfiziellen Fibromatosen, aber auch zahlreiche aggressive Fibromatosen. Dabei zeigten die proliferierenden Keratinozyten der germinativen Schicht ein deutliches positives Reaktionsprodukt mit dem angewandten monoklonalen Antikörper MiB-1 als endogene Kontrolle. - 48 - Material und Methoden 2.3 Statistische Auswertung Gegenstand der statistischen Analyse war der Zeitpunkt des Auftretens des ersten Rezidivs der aggressiven Fibromatosen in Abhängigkeit von bestimmten Faktoren. Bezüglich aller untersuchten Parameter wurde die Population, in jeweils 2 Subgruppen unterteilt. Es wurden Überlebenszeitfunktionen mit der Prozedur PROC LIFETEST mit Hilfe des Programms SAS/STAT Version 6 geschätzt. Zur Analyse des Einflusses der unterschiedlichen Faktoren auf die Zeit bis zum Eintreten des ersten Rezidivs wurden die Unterschiede zwischen den Überlebensfunktionen untersucht. Mit Hilfe des Log-Rank-Tests wurden potentielle Unterschiede auf Signifikanz getestet. Die Überlebensfunktionen gelten als signifikant unterschiedlich, wenn der p-Wert des Long-Rank-Tests kleiner oder gleich 0,05 beträgt. Zur besseren Einschätzung der Beeinflussung durch diese Faktoren wurden für die einzelnen Variablen Survival-Funktionen geschätzt (Cox & Oakes 1984; Miller 1994; Parmer & Machin 1995). Da es sich bei der vorliegenden Analyse um eine Datenerhebung mit zurückverlegtem Beginn handelt, wird von einer historischen Kohortenstudie gesprochen (Kruenbrock & Schach 1995). Patienten, die im Beobachtungszeitraum kein Rezidiv entwickelt haben oder vorzeitig aus der Studie entfielen, wurden als zensiert betrachtet. - 49 - Ergebnisse 3 ERGEBNISSE 3.1 Ergebnisse zu Patientendaten 3.1.1 Ergebnisse zu Patientenalter und Geschlechtsverteilung im Gesamtkollektiv Beim Patientenkollektiv der aggressiven Fibromatosen handelte es sich um 22 Frauen und 11 Männer. Das Alter dieser Patienten reichte von 19 bis zu 77 Jahren. Der Mittelwert des Alters betrug dabei 45,9 Jahre, der Altersmedian lag bei 45 Jahren. Bei allen 33 Patienten konnten klinische Daten erhoben werden. Bei dem Patientenkollektiv der Palmarfibromatosen handelte es sich um 3 Frauen und 8 Männer. Das Alter dieser Patienten reichte von 47 bis zu 62 Jahren. Die untersuchten Narben entstammten von 5 Frauen und 3 Männern. 3.1.2 Geschlechtsverteilung bei Patienten mit aggressiven Fibromatosen Das folgende Säulendiagramm liefert eine Darstellung der Geschlechtsverteilung der aggressiven Fibromatosen. Bei diesem Patientengut handelte es sich um 22 Frauen und 11 Männer (Männer : Frauen = 1 : 2). Geschlechtsverteilung Anzahl der Patienten 25 20 15 10 5 0 weiblich Abb. 7: männlich Graphische Darstellung der Geschlechtsverteilung bei 33 Patienten mit aggressiven Fibromatosen. - 50 - Ergebnisse 3.1.3 Altersverteilung bei Patienten mit aggressiven Fibromatosen Die folgende Graphik zeigt die Altersverteilung der Patienten mit aggressiven Fibromatosen. Es wurden jeweils Einteilungen in Dekaden vorgenommen. Anzahl der Patienten Altersverteilung 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 11 bis 20 Jahre Abb. 8: 21 bis 30 Jahre 31 bis 40 Jahre 41 bis 50 Jahre 51 bis 60 Jahre 61 bis 70 Jahre 71 bis 80 Jahre Graphische Darstellung der Altersverteilung bei 33 Patienten mit aggressiven Fibromatosen. Bei der Darstellung fällt auf, dass sich bei der Altersverteilung zwei Gipfel ergeben. Diese liegen jeweils in der vierten mit jeweils 10 Tumoren und in der sechsten Lebensdekade mit jeweils 8 Tumoren. - 51 - Ergebnisse 3.1.4 Geschlechtsverteilung bei Patienten mit Morbus Dupuytren Die folgende Graphik präsentiert die Geschlechtsverteilung der Patienten mit Morbus Dupuytren. Betroffen waren 3 Frauen und 8 Männer (Frauen : Männer = 1 : 2,7). Geschlechtsverteilung 8 Anzahl der Patienten 7 6 5 4 3 2 1 0 weiblich Abb. 9: männlich Graphische Darstellung der Geschlechtsverteilung bei 11 Patienten mit Morbus Dupuytren. 3.1.5 Altersverteilung bei Patienten mit Morbus Dupuytren Dieses Säulendiagramm legt eine Übersicht zur Altersverteilung der Patienten mit Morbus Dupuytren dar. Auch hier wurde das Alter in 10-Jahresklassen unterteilt. Da jeder Patient älter als 40 Jahre alt war, fängt das Diagramm erst mit der Säule „41 bis 50 Jahre“ an. Altersverteilung Anzahl der Patienten 5 4 3 2 1 0 41 bis 50 Jhre Abb. 10: 51 bis 60 Jahre 61 bis 70 Jahre Graphische Darstellung der Altersverteilung bei 11 Patienten mit Morbus Dupuytren. - 52 - Ergebnisse 3.2 Klinisch-pathologische Daten von 33 aggressiven Fibromatosen Für die Analyse der klinisch-pathologischen Daten der aggressiven Fibromatosen wurden folgende Faktoren berücksichtigt: Alter und Geschlecht des Patienten, Tumorgröße, Tumorlokalisation, Resektionsstatus des Tumors und über die Tumorresektion hinausgehende zusätzliche Therapie. Für die statistische Auswertung wurden von den insgesamt 47 aggressiven Fibromatosen der 33 Patienten nur 33 Tumoren erfasst. Dabei handelte es sich um jeweils einen Tumor eines Patienten. Im Falle der Patienten, von denen Mehrfachrezidive vorhanden waren, - in diesem Untersuchungsgut waren es 8 Patienten - wurde für die statistische Auswertung, chronologisch betrachtet, jeweils der erste Tumor erfasst. Bezüglich des Alters und des Geschlechts wurden bereits oben im Text Graphiken aufgeführt. Die folgenden Angaben beziehen sich auf die für die in der statistischen Auswertung erfassten 33 Tumoren. 3.2.1 Tumorgröße Die Tumorgröße reichte von 1 cm bis zu 13 cm. Der Mittelwert lag bei einer Tumorgröße von 5,96 cm, der Median betrug 5,5 cm. Für die statistische Auswertung wurde ein Mittelmaß von 5 cm angesetzt. Tumoren mit einer Größe kleiner oder gleich 5 cm wurden mit der Ziffer 1 kodiert, Tumoren deren Größe über 5 cm betrug, wurden mit der Ziffer 2 kodiert. Die einzelnen Tumorgrößen als auch die zugehörige Kodierung sind der Tabelle 4 zu entnehmen. Dabei waren 16 (48,5%) der 33 Tumoren kleiner oder gleich 5 cm und die restlichen 17 (51,5%) Tumoren waren größer als 5 cm. 3.2.2 Tumorlokalisation 4 der 33 Tumoren waren als abdominale Desmoide zu kennzeichnen. Die übrigen 29 Tumoren gehörten zur Gruppe der extraabdominalen Desmoide. Für die statistische Auswertung wurde jedoch die Unterteilung in „Tumoren lokalisiert im Extremitätenbereich“ und „Tumoren lokalisiert im Stammbereich“ vorgenommen. Hierbei ergab sich die folgende Konstellation: 19 (57,6%) Tumoren waren in die Gruppe der Extremitäten-Tumoren und 14 (42,4%) Tumoren in die Gruppe der Stamm-Tumoren klassifiziert. Die häufigste Einzellokalisation war der SchulterOberarmbereich mit insgesamt 11 (33,3%) Tumoren. (siehe Abbildung 11). - 53 - Abb. 11: Ergebnisse Anatomische Verteilung der aggressiven Fibromatosen bei 33 Patienten. 3.2.3 Resektionsstatus In Anlehnung an die TNM-Klassifikation maligner Tumoren der UICC (Union Internationale Contre le Cancer) (Wittekind et al. 2002) wurde der Resektionsstatus wie folgt eingeteilt: • R0 ⇒ Resektionsränder frei von Tumorgewebe • R1 ⇒ mikroskopisch Resttumor vorhanden • R2 ⇒ makroskopisch Resttumor vorhanden Als R0 wurden 4 (12,1%) der 33 Tumoren eingestuft. Einen Resektionsstatus von R1 besaßen 21 (63,6%) und einen Resektionsstatus von R2 besaßen 8 (24,2%) Tumoren der 33 aggressiven Fibromatosen. Für die statistische Auswertung wurden, aufgrund der geringen Anzahl, die als R0-klassifizierten aggressiven Fibromatosen gemeinsam mit den als zusammengefasst. R1-diagnostizierten Desmoidtumoren in einer Subgruppe - 54 - Ergebnisse 3.2.4 Adjuvante Therapie Als einzige adjuvante Therapie wurde eine Bestrahlung angewandt. Bei 4 (12,1%) der 33 Patienten konnten jedoch aus den Krankenakten keine sicheren Angaben bezüglich einer adjuvanten Therapie erhoben werden. 11 (33,3%) der 33 Patienten erhielten zusätzlich zur Operation eine Radiatio, bei 18 (54,5%) der 33 Patienten wurde keine weiterführende Therapie durchgeführt. 3.3 Ergebnisse der lichtmikroskopischen Untersuchungen Da die statistische Untersuchung der aggressiven Fibromatosen 33 Tumoren erfasste, werden sich nun die aufgeführten Ergebnisse nur auf diese 33 Tumoren beziehen. Erst nach Vorstellung der statistischen Ergebnisse werden die restlichen 14 aggressiven Fibromatosen vergleichend herangezogen. 3.3.1 Histopathologisches Erscheinungsbild der aggressiven Fibromatosen Ausnahmslos alle untersuchten Gewebsschnitte zeigten die aggressiven Fibromatosen als aus langen, teils welligen Faszikeln oder Bündeln aufgebaute Tumoren. Dabei setzten sich die einzelnen Bündel aus länglichen spindelförmigen Zellen zusammen, welche von Kollagenfasern umgeben waren. Es konnten ebenfalls in allen Desmoidtumoren zwei unterschiedliche Arten von Zellen charakterisiert werden. Zum einen gab es Zellen mit großen hellen Kernen, in welchen die Kernkörperchen deutlich zu erkennen waren und zum anderen wurden auch Zellen beobachtet, mit kleinen sehr dunklen und dichten Kernen, in welchen die Nukleolen nicht sichtbar waren. Auffallende Atypien oder atypische Kernteilungsfiguren waren in keiner der Gewebeproben dokumentiert worden. Desgleichen unterschieden sich auch die Faszikel voneinander, und zwar in ihrer Zelldichte. Es waren sowohl Faszikel nachzuweisen mit enorm dichter Zellanzahl als auch Faszikel, welche nur eine sehr geringe Zellanzahl aufwiesen. Diese verschiedenen Bündel waren disseminiert nebeneinander anzutreffen. Zudem konnte in allen Gewebsschnitten (100%) eine tentakelartige Infiltration der aggressiven Fibromatosen in das umgebende Gewebe dokumentiert werden. Vor allem in der Peripherie zeigten eingeschlossene Zellen oft auffallende Regenerationsphänomene mit dichtgelagerten - 55 - Ergebnisse zahlreichen Kernanschnitten. Hinsichtlich der Tumortopographie konnten keine histologischen Unterschiede festgestellt werden. a) Abb. 12: b) Histologisches Erscheinungsbild eines Desmoids der linken lateralen Thoraxwand in der HE-Färbung. a) Übersicht des typischen faszikelförmigen Wachstumsmusters des Desmoids. b) Stärkere Vergrößerung mit Präsentation der charakteristischen zwei Arten von Tumorzellkernen: spindelige Tumorzellen mit großen hellen Kernen und deutlichen Nukleolen, zudem Tumorzellen mit kleinen sehr dunklen und dichten Kernen und nicht sichtbaren Nukleolen. Oberes Bildteil: einzelne typische Mitosefigur. U-Nummer: E20727/99, weiblich, 42 Jahre. 3.3.2 Histopathologisches Erscheinungsbild der superfiziellen Fibromatosen Die superfiziellen Fibromatosen unterschieden sich in vielen Fällen nicht nur untereinander, sondern es wurden auch verschiedenartige Areale innerhalb eines Präparates vorgefunden. Insgesamt konnten 3 verschiedene Erscheinungsformen dokumentiert werden. Es fanden sich zum einen sehr zellreiche Bezirke mit Bündeln aus plumpen Zellen mit spindelförmigen Kernen. Die ineinander verwobenen Bündel waren von in sehr geringer Menge an Kollagenfasern umgeben. Zum anderen konnten Areale mit einer mittleren Zelldichte und sowohl plumperen als auch schlankeren Zellen mit einem elongierten Zellkern beobachtet werden. Diese weniger zellreichen Bündel waren ebenfalls von Kollagenfasern umgeben, die aber in diesen Arealen in größerer Menge auftraten. Letztendlich konnten auch in einigen - 56 - Ergebnisse wenigen Präparaten Areale vorgefunden werden, welche sehr zellarm, dafür aber sehr reich an Kollagenbündeln waren. a) Abb. 13: b) Histologisches Erscheinungsbild einer superfiziellen Fibromatose der linken Handfläche in der HE-Färbung. a) Übersicht aus einem Knoten der Proliferationsphase mit runden und ovalen Kernen und nur randständig erkennbarer Kollagensubstanz. b) Ausschnittsvergrößerung eines repräsentativen zellreichen Knotens der Proliferationsphase mit dicht aneinander gelagerten Myofibroblasten mit großen Kernen und deutlichen Nukleolen. Interzellulär findet sich vorwiegend Kollagen des Typs III. U-Nummer: E4095/91, weiblich, 60 Jahre. 3.3.3 Histopathologisches Erscheinungsbild der Narben Lichtmikroskopisch stellten sich die Narben als Gewebe mit einer mittleren Zelldichte dar. Die Zellen wiesen wie die aggressiven und superfiziellen Fibromatosen spindelförmige Kerne auf. Umgeben waren die Zellen von Verbänden aus locker bis dicht zueinander angeordneten Kollagenfasern. - 57 - Ergebnisse 3.4 Nukleolenanzahl 3.4.1 Nukleolenanzahl in den Zellen der aggressiven Fibromatosen Durchgängig in fast allen untersuchten Gewebsschnitten der aggressiven Fibromatosen waren stets mehr als ein Nukleolus pro Zelle anzutreffen. In den meisten Fällen wurden pro Zelle 2 bis 3 Nukleolen beobachtet. 16 (48,5%) der 33 aggressiven Fibromatosen wiesen Tumorzellen mit meist 1 bis zu 2 Nukleolen auf. 2 (6,1%) der Tumoren waren vorwiegend durch Zellen mit 1 bis 3 Nukleolen vertreten. 13 (39,4%) aggressive Fibromatosen zeigten Zellen, welche hauptsächlich 2 bis 3 Nukleolen besaßen. In den restlichen 2 (6,1%) Tumoren wurden Zellen gefunden, die im Besitz von zwischen 2 und 4 Nukleolen waren. In 19 (57,6%) dieser Tumoren wiesen die Zellen unabhängig von der in ihnen auftretenden Nukleolenanzahl einen stets prominenten durchschnittlich 2-3 µm großen Nukleolus auf. Die übrigen sich in der gleichen Zelle befindenden Nukleolen waren dagegen viel kleiner. 3.4.2 Nukleolenanzahl in den Zellen des Morbus Dupuytren 9 (81,8%) der 11 superfiziellen Fibromatosen wiesen Zellen auf mit einer Anzahl an Nukleolen zwischen 1 und 2. Die restlichen 2 (18,2%) superfiziellen Fibromatosen waren im Besitz von Zellen mit 2 bis 3 Kernkörperchen pro Zelle. 3.4.3 Nukleolenanzahl in den Zellen der Narben 2 (22,2%) der 9 Narben zeigten Zellen mit vorwiegend einem Nukleolus. 4 (44,4%) Narben waren von Zellen vertreten, die im Besitz von einem bis zu 2 Kernkörperchen waren. Eine (11,1%) Narbe hatte vorwiegend Zellen mit 2 Nukleolen und die restlichen 2 (22,2%) Narben besaßen Zellen mit einer Anzahl an Kernkörperchen zwischen 1 und 3. - 58 - Ergebnisse 3.5 Mitosen 3.5.1 Mitosefiguren in aggressiven Fibromatosen In den 33 untersuchten Tumoren wurden folgende Ergebnisse hinsichtlich der Anzahl von Mitosefiguren erzielt: 23 (69,7%) Tumoren wiesen keine Mitosefiguren auf. In 9 (27,3%) Tumoren fand sich eine einzige Mitose und ein (3%) Tumor wies 3 Mitosen in den untersuchten 50 Gesichtsfeldern auf. Es wurden keine atypischen Mitosen nachgewiesen. 3.5.2 Mitosefiguren im Morbus Dupuytren In den 11 untersuchten superfiziellen Fibromatosen wurden hinsichtlich der Anzahl von Mitosefiguren folgende Ergebnisse erzielt: 9 (81,8%) Palmarfibromatosen wiesen keine Mitose auf. In 2 (18,2%) Tumoren wurde 1 Mitose in den untersuchten 50 Gesichtsfeldern gefunden. Atypische Mitosen konnten nicht beobachtet werden. 