LMU - Helmholtz Zentrum München

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Picornaviren
LMU
- nicht segmentiert
- segmentiert
- Helikales NC
- Zwei ikos.Capside
- umhüllt
- Nicht umhüllt
- ES RNA (+)
- DS RNA
- nicht segmentiert
- Helikales NC
- umhüllt
- ES RNA (-)
RNA-Viren -
Einteilung
(+) Strang RNA-Viren
LMU Picornaviridae:
Enterovirus
Rhinovirus
Hepatovirus
Aphthovirus
Cardiovirus
Parechovirus
polio, coxsackie, echo
human rhino
hepatitis A
foot-and-mouth disease; MKS
encephalomyocarditis, mengo
human parecho
Caliciviridae:
Norovirus
norwalk-like, sapporo-like
Hepatitis-E-likeviridae:
Hepatitis-Evirus
hepatitis E
Togaviridae:
Alphavirus
Rubivirus
sindbis, semliki-forest
rubella
Flaviviridae:
Flavivirus
Hepacivirus
yellow fever, dengue, FSME
hepatitis C
Coronaviridae:
Coronavirus
human corona 229-E, SARS
LMU
Coronaviridae
ein Molekül infektiöse RNA, etwa 16-21 kb
(längstes RNA-Virus Genom)
Virionen mit 80 – 160 nm Durchmesser
lipidhaltige Hülle
helikales Nukleokapsid
Coronaviridae
LMU
Gattung Coronavirus: 4 Gruppen
Coronaviridae
LMU
5‘-cap
5'-methyliertes cap
Polyadenyliertes 3’-Ende
Strukturproteine am 3'-Ende kodiert
Nicht-Strukturproteine (NS) am 5'-Ende
ORF1 (a und b) nehmen 2/3 des Genoms ein
Coronaviridae
LMU
Haarnadelschleife
Leader-RNA
5‘-cap
ORF1a
ORF1b
Haarnadelschleife induziert Leserastersprung (20-30 %)
bei Translation
Proteolytische Spaltung der NS-Proteine durch virale
Proteasen
Coronaviridae
LMU
template: (-) Strang
Leader-RNA
5‘-cap
5‘-cap
5‘-cap
5‘-cap
5‘-cap
5‘-cap
5‘-cap
Subgenomische mRNA’s für die Expression der
Strukturproteine (“nested” mRNA’s)
Priming via Leader-RNA
Identisches 3’ Ende
5’ Cap und 3’ poly A
Regulation z.T. via Anzahl der Leader-RNA Bindestellen
Coronaviridae
LMU
Entry
?
(+)
(+)
(+)
(-)
(+)
(+)
(+)
(+)
Budding ins ER
Freisetzung via Golgi
Coronaviridae (HCV-229E und -OC43)
LMU
•
•
Weltweite Verbreitung
Bis zu 90 % der Erwachsenen haben Antikörper
Pathogenese:
- Tröpfcheninfektion
- Vermehrung in Flimmerepithelzellen des oberen Respirationstraktes
- andere
Coronaviren auch Vermehrung in Darmepithelzellen
•
- Infektion beschränkt sich meist auf die Epithelien dieser Organe
- Genetische Prädisposition für HCV-229 Empfänglichkeit (Chromosom 15)
- Reinfektionen häufig / meist symptomlos
•
Coronaviridae (HCV-229E und -OC43)
LMU
•
Saisonale Häufung im Winter (Februar / März):
•
•
Klinik:
- häufig inapparent
- Inkubationszeit: 2 - 5 Tage
- Erkrankungsdauer ca. 1 Woche
- Schnupfen, Husten, Hals- und Kopfschmerzen, leichtes Fieber
- Schwererer Verlauf bei Säuglingen und Kleinkindern:
asthmatische Anfälle, Bronchitis (selten) und Pneumonien (selten) möglich
•
Harmloser Atemwegsinfekt !
