1 Einleitung 1 2 Schrifttum 4 3 Material und Methoden 23 4 Ergebnisse

Verzeichnisse
I
Inhalt
Abbildungen
Tabellen
Abkürzunger
Ш
V
VI
1 Einleitung
1
1.1 Zielsetzung
1.2 Fragestellung
3
3
2 Schrifttum
4
2.1 Die chronisch obstruktive Lungenerkrankung (COPD)
2.2 Moraxella catarrhalis
2.2.1 Allgemeines
2.2.2 Virulenzfaktoren
2.3 Die angeborene Immunabwehr (Innate Immunity)
2.3.1 Pattern recognition receptors (PRRs)
2.3.2 Zytokine, Chemokine, IL8
2.4 Toll-like Rezeptoren
2.4.1 Einteilung und Expression
2.4.2 Funktion
2.5 CEACAM Rezeptoren
2.5.1 Einteilung und Struktur.
2.5.2 Expression und Funktion
2.6 Signaltransduktion
2.6.1 Die CEACAM 1-Signalkaskade
2.6.2 Die TLR2-Signalkaskade
4
5
5
6
8
S
9
10
10
10
12
13
/5
17
18
18
3 Material und Methoden
23
3.1 Material
3.1.1 Zelllinien und Zellkultur
3.1.2 Bakterienkultur
3.1.3 Molekularbiologische Methoden
3.2 Methoden
3.2.1 Zellbiologische Methoden
3.2.2 Mikrobiologische Methoden
3.2.3 Molekularbiologische Methoden
3.2.4 Statistik
23
23
26
29
13
43
46
48
59
4 Ergebnisse ....................................................................................................... 60
4.1 Expression und Lokalisation der CEACAM Rezeptoren auf humanem pulmonalen
Epithel
60
4.2 Expression von TLR2 auf humanem pulmonalen Epithel
62
4.3 Expression von TLR2 und CEACAM1 nach Stimulation mit M.catarrhalis auf
pulmonalen Epithelzellen
63
4.4 Kolokalisation von CEACAM1 und TLR2 in HEK293 Zellen
64
4.5 TLR2-vermittelte Aktivierung von NF-кВ und E.8 durch M. catarrhalis
65
4.6 Die UspAl-CEACAMl-Interaktion hat einen signifikanten Einfluss auf die
Adhäsion von M. catarrhalis an pulmonalen Epitheizellen
67
Bibliografische Informationen
http://d-nb.info/998778087
digitalisiert durch
Д
Verzeichnisse
4.7 Die Interaktion von Moraxella-XJspA\ und CEACAM1 reduziert die IL8-Sekretion
pulmonaler Epithelzellen
68
4.8 Gen-Silencing von CEACAM1 führt zu einer Verstärkung der M. catarrhalisinduzierten IL8-Sekretion
69
4.9 Die Hemmung der Moraxella catarrhalis-induzienen NF-кВ-Aktivierung durch
CEACAM1 erfolgt über dessen ITTM-Domäne
71
4.10 Die Bindung von UspAl an CEACAM 1 führt zu dessen Tyrosinphosphorylierung
und zur Rekrutierung von SHP1
73
4.11 Gen-Silencing von SHP1 führt zu einer Verstärkung der M. catarrhalisinduzierten IL8-Sekretion, Gen-Silencing von SHP2 hat dagegen keinen Einfluss74
4.12 Stimulation pulmonaler Epithelzellen mit M. catarrhalis führt zur
Phosphorylierung von TLR2
76
4.13 Durch spezifische Inhibition der PB Kinase wird die M. catarrhalis-induzierte NFкВ-Aktivierung bzw. IL8-Sekretion gehemmt
77
4.14 Die UspAl-CEACAMl-Interaktion führt zur Rekrutierung von SHP1 an TLR2 .79
4.15 Die SHPl-TLRl-Assoziation hat eine Aufhebung des p85-TLR2Signalkomplexes zur Folge
80
4.16 Die UspAl-CEACAMl-induzierte SHP1-Rekrutierung kontrolliert die PI3Kabhängige Phosphorylierung von Akt (S437)
81
4.17 Die Bindung der /Vrasena-spezifischen Oberflächenproteine (Opa) an CEACAM 1
hemmt ebenfalls die TLR2-abhängige Immunantwort pulmonaler Epithelzellen.. 83
5 Diskussion
5.1 Diskussion der Ergebnisse
5.1.1 CEACAM-Expression auf pulmonalem Epithel
5.1.2 Moraxella catarrhalis und CEACAM1
5.1.3 Tyrosinphosphorylierung und Signaltransduktion von CEACAM1
5.1.4 M. catarrhalis und TLR2 auf pulmonalem Epithel
5.1.5 Signaling von TLR2
5.1.6 CEACAM 1 und TLR2
5.1.7 Weitere mögliche Liganden für CEACAM1 und TLR2
5.2. Diskussion der eingesetzten Materialien und Methoden
5.2.1 Auswahl der Zellen
5.2.2 Auswahl der Bakterien
5.2.3 Transfektionsversuche
5.3 Ausblick
6 Zusammenfassung / Summary
6.1 Zusammenfassung
6.2 Summary
88
88
88
89
90
91
92
94
95
96
96
96
97
99
101
101
102
7 Referenzen
1° 4
8 Anhang
121
8.1 Publikationen
8.2 Danksagung
8.3 Selbständigkeitserklärung
'21
122
ш