3.5.3 Mitosefiguren in Narben 4 (44,4%) der insgesamt 9 untersuchten Narben waren von ihrer Fläche her zu klein, um 50 Gesichtsfelder beurteilen zu können. Bei diesen Narben wurde die Anzahl der Mitosen auf die Anzahl der untersuchten Felder angegeben und auf 50 Gesichtsfelder umgerechnet: 2 (22,2%) Narben wiesen 5 Mitosen auf, 2 (22,2%) Narben wiesen 7 Mitosen auf, eine (11,1%) Narbe wies 11 Mitosen auf, eine (11,1%) Narbe wies 13 Mitosen auf, eine (11,1%) Narbe wies 17 Mitosen auf und 2 (22,2%) Narben wiesen 21 Mitosen auf. Atypische Mitosen sind nicht festgestellt worden. - 59 - Ergebnisse 3.6 Erythrozytenextravasate Die Analyse der bearbeiteten Gewebsschnitte wies in vielen Fällen Einblutungen in den Geweben auf, die an zahlreichen roten Blutkörperchen deutlich zu erkennen waren. Im Folgenden werden die Ergebnisse zu diesem Aspekt dargestellt. 3.6.1 Erythrozytenextravasate in aggressiven Fibromatosen In 26 (78,8%) der 33 aggressiven Fibromatosen konnten Extravasate roter Blutkörperchen nachgewiesen werden. In 4 (15,4%) dieser 26 Fälle waren diese Extravasate zum Teil enorm stark ausgeprägt. In 7 (21,2%) der 33 Tumoren konnten keine Erythrozytenextravasate festgestellt werden. 3.6.2 Erythrozytenextravasate im Morbus Dupuytren In 10 (90,9%) der 11 superfiziellen Fibromatosen wurden Extravasate roter Blutkörperchen in dem erkrankten Gewebe beobachtet. In der Hälfte (50%) dieser Fälle traten die Extravasate jedoch nur geringgradig in Erscheinung, d. h. die disseminiert verteilten Erythrozyten waren nur an einigen wenigen Stellen in den Fibromatoseknötchen und in sehr geringer Anzahl vorhanden. Eine superfizielle Fibromatose (9,1%) wies keine Erythrozytenextravasate auf. 3.6.3 Erythrozytenextravasate in Narben In 4 (44,4%) der 9 untersuchten Narben waren Blutextravasate zu beobachten. In allen 4 Fällen handelte es sich um sehr gering ausgeprägte Extravasate. Die roten Blutkörperchen waren in geringer Anzahl und nur an wenigen Stellen vorhanden. Die übrigen 5 (55,6%) Narben wiesen keine Erythrozytenextravasate auf. - 60 - Ergebnisse 3.7 Entzündungsinfiltrate Bei der lichtmikroskopischen Untersuchung der Gewebsschnitte waren in vielen Fällen Entzündungsinfiltrate in dem erkrankten Gewebe vorhanden. Im Folgenden werden die Ergebnisse hinsichtlich dieses Aspektes dargelegt. 3.7.1 Entzündungsinfiltrate in aggressiven Fibromatosen In 18 (54,5%) der 33 untersuchten aggressiven Fibromatosen waren stellenweise Entzündungsinfiltrate zu beobachten. Die Entzündungsinfiltrate bestanden vorwiegend aus Ansammlungen von Lymphozyten. In 2 (11,1%) dieser 18 Fälle waren die Entzündungsinfiltrate stärkergradig entwickelt. Die zahlreichen Lymphozyten waren überwiegend am Rande der Fibromatosen zum umgebenden Gewebe zu beobachten, doch auch inmitten der Tumormassen konnten Lymphozytenaggregate dokumentiert werden. Diese waren jedoch eher selten und in geringerem Ausmaß vorhanden. In 15 (45,5%) Tumoren konnten keine Entzündungsinfiltrate nachgewiesen werden. 3.7.2 Entzündungsinfiltrate im Morbus Dupuytren In 3 (27,3%) der 11 superfiziellen Fibromatosen konnten Lymphozytenansammlungen dokumentiert werden. Diese Fibromatosen wiesen die Ansammlungen in sehr geringem Maße und lokalisiert in der Peripherie zellreicher Areale auf. In den restlichen 8 (72,7%) Fällen wurden keine Lymphozytenaggregate gefunden. 3.7.3 Entzündungsinfiltrate in Narben In 5 (55,6%) der 9 Narben waren Entzündungsinfiltrate zum Vorschein getreten. In 2 (40%) dieser 5 Fälle konnten zusätzlich Riesenzellen vom Fremdkörper-Typ nachgewiesen werden. Die übrigen 4 (44,4%) Narben waren frei von Entzündungsinfiltraten. - 61 - a) Abb. 14: Ergebnisse b) a) Mikrofotogramm einer aggressiven Fibromatose aus dem linken Oberschenkel in der HE-Färbung. Hervorgehoben erkennbar ist hier das Auftreten von Tumorzellkernen mit teilweise bis zu 3 vorkommenden Nukleolen. U-Nummer: E502/96, weiblich, 41 Jahre. b) Detailvergrößerung aus einem zellreichen Knoten eines Morbus Dupuytren der linken Handfläche in der HE-Färbung mit Darstellung myofibroblastärer Tumorzellkerne mit teilweise multipel auftretenden Nukleolen. U-Nummer: E4095/01, weiblich, 60 Jahre. a) b) Mitosefigur Mitosefigur Abb. 15: a) Mikrofotogramm mit solitärer Mitose im Desmoidtumor eines rechten Unterschenkels in der HE-Färbung. U-Nummer: E23735/93, männlich, 32 Jahre. b) Detailaufnahme mit Mitose eines Desmoidtumors im Bereich der linken Schulter in der HE-Färbung. U-Nummer: E23776/95, männlich, 58 Jahre. - 62 - a) Abb. 16: Ergebnisse b) a) und b) Übersichtsbild mit Ausschnittsvergrößerung einer aggressiven Fibromatose des rechten Schulteroberarmbereichs in der HE-Färbung. Multiple Einblutungen in den Tumor im Bereich von Gefäßen. U-Nummer: E18360/94, weiblich, 51 Jahre. a) Abb. 17: b) a) Übersichtsbild eines Desmoidtumors im Bereich des Mons pubis in der HE-Färbung. Anschaulich erkennbar ist die Nähe von Einblutungen zu dem naheliegenden Gefäß. U-Nummer: E18720/00, weiblich, 43 Jahre. b) Ausschnittsvergrößerung eines Desmoidtumors der rechten lateralen Thoraxwand in der HE-Färbung. Demonstration des vereinzelten Vorkommens von mehrkernigen Fremdkörperriesenzellen in den aggressiven Fibromatosen. U-Nummer: E23796/98, weiblich, 41 Jahre. - 63 - Ergebnisse 3.8 Entwicklung der aggressiven Fibromatosen im Rahmen einer Gravidität Es ließ sich aggressive Fibromatose vom abdominalen Typ auch in Verbindung zur Gravidität belegen. Das Patientengut der aggressiven Fibromatose umfasste 22 Frauen. 3 (13,6%) dieser Frauen waren von der aggressiven Fibromatose vom abdominalen Typ betroffen. Bei 2 (66,7%) der 3 Frauen kam es zur Entwicklung des Tumors im Rahmen einer Schwangerschaft. Beim Vergleich aller abdominaler aggressiver Fibromatosen sind keine histologischen Unterschiede zwischen den Desmoiden, welche im Rahmen der Schwangerschaft und den Desmoiden, die ohne erkennbare Ursache entstanden, festgestellt worden. 3.9 Multizentrische und familiäre aggressive Fibromatosen In einem der 33 Fälle konnte ein multizentrisches Erscheinen der aggressiven Fibromatosen nachgewiesen werden. Es handelte sich in diesem Fall um eine Patientin, welche sowohl extraabdominale als auch abdominale Desmoide aufwies. Die topographische Verteilung dieser Tumoren setzt sich wie folgt zusammen: linke und rechte laterale Thoraxwand, linker Musculus rectus abdominis und Mons pubis. Die Patientin entwickelte im Jahre 1980 zum ersten mal eine aggressive Fibromatose im Bereich des linken Musculus rectus abdominis. Im Rahmen einer Schwangerschaft im Jahre 1984 kam es zum ersten Rezidiv dieses Tumors im besagten Gebiet. Das zweite Rezidiv folgte dann im Jahre 1986. Ca. 10 Jahre später, also 1996, entwickelte die Patientin die aggressive Fibromatose im Bereich der linken Thoraxwand. Zwei Jahre später rezidivierte der Tumor an dieser Stelle. 1999 tauchte die aggressive Fibromatose bei der Patientin im Bereich des Mons pubis auf. Im darauffolgenden Jahr wurde die rechte laterale Thoraxwand von dem Tumor befallen. Gleichzeitig war diese Patientin die einzige Person dieser Arbeit, bei welcher das Auftreten dieser Tumorentität wahrscheinlich auch familiär vorkam. Aus klinischen Akten, Telefonaten mit dem Hausarzt und Untersuchung von Gewebebiopsien des Sohnes, konnte ein fibröser Tumor auch beim Sohn der Patientin diagnostiziert werden. - 64 - Ergebnisse 3.10 Morphologie nach Gore-Tex-Implantation Ein sehr auffallendes Phänomen konnte bei der Fibromatose einer Patientin beobachtet werden, welche im Rahmen der ersten Therapie des Primärtumors ein Gore-Tex-Implantat eingesetzt bekommen hat. Von dieser Patientin stand der Analyse dieser Primärtumor zur Verfügung. Es handelte sich um einen Desmoidtumor lokalisiert im Bereich des linken Musculus rectus abdominis. Die Eingangs-Nummer dieses Desmoids lautet E756/00. Das besondere an diesem Fall war, dass das Implantat eine Art Abgrenzung zum Tumorgewebe geschaffen hatte. Das Tumorgewebe konnte nur noch auf der einen Seite des Implantates vorgefunden werden, wobei die gegenüberliegende Seite frei vom Tumorgewebe war. Dabei wuchs der Tumor auf der Tumorseite bis zum Implantat, hatte aber die Barriere, welche durch das Implantat gebildet wurde, nicht durchgebrochen. (siehe Abbildung 18). - 65 - a) b) c) d) Ergebnisse 250 µm Abb. 18: Histologie einer aggressiven Fibromatose des linken Musculus rectus abdominis nach Einpflanzung eines Gore-Tex-Implantats in der HEFärbung. a) und b) Übersichtsbilder zur Veranschaulichung der Ausbildung einer Barriere durch das Implantat für das Fibromatosewachstum. c) und d) Zwei Ausschnittsvergrößerungen des Gore-Tex-Implantats, in Abbildung d) eine Detailaufnahme der im Umbau befindlichen Implantatstruktur. U-Nummer: E756/00, weiblich, 25 Jahre. - 66 - Ergebnisse 3.11 Hämosiderinablagerungen 3.11.1 Hämosiderinablagerungen in aggressiven Fibromatosen Bei der Auswertung der eisengefärbten Gewebsschnitte der insgesamt 33 untersuchten aggressiven Fibromatosen wurden folgende Ergebnisse erzielt. Die errechneten arithmetischen Mittelwerte der 3 repräsentativen Gesichtsfelder pro Gewebsschnitt reichen von 0 bis zu 26 Hämosiderin-speichernden Makrophagen. Der Median, welcher sich aus den 33 errechneten einzelnen Mittelwerten ergibt, liegt bei 0. Der Mittelwert der 33 errechneten Mittelwerte liegt bei 1,74. Folgende Ergebnisse wurden erzielt: 18 (54,5%) Fibromatosen zeigten keine Hämosiderinspeichernden Makrophagen, 10 (30,3%) Desmoide zeigten bis zu 2 Hämosiderinspeichernde Makrophagen, 2 (6,1%) Tumoren wiesen zwischen 2 und 4 Hämosiderin-speichernde Makrophagen auf und in jeweils einer (3%) Fibromatose konnten 5,33; 9,67 und 26 Hämosiderin-speichernde Makrophagen dokumentiert werden. Das nachfolgende Säulendiagramm liefert eine Übersicht über die 33 berechneten Mittelwerte für Hämosiderin-speichernde Makrophagen in aggressiven Fibromatosen. Mittelwertverteilung eisenpositiver Zellen 18 Anzahl der Patienten 16 14 12 10 8 6 4 2 0 0 Abb. 19: >0 bis 2 >2 bis 4 >4 bis 6 >6 bis 8 >8 bis 10 >10 bis 25 26 Verteilung Hämosiderin-speichernder Makrophagen in aggressiven Fibromatosen von insgesamt 33 Patienten. - 67 - Ergebnisse 3.11.2 Hämosiderinablagerungen im Morbus Dupuytren Für die 11 Gewebsschnitte der resezierten knotigen Strukturen bei Morbus Dupuytren ergaben sich folgende Resultate. Pro Gewebsschnitt wurde ein arithmetischer Mittelwert aus 3 repräsentativen Gesichtsfeldern berechnet. Der Median der 11 arithmetischen Mittelwerte liegt bei 0, der Mittelwert der 11 Mittelwerte liegt bei 17,5. Die einzelnen 11 Mittelwerte waren folgendermaßen vertreten. Insgesamt 6 (54,5%) Gewebsschnitte wiesen eine negative Eisenreaktion auf. Jeweils einmal (9,1%) traten folgende Mittelwerte in Erscheinung: 2,33; 11; 12,33; 23 und 30. 3.11.3 Hämosiderinablagerungen in Narben 4 (44,4%) der 9 Narben wiesen eine negative Eisenreaktion auf. Für die übrigen 5 Narben ergeben sich die folgenden Mittelwerte: 1; 1,33; 1,67; 3,33 und 3,67. Der Median dieser Mittelwerte liegt bei 1, der Mittelwert liegt bei 1,22. a) Abb. 20: b) Ausschnittsvergrößerungen aus jeweils einer mit Berliner-Blau-Färbung behandelten Gewebsprobe einer Narbe mit Darstellung von Hämosiderin-speichernden Makrophagen als Residuen nach Einblutungen; hier als blaue Zellen erkennbar. a) Narbe aus dem linken Schulterbereich. U-Nummer: E2952/01, weiblich, 63 Jahre. b) Narbe aus dem Bereich der Kopfschwarte. U-Nummer: E2067/01, männlich, 58 Jahre. - 68 - Ergebnisse 3.12 Faserdarstellungen (Kollagenfasern und elastische Fasern) Die EvG-Färbung wurde in dieser Arbeit angewandt, um eine Charakterisierung der kollagenen und der elastischen Fasern in den einzelnen Gewebeproben vornehmen zu können. Im Folgenden werden die Ergebnisse aufgeführt. 3.12.1 Elastische Fasern in aggressiven Fibromatosen In 6 (18,2%) der 33 aggressiven Fibromatosen konnten keine elastischen Fasern nachgewiesen werden. Die restlichen 27 (81,8%) Tumoren wiesen deutliche elastische Fasern auf. In allen diesen Gewebeproben wurden verschiedene gleichzeitig vorkommende Formen der Fasern beobachtet. Bei diesen unterschiedlichen Formen konnten nachgewiesen werden: • solitäre kurze und breite Faserfragmente • solitäre kurze und schmale Faserfragmente • solitäre sehr feine, haarförmige längliche Fasern • kleine als auch große Verbände bestehend aus kurzen Faserfragmenten • kleine als auch große Verbände bestehend aus länglichen haarförmigen Fasern • große Verbände sowohl kurzer breiter und schmaler Faserfragmente als auch feiner länglicher Fasern Die mikrofotographischen Dokumentationen der elastischen Fasern können den Abbildungen 21 und 22 entnommen werden. Es fiel auf, dass besonders um Gefäße kleine Gruppenformationen von Fasern in fast jeder Gewebeprobe dokumentiert werden konnten. Ebenfalls auffällig war die Tatsache, dass zunehmend viele Fasernverbände in der Nähe des den Tumor umgebenden Gewebes vorhanden waren. Anscheinend handelt es sich hier um Fasern, welche im Rahmen der Tumorausbreitung von dem gesunden umgebenden Gewebe mit in den Krankheitsprozess einbezogen wurden. Demgegenüber war das Fibromatosezentrum fast stets frei von Fasern. - 69 - Ergebnisse 3.12.2 Elastische Fasern im Morbus Dupuytren In 5 (45,5%) der 11 untersuchten Geweben des Morbus Dupuytren konnten dichte Bündelformationen bestehend aus vielen groben kurzen Fasern in zellarmen Arealen und gleichzeitig stellenweise vorkommende längliche haarförmige Fasern in zellreichen Arealen nachgewiesen werden. 3 (27,3%) Palmarfibromatosen bestanden nur aus zellreichen Arealen. In diesen Gewebeproben wurden vorwiegend längliche haarförmige Fasern beobachtet. In den restlichen 3 (27,3%) Gewebeproben wurden viele verschiedene Faserformen in zellarmen und keine Fasern in zellreichen Arealen beobachtet. 