Coronaviridae (SARS-CoV)
LMU
•
Severe Acute Respiratory Syndrom-Virus
Erstmaliges Auftreten im November 2002 in China
Klinik:
•
- Inkubationszeit: 2 – 7 Tage
- Plötzlich auftretendes, schnell steigendes,
hohes Fieber (bis 38°C)
- Atemnot, Muskel- und Kopfschmerzen
- Entzündung beider Lungenflügel
- Thrombozytopenie / Leukozytopenie
- Letalität: ca. 11 % (?)
Coronaviridae (SARS-CoV)
•
•
Coronaviridae (SARS-CoV)
LMU
•
•
März / April / Mai 2003: Panik vor einer Epidemie !!!
Coronaviridae (SARS-CoV)
LMU
Ca. 1000 Tote weltweit
•
Letzter Fall: Sommer 2003 (taiwanesischer Militärarzt)
Genogruppen der Coronaviren:
•
•
- Gruppe 1 und 2 bei Säugetieren
- Gruppe 3 bei Vögeln
- Gruppe 4 SARS-CoV ???
Coronaviridae (SARS-CoV)
LMU
Weitere Besonderheiten SARS-CoV :
- Vermehrung in Vero Zellen (African Green Monkey Kidney) möglich
im Gegensatz zu HCV 229E und -OC43
•
- Tröpfchen- und Schmierinfektion möglich !
(weitere Übertragungswege ? Klimaanlage etc.)
- Befall der unteren Atemwege (Lunge) und des Darms
(viel Virus im Stuhl nachweisbar)
•
- Zoonose
(Zibetkatze, Fledermaus, Frettchen, Marder ?)
03.05.2003 - (idw) Robert Koch-Institut
Die in Deutschland ergriffenen Maßnahmen gegen das Schwere Akute Respiratorische Syndrom (SARS) sind wirksam.
…
Innerhalb Deutschlands hat es bislang keine Ansteckung gegeben. "Das zeigt, dass die schnelle Reaktion des
Robert Koch-Instituts und die gute Zusammenarbeit mit den zuständigen Behörden der Bundesländer sowie den
Gesundheitsämtern vor Ort auf der Grundlage des Infektionsschutzgesetzes in Deutschland eine größere Ausbreitung
des internationalen SARS-Ausbruchs bisher verhindert hat", sagt Reinhard Kurth, Präsident des Robert Koch-Instituts.
Picornaviren
LMU
- nicht segmentiert
- segmentiert
- Helikales NC
- Zwei ikos.Capside
- umhüllt
- Nicht umhüllt
- ES RNA (+)
- DS RNA
- nicht segmentiert
- Helikales NC
- umhüllt
- ES RNA (-)
RNA-Viren -
Einteilung
LMU
Reoviridae
DS- Strang RNA-Viren
(segmentierte Genome)
Rotavirus (11)
Orthoreovirus (10)
Orbivirus (10)
Seadornavirus (12)
Rotaviren (Gruppen: A,B,C,D,E,F,G)
Reovirus (Serotypen GT 1-3)
Orungovirus, Kemerovovirus
Bannavirus
(weitere 7 Gattungen bei Tieren und Pflanzen)
Reoviridae: Reo- von respiratory, enteric, orphan:
Zeitpunkt der Entdeckung (1959) konnte gezeigt werden, dass diese Viren den
Respirations- und Gastrointestinaltrakt infizieren. Eine Assoziation mit
Erkrankungen war jedoch nicht bekannt.
Birnaviridae
Avibirnavirus (2)
Gumborovirus (Hühner)
Aquabirnavirus (2)
Infekt. Pankreasnekrose (Lachse)
Entomobirnavirus (2) Drosophila-X-Virus
LMU
Reoviridae (Rotaviren)
11 Moleküle (Segmente) DS-RNA; 0,6 - 3 kb
Nicht umhüllt
Zwei ikosaedrische Kapside (inneres und äußeres)
Dadurch: hohe Stabilität in der Umwelt (Flüsse, Abwässer)
Dadurch: hohe pH Resistenz (3,5 – 10)
Durchmesser: 70 - 80 nm
LMU
Reoviridae (Rotaviren)
Genome organisation
L
M
S
- 11 Moleküle (Segmente) DS-RNA; Größe zwischen 0,6 - 3 kb
- Cap-Struktur an allen 5’-Enden
- Kein poly A am 3’-Ende; dafür: Cytidinreste
- Konservierte Bereiche (7-10 bp) an beiden Enden (Replikation, Verpackung ?)
