Identifizierung von Kationen-Kanalproteinen in eukaryotischen und

Identifizierung von Kationen-Kanalproteinen in eukaryotischen
und prokaryotischen Zellen
(Promotionsprojekt, Prof. Veit Flockerzi)
Wir beschäftigen uns mit der Proteinzusammensetzung, der Funktion und der Pharmakologie
spannungsgesteuerter Ca2+ Kanäle und von TRP Kationenkanälen. TRP Kanalproteine bilden eine
große und diverse Familie von Proteinen, die in vielen verschiedenen Geweben und Zelltypen
exprimiert werden. Sie liegen Kanälen zugrunde, die auf Temperatur, scharfe Naturstoffe (z. B.
Capsaicin, Allicin, Senföl), auf Wachstumsfaktoren im Nervensystem, auf Pheromone, mechanische
Reize und Stress reagieren. Außerdem führen Mutationen einiger TRP Kanalproteine zu
verschiedenen Erkrankungen sowohl beim Menschen als auch bei Mäusen, z. B. zu Tumoren und
degenerativen Nervenerkrankungen. Die Kanalproteine kommen in einer großen Anzahl von
Organismen, Geweben und Zelltypen vor, so auch in nicht-erregbaren Epithelzellen und roten
Blutkörperchen, in der glatten Muskulatur und in Nervenzellen. Das TRPC5 Protein gehört zur TRPC
Unterfamilie der TRP Proteine und bildet vermutlich zusammen mit anderen TRPC Proteinen einen
Ionenkanal, der die Neuronenlänge und das kegelförmige Wachstum im Hippokampus reguliert. Die
genaue Zusammensetzung dieses TRPC5 enthaltenden Kanals wurde bislang noch nicht aufgeklärt.
In diesem Projekt sollen folgende Ziele verfolgt werden: 1. Isolierung des TRPC5 Kanalproteins aus
Rinder- und Maus-Gewebe und Charakterisierung der interagierenden Proteine mit Hilfe von
spezifischen
Antikörpern,
Immuno-Affinitäts-Chromatographie
und
Hefe-2-Hybrid
Sreening.
2. Funktionelle Expression des TRPC5 enthaltenden Kanal-Komplexes. 3. Charakterisierung der
funktionellen Rolle von TRPC5 in peripheren Blutzellen. 4. Interaktionen spannungsgesteuerter Ca
Kanal-Untereinheiten und TRP Kanalproteinen.
Methoden:
Differentielle Zentrifugation; Proteinchemie; Konstruktion rekombinanter Proteine; Aufreinigung von
Kanalproteinen; Herstellung, Reinigung und Anwendung von Antikörpern; verschiedene
molekularbiologische Methoden inklusive der Konstruktion und dem Screening von Hefe-2-Hybrid und
cDNA Bibliotheken; funktionelle Expression von cDNA
Publikationen:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&term=Flockerzi+V
Promotionsprojekte:
- Aufklärung der Proteinzusammensetzung des TRPC5 Ionenkanals
- Kopplung des TRP Kanalproteins mit spannungsgesteuerten Ca2+-Kanaluntereinheiten
- Identifizierung des TRP-verwandten Kationenkanals in Prokaryoten
- Proteinzusammensetzung des TRPM4 Ionenkanals