3.12.3 Elastische Fasern in Narben In der EvG-Färbung konnte ein Verlust der regelrechten elastischen Faserkomplexe im dermalen Bindegewebe mit Übergang auf die Narbenzone dokumentiert werden. - 70 - a) b) c) d) Abb. 21: Ergebnisse Mikrofotogramme unterschiedlicher elastischer Fasern einer aggressiven Fibromatose der linken Oberschenkelregion in der EvGFärbung. a) Verband dicht zusammengelagerter, kurzer und im Durchmesser breiter Fasernfragmente. b) und c) Solitäre, längliche, vorwiegend gerade haarfeine parallel zu den sie umgebenden Myofibroblasten verlaufende Fasern. d) Vorzugsweise mittellange, breitere und in sich geschwungene Fasern mit nur andeutungsweise erkennbarem parallelen Verlauf zu den Myofibroblasten. U-Nummer: E502/96 weiblich, 41 Jahre. - 71 - a) Abb. 22: Ergebnisse b) Mikrofotogramme elastischer Fasern und Kollagenfasern des Typs I einer aggressiven Fibromatose im Bereich der rechten lateralen Thoraxwand in der EvG-Färbung. a) Mehrere Verbände dicht formierter, sehr kurzer, teilweise gerader als auch geschwungener Fasernfragmente. b) Typische lockere Anordnung zueinander parallel verlaufender gewellter Kollagenfasern des Typs I mit nicht mehr erkennbaren elastischen Fasern. U-Nummer: E23796/98, weiblich, 41 Jahre. a) Abb. 23: b) Mikrofotogramme elastischer Fasern einer Fibromatose Dupuytren der rechten Hand in der EvG-Färbung. a) und b) Vorwiegend breite und verschieden lange Fasern am Rande des Fibromatoseknotens. U-Nummer: E2377/01, männlich, 47 Jahre. - 72 - a) Abb. 24: Ergebnisse b) Mikrofotogramme elastischer Fasern bei Morbus Dupuytren der rechten Hand. a) Übersichtsaufnahme eines Fibromatoseknotens des Morbus Dupuytren mit gering ausgeprägten elastischen Fasern am Rande des Fibromatoseknotens. b) Ausschnittsvergrößerung aus einem Bereich des Fibromatoseknotens mit deutlichen verschieden langen, breiteren, teilweise gewellten elastischen Fasern als auch Faserfragmenten. U-Nummer: E5107/01, weiblich, 69 Jahre. a) Abb. 25: b) Mikrofotogramme elastischer Fasern einer Narbe der linken Schulter. a) Grobe sowohl längere als auch kürzere elastische Fasern am Rande des Narbengewebes zum gesunden Gewebe. b) Vorzugsweise zarte längliche haarförmige Fasern inmitten des Narbengewebes. U-Nummer: E2637/01, männlich, 51 Jahre. - 73 - Ergebnisse 3.13 Darstellung der Retikulinfasern Mit Hilfe der Versilberung nach Gomorri konnten in den Gewebeproben Retikulinfasern erkannt und beschrieben werden. 3.13.1 Retikulinfasern in aggressiven Fibromatosen 10 (30,3%) der 33 aggressiven Fibromatosen zeigten Retikulinfasern nur um Gefäße. Im Fibromatosegewebe selbst waren keine Retikulinfasern enthalten. Bei den übrigen 23 (69,7%) Gewebeproben konnten Retikulinfasern sowohl um Gefäße herum angeordnet als auch im Fibromatosegewebe selbst nachgewiesen werden. Die Retikulinfasern im Desmoidtumor stellten sich als feine zart ausgebildete längliche Fasern oder als relativ kurze gewellte breitere Faserfragmente dar. Diese beiden Faserarten formierten sich zu feinen Fasergeflechten oder Fasernetzen. 3.13.2 Retikulinfasern im Morbus Dupuytren 9 (81,8%) der 11 Gewebeproben bei Morbus Dupuytren wiesen deutliche Retikulinfasern auf, welche um Gefäßränder gruppiert waren. Über diese Fasern hinaus konnten sonst nur noch stellenweise feine zarte Retikulinnetze in zellreichen Arealen der superfiziellen Fibromatose dokumentiert werden. 2 (18,2%) der 11 superfiziellen Fibromatosen enthielten in den zellreichen Arealen mehrere Verbände aus kurzen breiteren Faserfragmenten. Auch hier waren viele Fasern um Gefäßränder angeordnet. 3.13.3 Retikulinfasern in Narben In 8 (88,9%) der 9 Narben waren keine Retikulinfasern nachzuweisen. Eine (11,1%) Narbe besaß feine Fasern angeordnet um die Gefäße und zarte längliche und kurze Fasern am Übergang der Narbe zum gesunden Gewebe. Im Zentrum dieser Narbe waren jedoch keine Retikulinfasern vorhanden. - 74 - a) Abb. 26: Ergebnisse b) a) Mikrofotographische Dokumentation von Retikulinfasern durch die Gomorri-Färbung. Dichtes Netz aus multiplen sehr zarten, haarfeinen, länglichen retikulären Fasern einer aggressiven Fibromatose im Bereich des Mons pubis. U-Nummer: E18720/00, weiblich, 43 Jahre. b) Retikulinfasern im Bereich eines Gefäßes einer aggressiven Fibromatose der linken lateralen Thoraxwand mit retikulinfreiem übrigen Tumorgewebe. U-Nummer: E20727/99, weiblich, 42 Jahre. a) Abb. 27: b) a) Detailaufnahme eines retikulären Fasernetzes aus groben, kurzen und breiten Fasern einer Fibromatose Dupuytren im Bereich der rechten Hand in der Gomorri-Färbung. U-Nummer: E2377/01, männlich, 47 Jahre. b) Gefäß umgebende retikuläre Fasern einer superfiziellen Fibromatose der rechten Hand in der Gomorri-Färbung. U-Nummer: E5107/01,weiblich, 69 Jahre. - 75 - a) Abb. 28: Ergebnisse b) a) Dichtes Retikulinnetz aus grob gewellten, kurzen, breiten Fasern in einer superfiziellen Fibromatose der linken Hand in der GomorriFärbung. U-Nummer: E4095/01, weiblich, 60 Jahre. b) Lockeres Retikulinnetz aus vorwiegend feinen, länglichen und nur teils gewellten Fasern am Übergang einer Narbe im Bereich der linken Schulter in das gesunde Gewebe. Mikrofotographische Dokumentation einer Gomorri-Färbung. U-Nummer: E2637/01, männlich, 51 Jahre. - 76 - Ergebnisse 3.14 Immunhistochemische Expressionsmuster Die immunhistochemischen Expressionsmuster mit Hilfe der Marker MiB-1 und CD31 wurden nur in den Fällen der aggressiven und superfiziellen Fibromatosen untersucht. 3.14.1 MiB-1-Expressionsmuster in aggressiven Fibromatosen Fast die Hälfte der 33 aggressiven Fibromatosen, nämlich 16 (48,5%), waren MiB-1 negativ. Die übrigen 17 (51,5%) Desmoide zeigten zwischen 0,3% und 8,9% MiB-1 positive Tumorzellen auf einer Tumorfläche von 0,16 mm². Der Mittelwert der Einzelergebnisse lag bei 2,24%, der Median bei 0,33% MiB-1-positiven Tumorzellen pro 0,16 mm². Für die statistische Auswertung wurde die Einteilung nach dem Median vorgenommen. Die genauen Angaben hierzu sind der Tabelle 4 zu entnehmen. 3.14.2 MiB-1-Expressionsmuster in superfiziellen Fibromatosen 45,5% der untersuchten Fälle waren MiB-1-negativ. Die restlichen 54,5% zeigten eine MiB-1-Expression zwischen 0,27% und 4,93%. Der arithmetische Mittelwert, welcher sich aus den einzelnen Ergebnissen errechnen ließ, liegt bei 1,29%, der Median ist bei 0,27% anzusetzen. Dabei zeigte nur eine Fibromatose den Wert von 0,27%, alle übrigen superfiziellen Fibromatosen wiesen mehrere MiB-1-positiven Zellen auf. 3.14.3 CD-31-Expressionsmuster/Mikrogefäßdichte in aggressiven Fibromatosen In den untersuchten Tumorfällen konnten CD-31-positive Zellen dokumentiert werden, wobei die durchschnittliche Gefäßdichte in den einzelnen Tumoren stark voneinander differierte. Die einzelnen Werte reichten bis zu 218,67 Gefäßen pro 2,84 mm². Die im einzelnen ermittelten recht heterogenen Gefäßzahlen können dem angefügten Tabellenteil entnommen werden. Aus den gesammelten Daten ergibt sich ein Median der Mikrogefäßdichte von 116,3 Gefäßen pro 2,84 mm², der arithmetische Mittelwert ist bei 117,1 anzusetzen. Bei der Begutachtung der sichtbaren Gefäße im HE-gefärbten Schnitt ist das Vorkommen von zahlreichen sowohl dünn- als auch dickwandigen Gefäßen mit unterschiedlich großen Lumina - 77 - Ergebnisse aufgefallen. Ab und an wurden auch arterielle Gefäße mit hyperplasierten Wänden dokumentiert. 3.14.4 CD-31-Expressionsmuster/Mikrogefäßdichte in superfiziellen Fibromatosen Jede untersuchte superfizielle Fibromatose wies CD-31-positive Zellen auf. Die einzelnen Ergebnisse reichten dabei von 12 bis 129 Gefäßen pro 2,84 mm². Der errechnete Mittelwert lag bei 54,2 Gefäßen, der Median bei 51,7 Gefäßen pro 2,84 mm². a) Abb. 29: b) a) und b) Mikrofotographische Dokumentation MiB-1-positiver Zellen in sogenannten hot-spots, Arealen mit der höchsten Dichte an proliferierenden Zellen, in einer aggressiven Fibromatose im Bereich des dorsalen Beckenkamms, links paravertebral. Gleichzeitige Erfassung einer Mitosefigur im linken unteren Bildrand des Bildes a). U-Nummer: E14046/97, weiblich, 59 Jahre. - 78 - a) Abb. 30: Ergebnisse b) a) und b) Mikrofotographische Dokumentation von CD-31-Reaktionen zur quantitativen Mikrogefäßdichte-Bestimmung in einer aggressiven Fibromatose im Bereich des rechten Unterschenkels. U-Nummer: E2184/97, männlich, 35 Jahre. a) Abb. 31: b) a) Übersichtsaufnahme eines hot-spot-Areales von CD-31-Reaktionen zur Bestimmung der Mikrogefäßdichte in einer aggressiven Fibromatose im Bereich des rechten Unterschenkels. U-Nummer: E2184/97, männlich, 35 Jahre. b) Ausschnittsvergrößerung von Mikrogefäßen einer Fibromatose Dupuytren der rechten Hand, beurteilt mittels der rötlich angefärbten CD-31-positiven Zellen. U-Nummer: E2377/01, männlich, 47 Jahre. - 79 - Ergebnisse 3.15 Ergebnisse der statistischen Untersuchungen 3.15.1 Klinische Verlaufsdaten Die 33 Patienten, die von der aggressiven Fibromatose betroffen waren, wurden in einer Spannweite von 3 bis 108 Monaten nachbeobachtet. Dabei ergab sich für das Follow-up ein Median von 38 Monaten und ein Mittelwert von 46,2 Monaten. Im Zeitraum der Nachbeobachtung erlitten 12 (36,4%) dieser Patienten ein oder mehrere Lokalrezidive. 5 der 12 (41,7%) betroffenen Patienten entwickelten ein Lokalrezidiv. 2 der 12 (16,7%) betroffenen Patienten entwickelten 2 Lokalrezidive. 4 der 12 (33,3%) betroffenen Patienten entwickelten 3 Lokalrezidive und eine Patientin (8,3%) entwickelte 3 Lokalrezidive und eine neue aggressive Fibromatose lokalisiert an einer anderen Stelle des Körpers. 3.15.2 Prognostische Parameter Die statistische Auswertung der Daten zur aggressiven Fibromatose diente der Überprüfung einer eventuellen Abhängigkeit der Rezidivhäufigkeit dieses Tumors von diversen Faktoren, das heißt der Untersuchung prognostischer Parameter. Es wurde eine mögliche Abhängigkeit von insgesamt 9 unterschiedlichen Einflüssen untersucht. Bei den verschiedenen Abhängigkeitsfaktoren handelte es sich um: • Geschlecht der Patienten • Alter der Patienten • Tumorlokalisation • Tumorgröße • Mitosenanzahl im Tumorgewebe • Proliferationsaktivität des Tumors • Gefäßdichte im Tumorgewebe • Resektionsstatus • Adjuvante Therapie in Form einer postoperativen Nachbestrahlung Für die Auswertung wurde der Log-Rank-Test verwendet. Aufgrund der geringen Fallzahl wurden separate Analysen mit jeweils einem Einflussfaktor durchgeführt, um die Überlebensfunktionen schätzen zu können. Aufgrund der geringen Anzahl von Patienten (33) in dieser Studie, ist insgesamt die Auswertung als eine Deskription einer kleinen Studienpopulation zu betrachten. Das - 80 - Ergebnisse Ergebnis der Auswertung der verschiedenen Abhängigkeitsfaktoren führt zu der Schlussfolgerung, dass als Ausblick die Fokussierung insbesondere auf 4 Einflussgrößen, nämlich das Alter des Patienten, Mitosenanzahl im Tumorgewebe, Gefäßdichte des Tumorgewebes und adjuvante Therapie im Sinne einer Nachbestrahlung in einer Studie mit einem größeren Studienumfang sinnvoll wäre. Im Folgenden werden nun alle 9 Graphiken dargestellt, welche bei der kleinen Studienpopulation jedoch nur Hinweise, nicht aber statistische Signifikanzen auf ein eventuelles Vorliegen einer Abhängigkeit der Rezidivhäufigkeit von einer bestimmten Einflussgröße ergaben. - 81 - Ergebnisse 3.15.2.1 Patientengeschlecht Der bei der Überprüfung des Zusammenhangs zwischen Geschlecht des Patienten und Rezidivhäufigkeit ermittelte Log-Rank-Wert liegt bei 0,60. Es konnte somit keine Abhängigkeit beider Größen voneinander bewiesen werden. Abbildung 32 zeigt die beiden Überlebenszeitkurven der untersuchten Gruppen. Abb. 32: Überlebenszeitkurven zur Darstellung des Rezidivauftritts von 33 aggressiven Fibromatosen in Abhängigkeit vom Patientengeschlecht. - 82 - Ergebnisse 3.15.2.2 Patientenalter Bei der statistischen Prüfung der Bedeutung des Alters des Patienten auf die Rezidive der aggressiven Fibromatose wird ersichtlich, dass die Wahrscheinlichkeit für Patienten mit einem Alter unter 50 Jahren an einem Rezidiv zu erkranken höher liegt als für ältere Patienten. Der Log-Rank-Wert liegt hier bei 0,07. Doch auch bei diesem Ergebnis handelt es sich aufgrund der niedrigen Fallzahl dieser Analyse nur um einen Hinweis und nicht einen Beweis. Abbildung 33 stellt die Wechselbeziehung zwischen Patientenalter und Auftritt des Rezidivs graphisch dar. Abb. 33: Überlebenszeitkurven zur Darstellung des Rezidivauftritts von 33 aggressiven Fibromatosen in Abhängigkeit vom Patientenalter. - 83 - Ergebnisse 3.15.2.3 Tumortopographie Bezüglich des klinisch-pathologischen Parameters „Tumortopographie“ ergab die Analyse des Einflusses dieses Faktors auf die Rezidive der aggressiven Fibromatosen einen Log-Rank-Wert von 0,91. Dieser enorm hohe Wert zeigt, dass kein Zusammenhang zwischen dem Parameter „Tumortopographie“ und des Rezidivauftritts vorliegt. Die in der Abbildung 34 enthaltene Graphik verdeutlicht anschaulich das Ergebnis. Abb. 34: Überlebenszeitkurven zur Darstellung des Rezidivauftritts von 33 aggressiven Fibromatosen in Abhängigkeit von der Tumortopographie. - 84 - Ergebnisse 3.15.2.4 Tumorgröße Die Analyse der Rückwirkung der Tumorgröße auf die Lokalrezidivrate ergab einen Log-Rank-Wert von 0,64. Dieser Wert ist zu hoch, um von einer statistischen Signifikanz sprechen zu können. Aufgrund dessen ist kein eindeutiger Hinweis auf eine mögliche Abhängigkeit der Rezidivrate von der Tumorgröße gegeben. Die fehlende statistische Signifikanz spiegelt sich graphisch in Abbildung 35 wieder. Abb. 35: Überlebenszeitkurven zur Darstellung des Rezidivauftritts von 33 aggressiven Fibromatosen in Abhängigkeit von der Tumorgröße. - 85 - Ergebnisse 3.15.2.5 Mitosenanzahl Die statistische Untersuchung liefert bei der Überprüfung der Einflussgröße „Mitosenanzahl im Tumorgewebe“ den Hinweis, dass beim Nachweis von einer oder mehreren Mitosen im Tumorgewebe, das Risiko eines Rezidivs höher ist, als bei Patienten mit Desmoidtumoren ohne mitotische Aktivität. Der hierbei errechnete Log-Rank-Wert liegt bei 0,17. (siehe Abbildung 36). Abb. 36: Überlebenszeitkurven zur Darstellung des Rezidivauftritts von 33 aggressiven Fibromatosen in Abhängigkeit von der Mitosenanzahl im Tumorgewebe. - 86 - Ergebnisse 3.15.2.6 Proliferationsaktivität - MiB-1 Die Auswertung der Proliferationsaktivität, ermittelt mit Hilfe des monoklonalen Antikörpers MiB-1 als eventuellen Faktor mit Einfluss auf die Lokalrezidivrate, führte zu einem Log-Rank-Wert von 0,86. Es konnte somit kein Hinweis hinsichtlich der Abhängigkeit der Rezidivrate von der Proliferationsaktivität erbracht werden. Die graphische Darstellung der Überlebenszeitkurven bezüglich dieses Faktors kann der Abbildung 37 entnommen werden. Abb. 37: Überlebenszeitkurven zur Darstellung des Rezidivauftritts von 33 aggressiven Fibromatosen in Abhängigkeit von der Proliferationsaktivität des Tumors. - 87 - Ergebnisse 3.15.2.7 Gefäßdichte Aus der statistischen Analyse der Überlebenszeiten in Abhängigkeit von der Gefäßdichte des Desmoids, ermittelt anhand des Antikörpers CD-31, ist abzuleiten, dass eine erniedrigte Gefäßdichte mit ungünstiger Prognose einhergeht. Der LogRank-Wert liegt bei 0,27. Abbildung 38 liefert die graphisch aufgeführten Überlebenszeitkurven hinsichtlich der Gefäßdichte als möglichen Einflussfaktor auf die Rezidivhäufigkeit der aggressiven Fibromatosen. Die Zahl 116,3 steht für den Median der errechneten Mittelwerte der Gefäßdichte in den untersuchten 33 aggressiven Fibromatosen. Abb. 38: Überlebenszeitkurven zur Darstellung des Rezidivauftritts von 33 aggressiven Fibromatosen in Abhängigkeit von der Gefäßdichte des Tumorgewebes. - 88 - Ergebnisse 3.15.2.8 Resektionsstatus Der bei der Überprüfung des Zusammenhangs zwischen Resektionsstatus des Tumors und des Auftretens des ersten Rezidivs der aggressiven Fibromatosen ermittelte Log-Rank-Wert von 0,56 und die Graphik in Abbildung 39 zeigen, dass zwischen dem Resektionsstatus des Tumors und der Lokalrezidivrate keine signifikanten Unterschiede in der hier durchgeführten statistischen Analyse ermittelt werden konnten. Anhand der Kurvenverläufe in der Graphik kann lediglich vage darauf geschlossen werden, dass als R0- und R1-klassifizierte Tumorresektate wahrscheinlich eher ein spätes Lokalrezidiv zur Folge haben werden. Abb. 39: Überlebenszeitkurven zur Darstellung des Rezidivauftritts von 33 aggressiven Fibromatosen in Abhängigkeit vom Resektionsstatus des Tumorgewebes. - 89 - Ergebnisse 3.15.2.9 Adjuvante Bestrahlung Das Ergebnis der statistischen Analyse des Faktors „postoperative Bestrahlung“ als Einflussgröße auf die Rezidivhäufigkeit zeigt eine Assoziation zwischen der Bestrahlung und dem ersten Auftreten des Rezidivs an. Mit einem ermittelten LogRank-Wert von 0,01 stellt die Graphik in Abbildung 40 diesen Zusammenhang dar, wobei demnach für Patienten, bei welchen die postoperative Bestrahlung im Behandlungskonzept des Tumors mitenthalten war, die Wahrscheinlichkeit, an einem Rezidiv erneut zu erkranken, geringer war als für Patienten, welche jene adjuvante Therapie nicht erhalten haben. Abb. 40: Überlebenszeitkurven zur Darstellung des Rezidivauftritts von 33 aggressiven Fibromatosen in Abhängigkeit von adjuvanter Therapie der Patienten im Sinne einer Radiatio. - 90 - Ergebnisse 3.16 Ergebnisse der 14 Rezidive der aggressiven Fibromatosen Die erfassten 14 Rezidive stammen von 8 der 33 Patienten, deren Ersttumoren bereits beschrieben wurden. Das Alter dieser Patienten bei den Rezidiven erstreckte sich zwischen 25 und 63 Jahren. Es handelt sich hierbei um 5 weibliche und 3 männliche Personen. 