- RNA abhängige RNA Polymerase ist Bestandteil des Virions !
- Reassortantenbildung bei Koinfektion
Reoviridae (Rotaviren)
LMU
Replikation
Reifes Virion
Synthese der
- Strang RNAs
+
Core
Komplex
+ Strang RNAs
+ Strang RNAs
b:
- Rezeptorvermittelte Endozytose
- Virion im Endosom
- Abstreifen des äußeren Kapsids
- Freisetzung ins Zytoplasma
- Umlagerung des Kapsids
- Aktivierung der RNA abhäng. RNA Polymerase
- Transkription von (+) mRNAs ins Zytoplasma
(nur – Strang wird abgelesen !)
- = primäre Transkription
c und d:
- Synthese der Core-und Kapsidproteine im
Zytoplasma und ER
- Zytoplasmatische Einschlußkörperchen
(Viroplasma) entstehen
e und f:
- Zusammenbau unreifer Virionen mit nur
+ Strang RNA (Reassortanten !) am ER
- Synthese der – RNA Strangs (Doppelstrang)
im reifenden Viruspartikel
- = sekundäre Transkription
- Budding ins ER (transiente Membran)
- Weitere Reifung (Verlust der Membran)
- Freisetzung nach Absterben der Zelle
Reoviridae (Rotaviren)
Ganzjähriges Vorkommen mit peak im Winter
30-50 % aller kindlichen Diarrhöen
Durchseuchung: 90% (100%) im Alter von 3 (5) Jahren
Ca. 60.000 Infektionen pro Jahr (Deutschland)
Ca. 527.000 tote Kinder pro Jahr2004 (weltweit)
Reoviridae (Rotaviren)
Pathogenese
- fäkal-orale Übertragung
- Infektion der differenzierten Enterozyten des
(Dünn-) Darmepithels
- Erhöhung der Ca2+ Konzentration (NSP4 Enterotoxin?)
- Zusammenbruch des Zytoskeletts
- Schädigung der Enterozyten
Durchfall, verminderte Nährstoff– und Wasseraufnahme
nicht infiziert
infiziert
Geschwollen und
vaskularisiert an der
“villi”-Spitze
Reoviridae (Rotaviren)
Klinik (Rotavirus A)
- Inkubationszeit: 1 - 3 Tage
- Meist inapparent bei Neugeborenen und älteren Kindern
- Apparent v.a. bei Kindern > 3 Monate und < 2 Jahre
- Symptome (3 – 5 Tage):
- Fieber
- Erbrechen
- Bauchschmerzen
- Durchfall
- Bei schweren Verläufen (40%):
- Stationäre Behandlung im Krankenhaus erforderlich
- Dehydration, Lethargie und Kreislaufversagen
- Tödliche Verläufe selten in Industrieländern
- Virusausscheidung bis 3 Tage nach Beschwerdefreiheit
Reoviridae (Rotaviren)
Rotavirus Impfstoffe:
Rotarix:
- attenuierter Lebendimpstoff
- vom häufigsten Serotyp G1P abgeleitet
- monovalent
- starke Replikation im Darm
- zwei Impfdosen (niedrig konzentriert)
Rotateq (Rotashield):
- rekombinanter Lebendimpfstoff auf Basis des bovinen
Rotavirus (Stamm WC3)
- polyvalent (5 Varianten mit 5 Antigenen der häufigsten
humanpathogenen Rotavirus Serotypen)
- schwächere Replikation im Darm
- drei Impfdosen (hoch konzentriert)
Zulassung (Deutschland) in 2006; ab 6. Lebenswoche
Noch keine STIKO-Empfehlung
98% iger Schutz vor schweren Verläufen
Reoviridae (Rotaviren)
Diagnostik:
Antigen-ELISA (aus Stuhlproben):
- Mikrotiterplatte mit anti-Rotavirus Antikörper
(kommerziell erhältlich)
- Zugabe von Suspension der Stuhlprobe
- Zugabe von POX konjugiertem
anti-Rotavirus Antikörper
- Substratzugabe und Farbreaktion
PCR aus Stuhlproben
Picornaviren
LMU
- nicht segmentiert
- segmentiert
- Helikales NC
- Zwei ikos.Capside
- umhüllt
- Nicht umhüllt
- ES RNA (+)
- DS RNA
- nicht segmentiert
- Helikales NC
- umhüllt
- ES RNA (-)
RNA-Viren -
Einteilung
LMU
(-) strang RNA-Viren
unsegmentiert !
