DNA-Isolierung aus Blut DNA-Isolierung aus Blut DNA

DNA-Isolierung aus Blut
DNA-Isolierung aus Blut
DNA-Isolierung ist in den wissenschaftlichen, medizinischen oder juristischen Bereichen für
die genetische Analyse hilfreich. um eine Operation in der Molekularbiologie durchzuführen
wird Jedoch ein reines DNA-Beispiel benötigt. DNA Destillation und Extraktion trennt die
DNA von den anderen Zellbestandteilen im Zellkern und schützt vor Abbau durch zelluläre
Enzyme.
Erforderliche Materialien zur DNA-Isolierung aus Blut
uffer AL
-100%)
uffer AW1 (enthält Salz sitotrop)
uffer AW2 (enthält Natriumazid)
Wirbel
DNA-Isolierung aus Blut
Methode der DNA-Isolierung aus Blut
1.
Proteinase K wird in 2,0 mL Mikrozentrifugenröhrchen gefüllt.
2. Wird während der Nukleinsäurepurifikation um die DNase und RNase zu
inaktivieren, verwendet.
1. Die Blutprobe wird in 2,0 ml Mikrozentrifugenröhrchen gegeben und die DNA
Isolierung beginnt.
2. ATL Puffer(Lyse-Puffer) hinzufügen.
a. Lysepuffer, wird verwendet, um die Struktur der Zellmembranen zu stören.
b. Wird verwirbelt und bei 56 ° C für 10 Minuten inkubiert.
DNA-Isolierung aus Blut
i. Weitere Inkubationszeit hat keinen weiteren Nutzen.
3. Nach der Inkubation 96% Ethanol lysate hinzugefügt.
a. Zusammen mit der Zentrifuge werden Pellets bestehen.
4. Wenn ausreichend Ethanol hinzugefügt wurde, wird eine starke Bindung mit Hilfe der
Phosphatgruppen und positiven Ionen hergestellt.
5. Wirbelbewegung für 15 Sekunden.
6. In 2ml Sammelröhrchen wird das Kolon/Säulenrohr gegeben und der Mischung
zugefügt.
7. Bei 6000 x g (8000 rpm) wird zentrifugiert.
8. 2ml Sammelröhrchen wird verworfen und das Säulenrohr wird in ein neues
Röhrchen gegeben.
9. AW1 Puffer wird zugegeben und bei 6000 × g (8000 rpm) für 1 Minute
zentrifugiert.
a. AW1 Puffer enthält Guanidiniumchlorid (Guanidinhydrochlorid).
DNA-Isolierung aus Blut
b. Dieses Beispiel wird zur Denaturierung von Proteinen verwendet.
c. AW1 und AW2 Puffer wurden konzentriert verwendet. Deshalb wird bei der ersten
Benutzung das 96-100% Ethanol in den Kolben gegeben und gemischt.
10. Sammelröhrchen wird verworfen und das Säulenrohr wird in ein neues 2-mlRöhrchen gegeben.
11. AW2 Puffer wird zugegeben und bei 20000 x g (14000 rpm) für 4 Minuten zentrifugiert.
a. AW2 Puffer enthält 70% EtOH. 70% EtOH entfernt das Salz bei der Säule.
b. Schafft die Destillation der DNA.
12. Säulenrohr wird in ein neues 1,5 ml oder 2 ml Mikrozentrifugenröhrchen gegeben.
a. AE Puffer (Elutionspuffer) wird direkt in Membran transferiert und bei 6000xg
(8000 rpm) für 1 Minute zentrifugiert.
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i. AE Puffer beinhaltet 10 mM Tris·Cl, 0,5 mM EDTA, pH 9,0.
ii. Mit AE Puffer wird eine stabile DNA geschaffen.
13. Nach dem Zentrifugieren ist die DNA gebrauchsfertig und wird bei -20 ° C aufbewahrt.