4 (28,6%) der 14 Rezidive waren im Bereich des Körperstammes und 10 (71,4%) im Bereich der Extremitäten lokalisiert. Die Tumoren waren zwischen 1 cm und 13 cm groß. 3.16.1 Histopathologisches Erscheinungsbild der Rezidive Die 14 untersuchten Rezidivtumoren wiesen histologisch genau das gleiche Bild wie die Ersttumoren dieser Rezidive, die zu Anfang des Abschnittes „Ergebnisse“ vorgestellt wurden, auf. Auch sie fielen auf durch lange teils wellige Faszikel aus länglichen spindelförmigen Zellen, welche von zahlreichen Kollagenfasern umgeben werden, auf. Wie schon in den anderen Tumoren festgestellt, konnten auch diesmal Faszikel verschiedener Zelldichte und 2 unterschiedliche Zellarten, nämlich Zellen mit großen hellen Kernen und Zellen mit kleinen sehr dunklen und dichten Kernen dokumentiert werden. In allen Gewebsschnitten konnte eine tentakelartige Infiltration der aggressiven Fibromatose in die umgebende Muskulatur beobachtet werden. 3.16.2 Nukleolenanzahl 4 (28,6%) der 14 Rezidive waren im Besitz von 1 bis 2 Nukleolen pro Zelle. 9 (64,3%) dieser Tumoren wiesen zwischen 2 und 3 Kernkörperchen pro Zelle auf und der restliche (7,1%) Tumor wies stellenweise bis zu 4 Nukleolen pro Zelle auf. Auch in den Rezidiven fiel die Besonderheit auf, dass die Zellen unabhängig von der Nukleolenanzahl stets einen prominenten Nukleolus besaßen und die in der jeweiligen Zelle übrigen Nukleolen stets kleiner waren als das prominente Kernkörperchen. - 91 - Ergebnisse 3.16.3 Mitosenanzahl Bei 6 (42,9%) der 14 aggressiven Fibromatosen konnten keine Mitosen nachgewiesen werden. Ebenfalls 6 (42,9%) Tumoren offenbarten dagegen eine Mitose auf 50 untersuchte Gesichtsfelder. Bei den übrigen 2 (14,3%) Desmoiden konnten jeweils 2 Mitosen beobachtet werden. 3.16.4 Erythrozytenextravasate In 10 (71,4%) der Tumoren sind zahlreiche Erythrozytenextravasate im Tumorgewebe beobachtet worden. In den übrigen 4 (28,6%) Desmoiden sind keine Erythrozytenextravasate nachgewiesen worden. 3.16.5 Entzündungsinfiltrate 9 (64,3%) der 14 Rezidive zeigten deutliches Vorkommen an Entzündungsinfiltraten, wobei bei einem (11,1%) dieser 9 Tumoren die Entzündungsinfiltrate dermaßen stark entwickelt waren, dass das Bild einer wahren Entzündungsreaktion glich. Wie bei den Ersttumoren zeigten sich die Lymphozytenaggregate auch bei den Rezidiven vorwiegend in der Peripherie der Tumoren. Die übrigbleibenden 5 (35,7%) Tumoren wiesen keine Entzündungsinfiltrate auf. 3.16.6 Infiltration in das umgebende Gewebe Alle Rezidive zeigten über den Hauptknoten des Tumors hinaus mikroskopisch nachweisbare Tentakelstrukturen, welche das umgebende Gewebe infiltrierten. 3.16.7 Hämosiderinablagerungen Bei der Auswertung der Reaktion der Gewebsschnitte auf das Hämosiderin konnten folgende Ergebnisse erzielt werden. Die errechneten arithmetischen Mittelwerte der 3 repräsentativen Gesichtsfelder pro Gewebsschnitt reichen von 0 bis zu 9 Hämosiderin-speichernden Makrophagen. Der Median, welcher sich aus den 14 errechneten einzelnen Mittelwerten ergibt, liegt bei 2,34. Der Mittelwert der 14 errechneten Mittelwerte liegt bei 2,29. Das nachfolgende Säulendiagramm liefert eine Übersicht zu den 14 berechneten Mittelwerten für Hämosiderin-speichernde Makrophagen in den Rezidiven der aggressiven Fibromatose. - 92 - Ergebnisse Mittelwertverteilung eisenpositiver Zellen Anzahl der Patienten 5 4 3 2 1 0 0 Abb. 41: >0 bis 1 >1 bis 2 >2 bis 3 >3 bis 4 >4 bis 5 9 Verteilung Hämosiderin-speichernder Makrophagen in 14 Rezidiven der aggressiven Fibromatosen. 3.16.8 Elastische Fasern in den Rezidiven Mit Hilfe der EvG-Färbung konnten lichtmikroskopisch elastische Fasern in den 14 Rezidiven beobachtet und beurteilt werden. 3 (21,4%) der Rezidive wiesen keine elastischen Fasern auf. In den restlichen 11 (78,6%) aggressiven Fibromatosen konnte das Vorkommen von Faserarten dokumentiert werden, wie es auch schon bei den ersten 33 aggressiven Fibromatosen geschehen ist. Auch in Rezidiven fiel die Besonderheit auf, dass besonders um Gefäße kleine Gruppenformationen von Fasern in fast jeder Gewebeprobe enthalten waren. Das Fibromatosezentrum war fast durchgängig frei von elastischen Fasern; am Übergang der Fibromatose zum gesunden umgebendem Gewebe dagegen waren vermehrt elastische Fasern zu beobachten, welche auch hier wahrscheinlich von dem umgebenden Gewebe mit in den Krankheitsprozess durch das Wachstum des Tumors einbezogen wurden. 3.16.9 Retikulinfasern in den Rezidiven Mit Hilfe der Gomorri-Versilberung konnten mikroskopisch Retikulinfasern nachgewiesen werden. In 5 (35,7%) der 14 Rezidive konnten retikuläre Fasern nur um die Gefäße herum angeordnet beobachtet werden. In den restlichen 9 (64,3%) Desmoiden konnte diese Faserart auch im Tumorgewebe nachgewiesen werden. Hier jedoch waren die Fasern stets nur außerhalb des Tumorzentrums zu kleinen zarten Verbänden formiert vorhanden. - 93 - Ergebnisse 3.16.10 Immunhistochemische Expressionsmuster der 14 Rezidive 3.16.10.1 MiB-1-Expressionsmuster In 6 von 14 (42,9%) untersuchten Rezidiven der Desmoidtumoren konnte keine positive Reaktion gegenüber dem Proliferationsmarker MiB-1 nachgewiesen werden. Die übrigen 8 (57,1%) Desmoide zeigten dagegen zwischen 0,41% und 18,03% MiB-1-positive Tumorzellen pro betrachtete Tumorfläche von 0,16 mm². Der sich aus den einzelnen Resultaten ergebende Mittelwert liegt bei 2,93 und der ermittelte Median bei 0,7 MiB-1-positiven Zellen. Von den 8 Tumoren, in welchen sich MiB1-positive Tumorzellen nachweisen ließen, war lediglich ein Tumor im Besitz von weniger MiB-1-positiven Zellen als es der errechnete Median vorgibt. Die einzelnen Ergebnisse können der Tabelle 7 entnommen werden. 3.16.10.2 CD-31-Expressionsmuster / Gefäßdichte Alle 14 untersuchten Rezidive der aggressiven Fibromatose zeigten CD-31-positive Zellen. Die einzelnen Ergebnisse erstreckten sich hierbei zwischen 55 und 215 Gefäßen pro 2,84 mm² Tumorfläche. Der Mittelwert aller 14 Resultate liegt bei 117,4 und der Median bei 115,5 Gefäßen pro 2,84 mm² Tumorfläche. Die jeweiligen Einzelergebnisse können der Tabelle 7 entnommen werden. - 94 - Ergebnisse 3.17 Tabellen Im folgenden werden die erhobenen Zahlenwerte tabellarisch aufgeführt: Erklärung zu den Tabellen Nr.: Fallnummer E-Nr.: im Institut für Pathologie vergebene Eingangs-Nummer Initialen: die beiden Buchstaben stellen die Initialen des Namens des jeweiligen Patienten dar m/w: Alter: Patientengeschlecht: • m = männlich • w = weiblich angegeben ist jeweils das Alter, bei welchem der hier untersuchte Tumor oder das Rezidiv diagnostiziert wurde; bei den Narben ist das Alter angegeben, zu welchem Zeitpunkt eine Probebiopsie entnommen wurde Gravidität: diese Spalte taucht nur in Tabelle 4 auf und kennzeichnet, ob die aggressive Fibromatose im Rahmen der Schwangerschaft aufgetreten ist L: Größe: Tumortopographie: • 1 = Tumor im Bereich des Stammes • 2 = Tumor im Bereich der Extremitäten Tumorgröße: • 1 = Tumorgröße ≤ 5 cm Durchmesser • 2 = Tumorgröße > 5 cm Durchmesser in Klammern absolute Tumorgröße in cm Mitosen: Mitosenanzahl ermittelt auf 50 HPF (high power field) in Tabelle 6 bei den Narben in Klammern absolute Mitosenanzahl in den zur Verfügung stehenden hochvergrößerten Feldern MiB-1: Anteil der MiB-1-positiven Zellen pro Gesichtsfeld bei Auszählungen; arithmetischer Mittelwert fettgedruckt CD-31: stellt die Gefäßdichte dar: • absolute Gefäßanzahl pro Gesichtsfeld bei 3 Auszählungen • arithmetischer Mittelwert fettgedruckt 3 - 95 Eisen: Ergebnisse stellt die Anzahl Hämosiderin-speichernder Makrophagen dar • absolute Anzahl Hämosiderin-speichernder Makrophagen pro Gesichtsfeld bei 3 Auszählungen • R: Radiatio: arithmetischer Mittelwert fettgedruckt Resektionsstatus: • 0 = Resektionsränder tumorfrei • 1 = mikroskopisch Resttumor vorhanden • 2 = makroskopisch Resttumor vorhanden stellt dar, ob eine adjuvante Nachbestrahlung erfolgte: • ja = eine Nachbestrahlung ist erfolgt • nein = eine Nachbestrahlung ist nicht erfolgt • unbekannt = es konnte nicht ermittelt werden, ob eine Nachbestrahlung erfolgt ist Tab. 4: Angaben zu Patienten mit Desmoidtumoren Nr. Initialen 1. A. D. 26062/96 E-Nr. m/w w Alter Gravidität 39 nein L 1 2 Größe (11) Mitosen 0 0%; 0%; 0% MiB-1 CD-31 Eisen 2. A. S. 6261/00 w 56 ja 1 1 (3,8) 0 7,9%; 8,1%; 10,6% 3. B. B. 756/00 w 25 nein 1 2 (7,5) 0 0%; 0%; 0% 0% 96; 78; 87 87 0; 0; 0 4. B.-G. G. 22546/98 w 39 nein 1 2 (6) 1 0%; 0%; 0% 0% 54; 62; 49 5. B. K. 12274/94 w 40 nein 2 2 (9) 0 0%; 0%; 0% 0% 52; 46; 64 6. B. H. 23776/95 m 58 nein 2 1 (3) 0 6,2%; 3,47%; 1,09% 3,59% 113; 136; 105 7. G. D. 23735/93 m 32 nein 2 2 (8) 0 0%; 0%; 0% 8. G. B. 18360/94 w 51 nein 2 1 (3,5) 0 1,79%; 2,82%; 0,9% R Radiatio 0% 146; 157; 133 145,33 0; 0; 0 0 2 ja 8,87% 187; 203; 148 179,33 1; 1; 1 1 2 nein 0 1 nein 55 8; 14; 7 9,67 1 nein 54 2; 1; 1 1,33 0 nein 118 1; 1; 1 1 2 ja 106 0; 0; 0 0 1 nein 1,84% 115; 123; 111 116,33 0; 0; 0 0 1 nein 0% 116; 98; 104 30017/96 m 51 nein 2 2 (8) 0 0%; 0%; 0% 0% 124; 106; 95 G. Do. 7577/01 w 58 nein 2 1 (3,8) 0 0%; 0%; 0% 0% 0; 0; 0 108,33 0; 0; 0 0 1 ja 0 0; 0; 0 0 1 nein 11. H. T. 8373/93 m 24 nein 2 2 (11) 0 0%; 0%; 0% 12. J. M. 1981/01 w 37 nein 2 2 (9) 1 1,16%; 1,61%; 5,56% 0 0 nein 0 2 ja 13. J. H. 4825/99 w 77 nein 1 1 (1,5) 0 2,7%; 9,9%; 3,9% 5,5% 177; 195; 267 213 4; 7; 5 14. J. He. 8924/99 w 62 nein 1 1 (2) 0 5,4%; 5,31%; 3,59% 4,77% 143; 130; 117 130 2; 0; 0 5,33 1 unbekannt 0,67 2 15. K. H. 14046/97 w 59 nein 1 2 (8) 0 12,4%; 13,3%; 8,5% 11,4% 101; 162; 113 125,33 2; 3; 0 nein 1,67 1 nein 16. L. P. 27994/96 m 24 nein 2 1 (3) 1 2,8%; 2,4%; 1,1% 2,1% 96; 105; 119 17. M. M. 11138/98 w 35 ja 1 1 (3) 0 0,7%; 0,7%; 0,7% 0,7% 112; 181; 186 0 1 nein 26 1 nein 18. M. R. 9976/92 m 59 nein 2 2 (9) 0 0%; 0%; 0% 73,67 0; 0; 0 19. P. A. 23671/94 w 66 nein 2 2 (10) 0 3,8%; 4,91%; 4,52% 4,41% 146; 112; 142 133,33 0; 0; 0 0 1 unbekannt 0 1 20. R. G. 2134/99 w 63 nein 1 1 (3) 0 0,76%; 0,24%; 0% 0,33% 132; 149; 138 139,67 2; 3; 3 ja 2,67 1 21. R. M. 23125/97 m 46 nein 1 2 (8) 1 1,14%; 0,52%; 1,82% 1,16% 79; 77; 83 ja 79,67 0; 0; 0 0 2 22. R. Gu. 18141/94 w 49 nein 2 1 (5) 0 0%; 0%; 0% 0% 91; 94; 57 ja 80,67 0; 0; 0 0 1 ja 23. S. A. 11439/99 m 19 nein 2 1 (4,8) 0 0%; 0%; 0% 0% 192; 178; 140 170 0; 0; 0 0 1 ja 24. S. P. 9464/99 w 38 nein 1 1 (1) 1 0%; 0%; 0% 0% 254; 177; 162 197,67 1; 2; 2 1,67 1 unbekannt 25. S. G. 13378/99 m 72 nein 1 2 (7,9) 1 0%; 0%; 0% 47,33 1; 0; 0 0,33 1 ja 26. S. U. 5618/99 w 31 nein 2 2 (12) 3 5,5%; 4,2%; 16,9% 8,87% 209; 176; 126 170,33 1; 1; 0 0,67 1 nein 27. S. K. 21688/95 w 57 nein 1 2 (13) 0 0,86%; 0,54%; 0,72% 0,71% 139; 162; 111 137,33 0; 0; 0 0 2 ja 28. S. M. 6275/00 m 43 nein 2 2 (5,5) 1 2,56%; 5,67%; 11,35% 6,53% 182; 137; 123 147,33 1; 2; 1 1,33 1 nein 29. Sp. K. 14577/99 w 43 nein 2 1 (2,8) 1 0%; 0%; 0% 0% 102; 114; 105 107 3; 4; 1 2,67 0 unbekannt 30. S. R. 20551/95 m 45 nein 2 1 (2,5) 1 0%; 0%; 0% 0% 124; 181; 186 163,67 0; 0; 0 0 0 nein 31. S. L. 7851/00 w 45 nein 2 1 (2,5) 0 0%; 0%; 0% 0% 51; 63; 47 53,67 0; 0; 0 0 2 nein 32. T. B. 21986/00 w 37 nein 2 1 (3,1) 0 5,6%; 5,1%; 6,4% 5,7% 109; 113; 112 111,33 0; 0; 0 0 1 nein 33. T. S. 8107/02 w 36 nein 1 2 (5,5) 0 5,0%; 4,9%; 3,7% 1,33 1 nein 0% 221; 237; 198 218,67 0; 0; 0 2,78% 72; 77; 115 0% 47; 106; 68 0% 53; 41; 48 4,53% 72; 56; 81 88 0; 0; 0 106,67 0; 0; 0 132 30; 13; 35 69,67 1; 2; 1 Ergebnisse G. W. - 96 - 9. 10. Tab. 5: Angaben zu Patienten mit Morbus Dupuytren Nr. Initialen E-Nr. m/w Alter Mitosen 1. E. K.-J. 2379/01 m 50 0 7,6%; 5,5%; 1,7% MiB-1 2. G. W. 6327/01 m 53 0 0%; 0%; 0% 3. H. M. 5107/01 w 69 0 6,5%; 2,3%; 1,5% 3,43% 58; 36; 55 4. K. I. 4095/01 w 60 1 3,8%; 4,1%; 3,3% 5. K. J. 5375/01 m 53 0 0%; 0%; 0% 6. K. H.-G. 6145/01 m 57 0 1,1%; 1,6%; 1,3% 7. M. H. 2377/01 m 47 0 0%; 0%; 0% 8. P. H.