3. Teil: Aminosäuren - Institut für Organische Chemie

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Pioneer In Peptide Chemistry At UC San Diego Dies At 75
Murray Goodman, a professor of chemistry and biochemistry, at the University
of California, San Diego who helped found the field of peptide
chemistry—the synthesis and analysis of compounds that mimic
important biological molecules—died on June 1 in Munich, Germany, from
pneumonia. He was 75.
Goodman began his work in peptide chemistry when it was an emerging field.
Born and raised in New York City, he received a bachelor of science from
Brooklyn College in 1950. He earned his doctorate three years later from the
University of California, Berkeley, working on the use of isotopes as tracers to
understand the mechanisms of photosynthesis with Melvin Calvin, who
won the 1961 Nobel Prize in Chemistry. Drawn by the possibilities of a new
field, Goodman undertook postdoctoral research in peptide chemistry at the
Massachusetts Institute of Technology and later at Cambridge University
in England.
In 1970, Goodman joined the UCSD faculty as a professor of chemistry. He remained there ever since, serving
as chair of the Department of Chemistry for six years, and was recently honored with the establishment of an
endowed professorship in his name, the Goodman Chair in Chemistry.
Goodman’s research involved the chemical synthesis of natural peptide mimics and the study of how the
structure of these peptides contributes to their function. Peptides—essentially small protein
molecules—play many important roles in the body; for example, the body has natural painkiller peptides,
endogenous opioids. Goodman’s work was on the cutting edge of peptide synthesis as well as the application
of the latest molecular imaging techniques to determine peptide structure. Goodman’s group of scientists
collaborates with other researchers to test the biological effectiveness of the peptides they make. The group
then uses this information to modify the peptides to enhance their effectiveness. The work has many practical
applications including the development of anticancer drugs, pain medication, artificial sweeteners and
artificial growth hormones.
Molekulare Bestandteile einer E. coli-Zelle
3000 Proteine
3000 Nucleinsäuren
5 Polysaccharide
20 Lipide
500 Bausteinmoleküle
20 anorganische Ionen
15 %
7%
3%
2%
2%
1%
Wasser
70 %
(Adapted from the handouts of Prof. AG Beck-Sickinger, Leipzig)
Zusammensetzung des menschlichen Körpers
Proteine
Nucleinsäuren
Kohlenhydrate
Fette
Mineralsalze
17 %
1%
1%
17 %
4%
Wasser
60 %
In wässriger Lösung .....
Zwitterform
R
S
C N
O
CH3
CH3
H
COO
O
+
OH-
H3N CH C OH
CH3
+ H3O+
O
H3N CH C O
CH3
+
O
OH-
H2N CH C O
+ H3O+
CH3
Titrationskurve von
O
H3N CH2 C O
Glycin, R=H
Puffersysteme
Glycin
% B-
pK1
pI
pK2
pH
20 proteinogene Aminosäuren
Nicht essentielle
Aminosäuren
Essentielle Aminosäuren
Aliphatische Aminosäuren:
Raumerfüllung, hydrophob
2.2
Tyr, Y
9.1
Neutrale, polare Seitenketten
Name
Ser, S
Thr, T
Asn, N
Gln, Q
Strukturformel
Masse
rel. Häufigkeit in Proteinen
Geladene Seitenketten
Name
Strukturformel
Lys, K
Arg, R
His, H
Asp, D
Glu, E
Masse
rel. Häufigkeit in Proteinen
Schwefelhaltige
Seitenketten
Cystein
Cystein
Oxidation
Cystin
Disulfid
Reduktion
pKi = (pKa1+ pKa2)/2
for neutral and acidic amino acids
pKi = (pKa2+ pKa3)/2
for basic amino acids
Dissoziationskurve des Histidins
