Protokoll zum Versuchsteil: „Isolierung

Fachmodul Genetik
Mutationen
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Protokoll zum Versuchsteil: „Isolierung auxotropher Mutanten“
Name:
Gruppennr.:
Datum:
Abgabe bis spätestens 25.05.09
Abgabe des korrigierten Protokolls bis:
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Einleitung:
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Fachmodul Genetik
Mutationen
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1.
Bestimmung der Überlebensrate
Bestimmen Sie jeweils für die mutagenisierte Kultur und für die Kontrollkultur bei der
am besten auszuwertenden Platte die Koloniezahl und berechnen Sie die Überlebensrate.
2.
Isolierung auxotropher Mutanten mit Hilfe der Replika-Plattierung
Zählen Sie auf der von Ihnen bei der Replika-Plattierung eingesetzten Platte die
Kolonien. Konnten Sie auxotrophe Mutanten beobachten? Diskutieren Sie Ihre
Ergebnisse unter Einbeziehung der Ergebnisse des gesamten Kurses.
Werten Sie die Platte zur Charakterisierung der auxotrophen Mutanten aus.
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Mutationen
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3.
Anreicherung Uracil-bedürftiger Mutanten mit 5-FOA
Beschreiben Sie die Wirkung von 5-FOA. Erklären Sie, weshalb sich nur ein Teil der
an der Pyrimidin-Biosynthese beteiligten Gene durch diese Selektion isolieren lassen.
Warum müssen die Platten für die 5-FOA-Selektion auch Uracil enthalten?
Bestimmen Sie die Anzahl 5-FOA-resistenter Kolonien, die auf Ihrer Platte
gewachsen sind. Entspricht dies ungefähr der Zahl, die Sie erwarten konnten?
Werten Sie das Wuchsverhalten Ihrer 5-FOA resistenten Kolonien aus.
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4.
Identifizierung des defekten Gens aus dem Pyrimidin-Stoffwechsel
Bestimmen Sie die Transformationseffizienz Ihrer Mutanten.
Beschreiben Sie, welche Ihrer Mutanten Sie für das Transformationsexperiment
ausgewählt haben, sowie ihr Verhalten während des Experimentes (z.B.: Welche
Transformanten ließen sich komplementieren? Wuchsen alle für die Restriktionsanalyse ausgewählten Kolonien in flüssigem ampicillinhaltigem Vollmedium?
Enthielten alle Kolonien Plasmide?). Diskutieren Sie Ihre Ergebnisse.
Erklären Sie das Selektionsprinzip dieses Transformationsexperimentes!
Werten Sie die Restrikionsbanden aus und identifizieren Sie das Gen, das Ihre
Mutante(n) komplementieren kann. Charakterisieren Sie dieses Gen im Detail (z.B.:
Wirkung des Genprodukts, Genregulation)! Falls Sie unterschiedliche Gene
identifizieren konnten, wählen Sie bitte für die detaillierte Charakterisierung ein Gen
aus.
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