-R. 5806/01 m 61 0 1,4%; 0%; 0% 9. Q. K. 5788/01 m 57 1 0%; 0%; 0% 10. S. J. 4096/01 m 62 0 0,8%; 0%; 0% 11. T. W. 6334/01 w 62 0 0%; 0%; 0% Tab. 6: CD-31 4,93% 13; 11; 12 0% 48; 104; 23 Eisen 12 19; 37; 34 30 58,33 0; 0; 0 0 49,67 0; 0; 0 0 3,73% 35; 29; 47 37 7; 0; 0 2,33 0% 48; 32; 81 53,67 0; 0; 0 0 1,33% 34; 44; 73 50,33 0; 0; 0 0 0% 147; 97; 143 0,47% 71; 31; 53 0% 74; 39; 43 0,27% 92; 31; 57 0% 29; 38; 62 129 0; 0; 0 51,67 26; 11; 0 52 30; 3; 0 60 0; 0; 0 43 49; 15; 5 0 12,33 11 0 23 Angaben zu Patienten mit Narben Initialen E-Nr. m/w Alter 1. E. M. 2067/01 m 58 17 Mitosen (4/12) 0; 0; 0 Eisen 0 2. F. O. 1586/01 m 10 7 (7/50) 0; 0; 0 0 3. G. M. 2952/01 w 63 5 (5/50) 1; 2; 1 1,33 4. H. W. 7186/01 w 49 11 (11/50) 0; 0; 0 0 5. S. H. 5597/01 m 57 13 (2/8) 0; 0; 0 0 6. S. K. 1765/01 w 30 21 (7/17) 1; 1; 1 1 7. V. C. 3077/01 w 55 7 (3/22) 2; 2; 1 1,67 8. V. S. 7952/00 w 11 5 (5/50) 3; 5; 3 3,67 9. W. H. 2637/01 m 51 21 (21/50) 4; 3; 3 3,33 - 97 - Nr. Ergebnisse Tab. 7: Nr. Angaben zu Rezidiven der aggressiven Fibromatose m/w Alter L 1. A. D. Initialen 23796/98 E-Nr. w 41 2 2 Größe (11) Mitosen 2 0%; 0%; 0% MiB-1 0% 211; 236; 198 CD-31 215 0; 0; 0 0 2 2. A. D. 20727/99 w 42 2 2 (13) 1 0%; 0%; 0% 0% 124; 121; 106 117 3; 2; 3 2,67 1 3. A. D. 18720/00 w 43 1 2 (7,5) 1 20,7%; 21,4%; 12% 83,67 6; 3; 5 4,67 1 18,03% 88; 58; 105 4. B. K. 502/96 w 41 2 1 (4,5) 1 0%; 0%; 0% 0% 71; 63; 109 5. G. D. 2184/97 m 35 2 2 (7) 0 0%; 0%; 0% 0% 134; 146; 176 6. G. D. 937/00 m 39 2 2 (8) 0 0,52%; 0,39%; 0,32% 7. G. B. 3389/95 w 51 2 1 (4) 0 8. G. B. 25671/95 w 52 2 1 (3,4) Eisen R 81 0; 0; 0 0 1 152 0; 0; 0 0 1 0,41% 55; 63; 47 55 1; 1; 1 1 2 0%; 0%; 0% 0% 78; 72; 85 78,33 3; 2; 3 2,67 1 0 0%; 0%; 0% 0% 83; 78; 69 76,67 0; 0; 0 0 1 9 1 9. G. B. 4610/98 w 55 2 1 (3) 1 1,03%; 1,66%; 3,18% 1,96% 131; 104; 107 114 1; 19; 7 10. H. T. 15672/98 m 29 2 1 (3) 1 4,16%; 2,54%; 3,29% 3,33% 168; 149; 142 153 3; 5; 2 3,33 2 11. J. He. 7713/00 w 64 2 1 (1) 0 5,69%; 5,45%; 8,87% 6,67% 126; 97; 104 109 0; 0; 0 0 1 12. L. P. 16159/97 m 25 2 2 (7,2) 1 5,9%; 6,3%; 6,8% 6,33% 101; 138; 146 128,33 3; 1; 2 2 1 3,3% 205; 137; 143 161,67 3; 3; 5 3,67 0 0,99% 139; 114; 103 118,67 2; 3; 4 3 1 13. L. P. 22218/98 m 26 2 1 (4) 2 2,7%; 2,7%; 4,5% 14. S. L. 21619/00 w 45 2 1 (1,7) 0 1,36%; 0,47%; 1,15% - 98 Ergebnisse - 99 - Ergebnisse 3.18 Zusammenfassung der Ergebnisse Alle 3 „Läsionen“, nämlich superfizielle Fibromatosen, aggressive Fibromatosen und Narben vergleichend, können folgende Ergebnisse präsentiert werden: • Histologie und Zytologie: 1. Die Hauptzelle aller 3 „Läsionen“ bildet der Myofibroblast, der in allen Gewebsschnitten als eine fibroblastenähnliche Zelle mit spindelförmigem Kern und unterschiedlicher Anzahl an Nukleolen sich darstellt. 2. Alle 3 „Läsionen“ weisen stellenweise Areale auf, die dem charakteristischem Aufbau jeweils der anderen Gewebesorte entsprechen. So zeigen aggressive Fibromatosen Areale, welche der superfiziellen Fibromatose oder Areale, welche der Narbe ähneln, auf. Superfizielle Fibromatosen dagegen weisen Bezirke, welche der aggressiven Fibromatose oder Bezirke, welche der Narbe ähnlich sind, auf. Auch in den Narben können stellenweise Flächen entdeckt werden, die an den Aufbau der beiden Fibromatosen erinnern. 3. Hinsichtlich der Nukleolenanzahl lässt sich sagen, dass bei den aggressiven Fibromatosen eine Prädominanz zu 1 bis zu 2 mehr Nukleolen pro Zellkern vorliegt als in der superfiziellen Fibromatose oder der Narbe. Die Narbe und Morbus Dupuytren weisen dagegen annähernd die gleiche Anzahl an Nukleolen auf. 4. Alle 3 „Läsionen“ zeigen keine atypischen Kernteilungsfiguren. Betreffs der Mitosenanzahl lässt sich aber sagen, dass die Narben deutlich mehr Mitosen als die beiden Fibromatosen aufweisen. Bei beiden Fibromatosen sind Mitosen jedoch eine Seltenheit. 5. Beide Fibromatosetypen sind mit dem Vorkommen von unterschiedlich stark ausgeprägten Erythrozytenextravasaten vergesellschaftet. In den Narben finden sich diese jedoch nur in weniger als der Hälfte der Fälle und sind zudem nur sehr gering ausgeprägt. 6. Hinsichtlich der Lymphozytenansammlungen sind die aggressiven Fibromatosen und die Narben sehr zu ähneln. Beide Gewebearten zeigen in etwas mehr als der Hälfte der Fälle diese Ansammlungen, wogegen sie bei den superfiziellen Fibromatosen nur in einem Drittel der Fälle vorkommen. - 100 7. Ergebnisse Eisenpositive Zellen können in einem Teil aller 3 Gewebearten nachgewiesen werden. Eine genaue Aussage lässt sich hier jedoch nicht erstellen, da sowohl die superfiziellen als auch die aggressiven Fibromatosen sehr auch untereinander differierende Werte aufweisen. Lediglich bei den Narben lassen sich im Vergleich zu den Fibromatosen insgesamt weniger eisenpositive Zellen nachweisen. • Interstitielle Matrix und Fasertypisierung: 8. Narben weisen keine elastischen Fasern auf. Fast alle aggressiven Fibromatosen zeigen elastische Fasern in unterschiedlichen Formationen und in allen superfiziellen Fibromatosen können elastische Fasern nachgewiesen werden, wobei hier vorwiegend grobe kurze elastische Fasern in zellarmen und längliche haarförmige elastische Fasern in zellreichen Arealen vorgefunden werden. 9. Retikuläre Fasern in Narben sind eine Rarität. Hier auftretende Retikulinfasern lassen sich nur um die Gefäße angeordnet oder am Übergang zum gesunden Gewebe nachweisen. In beiden Fibromatosetypen dagegen gehören retikuläre Fasern zum regelmäßig anzutreffenden Bild dieser Tumorarten, wobei sich die Fasern in beiden Gewebearten zu Fasernetzen formieren. • Proliferationsaktivität: 10. Beide Fibromatosearten weisen in etwa die gleiche Proliferationsaktivität auf. Mit Zahlen ausgedrückt können beim Desmoid 48,5% aller Fälle MiB1-positive Zellen aufweisen, im Falle des Morbus Dupuytren sind es 45,5%. Auch die Median- und die Mittelwerte sind sich sehr ähnlich. So liegen die Mediane bei 0,33% und 0,27%, die Mittelwerte dagegen bei 2,24% und 1,29%. • Gefäßdichte / Vaskularisierung: 11. Beide Fibromatosearten unterscheiden sich sehr bezüglich der Gefäßdichte. Zwar können bei beiden Fibromatosetypen mittels des CD-31-Antikörpers Gefäße vorgefunden werden, doch unterscheiden sich die Fibromatosen in der Anzahl der vorgefundenen Gefäße. Den Zahlen nach zu urteilen weisen somit die aggressiven Fibromatosen eine mehr als doppelt so hohe Gefäßdichte auf als die superfiziellen Fibromatosen. - 101 - Ergebnisse • Prognosefaktoren: 12. Hinsichtlich der sogenannten „Prognosefaktoren“ wurde ermittelt, dass vor allem die Faktoren Patientenalter, Mitosenanzahl im Tumorgewebe, Gefäßdichte des Tumorgewebes und adjuvante Therapie im Sinne der Nachbestrahlung einen Einfluss auf die Rezidivhäufigkeit haben könnten. Dabei scheinen niedrigeres Patientenalter (Alter unter 50 Jahre), mitotische Aktivität im Tumorgewebe, geringe Gefäßdichte des Tumors (weniger als 116,3 Gefäße pro 2,84 mm²) und das Nicht-Erhalten einer adjuvanten Nachbestrahlung mit der erhöhten Rezidivhäufigkeit zu korrelieren. Faktoren wie Patientengeschlecht, Tumorlokalisation, Tumorgröße, Proliferationsaktivität des Tumors und der Resektionsstatus dagegen haben offensichtlich keinen Einfluss auf die Rezidivhäufigkeit der aggressiven Fibromatose. - 102 - Diskussion 4 DISKUSSION 4.1 Aufbau der Studie 4.1.1 Patientenkollektiv der aggressiven Fibromatosen In der hier vorliegenden Arbeit wurden insgesamt 47 Fälle von aggressiven Fibromatosen bei 33 Patienten untersucht, wobei eine statistische Untersuchung nur bei den Ersttumoren dieser Patienten erfolgte. Die Beobachtungszeiten erstreckten sich zwischen 3 und 108 Monaten mit einem Median von 38 Monaten und einem Mittelwert von 46,2 Monaten. Das Patientenalter reichte hierbei zwischen 19 bis zu 77 Jahren mit einem Median von 45 Jahren und einem Mittelwert von 45,9 Jahren. Es handelte sich um 22 weibliche und 11 männliche Probanden. Das Geschlechterverhältnis lag somit bei Frauen : Männer ⇒ 2 : 1. Brueckl et al. untersuchten in ihrer Studie in einem Zeitraum von 10 bis 355 Monaten ebenfalls 33 aggressive Fibromatosen, wobei es sich bei diesen Fibromatosen um 23 sporadische und 10 FAP-assoziierte Fälle handelte. Das Patientenalter erstreckte sich bei den sporadischen Fällen von 17 bis 86 Jahre mit einem Median von 50,5 Jahren und einem Mittelwert von 48,7 Jahren. Die Altersverteilung wäre somit mit der Altersverteilung in der vorliegenden Studie vergleichbar. Das Geschlechterverhältnis lag bei ihnen Frauen : Männer ⇒ 3,1 : 1 (25 : 8) vor. Auch dies spiegelt wie in dieser Studie ein eindeutiges Überwiegen des weiblichen Geschlechts bei dieser Tumorentität wider (Brueckl et al. 2001). Demzufolge lässt sich der Aufbau der hier vorgenommenen Analyse durchaus mit einer bereits vorliegenden Untersuchung vergleichen. 4.1.2 Tumorlokalisation In Finnland wurde eine große Studie durchgeführt, in welcher alle dort zwischen den Jahren 1961 und 1975 aufgetretenen aggressiven Fibromatosen untersucht wurden. Insgesamt standen jener Studie 89 Tumoren zur Verfügung. Davon waren 49% abdominal, 43% extraabdominal und 8% intraabdominal lokalisiert (Reitamo et al. 1986). In Anlehnung an die Definition des extraabdominalen, abdominalen und intraabdominalen Tumors von Reitamo wurden die 33 Desmoide des in dieser Arbeit aufgenommenen Untersuchungsgutes in die drei Kategorien eingeordnet. Dabei - 103 - Diskussion handelte es sich um 4 (12,1%) abdominale und 29 (87,9%) extraabdominale Tumoren. Intraabdominale Tumoren waren in dieser Arbeit nicht vorhanden. Dieses Ergebnis weicht entschieden von dem von Reitamo und seinen Mitarbeitern ab, da in der vorliegenden Studie vor allem das Auftreten der extraabdominalen Tumoren dominiert und die abdominalen Tumoren nur in einer demgegenüber geringen Anzahl vertreten sind. Ursachen für diese Konstellation mögen beispielsweise in der kleineren Patientenanzahl liegen, welche bei der Durchführung der Studie zur Verfügung stand. Immerhin war die Patientenanzahl in Reitamos Studie fast dreimal so groß wie in dieser Studie. Easter und Halasz führten eine Studie mit 19 Patienten mit Desmoidtumor durch. Die topographische Verteilung sah folgendermaßen aus: 12 (63,2%) extraabdominale, 5 (26,3%) abdominale und 2 (10,5%) intraabdominale Tumoren (Easter et al. 1989). Diese Verteilung entspricht eher der im Rahmen dieser Arbeit durchgeführten Studie. 4.1.3 Lokalrezidivrate Bei 13 (39,4%) der 33 Patienten mit aggressiver Fibromatose wurden in der Beobachtungszeit Rezidive beobachtet, wobei 8 dieser 13 Patienten außer dem Erstrezidiv noch weitere Rezidive entwickelt hatten. Die Rezidive bildeten sich in einem Zeitraum von 7 bis zu 63 Monaten. 10 (76,9%) der 13 Erstrezidive bildeten sich bereits während der ersten 2 Jahre und sind demnach als Frührezidive zu charakterisieren. Ein Rezidiv ist dann als Frührezidiv zu bewerten, wenn dieses innerhalb von wenigen Monaten bis zu 2 Jahren auftritt. Rezidive, die nach einem Zeitraum von mehr als 2 Jahren auftreten, werden als sog. Spätrezidive eingestuft (Thomas 1994). In einer Studie entwickelten in einer Dauer von 3 bis 31 Monaten 11 (33,3%) der untersuchten 33 Patienten ein Lokalrezidiv (Brueckl et al 2001). In einer anderen Studie wird von einer Rezidivquote von 31,6% berichtet, dies entspricht 6 Rezidiven bei 19 Patienten (Easter et al. 1989). Posner et al. dagegen stellen eine Rezidivrate von 35,1% dar. In ihrer Studie wurden 131 Patienten untersucht, von denen 46 ein Rezidiv innerhalb von 3 bis 64 Monaten entwickelten. In den ersten 2 Jahren wurden von den 46 Rezidiven bereits 80% diagnostiziert und somit als Frührezidive anerkannt (Posner et al. 1989). Diese Ergebnisse korrelieren sehr nahe mit den hier erbrachten Resultaten. - 104 - Diskussion 4.1.4 Gravidität 2 (9,1%) der 22 in dieser Studie untersuchten Patientinnen entwickelten eine aggressive Fibromatose vom abdominalen Typ im Rahmen einer Schwangerschaft. Insgesamt liegen in dieser Studie 4 abdominale Desmoide vor, wovon 2 (50%) in Verbindung mit einer Schwangerschaft entstanden sind. Burke et al. untersuchten 130 Patienten mit aggressiver Fibromatose vom intraabdominalen Typ. Der Anteil der Frauen betrug dabei 71. Bei 5 (7%) der 71 Frauen trat der Tumor im Rahmen einer Schwangerschaft auf (Burke et al. 1990). Kouho et al. führten eine Studie mit 24 Patienten durch, wobei der Anteil der weiblichen Patientinnen mit einer Anzahl von 14 vertreten war. Von diesen 14 Frauen entwickelte eine das Tumorleiden in Verbindung mit einer Schwangerschaft. Dies macht einen Prozentsatz von 7,1% aus (Kouho et al. 1997). Die in der gegebenen Analyse erbrachten Resultate bezüglich der Häufigkeit von aggressiven Fibromatosen im Rahmen einer Schwangerschaft stimmen annähernd mit den obig dargestellten Ergebnissen überein. In einer anderen Studie wurden 7 Patienten mit aggressiven Fibromatosen vom abdominalen Typ untersucht. Bei 6 dieser Patienten handelte es sich um Frauen, von denen 4 (66,7%) an der Krankheit im Rahmen einer Schwangerschaft erkrankten (Sutton et al. 1999). Diese enorm große Diskrepanz der Prozentzahlen lässt sich erklären mit den Argumenten, dass zum einen die Studienpopulation um fast vier fünftel kleiner war als die in dieser Studie erfasste Population und Sutton in seiner Studie explizit nur Patienten einschloss, welche den abdominalen Typ der aggressiven Fibromatose aufwiesen. Zudem sollten die Tumoren eine beträchtliche Größe erreicht haben. Somit handelt es sich in seinem Falle um eine ausgewählte und nicht dem Zufall überlassene Studie. Trotzdem existiert zwischen Suttons und der vorliegenden Studie eine approximative Korrelation in Hinblick auf die Schwangerschaft, denn von 6 Patientinnen mit dem abdominalen Typ des Desmoids waren 3 Frauen davon betroffen, welche kurz zuvor ein Kind zur Welt gebracht haben und eine Frau, die vor ca. einem Jahr gebar. Dies macht den Prozentsatz von 66,7% aus. Würden aber nur die 3 Frauen betrachtet, welche kurz nach der Geburt des Kindes ein Desmoid entwickelten, so liegt hierbei der Prozentsatz bei 50%. In der gegebenen Untersuchung sind von 4 abdominalen Tumoren bei Frauen 2 davon betroffen, welche kurz zuvor gebaren. Dies macht einen Prozentsatz von ebenfalls 50% aus. Im Buch „Soft tissue tumors“ von Enzinger und Weiss wird angeführt, dass ein - 105 - Diskussion häufigeres Vorkommen von Desmoidtumoren bei jungen Frauen während oder kurz nach der Schwangerschaft entweder mit dem besonderen hormonellen Status, in welchem sich eine schwangere Frau befindet, oder auch eventuell mit der Narbe im Rahmen eines Kaiserschnittes bei der Geburt in Zusammenhang stehen könnte (Enzinger & Weiss 1983). 