Aminosäurenabkömmlinge
(Thyroidhormon)
nicht proteinogene Aminosäuren
Aminosäurengemisch
Dünnschichtchromatographie
(2-dimensional)
Ionenaustauschchromatographie
Detektion mit
NinhydrinSprühreagenz
Derivatisierung
mit NinhydrinSprühreagenz
Absorption λ=570nm
Derivatisierung
RP-HPLC
Detektion im UV,
Fluoreszenz
A
A
t [min]
t [h]
Qualitativ, schnell,
ohne Apparativen Aufwand
Quantitativ, Apparat
unempfindlich, langsam
Quantitativ, Apparat
empfindlich, schnell
Nach-Säulen Derivatisierung
Vor-Säulen Derivatisierung
Reagenzien für die Detektion von Aminosäuren
λex=390 nm
λem=475 nm
λex=335 nm
λem=455 nm
λex=310 nm
λem=540 nm
λ=436 nm
λ=360 nm
(Sanger Reagenz)
Absorption
Chromatogramm von Dansyl-Aminosäuren
Zeit
Analytik von Aminosäuren
Trennung von Aminosäuren (Aminosäurenanalyse)
• freie Aminosäuren durch Ionenchromatographie
Derivatisierung, Detektion: Nach-Säulen-Derivatisierung
• derivatisierte Aminosäuren durch HPLC, GC
Vor-Säulen-Derivatisierung
Identifizierung
• Retentionszeit im Chromatogramm: UV, Fluoreszenz
• Masse
• Spektroskopie (UV, NMR, IR)
IR-Spektrum von Tryptophan
UV-Spektrum von Tyrosin und Tryptophan
HCl
NaOH
HCl
NaOH
Projektion nach Fischer:
1. Längste C-Kette
2. Höchste Oxidationsstufe oben
3. Horizontale Bindungen vor, vertikale hinter der Papierebene
4. L= funktionelle Gruppe levo=links, D=funktionelle Gruppe dextro=rechts
L
D
D
L
Diastereomere
L
H3C
L
D
H
H
CH2CH3
D
CH3
CH2CH3
Isoleucine
Isoleucine
Diastereomere
H
D
CH3
CH2CH3
Isoleucine
H3C
L
H
CH2CH3
Isoleucine
CIP-Nomenklatur: Cahn-Ingold-Prelog
CIP-Nomenklatur: Cahn-Ingold-Prelog
1. Identifizierung von 4 Substitutenten am chiralen C
2. Zuordnung der Priorität
Substituent direkt am Chiralitätszentrum:
höchste Ordnungszahl=höchste Priorität
I>Br>Cl>F>O>N>C>D>H>freies Elektronenpaar
3. Bei identischen Substituenten
höchste Ordnungszahl, höchste Anzahl=höchste Priorität
Dreifachbindung zählt dreifach, Doppelbindung doppelt
OH>NH2>C2H5>CH3>H
COOH>CHO>CH2OH>CH3
4.Rangniedrigster Substituent liegt hinter der Papierebene
5. Sinkt die Priorität im Uhrzeigersinn, dann R-Konfiguration,
Sinkt die Priorität gegen den Uhrzeigersinn, dann S-Konfiguration
Fischer
Keilstrich
CIP
Fischer
Keilstrich
CIP
HSCH2
CH2SH
Vor-Säulen Derivatisierung
Chirale Säule
Enantiomerentrennung von Pentafluorpropionyl-isopropylestern
an chiraler Phase durch Gaschromatographie
Synthese von Aminosäuren
1908:
Identifizierung des wesentlichen Bestandteiles des Seetangextraktes
(Suppenbestandteil): L-Glutaminsäure (Glu; E)
Mononatrium-L-glutamat: Gewürzmittel
1998:
Jährlicher Umsatz an proteinogenen Aminosäuren: > 1 Milliarde US $:
> 25 000 t Glu
> 25.000 t Lys
> 1.000 000 t Met
Nahrungsmittel, Futtermittel, Pharmazeutika, Kosmetika, synthetische Polymere,
Detergenzien, Tierernährung (Met, Lys), Infusionslösungen für parenterale Ernährung
Synthese von Aminosäuren
Chemische
ChemischeSynthese
Synthese
Biotechnologische
BiotechnologischeSynthese
Synthese
Isolation
Isolationaus
ausdem
dem
Proteinhydrolysat
Proteinhydrolysat
Racemat
Enantiomer
Synthese von Aminosäuren
Isolation
Isolationaus
ausdem
dem
Proteinhydrolysat
Proteinhydrolysat
Protein wird hydrolysiert,
Bausteine zerlegt:
6 N HCl, 110 °C, 24-72 h
• Trennung sehr schwierig
(Ionenaustauschchrmoatographie)
• Gln und Asn nicht erhältlich
•Trp zerstört, Ser, Thr teilweise
• sehr teuer
Biotechnologische
BiotechnologischeSynthese
Synthese
Mirkroorganismen (z.B.