(Mononegavirales)
Rhabdoviridae
Vesiculovirus
Lyssavirus
Vesicular stomatitis V.
Rabies Virus
Filoviridae
Filovirus
Marburg Virus
Ebola Virus
Paramyxoviridae
Paramyxovirus
Morbillivirus
Pneumovirus
Mumps, Parainfluenza
Masernvirus
RSV
Bornaviridae
Bornavirus
Pferd, Schaf
Paramyxoviren, Rhabdoviren,
LMU
Filoviren, Bornaviren
Gemeinsame Eigenschaften: „Mononegavirales“
(-) Strang RNA-Genom
RNA-abhängige RNA Polymerase ist Bestandteil des Virion
Genom einzelsträngig, nicht segmentiert
Virionen behüllt
Helicale Nukleokapside
Rhabdoviren
LMU
(-) Strang RNA,13-16 kb
„bullet-shaped“, 70-80 nm ∅, 130-380 nm lang
lipidhaltige Hülle, helikales Nukleokapsid
Viele verschiedene Viren (befallen Tiere und Pflanzen)
Rhabdoviren
LMU
(-) RNA
(-) RNA
Leader Region am 3’-Ende
RNA abhängige RNA Polymerase (L): Bestandteil des
Virion !!!
Alle Proteine sind “Strukturproteine”:
N (Nucleocapsid), NS (=P; phosph. Nucleocapsidprotein),
M (Matrix), G (Glykolisiertes Membranprotein) und L (s.o.)
Rhabdoviren
LMU
(-) RNA
(+) RNA
RNA Pol
Initiation der (+) RNA-Synthese am 3’-Ende der (-) RNA
Transkription einer kurzen leader RNA:
kein 5’ cap / kein polyA
Stop der Transkripton am Ende der leader RNA
Neustart am Beginn des N-Proteins:
jetzt: 5’ cap / poly A
Rhabdoviren
LMU
(-) RNA
(+) RNA
RNA Pol
Zwischen den einzelnen Genen befinden sich
intergenische Regionen
Die RNA Polymerase stoppt die Transkription, überliest
die intergenische Region und nimmt ihre Arbeit am NS
Protein wieder auf (Überspringen und Reinitiation)
Fortsetzung über gesamtes Genom
Rhabdoviren
LMU
RNA Pol
(-) RNA
(+) RNA
Dieser Prozess ist nicht immer erfolgreich:
Aufbau eines mRNA Gradienten
Dadurch:
[N] > [NS] > [M] > [G] > [P] > [L] Protein
LMU
Vesicular-Stomatitis-Virus (VSV)
•
Verbreitung ausschließlich auf amerikanischem Kontinent
•
Infektion von Pferden, Rindern, Schweinen, Menschen
Zwei Serotypen: New Jersey und Indiana
Übertragung:
- durch
Mücken und Fliegen
•
- durch Tierkontakte
- (indirekt) durch z.B. Melkmaschinen
Volkswirtschaftliche Schäden durch z.B. Rückgang der
Milchleistung
LMU
•
Vesicular-Stomatitis-Virus
(VSV)
Pathogenese:
- Das Virus gelangt über kleine Verletzungen
oder Arthropodenstiche in die Haut
- Vermehrung im stratum spinosum
- Ausbreitung lokal von Zelle zu Zelle
Klinik:
- Fieber
•
- “speicheln
und lahmen”
- aufgeplatze Vesikel (Bläschen) im Maul,
Rüsselscheibe, Zitzen, Kronsaum
- DD: Maul und Klauenseuche
- Beim Menschen:
transiente, milde Infektion mit grippeähnlichen
Symptomen
Vesicular-Stomatitis-Virus (VSV)
LMU
•
VSV-G pseudotyping
VSV-G
•
Vorteile:
- stabileres lentivirales Partikel
- Aufkonzentrierung (Zentrifugation) möglich
- breiterer Zielzelltropismus
LMU
Rabies (Tollwut)
•
Weltweite (!) Verbreitung
•
Urbane Tollwut
- v.a. durch streunende, herrenlose Hunde
- Indien / Ostasien / Afrika / Südamerika
Sylvatische Tollwut
- v.a.