4.1.5 Multizentrische aggressive Fibromatosen Im Untersuchungsgut konnte bei einem von 33 Patienten ein multizentrisches Vorkommen der aggressiven Fibromatose nachgewiesen werden. Die betroffene Patientin entwickelte sowohl extraabdominale als auch abdominale Desmoidtumoren. Es liegen europäische Literaturangaben vor, in denen das häufigere multizentrische Erscheinen dieser Tumorentität im extraabdominalen Bereich postuliert wird (Mac Kenzie 1972; Walker 1953). Demgegenüber liegen andere Angaben aus den Vereinigten Staaten vor, nach denen die Autoren die Multizentrität der Desmoidtumoren vorwiegend im abdominalen Bereich beobachtet haben (Dahn et al. 1963; Pearman et al. 1942). Reitamo und seine Mitarbeiter fanden bei 7 (7,9%) von 89 untersuchten Fällen ein multizentrisches Präsentieren der aggressiven Fibromatose. Diese trat in 2 Fällen im extraabdominalen Bereich und in 5 Fällen im abdominalen Bereich auf (Reitamo et al. 1986). Sowohl die hier gegebenen als auch Reitamos Ergebnisse stimmen eher mit den Ergebnissen aus den Vereinigten Staaten überein, obwohl in beiden Studien die Studienpopulation europäischer Herkunft war. - 106 - Diskussion 4.2 Lichtmikroskopische Untersuchungsergebnisse bei aggressiven Fibromatosen 4.2.1 Histopathologisches Erscheinungsbild der aggressiven Fibromatosen Durchweg in allen Tumoren konnte der Aufbau der aggressiven Fibromatose aus langen Faszikeln nachgewiesen werden. Dieses Resultat liefern auch viele andere Autoren, welche sich in ihren Arbeiten mit dem mikroskopischen Aufbau der Desmoidtumoren beschäftigt haben. So beschreiben Mentzel und Katenkamp in ihrem Artikel über die kurzgefasste Übersicht zu myofibroblastären Tumoren die Histologie der aggressiven Fibromatose. Sie veranschaulichen diesen Tumortyp als eine tiefgelegene Fibromatose, welche aus langen Faszikeln bestehend aus spindeligen Zellen mit unterschiedlicher Zelldichte aufgebaut ist (Mentzel & Katenkamp 1998). In einer Studie, in welcher 10 extraabdominale aggressive Fibromatosen untersucht wurden, beschreiben die Autoren die Desmoide als Tumoren mit mäßiger Zellproliferation in schlecht abzugrenzenden Faszikeln zusammengesetzt aus spindeligen Zellen, wobei vor allem in der das Retikulin darstellenden Färbung Kollagenbündel zwischen den einzelnen Zellen zu beobachten waren (Hasegawa et al. 1990). Ein anderer Autor beschreibt die aggressive Fibromatose als einen Tumor, welcher aus verflochtenen Bündeln aus spindeligen Zellen mit unterschiedlichem Kollagengehalt besteht (Reitamo et al. 1982). Zudem konnten in dem gegebenen Untersuchungsgut zwei Arten von Kernen charakterisiert werden, nämlich helle plumpe Kerne mit deutlichen Kernkörperchen und kleine dichte Kerne mit nicht erkennbaren Nukleolen. In einer Studie an 76 Fällen der aggressiven Fibromatose konnte in 32 Fällen das Vorkommen von plumpen Kernen nachgewiesen werden (Yokoyama et al. 1989). Drüber hinaus ist das häufige Vorkommen an mehrkernigen myofibroblastären Riesenzellen in der vorliegenden Studie aufgefallen. Es gibt Verfasser, die dieses Phänomen ebenfalls beobachtet haben und die mehrkernigen muskulären Riesenzellen als einen Ausdruck einer abortiven Regeneration auf die Infiltration des Tumors in die Skelettmuskulatur beschreiben (Mentzel & Katenkamp 1998). Auch andere Autoren beschreiben das Vorkommen von sarkoplasmatischen Riesenzellen als ein häufiges Bild (Batsakis & Raslan 1994). Im Untersuchungsgut fanden sich keine Atypien oder atypische Kernteilungsfiguren. Enzinger und Weiss weisen darauf hin, dass in ihrer Studie mit - 107 - Diskussion 367 Fällen der aggressiven Fibromatose atypische oder hyperchromatische Kerne nicht vorhanden sind (Enzinger & Weiss 1983). 4.2.2 Nukleolenanzahl Bezüglich der Nukleolenanzahl lieferte die Analyse das Ergebnis, dass in fast allen untersuchten aggressiven Fibromatosen durchgängig mehr als ein Nukleolus pro Zelle zu beobachten waren. 19 der 33 untersuchten Desmoide wiesen sogar unabhängig von der in ihnen auftretenden Nukleolenanzahl ein stets prominentes Kernkörperchen auf. Enzinger und Weiss beobachteten in den von ihnen untersuchten 367 Desmoidtumoren das konstante Auftreten von Zellen mit 1 bis zu 3 winzigen Kernkörperchen (Enzinger & Weiss 1983). Auch andere Autoren beschreiben in ihrem Artikel das Erscheinen von 1 bis zu 3 kleinen Kernkörperchen pro Zellkern (Hasegawa et al. 1990). 4.2.3 Mitosen Alle 47 untersuchten aggressiven Fibromatosen betrachtend, sind folgende Ergebnisse bezüglich der Mitoserate erzielt worden: 29 (61,7%) Desmoide zeigten keine Mitosen, 15 (31,9%) Tumoren wiesen jeweils eine Mitose auf, in 2 (4,3%) Desmoiden konnten jeweils 2 Mitosen beobachtet werden und nur ein (2,1%) Tumor wies 3 Mitosen in den 50 untersuchten hochvergrößerten Feldern auf. Das Resultat dieser Analyse ist demzufolge, dass Mitosen nur selten in den aggressiven Fibromatosen sind, und - wenn überhaupt - nur in einer geringen Anzahl auftreten. Auch Burke et al. untersuchten aggressive Fibromatosen im Hinblick auf das Vorkommen von Mitosen. Sie untersuchten die einzelnen Gewebsschnitte, indem jeweils 50 hochvergrößerte Felder lichtmikroskopisch betrachtet wurden. Ihnen standen insgesamt 130 Fälle zur Verfügung, dabei konnten bei fast der Hälfte Mitosen beobachtet werden, wobei einige Tumoren sogar mehr als 5 Mitosen offenbarten. Burke betonte bei diesem Ergebnis, dass trotz der höheren Anzahl (> 5) an Mitosen der Pathologe nicht dazu verleitet werden sollte, den Desmoidtumor als ein niedrigmalignes Fibrosarkom zu diagnostizieren (Burke et al. 1990). In einer andren Studie konnten in 30 von 76 zur Verfügung stehenden Desmoidtumoren Mitosen nachgewiesen werden. Dies macht einen Prozentsatz von 39,5% aus, in der vorliegenden Arbeit konnten in 38,3% der Fälle (18 von 47) Mitosen nachgewiesen - 108 - Diskussion werden. Die Mitosenanzahl erstreckte sich zwischen einer bis zu 4 nachgewiesenen Mitosen in 20 untersuchten hochvergrößerten Feldern (Yokoyama et al. 1989). Andere Autoren untersuchten eine multizentrische, mehrfach rezidivierende extraabdominale Fibromatose eines jungen Mädchens. In allen Rezidiven und den multipel auftretenden Fibromatosen waren Mitosen äußerst selten zu sehen und überschritten niemals die Anzahl von 5 Mitosen auf 20 untersuchte hochvergrößerte Felder (Fletcher et al. 1986). Die statistische Analyse der möglichen Abhängigkeit der Rezidivhäufigkeit von der Mitoserate lieferte den Hinweis, dass eine Korrelation zwischen den genannten Parametern bestehen könnte. Obwohl eine statistisch signifikante Abhängigkeit nicht nachzuweisen war, kann mit Berücksichtigung der hier vorgelegten Ergebnisse bereits der Nachweis einer Mitose in einer aggressiven Fibromatose als Hinweis eines erhöhten Lokalrezidivrisikos gelten. 4.2.4 Erythrozytenextravasate In mehreren Fällen der bearbeiteten Tumoren wurden Extravasate von roten Blutkörperchen im Interstitium beobachtet. In allen 47 aggressiven Fibromatosen konnten in insgesamt 36 (76,6%) Fällen diese Extravasate nachgewiesen werden. Dabei waren in 4 (11,1%) Fällen diese Erscheinungen sehr ausgeprägt. Burke und seine Mitarbeiter untersuchten 130 Fälle der intraabdominalen Fibromatose und fanden als auffälliges Phänomen in vielen der Fälle perivaskuläre Mikrohämorrhagien (Burke et al. 1990). Wilson und seine Assistenten führten ihre Untersuchungen an Desmoidtumoren der Pleura durch. Ihnen standen 4 Fälle zur Verfügung. Bei der lichtmikroskopischen Suche nach Mikrohämorrhagien wurden diese in keinem der 4 Fälle entdeckt (Wilson et al. 1999). Aus diesen Ergebnissen könnte geschlossen werden, dass Mikrohämorrhagien nicht in Desmoidtumoren der Pleura vorkommen, sie aber durchaus häufiger in intraabdominalen, abdominalen und extraabdominalen Tumoren auftreten. Um diesen Verdacht jedoch bestätigen zu können, wäre eine Studie bezüglich dieser Fragestellung mit einer großen Studienpopulation und verschiedenen topographischen Lokalisationen dieses Tumors notwendig. Erythrozytenextravasate sind vorwiegend bei den rasch wachsenden Weichgewebsläsionen zu beobachten, wie insbesondere der Fasciitis nodularis und auch Fasciitis proliferans / Myositis proliferans und Myositis ossificans. Da die Fasciitis nodularis ebenso wie die Fibromatose als eine fibroblastisch / - 109 - Diskussion myofibroblastisch differenzierte Weichgewebsläsion einzuordnen ist, sind die beobachteten Erythrozytenextravasate womöglich als ein besonders Merkmal myofibroblastär differenzierter Tumoren zu werten. 4.2.5 Entzündungsinfiltrationen Es konnten insgesamt in 27 (57,4%) von 47 Desmoidtumoren Lymphozytenaggregate vorwiegend in der Peripherie der Tumoren nachgewiesen werden. In 3 (11,1%) der 27 aggressiven Fibromatosen waren diese Aggregate enorm stark ausgeprägt, so dass sie das Bild einer Entzündungsreaktion boten. Auch andere Autoren beschreiben ein Auftreten von Lymphozytenansammlungen in der aggressiven Fibromatose, wobei auch sie das Vorkommen dieser Erscheinungen überwiegend in der Peripherie der Tumoren beobachten konnten (Fletcher et al. 1986; Torres 1968). Wiederum andere Autoren konnten in den Desmoidtumoren der Pleura Lymphozytenansammlungen beobachten. Auch sie stellten in einigen sehr wenigen Fällen ein Auftreten an recht prominenten Ansammlungen der Entzündungszellen dar, betonten dann aber, dass prominente Entzündungsinfiltrate zwar erscheinen können, dies aber nur äußerst selten und somit kein charakteristisches Zeichen der aggressiven Fibromatose darstellen (Wilson et al. 1999). Diese Ergebnisse stimmen mit den hier erbrachten Resultaten überein. Das vorwiegend in der Peripherie beobachtete Erscheinen der Entzündungsinfiltrate legt den Verdacht nahe, dass es sich um eine Abwehrreaktion des umgebenden Gewebes gegen den Tumor handeln könnte. 4.2.6 Hämosiderinablagerungen Insgesamt 24 (51,1%) der 47 Fibromatosen zeigten Hämosiderin-speichernde Makrophagen, wobei die Anzahl dieser Zellen teilweise von einem zum anderen Tumor stark differierte. Durch das Auftreten von eisenpositiven Zellen konnte somit das Hämosiderin in den Geweben nachgewiesen werden. Das Hämosiderin kann als ein Zeichen eines möglichen vorherigen lokalen Traumas interpretiert werden. In Zusammenhang damit ist es bereits in einigen wenigen Fällen nachgewiesen worden (Musgrove & McDonald 1948; Ramsey 1955; Enzinger & Shiraki 1967; Gibeily & Zajtschuk 1982). Fletcher untersuchte einen multizentrischen Desmoidtumor eines - 110 - Diskussion jungen Mädchens und suchte auch hier nach eventuell vorhandenem Hämosiderin, war in dieser Hinsicht jedoch in diesem Fall erfolglos geblieben (Fletcher 1986). 4.2.7 Elastische Fasern Nur in 9 (19,1%) der 47 aggressiven Fibromatosen konnten keine elastischen Fasern beobachtet werden. Alle übrigen 38 Fälle zeigten das Auftreten von elastischen Fasern in unterschiedlichen Formationen. Leider konnte diesbezüglich keine Literatur gefunden werden, in welcher das Auftreten dieser Fasern dokumentiert wäre. 4.2.8 Retikulinfasern Nur in 15 (31,9%) der 47 aggressiven Fibromatosen konnten retikuläre Fasern lediglich um die Gefäße angeordnet vorgefunden werden. Die übrigen 32 (68,1%) Desmoide wiesen diese Faserart auch innerhalb des Tumorgewebes auf. Leider war es auch bezüglich dieser Fasern nicht möglich bereits vorhandene Literatur aufzufinden. 4.2.9 Immunhistochemische Expressionsmuster 4.2.9.1 MiB-1-Expression In den 33 statistisch analysierten aggressiven Fibromatosen konnten in 16 Tumorfällen MiB-1-positive Zellen nachgewiesen werden. Dies macht einen Prozentsatz von 48,5% aus. Bei den 14 vorgelegenen Rezidiven wurden in 8 Fällen MiB-1-positive Zellen beobachtet, entsprechend 57,1%. Dieser Vergleich zeigt, dass der Anteil der Tumoren mit MiB-1-positiven Zellen bei beiden Gruppen annähernd gleich ist. Werden nun die aus beiden Gruppen ermittelten Median- und Mittelwerte betrachtet, so wird auch hier deutlich, dass diese Werte nur ein wenig voneinander differieren, wobei diese Diskrepanz zu vernachlässigen ist. Die beiden Mittelwerte liegen bei 2,93 und 2,24. Die beiden Medianwerte sind dagegen bei 0,7 und 0,33 anzusetzen. - 111 - Diskussion 4.2.9.2 CD-31-Expression / Gefäßdichte Bei der Untersuchung der CD-31-Expression ergaben sich Gefäßdichtewerte bis zu 218,67 Gefäße pro ausgewertetes Feld. In den zum späteren Zeitpunkt untersuchten 14 Rezidiven wiesen alle Tumoren (100%) CD-31-positive Zellen auf. Mit Hilfe dieses Markers konnte somit die Gefäßdichte ermittelt werden. Der Vergleich der beiden Gruppen zeigt, dass die ermittelten Median- und Mittelwerte eng miteinander korrelieren. Die beiden Medianwerte liegen bei 115,5 und 116,3. Im Mittel finden sich bei beiden Gruppen 117,4 Gefäße pro betrachtete Tumorfläche von 2,84 mm². 4.2.10 Prognostische Werte Bei der statistischen Analyse wurde das Ziel verfolgt, eine Abhängigkeit der Zeit bis zum Auftreten eines Rezidivs der aggressiven Fibromatosen von bestimmten Parametern nachzuweisen. Dabei wurde eine mögliche Abhängigkeit der Rezidivrate von folgenden Faktoren untersucht: Alter des Patienten, Geschlecht des Patienten, Tumorgröße, Tumorlokalisation, Resektionsstatus, adjuvante Therapie im Sinne einer Nachbestrahlung, Mitoserate, Gefäßdichte und Proliferationsaktivität des Tumors. Im folgenden werden nun die einzelnen Faktoren und die bei ihrer Analyse erbrachten Ergebnisse vorgestellt. 4.2.10.1 Geschlecht der Patienten In der durchgeführten Untersuchung konnten bei Männern und Frauen keine Unterschiede der Überlebensfunktionen festgestellt werden (Log-Rank-Wert 0,60). Auch die Literatur liefert keine Hinweise auf einen möglichen Zusammenhang. Dies führt zu der Folgerung, dass eine Analyse der Rückwirkung des Geschlechts auf die Lokalrezidivrate in einer größeren Studie mit höherer Fallzahl durchgeführt werden sollte, um festzustellen, ob das Geschlecht als Prognosefaktor des Desmoidtumors angesehen werden kann. 4.2.10.2 Alter der Patienten Bereits mehrfach schon wurde seitens vieler Arbeitsgruppen der Zusammenhang zwischen der Zeit bis zum Auftreten eines Rezidivs und dem Alter der Patienten analysiert. Enzinger und Weiss untersuchten 367 Desmoidtumoren und fanden, dass die Rezidivrate der extraabdominalen Desmoide mit 35% bis 65% höher lag als bei - 112 - Diskussion den abdominalen Desmoiden, deren Rezidivrate zwischen 15% und 30% ermittelt wurde (Enzinger & Weiss 1983). Weiterhin demonstrierten Enzinger und Shiraki, dass Rezidive häufiger bei jüngeren Patienten mit extraabdominalem Tumor zu beobachten sind als bei älteren Patienten (Enzinger & Shiraki 1967). Andere Autoren stützen ihre Observationen, doch die Arbeitsgruppen um Das Gupta und Markhede konnten das Alter des Patienten hinsichtlich der Rezidivrate nicht als einen Prognosefaktor bestätigen (Rock et al. 1984; Das Gupta et al. 1969; Markhede et al. 1986). Bei 42 extraabdominalen Fibromatosen mit einem Rezidivindex von 64% wurde belegt, dass die Rezidivrate bei jüngeren Patienten (Median: 21 Jahre) höher lag als die der älteren Patienten (Median: 33 Jahre) (Yokoyama et al. 1989). Auch in einer Studie mit 24 Fällen konnten die Autoren zu dem Ergebnis gelangen, dass die Rezidivrate bei jüngeren Patienten höher lag als bei älteren Patienten (Kouho et al. 1997). Ebenfalls in dieser Untersuchung konnte mittels der statistischen Untersuchungen der Hinweis erbracht werden, dass die Rezidivrate bei jüngeren Patienten höher ist als bei älteren Patienten (Log-Rank-Wert 0,07). Im Resümee kann gesagt werden, dass diese Ergebnisse trotz eines kleinen Studienumfangs mit den Ergebnissen der meisten Arbeitsgruppen übereinstimmen und somit daraus geschlossen werden kann, dass das Alter bei der Prognose des Krankheitsverlaufs eine Hilfestellung geben kann. 4.2.10.3 Tumortopographie In der Literatur finden sich 3 größere aktuelle Studien, die die Lokalisation der extraabdominalen Desmoide spezifizieren (Ballo et al. 1999; Karakousis et al. 1993; Merchant et al. 1999). In diesen Studien lässt sich im Wesentlichen eine Übereinstimmung bezüglich der beobachteten Desmoidlokalisation feststellen. Die Zusammenschau der 3 Kollektive ergibt eine Häufung der Lokalisation im Bereich der Schulter, der Axilla sowie der Extremitäten von 47-50% der Fälle. 