Corynebacterium glutamicum)
Mutanten
Fermentation unter
bestimmten Bedingungen
Überproduktion von
bestimmten Aminosäuren
Synthese von Aminosäuren
Chemische
ChemischeSynthese
Synthese
Enantioselektive
EnantioselektiveSynthese
Synthese
Enzymatische
EnzymatischeSynthese
Synthese
Racemische
Synthese
Racemat-Trennung
Racemat-Trennung
acides H,C ist δ−
Malonsäure
MalonsäureSynthese
Synthese
N-Acetamido-malonester
Verseifung
∆H, -CO2
Acylase
Acylase
L-Aminosäure
Racemat-Trennung
Racemat-Trennung
Enantioselektive
EnantioselektiveSynthese
Synthese
L
L
15 : 85
L=
Racemat-Trennung
Racemat-Trennung
DL-Alanin
N-Benzoyl-DL-Alanin
+ optisch aktives Amin, z. B. Brucin
Brucin-Salz von
N-Benzoyl-D-Alanin
Brucin-Salz von
N-Benzoyl-L-Alanin
„unlöslich“
„löslich“
Strecker Synthese
R
O
H
+
NH3
Nebenreaktion: Bis-alkykierung
R
NH2
H
OH
R
H
NC
H
N
- H 2O
HCN
R
NH
H
Schiff Base
O
KCN, (NH4)2CO3
O
HN
H
NH
Hydantoinase
R
O
H
CN
HCl
R
NH2
H
COOH
H
CN
O
Hydantoine
Racemisierung
pH 8-10
NH2
R
Variante der Strecker Synthese ist die Bucherer-Bergs
R
R
Synthese:
COOH
H
R
NHCONH2
COOH
H
R
NH2
D-Aminosäure
NH
HN
R
O
D-Phenylglycin und D-4-Hydroxyphenylglycin sind industrielle Produkte, welche nach diesem
Verfahren hergestellt werden
Gabriel Synthese
O
O
Cl
N-Br
+
X
R
N
COOH
R
N2H4
H2N
COOH
COOH
O
O
O
N-Brom-Phthalimid
NH
NH
O
Synthese von DL-Glu
Synthese von DL-Asp
COOH
COOH
COOH
+ NH3
H
H2N
CO
H
COOH
COOR
ROH
COOH
Maleinsäure
1. NH3/HCN
CHO
COOR 2. Hydrolyse
Synthese von DL-Met
CHO
CO/H2
+ CH3SH
CHO
SCH3
SCH3
1. NH3/HCN
2. Hydrolyse
H2 N
COOH
H2 N
COOH
Curtius Synthese
CN
1. NaOEt
COOH
2. RCH2X
EtOH
- N2
*
R
CN
R
COOH
HCl
NHCOOEt
R
R
NH3+
R
CN
- N2
CN
COOH
R
CN
C N N N
O
N2H4
CN
EtOH
N
CN
R
NHCOOEt
C
O
CONHNH2
HNO2
CN
R
*
CON3
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