Grundwissen Gelelektrophorese

Gelelektrophorese
Chantale Sevenich, Viviana Mandalà
Übersicht
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Grundwissen über Elektrophorese
Arten der Elektrophorese
Grundwissen Gelelektrophorese
Vor- und Nachteile
Einsatzbereiche
Ablauf einer Gelelektrophorese
Auswertung
Genvergleich eines Carzinompatienten
Grundwissen zur Elektrophorese
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Ist ein analytisches Verfahren, das durch den
Einsatz eines elektrischen Feldes, verschiedene
Moleküle voneinander trennt.
Elektrophorese bezeichnet die Wanderung
geladener Teilchen im elektrischen Feld.
Einzelne Moleküle bewegen sich in dem Feld
aufgrund ihrer elektrischen Ladung und Größe
unterschiedlich schnell. Folge: Auftrennung der
Moleküle
Arten der Elektrophorese
Kapillarelektrophorese
 Zonenelektrophorese
 Disk-Elektrophorese
 Isoelektrisch
 Gelelektrophorese
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Grundwissen Gelelektrophorese
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Bei Anlegen einer elektrischen Spannung
wandern die leicht negativ geladenen DNAMoleküle durch das Gel zur Anode. Das Gel
funktioniert wie ein Sieb
Kleine Moleküle können schneller durch das Gel
laufen, als große und werden dadurch
aufgetrennt.
Durch das im Gel eingelagerte Ethidiumbromid
wird die DNA im UV-Licht sichtbar
Vor- und Nachteile der Gelelektrophorese
Vorteile: Gel ist leicht gießbar und
denaturiert nicht in den Proben
 Ist eine wenig zeitaufwendige Technik zur
Analyse von PCR-Produkten
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Nachteile: Gel kann während
Elektrophorese schmelzen, Puffer
erschöpft, Genmaterial läuft nicht immer
gleich (schnell)
Die Einsatzbereiche
Analyse von Desoxyribonukleinsäure
(DNA)
 Analyse von Ribonukleinsäure (RNA)
 Allgemeine Proteinauftrennung
 Proteinreinigung
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Ablauf einer Gelelektrophorese
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In einer Duranflasche wird die
Agarose eingewogen und mit
TBE-Puffer versetzt
In der Mikrowelle wird das
Gemisch aufgekocht und die
Agarose eingeschmolzen
Lösung abkühlen und
Ethidiumbromid zugeben
Die Lösung wird nun in den
Gießstand gegossen, indem
Kämme eingesetzt sind (=DNA
Taschen)
Das Gel polymerisiert aus und
wird im Kühlschrank gelagert
Ablauf einer Gelelektrophorese
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Die Kammer wird mit
Puffer gefüllt
Das Tablett wird mit dem
Gel in die Kammer gelegt
DNA mit Leiter und
Ladepuffer wird in die
Taschen geladen
Kammer verschließen
Strom einschalten
Ablauf einer Gelelektrophorese
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Bei 160V/400mA läuft
das Gel ca. 75mins.
Ende der
Elektrophorese, wenn
die blaue Front kurz
vor dem Ende des
Gels ist
Strom abschalten und
Gel aus der Kammer
nehmen
Die Auswertung
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Gelstreifen auf den
Transilluminatoren legen
(ohne Luftblasen)
UV-Lampe (312nm)
einschalten und Gel
digital und fotografisch
festhalten
Optische Auswertung der
Banden
Genvergleich eines Carzinompatienten
Einteilung der Patienten in Kontrollkollektiv
und Krebskollektiv anhand der Diagnosen
 Blutabnahme und Isolierung der DNA
 PCR und Gelelektrophorese
 Genvergleich der Kollektive, wenn Gen
vorhanden, könnte der Krebs in diesem
Gen verschlüsselt sein
 Andere Zusammensetzung der DNA
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