23-30% der extraabdominalen Desmoidtumoren befinden sich am Stamm, 9-20% im Bereich der Bauchwand und 7-15% in der Kopf- und Halsregion. 4 der 33 Tumoren konnten als abdominale Desmoide im Bereich der Bauchwand identifiziert werden, die restlichen 29 Desmoide wurden als extraabdominale Desmoide klassifiziert. Bezüglich der Fragestellung einer Abhängigkeit der Rezidivhäufigkeit von der Tumortopographie konnte in der statistischen Analyse kein Hinweis vorgefunden werden (Log-Rank- - 113 - Diskussion Wert 0,91). Dabei wurden die Tumoren in 2 Gruppen eingeteilt und zwar in Desmoide, im Bereich des Stammes und im Bereich der Extremitäten lokalisiert. In einer Studie an 206 Fällen wurde eine mögliche Korrelation zwischen dem Rezidivindex und der Tumorlokalisation untersucht, wobei ebenfalls festgestellt wurde, dass die Tumortopographie keinen Einfluss auf die Rezidivhäufigkeit hat (Lewis et al. 1999). Aufgrund der hierbei erbrachten Resultate und auch der Ergebnisse von Lewis et al. kann durchaus die Auffassung vertreten werden, dass die Tumortopographie keinen prognostischen Wert bei den aggressiven Fibromatosen vom extraabdominalen und abdominalen Typ hat. 4.2.10.4 Tumorgröße Wie aus der Tabelle 4 entnommen werden kann, wiesen die Desmoide zum Zeitpunkt der Diagnose unterschiedliche Größen auf. Während die Desmoide an der Körperoberfläche oder im Gesichtsbereich, wie in 2 der bei dieser Untersuchung gegebenen Fälle im Bereich des Ohrläppchens, naturgemäß früher und in einem kleineren Stadium entdeckt werden können, erfolgt die Diagnose des tiefsitzenden Desmoids in den meisten Fällen erst spät, zu einem Zeitpunkt, zu dem der Tumor bereits einige Zentimeter groß ist. Die Tumorgrößen in dieser Studie erstreckten sich bei den 33 Desmoiden, welche einer statistischen Analyse unterzogen wurden, zwischen 1 cm und 13 cm. Der arithmetische Mittelwert der Einzelwerte liegt bei 5,96 cm der Median ist bei 5,50 cm anzusetzen. Auch in diesem Falle brachte die statistische Analyse keinen deutlichen Hinweis auf eine Korrelation zwischen der Tumorgröße und der Lokalrezidivrate (Log-Rank-Wert 0,64). Nur andeutungsweise ist der Graphik diesbezüglich eine Tendenz zu entnehmen, dass Tumoren mit einer Größe von mehr als 5 cm häufiger rezidivieren als Desmoide mit einer Größe kleiner als 5 cm. Um die Validität dieser Tendenz zu überprüfen, müsste diesbezüglich eine Studie mit einer großen Studienpopulation angesetzt werden. In einer Studie an 24 Desmoiden wurde die Abhängigkeit der Rezidivrate von der Tumorgröße analysiert, wobei keine Korrelation zwischen beiden Parametern gefunden wurde (Kouho et al.1997). - 114 - Diskussion 4.2.10.5 Mitosenanzahl Mit einem Log-Rank-Wert von 0,17 konnte mittels der statistischen Analyse der Hinweis erbracht werden, dass Mitosen im Desmoidtumor zu einem Rezidiv prädisponieren, wobei die Ergebnisse jedoch keine statistische Signifikanz zeigten. Dabei sind laut der hier erbrachten statistischen Ergebnisse bereits solche Patienten von dem erhöhten Risiko betroffen, in deren Tumoren nur eine Mitose auf 50 untersuchte hochvergrößerte Felder gefunden wurde. Mitosen sind eine seltene Erscheinung im Desmoidtumor (Naylor et al. 1979) und sollten, auch wenn sie manchmal in größerer Zahl auftreten mögen, den Pathologen nicht dazu verleiten, den Desmoidtumor aufgrund dessen als niedrigmalignes Fibrosarkom beziehungsweise Myofibrosarkom zu diagnostizieren (Burke et al. 1990). Aufgrund der hier vorgelegten Ergebnisse jedoch kann angenommen werden, dass die Mitosenanzahl die Rezidivrate des Tumors beeinflusst. 4.2.10.6 MiB-1 Mit Hilfe des monoklonalen Antikörpers MiB-1 kann das Zellkernantigen Ki-67 dargestellt werden. Bereits in unterschiedlichen malignen Neoplasien, wie Mammakarzinomen, Bronchialkarzinomen oder malignen Lymphomen, konnte Ki67 als histologischer Marker der proliferativen Aktivität nachgewiesen werden. Auch in Weichgewebssarkomen konnte eine Assoziation zwischen dem Nachweis dieses Zellkernantigens und der Prognose gezeigt werden (Ueda et al. 1989). Bei der statistischen Analyse der 33 aggressiven Fibromatosen konnte in dieser Arbeit ein Zusammenhang zwischen der Anzahl der MiB-1-positiven Tumorzellen und der Zeit bis zum Auftritt des Rezidivs ermittelt werden. In einer anderen Studie an 25 aggressiven Fibromatosen konnten in 10 Fällen MiB-1-positive Zellen dokumentiert werden. Dies macht einen Prozentsatz von 40% aus (Brueckl et al. 2001). Zwischen diesem Prozentsatz und dem in dieser Arbeit herausgearbeiteten Ergebnis von 48,5% können Parallelen gezogen werden. In der vergleichenden Studie konnte aber statistisch nachwiesen werden, dass Patienten mit Desmoidtumoren, welche MiB-1positive Zellen enthalten, ein stark verkürztes krankheitsfreies Überleben aufweisen als Patienten, deren Desmoidtumoren frei von MiB-1-positiven Tumorzellen sind. Eine Erklärung für die Diskrepanz der statistischen Ergebnisse, welche zwischen den hier gegebenen und Brueckls Studie vorliegt, mag diese sein, dass der erwähnte - 115 - Diskussion Autor Desmoidtumoren erst dann als MiB-1-positiv enthaltende Zellen definierte, wenn diese mehr als 5% dieser Zellen aufwiesen. Für diese Studie dagegen war jede einzelne vorgefundene MiB-1-positive Tumorzelle auch als solche zu charakterisieren. Wie unterschiedlich die Ergebnisse aber bezüglich des Nachweises des Zellkernantigens Ki-67 sind, kann auch der Studie von Kouho und seinen Assistenten entnommen werden. In jener Studie wurden 24 Desmoidtumoren auf das Vorhandensein von MiB-1-positiven Zellen untersucht, doch konnten diese in keinem Fall beobachtet werden (Kouho et al. 1997). Anhand der Resultate dieser Studie und der Ergebnisse von Brueckl, gleichzeitig die differierende Definition in Betracht nehmend, kann die Schlussfolgerung gezogen werden, dass MiB-1 als prognostischer Marker bei aggressiven Fibromatosen zur Zeit nicht sicher aussagekräftig ist. 4.2.10.7 CD-31 Das Wachstum eines Tumors ist von der Angiogenese abhängig, was sowohl durch experimentelle Studien an Modellen der Tumoren von Tieren als auch an kultivierten Zellen (Liotta et al. 1974; Ingber & Folkman 1989) nachgewiesen wurde. Es wurde angenommen, dass die Vaskularisation ein hilfreicher prognostischer Marker in vielen verschiedenen Tumoren sei, wie zum Beispiel Mammakarzinomen (Bosari et al. 1992; Simpson et al. 1996), Prostatakarzinomen (Weidner et al. 1993) und nicht kleinzelligen Bronchialkarzinomen (Macchiarani et al. 1992). Es wurde die Frage geprüft, ob CD-31 auch als prognostischer Marker bei der aggressiven Fibromatose eingesetzt werden kann. Die statistische Analyse hinsichtlich dieser Fragestellung lieferte dabei den Hinweis, dass eine geringe Gefäßdichte mit einem frühen Auftritt eines Rezidivs dieser Tumorentität einhergeht. Diese Aussage steht im Gegensatz zu den Ergebnissen der Studien von Schmidt et al. und von Yokoyama et al.. Schmidt et al. untersuchten in ihrer Studie 82 infantile Desmoide. Sie kamen zu der Schlussfolgerung, dass es eine Abhängigkeit zwischen den Rezidiven und der Gefäßdichte gibt. Aus ihren Ergebnissen folgerten sie, dass je höher die Gefäßdichte eines Tumors ist, umso eher der betroffene Patient ein Rezidiv erleiden wird. Dabei betrachteten sie vorwiegend Gefäße mit einem Durchmesser von weniger als 20 µm (Schmidt et al. 1991). Dieses Ergebnis mag daraus resultieren, dass Schmidt et al. nur infantile Fibromatosen untersuchten, die womöglich eine andere Biologie - 116 - Diskussion aufweisen als adulte Fibromatosen, welche in dem vorliegenden Untersuchungsgut analysiert wurden. Auch die Arbeitsgruppe um Yokoyama, welche 42 Desmoidtumoren hinsichtlich der Rezidivhäufigkeit in Abhängigkeit von der Gefäßdichte untersuchte, kam zu der Schlussfolgerung, dass bei höherer Gefäßdichte, eher Rezidive auftreten. Doch sie nahm nur Gefäße mit einem Durchmesser von weniger als 20 µm in Betracht (Yokoyama et al. 1989). Bei der Auswertung der Gefäßdichte in dieser Studie wurden alle dokumentierten Gefäße unabhängig von ihrem Durchmesser in Betracht gezogen, da der Tumor mit Nährstoffen nicht nur durch Gefäße versorgt wird, welche kleiner als 20 µm im Durchmesser sind. 4.2.10.8 Resektionsstatus Im vorliegenden Untersuchungsgut wurden 4 (12,1%) der 33 Tumoren als R0 eingestuft, das heißt bei 4 Tumoren waren die Resektionsränder frei von Tumorgewebe. In 21 (63,6%) Fällen ließ sich mikroskopisch Tumorgewebe im Resektionsrand nachweisen. Diese Tumoren erhielten den Resektionsstatus R1. Die restlichen 8 (24,2%) Desmoide waren mit dem Resektionsstatus R2 diagnostiziert, da bei ihnen bereits makroskopisch Tumorgewebe an den Resektionsrändern zu erkennen war. Aggressiv wachsende Tumoren neigen zu infiltrierendem Wachstum. Aufgrund dessen ist die Rezidivrate dieser Tumoren nach einer Resektion hoch. Daraus ist zu begründen, dass bei einer chirurgischen Desmoidresektion unabhängig von der Lokalisation des Tumors die Einhaltung eines Sicherheitsabstandes von 2 cm von einigen Autoren gefordert wird, um somit bei diesem Tumor dem onkologischen Anspruch einer R0-Resektion nachzukommen (Easter & Halasz 1989; Harvey et al. 1997; Khorsand & Karakousis 1985). Obwohl ein rezidivfreier Verlauf keineswegs bei R0-Resektionen mit Sicherheitsabstand garantiert werden kann, ist die Rate an Rezidiven bei den so behandelten Patienten niedriger als bei R1- und R2Resektionen (Peterschulte et al. 2000). Bei der statistischen Analyse des gegebenen Untersuchungsgutes in Hinblick auf eine mögliche Abhängigkeit der Rezidivhäufigkeit vom Resektionsstaus wurde die Gruppe der Proben mit R0Resektion mit der Gruppe der Proben mit R1-Resektion zusammengeschlossen. Dies geschah aufgrund der geringen Anzahl der R0-klassifizierten Gewebeproben. Obwohl bei dieser Fragestellung kein signifikanter Unterschied beobachtet werden - 117 - Diskussion konnte (Log-Rank-Wert 0,56), so zeigt die Graphik diesbezüglich doch eine vage Andeutung, dass sowohl die R0- als auch die R1-Resektion zu einer der R2Resektion gegenüber selteneren Lokalrezidivrate führt, womit dieses Ergebnis teilweise mit den Resultaten vieler anderer Studien übereinstimmen würde (Pritchard et al. 1996; Easter & Halasz 1989; Sherman et al.1990). Das Wort „teilweise“ bedeutet in diesem Zusammenhang, dass die erwähnten Autoren Studien durchführten, in denen sie zur Schlussfolgerung kamen, dass nur bei der R0Resektion seltener Rezidive zu beobachten sind als bei den R1- oder R2Resektionen. Khorsand und Karakousis gehen sogar soweit, dass sie aufgrund ihrer Untersuchungen an 19 Desmoidtumoren die Schlussfolgerung treffen, dass tumorfreie Ränder bei der Resektion nicht nur die Rezidivrate senken, sondern dass dadurch die Mehrheit der Patienten geheilt werden könnte (Khorsand & Karakousis 1985). In dieser Studie jedoch führt andeutungsweise auch die R1-Resektion seltener zum Rezidiv. Doch es gibt auch Autoren, welche keine Unterschiede in der Lokalrezidivrate zwischen den einzelnen Resektionseinteilungen fanden, den Benefit der tumorfreien Resektionsränder somit nicht belegen konnten (Mirabell et al. 1990; Kiel & Suit 1984; Lewis et al. 1999). 4.2.10.9 Adjuvante Bestrahlung Die Radiotherapie spielt eine wichtige Rolle in der adjuvanten Therapie der Sarkome, doch ist ihre Rolle in der Behandlung der Desmoide weniger klar definiert (De Vita et al. 1987; O’Sullivan et al. 1999). Bestrahlung kann als adjuvante Therapie nach inkompletter Resektion, bei wiederholten Rezidiven, sowie nach einer intraläsionären oder marginalen Resektion zur Vermeidung von Mutilation oder Funktionseinbuße durchgeführt werden (Enzinger & Weiss 1983; Kobayashi et al. 1997; Pereyo & Heimer 1996). Auch dient die Bestrahlungstherapie der lokalen Kontrolle. Dabei bedeutet lokale Kontrolle Tumorverkleinerung ohne weitere Zunahme der Größe, in seltenen Fällen sogar komplette Eradikation des Tumors ohne erneutes Wachstum, bezogen auf den Beobachtungszeitraum (Piza-Katzer & Rhomberg 2000). In einer Studie an 29 Patienten mit 30 Desmoiden, in der sowohl postoperative Fälle, bei denen der Resektionsrand durch den Tumor verlief oder nahe des Tumorrandes lag, als auch inoperable Tumoren und Rezidive untersucht wurden, konnte in einem - 118 - Diskussion Beobachtungszeitraum von mindestens 2 Jahren eine lokale Kontrolle in 70-90% der Fibromatosen erreicht werden (McCollough et al. 1991). Der erste Befürworter der Radiotherapie zur lokalen Kontrolle war 1928 Ewing (Ewing 1928). Bezüglich des Desmoidtumors nehmen die meisten Autoren an, dass die totale Tumorentfernung die beste Behandlungsmethode darstellt (Easter & Halasz 1989). Der erste Befürworter der weiten Excision war 1899 Bouffier (Bouffier 1899). Die Wichtigkeit der weiten Excision zur Zeit der Initialresektion wurde auch von Das Gupta und seinen Mitarbeitern noch mal betont (Das Gupta et al. 1969; Brasfield & Das Gupta 1969). So wird stets bei der primären chirurgischen Therapie eine weite oder radikale Resektion angestrebt. Die Rezidivraten sind jedoch hoch. Einige Autoren sehen eine der Ursachen hierfür darin, dass lediglich 73% der Resektionen, vom Operateur makroskopisch als weit eingestuft, auch tatsächlich - nämlich histologisch - weit sind (Pereyo & Heimer 1996). Es existieren Studien mit dem Ergebnis, dass nicht im Gesunden entfernte Desmoidtumoren zwar mit einer erhöhten Rezidivrate korrelieren, eine postoperative Bestrahlung dieses Risiko jedoch signifikant senkt (Goy et al. 1997; Plukker et al. 1995). Andere Autoren demonstrierten anhand einer multivariaten Regressionsanalyse eine Abnahme der Rezidivhäufigkeit nach Anwendung einer adjuvanten Therapie im Sinne einer Nachbestrahlung (Posner et al. 1989). Auch in dieser Arbeit wurde die Wichtigkeit der Radiotherapie im Sinne einer adjuvanten Therapie untersucht. Bei 29 der 33 Fälle konnte ermittelt werden, ob eine Nachbestrahlung erfolgte. Diese wurde in 11 (37,9%) Fällen durchgeführt. Die statistische Analyse lieferte den Hinweis, dass eine Nachbestrahlung das Risiko eines Rezidivs senken kann (Log-Rank-Wert 0,01). Dieser Wert liegt weit unter der geforderten Signifikanzgrenze von 0,05. Somit könnte diese Aussage als signifikant gewertet werden, doch aufgrund der nur geringen statistisch analysierten Anzahl der Fälle kann dieses Ergebnis nur als Hinweis gelten. Der niedrige Wert von 0,01 führt jedoch zu der Schlussfolgerung, dass die Nachbestrahlung als wichtiger prognostischer Faktor zu betrachten ist. Natürlich vertreten nicht alle diese