- VIROTECH Diagnostics GmbH

ImmunoCard Toxins A&B
Enzym-Immunoassay
zum Nachweis der
Clostridium difficile Toxine A und B
Hersteller:
Meridian Bioscience Inc.
USA-Cincinnati, Ohio
Erreger und Krankheitsbild
Neuer virulenter Stamm!!
Clostridium difficile, ein anaerobes, sporenbildendes Bakterium, gilt als die wichtigste Ursache von im Krankenhaus erworbenen Diarrhöen.
Das Krankheitsbild reicht von selbstlimitierenden Durchfällen bis zur lebensgefährlichen pseudomembranösen Kolitis
und dem toxischen Megakolon.
Während einer Antibiotika-Therapie
kommt es zur Zerstörung der intestinalen Mikroflora, was sehr häufig zur Besiedlung mit pathogenen Clostridium
difficile-Stämmen führt. In ca. 25% aller
Fälle von Antibiotika assoziierter Diarrhöe ist Clostridium difficile die primäre
Ursache. Oftmals tritt diese Komplikation
auch bei Patienten auf, deren Darmschleimhaut infolge einer ZytostatikaTherapie geschädigt ist.
Sporen dieses Keims werden sehr leicht
nosokomial übertragen, wodurch es
nicht selten zur Häufung von Diarrhöen
im Krankenhausbereich kommen kann.
Im Herbst 2005 wurde in Kanada (Quebec) ein neuer C. difficile-Stamm (NAP1/
027) nachgewiesen. Seine erhöhte Pathogenität gegenüber den bisher isolierten Stämmen ist auf eine verstärkte Toxinproduktion (16fache Toxin A-/23fache
Toxin B-Produktion) zurückzuführen.
Aufgrund seiner zunehmenden Resistenzentwicklung gegenüber Metronidazol- und Fluorochinolon-Antibiotika ist
die schnelle Identifizierung dieses
Stammes von großer Bedeutung. Das
Auftreten von C. difficile (NAP1/027) in
Europa ist letztendlich nur eine Frage
der Zeit.
Clostridium difficile -Toxine
Die pathogenen C. difficile-Stämme bilden 2 immunologisch und biologisch
unterschiedliche Toxine:
Toxin A -
Toxin B -
ein gewebeschädigendes
Enterotoxin, welches die
Darmdurchlässigkeit erhöht
(Flüssigkeitsverlust)
ein Zytotoxin, verantwortlich für die Nekrose der Intestinalschleimhaut
Bei Verdacht auf eine C. difficileDiarrhöe ist der alleinige Nachweis von
Toxin A nicht ausreichend, da schon
mehrere pathogene C. difficile-Stämme
isoliert wurden, die nur das Toxin B produzieren.
Testsystem
ImmunoCard Toxins A&B (ICTAB) ist ein
qualitativer Enzym-Immunoassay für den
Nachweis der C. difficile-Toxine A und B
in Humanstuhl und Kulturanreicherungen. Der Assay nutzt monoklonales AntiToxin A und polyklonales Anti-Toxin B
immobilisiert auf der Testkarte. Vorhandene Toxinmoleküle in der Stuhlprobe
werden an die Anti-Toxin-Antikörper des
Konjugats gebunden und auf der Reaktionsmembran der Testkarte erfasst und
durch
Substratzugabe
chromatographisch sichtbar gemacht.
Testauswertung
Visuelle Testauswertung nach 15 minütiger Inkubation; inaktiviertes C. difficileToxin dient als interne Verlaufskontrolle
(Die Abbildung zeigt ein positives Testergebnis).
ImmunoCard Toxins A&B
Mit großem Erfolg auf dem Markt zur schnellen
Testung am Nachmittag oder am Wochenende!
▼ Leistungsdaten
Evaluierung des IC TAB im PCR-Vergleich
Frische Stuhlproben
ImmunoCard Toxins A&B
Sensitivität
Spezifität
91,3 %
87,0 %
97,4 %
95,6 %
IC Toxins A&B
Real time- PCR
Testung erfolgte im Vergleich zum „Goldstandard“ Cytotoxizitätstestung;
Gesamtprobenanzahl: 367 (23 positive und 346 negative)
(R.J. van den Berg et al. , J. Clin. Microbiol. 43: S. 5338 – 5340)
▼ Analytische Sensitivität
Nachweisgrenze der Clostridium difficile Toxine im IC TAB:
Toxin A
Toxin B
3ng/ml Stuhl
3ng/ml Stuhl
Vorteile für Diagnostik und Therapie:
▼ Rasche Bestätigung einer Infektion mit Clostridium difficile
▼ Sichere Diagnose aufgrund hoher analytischer Sensitivität für Toxin B-Bildner
▼ Frühzeitige Einleitung entsprechender Behandlungsmaßnahmen
▼ Schnelle Ergreifung prophylaktischer Isolierungsmaßnahmen im Krankenhausbereich
▼ Hohes Einsparpotenzial durch Optimierung des Hygienemanagements
ImmunoCard Toxins A&B
Testdurchführung
1.
Probenverdünnungspuffer (200 µl)
und Enzymkonjugat (3 Tropfen) mischen.
2.
Stuhlprobe (25 µl) zum
Konjugat-Gemisch geben.
3.
10 sec. vortexen; 5 min bei 20-26°C
ruhen lassen. Vor Auftrag noch einmal 10 sec. vortexen.
4.
Hergestellte Probenverdünnung (1.-3.)
(150 µl) auf untere Reaktionsfelder
tropfen, 5 min bei RT inkubieren.
5.
Waschpuffer (3 Tropfen) in die oberen
Reaktionsfelder geben, absorbieren
lassen.
6.
Substrat (3 Tropfen) in die oberen Reaktionsfelder geben, 5 min bei RT inkubieren.
Puffer-
Interpretation der Testergebnisse
positiv
negativ
ungültig
Vorteile des Immuno-Assays:
▼Detektion von Toxin A- und B-Bildnern
▼Toxinnachweis direkt aus Stuhl oder Kulturanreicherungen
▼Testdurchführung in nur 15 Minuten
▼Visuelle Testauswertung
ImmunoCard Toxins A&B: 50 Bestimmungen
HW/712050
F_Meridian ICTAB_20110428-06
VIROTECH Diagnostics GmbH Löwenplatz 5 D-65428 Rüsselsheim
+49 (0)6142 69090
+49 (0)6142 690919
[email protected] www.virotechdiagnostics.com