durch Füchse, Wölfe, Dachse / Waschbären, Stinktiere
•
- Europa / Nordamerika
Fälle pro Jahr (Mensch)
- WHO: ca. 1600
- Dunkelziffer: 40.000 – 70.000 ???
Rabies (Tollwut)
LMU
Totimpfstoff für Menschen
- Louis Pasteur (1882)
- Passagierung des Virus in Kanninchen
- zerriebenes und getrocknetes
Rückenmark des Kanninchens
(nicht mehr infektiös)
- Erste Tollwutimpfung:
Joseph Meister (1885)
- Später: Phenolinaktivierung (Kanninchen)
(Semple Impfstoff)
- Bzw.: Ätherextraktion (Kanninchen)
(Hempt Impfstoff / Entwicklungsländer)
- Seit 1980: in vitro gezüchtete, abgetötete
Tollwutviren
Rabies (Tollwut)
LMU
Risikogebiete
Rabies (Tollwut)
LMU
Tollwutgebiete weltweit
LMU
Rabies (Tollwut)
Wildtollwut
Rabies (Tollwut)
LMU
Lebendimpfstoff (attenuiertes Virus) für Wildtiere
(früher verabreicht im Hühnerkopf)
Deutschland ist
Tollwutfrei !!!
Rabies (Tollwut)
LMU
Fledermaustollwut in Deutschland (1982 - 2007)
EBLV-1 und EBLV-2 (European Bat Lyssa Virus)
Übertragung auf Mensch möglich (
tödlich *)!
*5 Fälle in letzten 50 Jahren in Europa
LMU
Rabies (Tollwut)
•
Pathogenese
- Beim Biss gelangt das Virus in Haut / Bindegewebe / Muskulatur
- Initiale Replikation an der Bissstelle
- Infektion
der Nervenendigungen
•
- Axonale Wanderung (20 mm pro Tag !!!) zum Gehirn
- Hauptreplikationsorte sind: Ammonshorn, Hippocampus und Hirnstamm
- Encephalomyelitis (Gehirn und RM sind betroffen) – Zerstörung der Neurone
- Nach der Vermehrung im Gehirn wandert das Virus axonal in die
Augenbindehaut, Speichel- und Hautdrüsen und in periphere Organe
- Produktion von infektiösen Viren (v.a. Speichel)
Labordiagnose:
- Tupfpräperate d. Hornhaut
- Hautbiopsien (Nacken)
Nachweis von Negri-Körperchen
=
eosinophile, zytoplasmatische
Ablagerungen viraler Nucleoproteine
LMU
Transport des
Endosoms ?
LMU
Rabies (Tollwut)
•
Klinik
- Inkubationszeit:
5 Tage bis Jahre !!! (je nach Bissstelle !!!)
•
- Nach Auftreten der Symptome
tödlich !!!
- Etablierung der Infektion nach Hundebiss: ca. 15 %
- Prodromalstadium (0-10 Tage):
Ziehen und Brennen an der Bissstelle (Kopfschmerzen / Gelenksteife / Fieber)
(Hyperaktivität / Hyperventilation / Lähmungserscheinungen)
- Akute neurologische Phase (2-7 Tage):
rasende Wut: Hydrophobie / Schluckkrämpfe / steigendes Fieber / Speichelfluss
(stille Wut (in 20 % der Fälle): Lähmungen)
- Koma (5-14 Tage)
- Tod durch Atemstillstand
Rabies (Tollwut)
LMU
Klinik
Rabies (Tollwut)
LMU
Postexpositionsprophylaxe (PEP)
Contributors
Armin Baiker, Max-von-Pettenkofer Institut, LMU München
Email: [email protected]
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