Meinung. So fanden Reitamo und seine Mitarbeiter in ihrer Studie mit 89 Patienten heraus, dass die Radiotherapie, welche an 6 Patienten erfolgte, die Rezidivhäufigkeit nicht gesenkt, sondern stattdessen sogar verdoppelt hat. Zudem entwickelte jeder der 6 Patienten Radiotherapie bedingte Komplikationen (Reitamo et al.1986). - 119 - Diskussion 4.3 Lichtmikroskopische Untersuchungsergebnisse beim Morbus Dupuytren Die in dieser Analyse untersuchten superfiziellen Fibromatosen stammen von 8 männlichen und 3 weiblichen Patienten. Dies macht eine Verteilung von Männer : Frauen => 2,7 : 1. Diese Geschlechtsverteilung stimmt mit der in der Literatur angegebenen Verteilung der Geschlechter überein. Es gibt Autoren, die von einem 3 bis 4 Mal häufigeren Auftreten dieser Erkrankung bei der männlichen Bevölkerung berichten (Enzinger & Weiss 1983). Das Alter dieser Patienten erstreckt sich zwischen 47 und 62 Jahren mit einem Mittelwert von 57,4 Jahren und einem Median von 57,0 Jahren. Enzinger und Weiss betonen, dass es sich bei dieser Krankheit um eine Krankheit des älteren Menschen handelt, und dass 20% der über 65-jährigen der gesamten Bevölkerung von der superfiziellen Fibromatose betroffen seien (Enzinger & Weiss 1983). Zwar sind in dieser Studie alle betroffenen Patienten jünger als 65 Jahre, doch kann anhand des Alters jedes Patienten bestätigt werden, dass es sich um eine Erkrankung des älteren Menschen handelt. Bei 6 (54,5%) Patienten trat die Erkrankung in der rechten und bei 5 (45,5%) Patienten in der linken Hand auf. Dies zeigt eine leichte Prädominanz der rechten Hand auf. Bekannte Studien berichten ebenfalls von einer geringgradigen Dominanz der rechten Hand dieser Erkrankung (Enzinger & Weiss 1983). Beim mikroskopischen Bild der knötchenförmigen Fibromatose konnten in diesem Untersuchungsgut insgesamt 3 sich verschieden darstellende Areale erkannt werden, welche nebeneinander existiert haben. Unterschiedliche Autoren haben in ihren Untersuchungen des Morbus Dupuytren ebenfalls diese Areale dokumentiert. Dabei werden diese Befunde als die verschiedenen Entwicklungsstadien der Palmarfibromatose dargestellt. Bei den 3 beobachteten Arealen handelt es sich somit um die Proliferatiosphase, die Involutionsphase und die Residualphase (Meister 1998; Mentzel & Katenkamp 1998; Enzinger & Weiss 1983). Anhand der mikroskopischen Beschreibungen dieser Phasen seitens dieser Autoren kann davon ausgegangen werden, dass in dieser Studie eben diese 3 Entwicklungsstadien beobachtet werden konnten. In allen untersuchten Gewebeproben konnten nur in 2 (18,2%) Fällen Mitosen beobachtet werden. Dabei waren jeweils in jedem Fall nur eine Mitose auf 50 untersuchte hochvergrößerte Felder dokumentiert worden. Atypien sind nicht - 120 - Diskussion aufgetreten. Auch Katenkamp und Stiller konnten in ihrer Studie mit 5 Palmarfibromatosen nur spärlich Mitosen entdecken, wobei Atypien fehlten (Katenkamp & Stiller 1976). In 3 (27,3%) Fällen konnten Lymphozytenansammlungen, welche vorwiegend in der Peripherie der Knötchen auftraten, beobachtet werden. Enzinger und Weiss berichten ebenfalls von dem Auftreten von Lymphozytenansammlungen in der superfiziellen Fibromatose. Auch sie konnten die Entzündungszellen vorwiegend am Rande der Knötchen beobachten (Enzinger und Weiss 1983). Hinsichtlich der Nukleolenanzahl, der Hämosiderin-speichernden Makrophagen, dem Vorkommen elastischer und retikulärer Fasern, der Proliferationsaktivität und der Gefäßdichte konnten leider keine Literaturhinweise gefunden werden. - 121 - Diskussion 4.4 Vergleich der gewonnenen Ergebnisse mit Schrifttumsangaben 1. Aggressive Fibromatosen sind seltene Tumoren des Weichgewebes, die in Abhängigkeit von der Lokalisation in drei Subtypen eingeteilt werden: extraabdominal, abdominal und intraabdominal. 2. Entsprechend den erzielten Befunden und den korrelierenden Ergebnissen aus der Literatur rezidiviert der Tumor mit einer Häufigkeit von etwa 30%-40%. Dabei sind vor allem Frührezidive besonders häufig zu beobachten. 3. Auch in dieser Arbeit konnte übereinstimmend mit der Literatur trotz der geringen Fallzahl die Multizentrität des Tumors und das Vorkommen des Tumors im Rahmen einer Gravidität belegt werden. 4. Das histopathologische Erscheinungsbild der aggressiven Fibromatosen als auch Ergebnisse bezüglich der Nukleolenanzahl, der Mitoserate, der Erythrozytenextravasate, der Entzündungsinfiltrationen und dem Auftreten Hämosiderinpositiver Zellen stehen in gutem Einklang zu Angaben aus der Literatur. 5. Das Geschlecht des Patienten kann laut den Ergebnissen dieser Studie nicht als prognostischer Marker hinsichtlich der Rezidivhäufigkeit angesehen werden. 6. Wie viele andere Studien, so suggeriert auch diese Studie das Alter des Patienten als guten prognostischen Parameter, wobei die jüngeren Patienten (Alter unter 50 Jahre) eher dem Risiko des Rezidivs ausgesetzt sind. 7. Eine prognostische Bedeutung der Tumortopographie konnte in dem hier analysiertem Untersuchungsgut nicht belegt werden. 8. Bezüglich der Tumorgröße konnte in dieser Analyse keine statistisch signifikante Cut-off-Linie angegeben werden, ab der mit einem schlechteren Krankheitsverlauf gerechnet werden muss. 9. Diese Untersuchungsreihe ergab, dass das Vorkommen von Mitosen in der aggressiven Fibromatose zu einem Rezidiv prädisponiert. 10. Anders als in bereits veröffentlichten Studien konnte in dieser Untersuchungsreihe die Korrelation zwischen MiB-1-Expression und der Rezidivhäufigkeit nicht bewiesen werden. 11. Die Studie liefert das Resultat, dass eine geringe Gefäßdichte mit einem frühen Auftritt von Rezidiven aggressiver Fibromatosen korreliert. Dieses Ergebnis steht jedoch im Widerspruch zu anderen Ergebnissen, die eine Korrelation - 122 - Diskussion zwischen dem frühen Auftritt eines Rezidivs und einer hohen Gefäßdichte postulieren. 12. Statistisch konnte andeutungsweise eine Korrelation zwischen dem frühen Auftritt von Rezidiven und dem Resektionsstatus ermittelt werden, wobei als R0- und R1-klassifizierte Resektate mit niedrigerem Rezidivrisiko einhergehen. 13. Die statistische Analyse lieferte den Hinweis, dass eine Nachbestrahlung als wichtiger prognostischer Parameter betrachtet werden kann. 14. Bezüglich der Analyse der Gewebeproben mit Morbus Dupuytren sind hinsichtlich des Patientenalters, des Patientengeschlechts, des histopathologischen Erscheinungsbildes der superfiziellen Fibromatose, der Mitoserate, der mitotischen Atypien und der Lymphozytenansammlungen die Angaben aus der Literatur konform. Hinsichtlich der Nukleonenanzahl, der eisenpositiven Zellen, dem Vorkommen elastischer und retikulärer Fasern, der Proliferationsaktivität und der Gefäßdichte konnten keine Literaturangaben gefunden werden. - 123 - Diskussion 4.5 Fazit für die Klinik 1. Die aggressive Fibromatose ist zwar ein seltener, doch häufig mehrfach rezidivierender Tumor, weshalb diese Tumorentität besonderer Zuwendung bedarf. 2. Insbesondere sind jüngere Patienten, unabhängig vom Geschlecht, von dem Risiko des frühen Auftretens eines Rezidivs betroffen. 3. Das Vorkommen von Mitosen, auch schon in sehr geringer Anzahl, prädisponiert zu frühen Rezidiven. 4. Eine geringe Gefäßdichte geht mit frühen Rezidiven aggressiver Fibromatosen einher. Diesem Punkt sollte besonderes Augenmerk gewidmet werden, da diese Aussage im Widerspruch zu anderen bisher veröffentlichten Meinungen diesbezüglich steht. 5. Diese Analyse weist auf die prognostische Bedeutung des chirurgischen Resektionsstatus bei aggressiven Fibromatosen hin. 6. Weiterhin liefert diese Untersuchung den Hinweis auf die prognostische Bedeutung der adjuvanten Therapie im Sinne einer Nachbestrahlung. - 124 - Zusammenfassung 5 ZUSAMMENFASSUNG 1. Ziel dieser Untersuchung war es, eine detaillierte Charakterisierung der feingeweblichen Befunde verschiedener Arten von Fibromatosen insbesondere der Zellularmatrix unter dem Gesichtspunkt der differentialdiagnostischen Abgrenzung zu erreichen und die prognostische Bedeutung bestimmter klinisch-pathologischer Tumortopographie, Proliferationsaktivität Parameter Tumorgröße, des (Patientenalter, Mitosenanzahl Tumors, Gefäßdichte Patientengeschlecht, im Tumorgewebe, im Tumorgewebe, Resektionsstatus, Nachbestrahlung) in Hinsicht auf die Rezidivhäufigkeit der aggressiven Fibromatose zu bestimmen. 2. Insgesamt wurden 47 Tumoren vom Typ der aggressiven Fibromatose bei 33 Patienten untersucht und mit 11 superfiziellen Fibromatosen und 9 Narben verglichen. Es wurden histologische Färbungen wie HE-Färbung, EvGFärbung und Färbung nach Gomorri angewandt. Mit Methoden der Immunhistochemie konnte sowohl die Proliferationsaktivität (monoklonaler Mausantikörper gegen MiB-1) als auch die Gefäßdichte (monoklonaler Mausantikörper gegen CD-31) der Tumoren analysiert werden. Mit Hilfe der statistischen Analyse mittels des Log-Rank-Tests konnten Aussagen bezüglich der prognostischen Wertigkeit bestimmter Parameter erhoben werden. 3. Die Auswertung der mittels der angegebenen histologischen Färbungen colorierten Präparate erfolgte an einem Carl Zeiss-Lichtmikroskop. 4. Jede durch CD-31 spezifisch positiv gefärbte Zelle wurde in je 3 repräsentativen Arealen als Kapillarstruktur gezählt. Die quantitative Auszählung erfolgte bei 100facher Vergrößerung an einem Carl ZeissLichtmikroskop. 5. Der MiB-1 Score wurde wie folgt angegeben: 1: < oder = 0,33% positive Zellen; 2: > 0,33% positive Zellen. 6. Die Hauptzelle aller 3 Läsionen bildet der Myofibroblast. Alle 3 Läsionen wiesen stellenweise Areale auf, die dem charakteristischem Aufbau jeweils der anderen Gewebesorte entsprechen. Atypische Kernteilungsfiguren ließen sich in keiner Läsion nachweisen. In beiden Fibromatosetypen waren Mitosen eine Seltenheit; Erythrozytenextravasate waren hier dagegen gehäuft anzutreffen. In Narben waren diese nur gering und selten ausgeprägt. - 125 Lymphozytenansammlungen konnten Zusammenfassung vorwiegend in der aggressiven Fibromatose und der Narbe beobachtet werden. Alle 3 Läsionen wiesen Hämosiderin-speichernde Makrophagen auf. 7. Elastische Fasern konnten insbesondere bei den beiden Fibromatosetypen dokumentiert werden, die hier in verschiedenen Formationen vorzufinden waren. In Narben fehlten sowohl diese Fasern als auch die retikulären Fasern, welche regelmäßig bei den beiden Fibromatosetypen in Form von Fasernetzen zu beobachten waren. 8. Beide Fibromatosetypen wiesen in etwa die gleiche Proliferationsaktivität auf. Die Gefäßdichte war bei den aggressiven Fibromatosen dagegen doppelt so groß wie bei den superfiziellen Fibromatosen. 9. Bezüglich der Prognosefaktoren ergab die Studie, dass ein niedrigeres Patientenalter (Alter unter 50 Jahre) und das Nicht-Erhalten einer adjuvanten Nachbestrahlung mit einer erhöhten Rezidivhäufigkeit einhergehen. 10. Es konnte beobachtet werden, dass das Vorkommen von Mitosen in der aggressiven Fibromatose zu einem Rezidiv prädisponiert. 11. Die Ergebnisse der Studie deuten darauf hin, dass als R0- und R1-klassifizierte Resektate mit niedrigerem Rezidivrisiko einhergehen. 12. Die Studie liefert das Resultat, dass eine geringe Gefäßdichte mit einem frühen Auftritt eines Rezidivs der aggressiven Fibromatose korreliert. Diese Aussage wurde bis dato in der veröffentlichten Literatur nicht belegt. Die Angaben aus der Literatur liefern diesbezüglich gegensätzliche Ergebnisse, indem darauf hingewiesen wird, dass besonders eine hohe Gefäßdichte zu einem frühen Rezidiv prädisponiert. 13. Anders als in bereits veröffentlichten Studien konnte in dieser Untersuchungsreihe die Korrelation zwischen MiB-1-Expression und der Rezidivhäufigkeit nicht belegt werden. 14. Eine prognostische Bedeutung des Patientengeschlechts und der Tumortopographie konnte in dem hier analysierten Untersuchungsgut, genauso wie in anderen bekannten Studien, nicht belegt werden. 15. Bezüglich der Tumorgröße konnte in dieser Analyse keine statistisch signifikante Cut-off-Linie angegeben werden, ab der mit einem schlechteren Krankheitsverlauf gerechnet werden muss. - 126 - Literaturverzeichnis LITERATURVERZEICHNIS 1. Allegra, S. R., Broderick, P. A. (1973) Desmoid fibroblastoma: intracytoplasmic collagenolsynthesis in a peculiar fibroblastic tumor - light and ultrastructural study. Human Path 4, 219-249 2. 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Für seine immerwährende Hilfsbereitschaft, seine konstruktiven Ratschläge und die kritische Durchsicht dieser Arbeit bin ich ihm sehr verbunden. Ferner gilt mein Dank Frau S. Schaub-Kuhnen und Frau M. Kochem für die Fertigstellung der exzellenten Schnittpräparate und die Anfertigung der immunhistochemischen Färbungen. Bei der Beratung zur Erstellung der Farbbilder bedanke ich mich bei Frau C. Troske. (Sämtliche Abbildungen makroskopischer Präparate sind Eigentum des Instituts für Pathologie beziehungsweise des Registers für Gliedmaßentumoren am Institut für Pathologie am Bergmannsheil. Die Verwendung dieser Abbildungen außerhalb dieser Promotionsschrift darf nur nach ausdrücklicher Genehmigung durch den Institutsdirektor beziehungsweise in dessen Vertretung durch Herrn PD Dr. med. C. Kuhnen erfolgen.) Frau S. Rabstein aus dem Statistischen Analysezentrum der Kliniken-Bergmannsheil danke ich für die Hilfe bei der Durchführung der statistischen Analyse. Letztlich gilt mein inniger Dank meinem Mann Bartos für seine Liebe und Geduld und vor allem für die technische Unterstützung bei der schriftlichen Niederlegung dieser Dissertation. - 144 - Lebenslauf LEBENSLAUF Persönliche Daten Name Geburtsdatum Geburtsort Familienstand Staatsangehörigkeit Schulausbildung 08.1988 - 06.1997 Hochschulstudium seit 10.1997 Praktika 09.1997 03.1998 02.2001 Famulaturen 09.1999 02.2000 03.2001 04.2001 07.2001 09.2001 Marlene Helwing 20.12.1977 Stettin verheiratet Deutsch Gymnasium in Wuppertal Abschluss: Hochschulreife Humanmedizin an der Ruhr-Universität-Bochum Krankenpflegepraktikum auf der Station der Inneren Medizin im Bethesda-Krankenhaus in Wuppertal Krankenpflegepraktikum auf der Station der Plastischen Chirurgie im Ferdinand-Sauerbruch-Klinikum in Wuppertal Praktikum der Allgemeinmedizin bei Frau Dr. Zimmermann in Bochum Klinische Ophthalmologie im Knappschaftskrankenhaus in Bochum Allgemeine Pathologie im Institut für Pathologie Bergmannsheil in Bochum Hals-Nasen-Ohrenheilkunde im St. Elisabeth-Hospital in Bochum Allgemeine Pathologie im Institut für Pathologie Bergmannsheil in Bochum Gynäkologie und Geburtshilfe in der Praxis von Herrn Michalewski in Monheim Anästhesiologie im St. Josef-Hospital in Bochum Praktische Tätigkeit während des Studiums seit 04.2001 studentische Hilfskraft im Institut für Pathologie Bergmannsheil in Bochum